Khóa luận tốt nghiệp ĐHSP Hà Nội LỜI CẢM ƠN Trước tiên, em xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới PGS.TS Đinh Thị Kim Nhung ThS Nguyễn Thị Thùy Vân tận tình bảo giúp đỡ em thời gian học tập nghiên cứu khóa luận Em xin bày tỏ lòng biết ơn tới thầy, cô giáo tổ môn Vi sinh, khoa Sinh - KTNN, trường Đại học Sư phạm Hà Nội nhiệt tình giảng dạy, khuyến khích em thời gian học tập nghiên cứu Em xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu trường Đại học Sư phạm Hà Nội Ban chủ nhiệm khoa Sinh - KTNN tạo điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành khóa luận Xin cảm ơn gia đình, bạn bè người thân giúp đỡ, động viên em ĐHSP Hà Nội 2, ngày 10/ 05/ 2011 Sinh viên Đào Văn Kiên i Đào Văn Kiên K33B - SP Sinh Khóa luận tốt nghiệp ĐHSP Hà Nội LỜI CAM ĐOAN Để đảm bảo tính trung thực khóa luận, xin cam đoan: Khóa luận “Xây dựng lựa chọn phương thức đóng gói, bảo quản màng BC tạo từ chủng Acetobacter xylinum BHN2” công trình nghiên cứu cá nhân tôi, thực hướng dẫn PGS TS Đinh Thị Kim Nhung ThS Nguyễn Thị Thùy Vân Các kết trình bày khóa luận trung thực chưa công bố khóa luận trước ĐHSP Hà Nội 2, ngày 10/ 05/ 201 Sinh viên Đào Văn Kiên ii Đào Văn Kiên K33B - SP Sinh Khóa luận tốt nghiệp ĐHSP Hà Nội MỤC LỤC Trang MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục tiêu đề tài Nội dung đề tài Ý nghĩa đề tài NỘI DUNG Chương Tổng quan tài liệu 1.1 Vị trí đặc điểm phân loại A.xylinum 1.1.1 Vị trí phân loại A.xylinum 1.1.2 Đặc điểm phân loại A.xylinum 1.2 Cấu trúc hình thành màng BC từ vi khuẩn A.xylinum 1.3 Tình hình nghiên cứu ứng dụng màng BC điều trị bỏng 11 Chương Vật liệu phương pháp nghiên cứu .13 2.1 Vật liệu nghiên cứu 13 2.1.1 Vi sinh vật 13 2.1.2 Dụng cụ thiết bị 13 2.1.3 Hóa chất 13 2.1.4 Môi trường 14 2.2 Phương pháp nghiên cứu 14 2.2.1 Phương pháp vi sinh 14 2.2.2 Phương pháp vật lý 16 2.2.3 Phương pháp xử lý màng BC từ A.xylinum 17 2.2.4 Phương pháp bảo quản màng BC từ A.xylinum 18 2.2.5 Phương pháp thống kê xử lí kết 20 Chương Kết nghiên cứu 21 3.1 Nghiên cứu thu nhận màng BC từ chủng A.xylium BHN2 21 iii Đào Văn Kiên K33B - SP Sinh Khóa luận tốt nghiệp ĐHSP Hà Nội 3.1.1 Lên men tạo màng 21 3.1.2 Xử lý màng sau lên men 22 3.2 Nghiên cứu phương thức đóng gói màng BC 23 3.2.1 Đóng gói phương pháp thủ công 23 3.2.2 Đóng gói máy hút chân không 24 3.3 Lựa chọn chất phụ gia bảo quản màng BC đóng gói 26 3.3.1 Khảo sát khả thấm hút màng BC 26 3.3.2 Khảo sát độ bền học màng BC sau bảo quản 30 3.4 Xây dựng quy trình đóng gói bảo quản màng BC quy mô phòng thí nghiệm 31 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 34 TÀI LIỆU THAM KHẢO 35 iv Đào Văn Kiên K33B - SP Sinh Khóa luận tốt nghiệp ĐHSP Hà Nội DANH MỤC HÌNH Trang Hình 1.1 Sợi cellulose màng BC Hình 1.2 Sợi cellulose thực vật Hình 1.3 Con đường sinh tổng hợp cellulose A.xylinum Hình 1.4 Con đường tổng hợp cellulose từ chất glucose Hình 2.5 Kết nhuộm Gram Acetobacter 16 Hình 2.6 Đo độ bền màng BC theo chiều dọc 17 Hình 2.7 Đo độ bền màng BC theo chiều ngang 17 Hình 2.8 Màng sau sấy 19 Hình 2.9 Màng BC ngâm tẩm phụ gia 19 Hình 2.10 Bàng BC tẩm phụ gia đóng gói 19 Hình 3.11 A.xylinum BHN2 môi trường thạch nghiêng 21 Hình 3.12 Giống A.xylinum BHN2 cấp 21 Hình 3.13 Màng BC chưa xử lý 22 Hình 3.14 Màng BC trước xử lý 22 Hình 3.15 Màng BC sau xử lý 22 Hình 3.16 Túi nilon thông thường 23 Hình 3.17 Đóng gói thủ công 23 Hình 3.18 Màng BC đóng gói thủ công 24 Hình 3.19 Túi nilon hút chân không 25 Hình 3.20 Máy hút chân không AMERA - V100 25 Hình 3.21 Màng BC đóng gói máy hút chân không 25 Hình 3.22 Chế phẩm màng BC tẩm Becberin clorid 0,1% đóng gói 33 v Đào Văn Kiên K33B - SP Sinh Khóa luận tốt nghiệp ĐHSP Hà Nội DANH MỤC BẢNG VÀ ĐỒ THỊ Trang Bảng Bảng 1.1 Đặc điểm sinh hóa chủng vi khuẩn A.xylinum theo Frateur Bảng 3.2 Khảo sát xâm nhiễm vi sinh vật màng BC đóng gói không tẩm chất phụ gia 23 Bảng 3.3 Khảo sát xâm nhiễm vi sinh vật màng BC đóng gói không tẩm chất phụ gia 24 Bảng 3.4 Khả thấm hút nước màng sau xử lý 27 Bảng 3.5 Khả thấm hút dung dịch nước muối sinh lý màng BC 27 Bảng 3.6 Khả thấm hút thuốc trị bỏng B76 màng 28 Bảng 3.7 Khả thấm hút Becberin clorid 0,1% màng 29 Bảng 3.8 Khảo sát độ bền học của mẫu màng BC tẩm chất phụ gia 30 Đồ thị Đồ thị 3.1 Khả thấm hút chất phụ gia màng BC 29 Đồ thị 3.2 Độ bền học mẫu màng BC tẩm chất phụ gia 30 vi Đào Văn Kiên K33B - SP Sinh Khóa luận tốt nghiệp ĐHSP Hà Nội TÓM TẮT CÔNG TRÌNH A.xylinum nuôi cấy môi trường dịch lỏng điều kiện nuôi cấy tĩnh hình thành lớp màng, có chất cellulose liên kết với tế bào vi khuẩn A.xylinum Màng gọi màng Bacteria cellulose (màng BC) Cellulose màng vi khuẩn có số đặc tính quý như: độ dẻo dai, độ bền, khỏe, độ đàn hồi Nhờ đặc tính mà màng BC xem nguồn nguyên liệu có tiềm ứng dụng nhiều lĩnh vực khác như: công nghệ thực phẩm (làm thạch dừa), y học (làm màng thay da tạm thời bệnh nhân bỏng), công nghệ mỹ phẩm (làm mặt nạ tẩy trang, làm sáng da)…Tuy nhiên màng BC trình đến tay người sử dụng thường bị giảm chất lượng bị nhiễm số loại nấm mốc vi khuẩn không mong muốn Vì vậy, tìm phương pháp đóng gói bảo quản màng BC vấn đề cấp thiết nghiên cứu Trong công trình tập trung nghiên cứu trình thu nhận màng, bước xử lý màng, ngâm tẩm phụ gia, phương thức đóng gói màng BC từ bước đầu xây dựng quy trình đóng gói bảo quản màng BC với quy mô phòng thí nghiệm Kết công trình tiền đề cho nghiên cứu xây dựng quy trình sản xuất màng BC quy mô công nghiệp, nhằm đáp ứng nhu cầu thực tiễn giảm giá thành sản phẩm vii Đào Văn Kiên K33B - SP Sinh Khóa luận tốt nghiệp ĐHSP Hà Nội PHỤ LỤC Hình Màng BC thu lên men bình tam giac Hình Màng BC đóng gói có tẩm B76 viii Đào Văn Kiên K33B - SP Sinh Khóa luận tốt nghiệp ĐHSP Hà Nội Hình Nước muối sinh lý NaCl 0,9% công ty dược phẩm Văn Lang Hình Thuốc trị bỏng B76 Học viên Quân y Hình Cây Vàng đắng dùng để triết xuất Becberin clorid ix Đào Văn Kiên K33B - SP Sinh Khóa luận tốt nghiệp ĐHSP Hà Nội DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT MC: Microbial cellulose BC: Bacterial cellulose PC: Plant cellulose CFU: Colony Forming Unit OD: Optical Density CS: Cộng x Đào Văn Kiên K33B - SP Sinh Khóa luận tốt nghiệp ĐHSP Hà Nội Qua nghiên cứu, màng BC sau xử lý bước đầu đáp ứng đủ tiêu vật liệu