Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 KHẢO SÁT TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA MỘT SỐ MẪU NẤM GANODERMA SPP CÓ TÊN GỌI “CỔ LINH CHI” Nguyễn Thị Thu Hằng*, Lê Thị Liên Châu*, Trương Thị Đẹp* TÓM TẮT Mục tiêu: Hiện nay, nhiều mẫu nấm Ganoderma spp với tên gọi “Cổ linh chi” bán nhiều cửa hàng Đông dược quận 5, Thành phố Hồ Chí Minh để trị ung thư Tuy nhiên tác dụng chúng chưa nghiên cứu Vì tiến hành khảo sát tác dụng sinh học số mẫu nấm Ganoderma spp ấu trùng Artemia salina mô phân sinh rễ Hành ta –Allium ascalonicum L., mô hình thử nghiệm dễ thực hiện, tốn kết thu đáng tin cậy Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Đối tượng nghiên cứu: mẫu nấm Ganoderma spp với tên gọi “Cổ linh chi” thu mua cửa hàng Đông dược Thành phố Hồ Chí Minh, ký hiệu là: M1, M2, M3, M4, M5, M6, M7 Trong mẫu M1, M2, M3, M4 xác định thuộc tổ hợp Ganoderma applanatum complex; mẫu M5, M6, M7 thuộc tổ hợp Ganoderma lucidum complex (theo nghiên cứu hình thái-cấu trúc đăng hội nghị Pharma Indochina IV(6)) Phương pháp nghiên cứu: Khảo sát tác dụng sinh học ấu trùng Artemia salina mô phân sinh rễ Hành ta –Allium ascalonicum L Kết bàn luận: Dịch chiết nước thể mẫu nấm có giá trị LD50 nhỏ 1000 ppm thử nghiệm ấu trùng Artemia salina Ngoại trừ mẫu M3, mẫu lại gây số bất thường nhiễm sắc thể như: biến kỳ có nhiễm sắc thể bung, hai nhân dính, cầu nối nhiễm sắc thể, cầu nối nhân Tuy nhiên tỷ lệ bất thường thấp, nhỏ 1% Các mẫu nấm khảo sát làm giảm số phân bào, mẫu M4 M5 làm giảm 50% số phân bào nồng độ 2% sau 24 xử lý Kết luận: Các mẫu nấm khảo sát có tác dụng mô hình thử nghiệm, mẫu M4 M5 thể tác dụng mạnh Từ khóa: Artemia salina, Allium ascalonicum, Ganoderma applanatum complex, Ganoderma lucidum complex, Cổ linh chi ABSTRACT STUDY ON THE BIOLOGICAL ACTIVITIES OF SOME GANODERMA SPP NAMED “CO LINH CHI” Nguyen Thi Thu Hang*, Le Thi Lien Chau, Truong Thi Dep * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 15 - Supplement of No - 2011: 70 - 73 Introduction: Many Ganoderma spp named “Co linh chi” are sold popularly in Oriental Medicine Stores in district 5, HoChiMinh city in treatment cancer, however their effects are not studied In order to screening the fungus samples having strongest effects, we researched the biological activities of the fruit bodies extracts using Artemia salina and Allium ascalonicum test These tests are easy to handle, they have low cost, carried out in a large number of onion roots and larvas of Artemia salina, so the result of tests are reliable Materials and methods: Materials: Fruit bodies of samples of Ganoderma spp named “Co linh chi” are sold popularly in Oriental Medicine Stores in district 5, HoChiMinh city They are called in turn M1, *:Bộ môn Thực vật- Khoa Dược - Đại học Y dược TP.HCM Tác giả liên lạc: ThS Nguyễn Thị Thu HằngĐT: 0902432410 70 Email: hangtiti@gmail.com Chuyên Đề