sử dụng điều trị bỏng Như vậy, thu nhận màng BC từ chủng A.xylinum BHN2 đáp ứng yêu cầu vật liệu ứng dụng điều trị bỏng cần trải qua trình lên men tạo màng xử lý màng sau lên men 3.2 Nghiên cứu phương thức đóng gói màng BC 3.2.1 Đóng gói phương pháp thủ công - Vật liệu đóng gói: túi nilon thông dụng hấp vô trùng - Phương pháp đóng gói: làm kín miệng túi nhiệt hơ lửa đèn cồn Hình 3.16 Túi nilon thông thường Hình 3.17 Đóng gói thủ công Màng BC sau đóng gói phương pháp chiếu xạ UV 30 phút, bảo quản theo dõi điều kiện môi trường bình thường Kết sau ngày: bề mặt màng thấy số nấm mốc khuẩn lạc xuất Bảng 3.2 Khảo sát xâm nhiễm vi sinh vật màng BC đóng gói không tẩm chất phụ gia Ngày Xuất VSV - - + + Xuất hiện: + Không xuất hiên: - 23 Đào Văn Kiên K33B - SP Sinh Khóa luận tốt nghiệp ĐHSP Hà Nội Ưu nhược điểm phương pháp là: + Ưu điểm: Vật liệu dễ kiếm, giá thành rẻ, thao tác đơn giản, dễ thực + Nhược điểm: Không đáp ứng yêu cầu bảo quản màng thời gian dài, màng dễ bị nhiễm khuẩn Hình 3.18 Màng BC đóng gói thủ công Vì vậy, phương pháp đóng gói không khả thi, không đáp ứng yêu cầu bảo quản màng BC, ứng dụng trị bỏng 3.2.2 Đóng gói máy hút chân không - Vật liệu đóng gói: túi hút chân không chuyên dụng - Phương pháp đóng gói: Được đóng gói máy hút chân không chuyên dụng AMERA V100 Chúng theo dõi màng BC đóng gói máy hút chân không 30 ngày thấy: bề mặt màng BC không thấy xuất nấm mốc khuẩn lạc Bảng 3.3 Khảo sát xâm nhiễm vi sinh vật màng BC đóng gói không tẩm chất phụ gia Ngày 14 30 Xuất VSV - - - - - - 24 Đào Văn Kiên K33B - SP Sinh Khóa luận tốt nghiệp ĐHSP Hà Nội Hình 3.19 Túi nilon hút Hình 3.20 Máy hút chân không AMERA - V100 chân không Ưu nhược điểm phương pháp: - Ưu điểm: + Thao tác không phức tạp + Bảo quản màng BC khoảng thời gian dài - Nhược điểm: + Phải đầu tư máy vật liệu đóng gói hút chân không chuyên dụng Hình 3.21 Màng BC đóng gói máy hút chân không 25 Đào Văn Kiên K33B - SP Sinh Khóa luận tốt nghiệp ĐHSP Hà Nội Nhận xét: màng BC đóng gói máy hút chân khả bảo quản màng BC lâu phương pháp thông thường Như vậy, phương thức đóng gói máy hút chân không phù hợp với đóng gói màng BC quy mô phòng thí nghiệm 3.3 Lựa chọn chất phụ gia bảo quản màng BC đóng gói Chúng tiến hành lựa chọn chất phụ gia bảo quản màng BC đóng gói, đồng thời chất phụ gia dung dịch, thuốc hỗ trợ trình trị bỏng Màng sau xử lý ngâm tẩm dung dịch chất phụ gia theo phương pháp 2.2.5.2 thời gian 12 Chất phụ gia nghiên cứu: - Nước cất vô trùng - Dung dịch nước muối sinh lý NaCl 0,9% - Becberin clorid 0,1% - Thuốc trị bỏng B76 Chúng tiến hành kiểm tra khả thấm hút màng BC dung dịch chất phụ gia, độ bền học màng BC sau ngâm tẩm phụ gia Cụ thể: 3.3.1 Khảo sát khả thấm hút màng BC Màng BC sau xử lý sấy khô 40oC 12h, sau ngâm nước cất vô trùng 3.3.1.1 Khảo sát khả thấm hút nước màng BC Cân khối lượng màng khoảng thời gian giờ, giờ, giờ, giờ, 10 giờ, 12 để khảo sát khả thấm hút Kết thống kê bảng sau: 26 Đào Văn Kiên K33B - SP Sinh Khóa luận tốt nghiệp ĐHSP Hà Nội Bảng 3.4 Khả thấm hút nước màng sau xử lý (g/100cm2) Thời gian Thử nghiệm 2h 4h 6h 8h 10h 12h Mẫu 0,62 1.85 2,64 3,58 5,12 6,35 Mẫu 0,59 2,28 3,32 4,16 4,51 5,89 Mẫu 0,58 2,15 3,16 3,53 5,33 5,56 M 0,60 2,09 3,04 3,76 4,99 5,93 Qua bảng 3.4 ta nhận thấy: màng BC có khả thấm hút nước tốt Sau màng hút 3,76 g/100cm2 nước, sau 12 màng hút tới 5,93 g/100cm2 nước 3.3.1.2 Khảo sát khả thấm hút nước muối sinh lý màng BC Nước muối sinh lý (dung dịch NaCl 0,9%) có tác dụng sát khuẩn nhẹ, dung dịch đẳng trương có áp suất thẩm thấu xấp xỉ với dịch thể người Khảo sát khả thấm hút nước muối sinh lý màng BC phương pháp tương tự với nước Kết trình bày bảng sau: Bảng 3.5 Khả thấm hút dung dịch nước muối sinh lý màng BC (g/100cm2) Thời gian Thử nghiệm giờ giờ 10 12 Mẫu 2,25 3.08 3,82 3,93 4,03 Mẫu 2,3 3,15 3,86 3,98 4,15 4,17 Mẫu 2,19 2,95 3,71 3,84 3,92 3,98 M 2,25 3,06 3,80 3,92 4,02 4,06 Qua bảng 3.5 ta thấy: sau ngâm màng BC hút 3,80 g/100cm2 dung dịch nước muối sinh lý, sau 12 hút 4,06 g/100cm2 Như vậy, khả thấm hút dung dịch nước muối sinh lý màng BC tương đối tốt 27 Đào Văn Kiên K33B - SP Sinh Khóa luận tốt nghiệp ĐHSP Hà Nội 3.3.1.3 Khảo sát khả thấm hút thuốc trị bỏng B76 màng BC Thuốc trị bỏng B76 Học viện Quân y sản xuất, có dạng bột, chiết xuất từ vỏ xoan trà, có tác dụng chữa vết bỏng nông, bỏng trung bình vết mổ vô trùng, vết lở loét tay chân, chốc đầu, Màng BC sau xử lý sấy khô ngâm dung dịch hòa tan bột thuốc trị bỏng B76 12 tiến hành khảo sát độ thấm hút màng Kết trình bày bảng sau: Bảng 3.6 Khả thấm hút thuốc trị bỏng B76 màng (g/cm2) Thời gian Thử nghiệm giờ giờ 10 12 Mẫu 1,56 1,85 2,13 2,39 2,61 2,78 Mẫu 1,61 1,90 2,18 2,52 2,73 2,90 Mẫu 1,59 1,88 2,15 2,42 2,65 2,83 M 1,59 1,88 2,15 2,44 2,66 2,84 Qua bảng 3.6 ta thấy: sau ngâm màng BC hút 2,15 g/100cm2 dung dịch thuốc trị bỏng B76, sau 12 hút 2,84 g/100cm2 Như vậy, màng BC có khả thấm hút dung dịch thuốc trị bỏng B76 so với hút nước nước muối sinh lý 3.3.1.4 Khảo sát khả thấm hút Becberin clorid 0,1% màng BC Becberin clorid (C20H18ClNO4.2H2O) triết xuất từ vàng đắng loại kháng sinh có khả sát khuẩn cao Màng BC sau xử lý sấy khô ngâm dung dịch hòa tan Becberrin clorid 0,1% 12 Qua tiến hành khảo sát khả thấm hút màng Kết trình bày bảng sau: 28 Đào Văn Kiên K33B - SP Sinh Khóa luận tốt nghiệp ĐHSP Hà Nội Bảng 3.7 Khả thấm hút Becberin clorid 0,1% màng(g/100cm2) Mẫu Mẫu Mẫu 2,95 3,01 2,93 3,99 4,05 3,95 Thời gian giờ 4,38 4,46 4,40 4,49 4,33 4,41 M 2,96 3,40 4,37 Thử nghiệm 10 4,52 4,54 4,48 12 4,55 4,58 4,52 4,51 4,55 4,45 Qua bảng 3.7 ta thấy: sau ngâm màng BC hút 4,37 g/100cm2 dung dịch Becberin clorid0,1%, sau 12 hút đươc 4,55 g/100cm2 Như vậy, màng có khả thấm hút tốt với dung dịch Becberin clorid 0,1% , thấm hút tốt dung dịch B76 dung dịch nước muối sinh lý  So sánh khả thấm hút màng BC chất phụ gia Kết thể qua đồ thị sau: M(g/100cm2) Nước NaCL B76 Becberin clorid 2 10 12 t(Giờ) Đồ thị 3.1 Khả thấm hút chất phụ gia màng BC Qua đồ thị 3.1 ta thấy: khả thấm hút nước màng BC tốt so với khả thấm hút chất phụ gia, sau 12 màng hút lượng nước 5,93g/10cm2 Đối với chất phụ gia: khả màng 29 Đào Văn Kiên K33B - SP Sinh Khóa luận tốt nghiệp ĐHSP Hà Nội thấm hút Becberin colorid 0,1% tốt (4,55g/100cm2/12 