Dược Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học M2, M3, M4, M5, M6, M7; M1, M2, M3, M4 are determined Ganoderma applanatum complex; M5, M6, M7 belong to Ganoderma lucidum complex Methods: The aqueous extracts of fungus samples are used in Artemia salina and Allium ascalonicum test Results: All of their aqueous extracts had LD50 lower than 1000 ppm in Artemia salina test, and caused the decrease of mitotic index and chromosome aberrations with very low rate (below 1%) such as: disturbed metaphase, bridge at telophase, adhered nucleus, bridge at nucleus M4 and M5 decreased the mitotic index over 50 % of the control % after 24 hours treatment Conclusions: The results showed that all of aqueous extracts of fungus samples had biological activities in Artemia salina and Allium ascalonicum test, M4 and M5 were strongest Keywords: Artemia salina, Allium ascalonicum, Ganoderma applanatum complex, Ganoderma lucidum complex, Cổ linh chi - giờ, xay thành bột mịn Cân ĐẶTVẤN ĐỀ xác 100 g bột thể nấm (mỗi mẫu riêng Thời gian gần đây, mẫu nấm biệt), làm ẩm với 200 ml nước cất khoảng Ganoderma spp với tên gọi “Cổ linh chi” giờ, thêm 800 ml nước cất ngâm 24 tìm kiếm sử dụng ngày nhiều để Đun cách thủy giờ, lọc Bã tiếp tục trị ung thư Tuy nhiên việc xác định tác dụng chiết với 1000 ml nước cất 1,5 – mẫu nấm vấn đề quan (làm lần vậy) Gộp dịch chiết, cô tâm nhiều nhà khoa học Chúng tiến cách thủy đến 100 ml cao toàn phần Cao hành khảo sát tác dụng sinh học cao chiết lỏng toàn phần chia làm phần: toàn phần thể số mẫu nấm Ganoderma spp có tên gọi “Cổ linh chi” mô phân sinh + Phần 1: Dùng để thử tác dụng kháng rễ Hành ta – Allium ascalonicum L ấu phân bào mô phân sinh rễ Hành ta trùng Artemia salina để sàng lọc mẫu Allium ascalonicum L nấm có tác dụng, nhằm phát triển đưa vào + Phần 2: Được cô cách thủy thành cao đặc, sử dụng nguồn dược liệu để trị sấy nhiệt độ 50oC Cao đặc dùng để thử ung thư Chúng chọn hai mô hình dễ thực hiện, tốn kết thu độc tính ấu trùng Artemia đáng tin cậy * Thử độc tính cao đặc mẫu nấm ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ấu trùng Artemia Đối tượng nghiên cứu: Kết đánh giá giá trị LD50 Tính tỉ lệ (%) ấu trùng Artemia chết, từ tỉ lệ sử dụng phần mềm Probit analysis để tìm giá trị LD50 mẫu nấm Ganoderma spp với tên gọi “Cổ linh chi” thu mua cửa hàng Đông dược Thành phố Hồ Chí Minh, ký hiệu là: M1, M2, M3, M4, M5, M6, M7 Trong mẫu M1, M2, M3, M4 xác định thuộc tổ hợp Ganoderma applanatum complex; mẫu M5, M6, M7 thuộc tổ hợp Ganoderma lucidum complex (theo nghiên cứu hình thái-cấu trúc đăng hội nghị Pharma Indochina IV (6)) Thử tác dụng kháng phân bào cao lỏng toàn phần mẫu nấm mô phân sinh rễ Hành ta - Allium ascalonicum L (Allium test – AT)(2,4,5) theo phương pháp Deysson (1949): Phương pháp nghiên cứu Các công thức đánh giá kết Điều chế cao lỏng cao đặc toàn phần với dung môi nước Thể khô sấy nhiệt độ 50 – 60 0C