giờ), tiếp đến thấm hút nước muối sinh lý (4,06g/100cm2/12 giờ), thấm hút thuốc trị bỏng B76 (2,84g/100cm2/12 giờ) 3.3.2 Khảo sát độ bền học màng BC sau bảo quản Các mẫu màng đóng gói máy hút chân không, có tẩm chất phụ gia sau ngày đưa khỏi túi bảo quản để kiểm tra độ bền học theo phương pháp 2.2.2.1, kết thể bảng sau: Bảng 3.8 Khảo sát độ bền học của mẫu màng BC tẩm chất phụ gia (N/150cm2) Chiều đo Chiều dọc Chiều ngang Ngâm nước 14,7 17,4 NaCl 0,9% 16,4 19,2 B76 17,5 20,8 Becberin clorid 0,1% 17,2 20,5 Mẫu màng  So sánh độ bền học mẫu màngBC tẩm chất phụ gia Kết thể qua đồ thị sau: N/150cm2 20 16 12 Chiều dọc Chiều ngang Nước cất NaCl 0,9% B76 Becberin clorid 0,1% Đồ thị 3.2 Độ bền học mẫu màng BC tẩm chất phụ gia 30 Đào Văn Kiên K33B - SP Sinh Khóa luận tốt nghiệp ĐHSP Hà Nội Qua bảng 3.8 đồ thị 3.2 ta thấy độ bền học màng BC đóng gói với thuốc trị bỏng B76 (17,5 N/150cm2 theo chiều dọc, 20,8 N/150cm2 theo chiều ngang) Becberin clorid 0,1% (17,2 N/150cm2 theo chiều dọc, 20,5 N/150cm2 theo chiều ngang) tốt Thông qua việc khảo sát độ thấm hút độ bền học màng BC đóng gói với chất phụ gia ta nhận thấy: màng BC có độ thấm hút tốt với Becberin clorid 0,1% thuốc trị bỏng B76, màng BC tẩm thuốc trị bỏng B76 Becberin clorid 0,1% có độ bền học tương đương tốt so với tẩm nước muối sinh lý màng không tẩm phụ gia Như vậy, lựa chọn Becberin clorid 0,1% làm chất phụ gia đóng gói, bảo quản màng BC 3.4 Xây dựng quy trình đóng gói bảo quản màng BC quy mô phòng thí nghiệm Bao gồm bước bản:  Bước 1: Xử lý màng Các bước Cách xử lý Kết Rửa lại nước máy nhiều lần Loại bỏ bớt acid acetic      Đun với NaOH O,5N 100 C Màng có màu vàng sậm, mùi 30 phút khét Màng từ màu vàng sậm chuyển Trung hoà acid citric loãng thành màu trắng Ngâm với NaOH 0,5N nhiệt độ Màng BC trắng trong, không mùi phòng 12h ( lặp lại lần) Màng BC trắng trong, không mùi Trung hoà acid citric loãng đạt mặt cảm quan Bước 2: Diệt khuẩn lần (hấp vô trùng) Bước 3: Sấy Bước 4: Tẩm Becberin clorid 0,1% 12 Bước 5: Diệt khuẩn lần (chiếu xạ UV) Bước 6: Đóng gói máy hút chân không 31 Đào Văn Kiên K33B - SP Sinh Khóa luận tốt nghiệp ĐHSP Hà Nội Sơ đồ quy trình đóng gói màng BC phòng thí nghiệm Màng BC thu sau lên men - Tẩy rửa: Rửa nhiều lần nước máy Bước 1: Xử lý màng - Loại bỏ acid acetic NaOH - Trung hòa acid citric loãng Màng BC có màu trắng, không mùi Hấp vô trùng Sấy 12 400C Bước 2: Diệt khuẩn lần Bước 3: Sấy Tẩm Berberin clorid 0,1% 12 Bước 4:Tẩm ướp phụ gia Chiếu xạ UV Bước 5: Diệt khuẩn lần Màng BC khuẩn Đóng gói màng BC máy hút chân không Bước 6: Đóng gói Chế phẩm màng BC 32 Đào Văn Kiên K33B - SP Sinh Khóa luận tốt nghiệp ĐHSP Hà Nội Hình 3.22 Chế phẩm màng BC tẩm Becberin clorid 0,1% đóng gói Quy trình đóng gói màng BC phòng thí nghiệm có ưu nhược điểm là: - Ưu điểm: + Quy trình đơn giản, dễ thực hiện, không tốn kém, phù hợp với quy mô phòng thí nghiệm + Về không làm thay đổi tính chất màng + Màng BC sau đóng gói đáp ứng yêu cầu màng sinh học ứng dụng trị bỏng - Nhược điểm: + Màng sau xử lý thường bị mỏng + Không tiết kiệm thời gian sản xuất màng: tổng thời gian quy trình kéo dài 24 Như