Chuyên Đề Dược Khoa Tỷ lệ ấu trùng Artemia chết (%)= Số ấu trùng Artemia chết Tổng số ấu trùng Artemia ×100 *Chỉ số phân bào: MI (%)= Số tế bào phân chia Tổng số tế bào ×100 71 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 * Tỉ lệ độ tăng chiều dài rễ hành (L%) mẫu thử so với mẫu chứng sau 24 nuôi lại Knop ½: L (%)= Lt (Độ dài rễ hành mẫu thử nuôi lại Knop ½) Lc (Độ dài rễ hành mẫu chứng nuôi lại Knop ½) ×100 * Độ giảm số phân bào= MI% (chứng) – MI% (thử) ×100 MI% (chứng) KẾTQUẢ VÀ BÀN LUẬN Khảo sát tác dụng kháng phân bào mô phân sinh rễ Hành ta - Allium ascalonicum L * Quan sát hình thái rễ hành: Các mẫu nấm khảo sát làm thay đổi màu sắc hình dạng rễ hành nồng độ khảo sát * Tác động gây bất thường mô phân sinh rễ hành: Ngoại trừ mẫu M3, mẫu lại gây số bất thường nhiễm sắc thể như: biến kỳ có nhiễm sắc thể bung, hai nhân dính, cầu nối nhiễm sắc thể, cầu nối nhân Tuy nhiên tỷ lệ bất thường thấp, nhỏ 1% * Các mẫu nấm khảo sát làm giảm số phân bào với mức độ khác (bảng 1, 2, 3) Bảng Độ giảm số phân bào (%) mô phân sinh rễ Hành ta xử lý với cao chiết toàn phần mẫu nấm nồng độ 2% Mẫu M1 M2 M3 M4 M5 M6 M7 16,76 11,53 18,72 27,42 28,04 30,00 19,16 Thời gian xử lý (giờ) 31,58 21,63 33,95 53,92 36,78 38,98 47,94 57,32 17,77 60,68 24,89 39,26 29,71 38,42 24 22,35 34,41 17,67 62,19 69,97 36,55 31,84 Bảng Độ giảm số phân bào (%) mô phân sinh rễ Hành ta xử lý với cao chiết toàn phần mẫu nấm nồng độ 4% Mẫu M1 M2 M3 M4 M5 M6 M7 72 22,59 26,25 34,09 33,89 45,01 38,43 21,46 Thời gian xử lý (giờ) 31,09 33,76 46,13 53,23 35,25 46,56 57,43 69,18 24,38 58,66 26,06 43,09 46,86 39,32 24 27,90 55,80 45,45 chết 52,23 48,54 44,90 Bảng Độ giảm số phân bào (%) mô phân sinh rễ Hành ta xử lý với cao chiết toàn phần mẫu nấm so với mẫu chứng nồng độ 6% Mẫu M1 M2 M3 M4 M5 M6 M7 25,12 23,18 33,55 39,55 55,68 21,57 36,34 Thời gian xử lý (giờ) 49,75 60,75 58,04 66,37 43,05 53,55 70,74 74,04 38,93 62,05 38,77 55,69 32,62 38,87 24 chết chết chết chết chết chết chết Qua nồng độ khảo sát nhận thấy mẫu M4, M5 có tác dụng kháng phân bào mạnh thể qua việc gây bất thường nhiễm sắc thể làm giảm mạnh số phân bào (giảm 50% nồng độ g dược liệu/ 100 ml sau 24 xử lý) * Độ gia tăng chiều dài rễ hành (L%) sau ngừng xử lý với dung dịch thử nuôi lại Knop 1/2 24 giờ: Rễ hành mọc dài chậm so với mẫu chứng (bảng 4) Sự hồi phục rễ hành mẫu M1 tốt nhất, mẫu M4 yếu Bảng Tỷ lệ L% mẫu nấm Mẫu M1 M2 M3 M4 M5 M6 M7 Nồng độ cao (g dược liệu /100 ml) 93,68 84,21 78,18 69,10 75,94 65,04 60,00 chết 79,69 61,74 75,34 62,33 52,53 51,89 Các mẫu nấm khảo sát có kiểu tác động lại có mức độ tác động khác hai mô hình Artemia AT Theo kết phân tích hình thái cấu trúc(6) Chuyên Đề Dược Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 mẫu nấm chia thành nhóm: mẫu M1, M2, M3, M4 thuộc tổ hợp G applanatum complex; mẫu M5, M6, M7 thuộc tổ hợp G lucidum complex Các mẫu nấm nhóm có ảnh hưởng khác mô phân