vậy, bước đầu xây dựng quy trình đóng gói bảo quản màng BC quy mô phòng thí nghiệm Tuy nhiên quy trình hạn chế định cần nghiên cứu hoàn thiện thời gian tới 33 Đào Văn Kiên K33B - SP Sinh Khóa luận tốt nghiệp ĐHSP Hà Nội KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận + Thu nhận màng BC từ chủng A.xylinum BHN2 đáp ứng yêu cầu vật liệu ứng dụng điều trị bỏng cần trải qua trình lên men tạo màng xử lý màng sau lên men + Lựa chọn phương thức đóng gói máy hút chân không phù hợp với đóng gói màng BC quy mô phòng thí nghiệm + Lựa chọn Becberin clorid 0,1% làm chất phụ gia đóng gói, bảo quản màng BC + Bước đầu xây dựng quy trình đóng gói bảo quản màng BC quy mô phòng thí nghiệm Kiến nghị Trên kết nghiên cứu bước đầu quy trình đóng gói bảo quản màng BC quy mô phòng thí nghiệm Để sản phẩm ứng dụng vào thực tiễn cần giải vấn đề sau: + Xây dựng phương pháp xử lý tiết kiệm, đơn giản, hiệu + Tiếp tục nghiên cứu, thử nghiệm để tìm chất phụ gia bảo quản hỗ trợ màng BC trị bỏng hiệu + Bước đầu ứng dụng màng BC làm màng trị bỏng động vật người + Xây dựng quy trình sản xuất màng BC quy mô công nghiệp nhằm đáp ứng nhu cầu thực tiễn giảm giá thành sản phẩm 34 Đào Văn Kiên K33B - SP Sinh Khóa luận tốt nghiệp ĐHSP Hà Nội TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Phạm Thị Trân Châu, Trần Thị Áng (1992), Hóa sinh học, Nxb Giáo dục, Hà Nội, tr 80-81 Nguyễn Lân Dũng, Phạm Văn Ty, Dương Đức Tiến (1980), Vi sinh vật học, tập 1-2, Nxb Khoa học kỹ thuật, Hà Nội Nguyễn Thành Đạt, Nguyễn Duy Thảo, Vương Trọng Hào (1990), Thực hành vi sinh vật, Nxb Giáo dục, Hà Nội, tr 17- 34, 63-74, 89-92 Phạm Thị Ngọc Đoài, Nguyễn Thị Diễm Chi, Nghiên cứu tạo màng sinh học trị từ A.xylinum, Tạp chí hội dược học Vũ Thị Minh Đức (2001), Thực tập vi sinh, Nxb Đại học Quốc gia Hà Nội , tr 1-50 Trịnh Hữu Hằng, Đỗ Công Quỳnh, (2001), Sinh lý học người động vật, Nxb Khoa học kỹ thuật, Hà Nội, tr 173, 184-187 Trương Thị Ngọc Hoa, Trương Nguyễn Quỳnh Hương (2007), Đa dạng hóa môi trường sản xuất Natadecoco từ vi khuẩn A.xylinum chế tạo màng sinh học, Luận văn thạc sĩ sinh học ĐHSP Hà Nội, Đặng Thị Hồng (2007), Phân lập, tuyển chọn nghiên cứu số đặc tính sinh học vi khuẩn A.xylinum chế tạo màng sinh học, Luận văn thạc sĩ sinh học ĐHSP Hà Nội Phạm Thành Hổ (2000), Di truyền học, Nxb Giáo dục, Hà Nội 10 Nguyễn Thúy Hương (2006), Chọn lọc dùng A.xylinum thích hợp cho loại môi trường dùng sản xuất cellulose vi khuẩn với quy mô lớn 11 Huỳnh Thị Ngọc Lan, Nguyễn Văn Thanh (2006), Nghiên cứu đặc tính màng cellulose vi khuẩn từ A.xylinum sử dụng làm màng trị bỏng, số 361, Tạp chí dược học 35 Đào Văn Kiên K33B - SP Sinh Khóa luận tốt nghiệp ĐHSP Hà Nội 12 Chu Văn Mẫn (2003), Ứng dụng tin học sinh học, Nxb ĐHQG Hà Nội 13 Đinh Thị Kim Nhung (1996), Nghiên cứu số đặc điểm sinh học vi khuẩn Acetobacter ứng dụng chúng lên men acid acetic theo phương pháp chìm, Luận án tiến sĩ sinh học Trường Đại Sư phạm Hà Nội 14 Trần Như Quỳnh (2009), Nghiên cứu số đặc tính vật lý màng BC từ A.xylinum, ứng dụng trị bỏng, Luận văn Thạc sỹ sinh học ĐHSP Hà Nội 15 Nguyễn Thị Nguyệt (2008), Nghiên cứu vi khuẩn A.xylinum cho màng Bacterial cellulose làm mặt nạ dưỡng da, Luận văn Thạc sỹ sinh học ĐHSP Hà Nội 16 Lương Đức Phẩm (2004), Công nghệ vi sinh vật, Nxb Nông nghiệp 17 Trần Thị Thanh (2003), Công nghệ vi sinh, Nxb Giáo dục 18 Đặng Hùng Thắng (1999), Thống kê ứng dụng, Nxb Giáo dục, Hà Nội, tr 214-267 19 Trần Linh Thước (2006), Phương pháp phân tích vi sinh vật, Nxb Giáo dục, Hà Nội, tr 1-29, 40-69 20 Nguyễn Thị Thùy Vân cs (2011), Nghiên cứu số đặc tính màng Bacterrial cellulose từ vi khuẩn A.xylinum BHN2, ứng dụng trị bỏng Tiếng nước 21 Bworn ( 2007), E Bacterial cellulose/ Thermoplastic nanocomposites Master of science in chemical engineering, Washington state university 22 Chung Y., Shyu Y (1999), The effect of pH, salt, heating and freezing on the physical properties of bacterial cellulose – nata, Int Journal of Food sci and Tech 34, p 23-26 36 Đào Văn Kiên K33B - SP Sinh Khóa luận tốt nghiệp ĐHSP Hà Nội 23 Nguyen Van Thanh et al (2005), Study on preparation bacterial cellulose from A.xylinum for treating burns and wounds, Proceedings of the 4-th Indochina Conf on Pharmaceutical Sciences, Nov 10-13, Univ of Medicine and Pharmacy of HCM City, Vietnam 24 Takayasu Tsuchida, Fumihiro Yoshinaga (1997), Production of bacterial cellulose by agitation culture systems Vol 69, N o 11, Pure & Appl Chem, p 2453- 2458 25 Thesis Homles (2004), Bacterial cellulose Department of chemical and process Engineering University of Canterbury Christchurch, New Zealand, p 1-65 37 Đào Văn Kiên K33B - SP Sinh [...]... đề tài Xây dựng và lựa chọn phương thức đóng gói và bảo quản chế phẩm màng BC 3 Nội dung nghiên cứu của đề tài - Nghiên cứu thu nhận màng BC trên quy mô phòng thí nghiệm - Nghiên cứu phương thức đóng gói màng BC - Lựa chọn chất phụ gia bảo quản màng BC khi đóng gói - Xây dựng quy trình đóng gói và bảo quản màng BC ở quy mô phòng thí nghiệm 4 Ý nghĩa của đề tài Bước đầu xây dựng và đề xuất các phương. .. dầu mù u mà thay thế vào đó chúng tôi sử dụng các loại thuốc trị bỏng khác như: Becberin florid 0,1%, thuốc bột trị bỏng B76, nước muối sinh lý Đặc biệt, chúng tôi đã xây dựng và lựa chọn được phương thức đóng gói, bảo quản màng BC tạo ra từ chủng A.xylinum, tìm ra vật liệu đóng gói và chất bảo quản phù hợp, vừa hợp giá thành, bảo quản được màng BC trong một khoảng thời gian dài và nâng cao được tác... Như vậy, phương thức đóng gói bằng máy hút chân không phù hợp với đóng gói màng BC ở quy mô phòng thí nghiệm 3.3 Lựa chọn chất phụ gia bảo quản màng BC khi đóng gói Chúng tôi tiến hành lựa chọn chất phụ gia bảo quản màng BC khi đóng gói, đồng thời các chất phụ gia này cũng là dung dịch, thuốc hỗ trợ trong quá trình trị bỏng Màng sau xử lý được ngâm tẩm trong các dung dịch chất phụ gia theo phương pháp... trang, làm sáng da)…Tuy nhiên màng BC trong quá trình đến tay người sử dụng thường bị giảm chất lượng hoặc bị nhiễm một số loại nấm mốc và vi khuẩn không mong muốn Từ những thực tiễn trên và mong muốn tìm hiểu thêm về vi khuẩn A.xylinum, quá trình tạo màng BC cũng như nhiều ứng dụng hữu ích của nó tôi chọn đề tài: Xây dựng và lựa chọn phương