sinh rễ hành: Mẫu M3 không gây bất thường nhiễm sắc thể mà làm giảm số phân bào mẫu M1, M2, M4 có tác động này; mẫu M7 tác động gây bất thường mẫu M5, M6 có thêm bất thường cầu nối nhân Điều tuổi nấm, môi trường sống, thời điểm thu hái, điều kiện bảo quản,… làm ảnh hưởng hàm lượng hoạt chất có tác dụng dẫn đến kết KẾT LUẬN Dịch chiết nước mẫu nấm khảo sát có tác dụng mô hình thử nghiệm với mức độ khác Trong mẫu M4 (thuộc tổ hợp G applanatum complex) M5 (thuộc tổ hợp G lucidum complex) có tác dụng mạnh Cần tiến hành điện di xác định trình tự AND để xác định loài cách xác, đồng thời nghiên cứu sâu thành phần hóa học tác dụng mẫu nhằm phát triển đưa vào sử dụng nguồn dược liệu trị ung thư TÀI LIỆU THAM KHẢO Khảo sát độc tính ấu trùng Artemia Bảng Giá trị LD50 mẫu nấm Mẫu M1 M2 M3 M4 M5 M6 M7 LD50 375,947238,057445,722166,469 329,721 346,795 295,866 Giá trị LD50 mẫu nấm khảo sát 1000 ppm, mẫu nấm có hoạt tính sinh học thử nghiệm Mẫu M4 có giá trị LD50 thấp nhất, mẫu M4 có tác dụng độc ấu trùng Artemia mạnh nhất, kết tương đối phù hợp với kết thử tác dụng kháng phân bào mô phân sinh rễ hành Mức độ gây độc ấu trùng Artemia mẫu nấm xếp theo thứ tự sau: M3 < M1 < M6 < M5 < M < M2 < M4 Chuyên Đề Dược Khoa Nghiên cứu Y học Bojana Boh et al (2000) Triterpenoid Acids from Ganoderma applanatum Food Technol, Biotechnol, 38 (1): 11-18 El-Shahaby O.A., Abdel Migid H.M., Soliman M.I and Mashaly I.A (2003) Genetoxicity Screening of Industrial Waste water Using the Allium cepa Chromosome Aberration Assay Pakistan Journal of Biological Sciences, 6(1): 23-28 Lê Xuân Thám (1996) Nấm Linh chi - Nguồn dược liệu quí Việt Nam Nhà xuất Mũi Cà Mau, 129 – 133 Nguyễn Thị Lâu, Trương Thị Đẹp, Nguyễn Hoàn Hảo(1985) Tác dụng phân bào SR3 chất trích từ Brucea javanica Merr Simarubaceae Tạp chí Dược học, 3: 13-16 Trương Thị Đẹp, Nguyễn Thị Thu Hằng (2005) Study on antimitotic activity of fruit body extracts of some Trametes spp and some Ganoderma spp using Allium ascalonicum test Pharma Indochina IV, University of Medicine and Pharmacy at Ho Chi Minh City,2: 560 –564 Trương Thị Đẹp, Liêu Hồ Mỹ Trang, Nguyễn Thị Thu Ngân (2005) Distinction of the fruit bodies named “Co linh chi” in Ho Chi Minh City Pharma Indochina IV, University of Medicine and Pharmacy at Ho Chi Minh City,2: 202 73 ... LD50 mẫu nấm khảo sát 1000 ppm, mẫu nấm có hoạt tính sinh học thử nghiệm Mẫu M4 có giá trị LD50 thấp nhất, mẫu M4 có tác dụng độc ấu trùng Artemia mạnh nhất, kết tương đối phù hợp với kết thử tác. .. phần: toàn phần thể số mẫu nấm Ganoderma spp có tên gọi Cổ linh chi mô phân sinh + Phần 1: Dùng để thử tác dụng kháng rễ Hành ta – Allium ascalonicum L ấu phân bào mô phân sinh rễ Hành ta trùng... LUẬN Khảo sát tác dụng kháng phân bào mô phân sinh rễ Hành ta - Allium ascalonicum L * Quan sát hình thái rễ hành: Các mẫu nấm khảo sát làm thay đổi màu sắc hình dạng rễ hành nồng độ khảo sát * Tác