thức đóng gói, bảo quản màng BC 1 Đào Văn Kiên K33B - SP... điểm: Không đáp ứng được yêu cầu bảo quản màng trong một thời gian dài, màng dễ bị nhiễm khuẩn Hình 3.18 Màng BC đóng gói thủ công Vì vậy, phương pháp đóng gói này là không khả thi, không đáp ứng được yêu cầu bảo quản màng BC, ứng dụng trị bỏng 3.2.2 Đóng gói bằng máy hút chân không - Vật liệu đóng gói: là túi hút chân không chuyên dụng - Phương pháp đóng gói: Được đóng gói bằng máy hút chân không... phương pháp: - Ưu điểm: + Thao tác không phức tạp + Bảo quản được màng BC trong một khoảng thời gian dài - Nhược điểm: + Phải đầu tư máy và vật liệu đóng gói hút chân không chuyên dụng Hình 3.21 Màng BC đóng gói bằng máy hút chân không 25 Đào Văn Kiên K33B - SP Sinh Khóa luận tốt nghiệp ĐHSP Hà Nội 2 Nhận xét: màng BC được đóng gói bằng máy hút chân không có khả năng bảo quản màng BC được lâu hơn phương. .. quá trình là lên men tạo màng và xử lý màng sau lên men 3.2 Nghiên cứu phương thức đóng gói màng BC 3.2.1 Đóng gói bằng phương pháp thủ công - Vật liệu đóng gói: là túi nilon thông dụng đã được hấp vô trùng - Phương pháp đóng gói: làm kín miệng túi bằng nhiệt hơ trên ngọn lửa đèn cồn Hình 3.16 Túi nilon thông thường Hình 3.17 Đóng gói thủ công Màng BC sau khi được đóng gói bằng phương pháp này được chiếu... 1 vào môi trường lên men nhân giống cấp 2 (20 ml dịch cấp 1/200ml môi trường) - Tiến hành lên men tĩnh trong 4 ngày để tạo màng  Bước 4: thu màng BC - Sau 4 ngày, màng đã đảm bảo độ dày Tiến hành thu và xử màng BC Hình 3.13 Màng BC chưa xử lý Màng BC chưa qua xử lý có diện tích 10x15 cm, dày khoảng 0,5 - 0,7 cm, màu trắng đục và có mùi chua gắt của acid acetic 3.1.2 Xử lý màng sau lên men Màng BC. .. cho thấy cấu trúc sợi cellulose của màng BC, các sợi này tạo thành bề mặt đồng nhất và còn rất ít các tế bào vi khuẩn [13] Chúng tôi quyết định sử dụng màng BC đã xử lý theo phương pháp trên cho các nghiên cứu tiếp theo 2.2.4 Phương pháp bảo quản màng BC từ A.xylinum Màng BC sau khi được tạo thành hàng loạt cần được bảo quản để dùng cho các nghiên cứu tiếp theo và sử dụng để thử nghiệm điều trị bỏng... với nước cất vô trùng để màng BC hút nước và trở lại hình dạng ban đầu Sau đó, màng BC sẽ được tẩm thuốc đặc trị bỏng để điều trị vết thương 2.2.4.2 Bảo quản với chất phụ gia Khi sấy xong, màng BC sẽ được ngâm tẩm với các chất phụ gia khác nhau trong 12 giờ, sau đó mới được đóng gói bằng máy hút chân không Dụng cụ ngâm tẩm màng BC là hộp lồng nhựa, kích thước 10 x 15 cm2, ngâm 1 màng/ 100ml dung dịch chất ... chọn đề tài: Xây dựng lựa chọn phương thức đóng gói, bảo quản màng BC Đào Văn Kiên K33B - SP Sinh Khóa luận tốt nghiệp ĐHSP Hà Nội 2 Mục tiêu đề tài Xây dựng lựa chọn phương thức đóng gói bảo. .. sinh lý Đặc biệt, xây dựng lựa chọn phương thức đóng gói, bảo quản màng BC tạo từ chủng A.xylinum, tìm vật liệu đóng gói chất bảo quản phù hợp, vừa hợp giá thành, bảo quản màng BC khoảng thời gian... 3.3 Lựa chọn chất phụ gia bảo quản màng BC đóng gói 26 3.3.1 Khảo sát khả thấm hút màng BC 26 3.3.2 Khảo sát độ bền học màng BC sau bảo quản 30 3.4 Xây dựng quy trình đóng gói bảo quản