Đang tải... (xem toàn văn)
nghiên cứu chiết tách và phân lập một số chất từ cây giá (excoecaria agallocha l ) họ euphorbicaceae ở việt nam
MÃ ĐỀ TÀI: TÊN ĐỀ TÀI : NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH PHÂN LẬP CÁC CHẤT TỪ CÂY GIÁ (EXCOECARIA AGALLOCHA L., EUPHOBIACEAE) Sinh viên: Họ tên – Lớp – Khóa Giáo viên hướng dẫn: Học hàm học vị Họ tên Khoa/Viện Điện thoại nhóm SV : Phần Tóm tắt nội dung đề tài: Bối cảnh mục tiêu : Cây Giá có tên khoa học Excoecaria agallocha L., họ Euphorbiaceae loài mọc vùng đất bồi ven biển, ven sông ưa đất cát pha, có mùn, nước lợ nước mặn, dễ tìm có khả phát triển tốt Từ Cây Giá (Excoecaria agallocha L.) người ta chiết số chất có hoạt tính kháng virus HIV, nhiều hợp chất có hoạt tính sinh học cao, có tác dụng ức chế mạnh số loài virus, có khả kháng viêm, chống oxy hóa ức chế số tác nhân gây ung thư.[1] Vì đề tài “ Nghiên cứu chiết tách phân lập số chất từ giá (Excoecaria agallocha L.) họ Euphorbiaceae Việt Nam ” góp phần tìm hiểu tiềm khai thác sử dụng loài hữu ích Phương pháp: Bản mỏng sắc ký mỏng, cột sắc ký cột Kết : Từ cặn chiết n-hexan dịch chiết tổng methanol loài Excoecaria agallocha L thu hợp chất EA1 (14-taraxerene-3-one) , EA2 (14-taraxerene-3β-ol) , EA3 (14-taraxerene-3α-ol) Kết luận : TÀI LIỆU THAM KHẢO Page I Đặt vấn đề Thực vật chi Excoecaria Cây Giá (Excoecaria agallocha L.) có vùng phân bố tương đối rộng, gặp khu vực ven biển từ miền Nam Ấn Độ, Sri Lanka, Myanmar đến Thái Lan, Việt Nam… Về phía Bắc gặp Trung Quốc, Nhật Bản Phía Nam, gặp Bắc Austalia khu vực Thái Bình Dương Lá sắc uống chữa động kinh; giã tươi đắp trị vết loét Dịch nấu với dầu dùng xoa đắp trị thấp khớp, phong bại liệt Rễ độc phần mặt đất Giã lẫn với Gừng, dùng làm thuốc chườm trị sưng chân tay Hạt phơi nắng chế dầu dùng trị ghẻ.[2] Theo thống kê, họ Thầu dầu (Euphorbiaceae) họ lớn thực vật có hoa với 240 chi khoảng 6.000 loài Phần lớn thân thảo, khu vực nhiệt đới tồn loại bụi thân gỗ Một số loài chứa nhiều nước tương tự loại xương rồng Các thuộc chi Excoecaria loài Cây gỗ cao 20m, đường kính 25cm Cành nhánh nhiều, khúc khuỷu, vỏ màu xám tro Thân có nhựa mủ Lá đơn, mọc cách, thường tập trung đầu cành, phiến dày cứng hình bầu dục hình trứng bầu dục, đầu có mũi lồi ngắn, lệch tù, gốc tù, dài - 8cm, rộng 2,5 - 4,5cm, mép gợn sóng, gân bên - đôi, cuống mảnh, dài 2cm, có tuyến nhỏ gốc phiến Hoa đơn tình khác gốc hay gốc Cụm hoa đực bông, dài - 8cm Hoa đực có cánh đài, hình dải, nhị, nhị phình gốc Hoa cái, bắc giống hoa đực, hoa gần không cuống, cánh đài 3, hình tam giác Bầu hình trứng ô, vòi nhụy; nang có cuống nhỏ, có cạnh, đường kính 1cm Hạt hình cầu, đường kính 4mm, màu xám nhạt.[3] Page Hình 1: Cây Giá (Excoecaria agallocha L.) 1.1 Tình hình nghiên cứu giá (Excoecaria agallocha L.) Trên giới, Cây Giá nghiên cứu nhiều thành phần hóa học hoạt tính sinh học Các chất tách chủ yếu thuộc vào lớp chất diterpen flavonoid Page 1.2 Các diterpen Diterpen nhóm chất thuộc lớp chất terpen, thành phần phân tử chứa đơn vị isopren (C5H8), có công thức phân tử C20Hn, có cấu tạo mạch thẳng mạch vòng Các nghiên cứu cho biết, nhựa mủ Giá hỗn hợp diterpen este (các hợp chất chứa C20 ) với axit béo bão hòa tương tự axit n-cacboxylic (với C 22-C30) Các hợp chất có tác dụng gây kích thích, gây nhức nhối da tiếp xúc Năm 2000, Bằng phương pháp phổ Ammanamanchi đồng ông phân lập 11 diterpen từ dịch chiết n-hexan rễ Cây Giá (Excoecaria agallocha L.) thu vùng Godavari Ấn Độ Trong có diterpen là: 3-oxo-ent-13epi-8(13)-epoxy-15-chloro-14-hydroxylabdan (1); ent-15-chloro-13,14 dihydroxylabd-8(9)-en-3-on (2); ent-15-chloro-labd-8(9)en-3α,13,14-triol (3); ent-11β-hydroxy8(14),15-isopimaradien-3-on (4); 8,13-epoxy-3-nor-2,3-seco-14-epilabden-2,4-olid (5) Và diterpen biết là: ent-3-oxo-13-epi-manoyl oxid (6); ent- 3β-hydroxy-13-epi-manoyl oxid (7); (13R,14S)-ent-8α,13;14,15-diepoxy-13-epi-labdan-3-on (8); ent-16-hydroxy-3- oxo-13-epi- manoyl oxid (9); ent-15-hydroxylabda-8(17),13E-dien-3-on (10); labda- 8(17),13E-dien-3β,15diol (11) Một số Diterpen phân lập có hoạt tính chống lại phát triển khối u thể chuột [4] Page Năm 2000, Tenji Konishi cộng phân lập diterpen từ nhựa gỗ Giá (Excoecaria agallocha L.) thu Okinawa, Nhật Bản Cấu trúc diterpen này xác định nhờ phương pháp phổ NMR X-Ray đơn tinh thể Excoecarin M (12) Excoecarin N (13) [5] Page Năm 2002, Ammanamanchi cộng phân lập nhận dạng diterpen từ dịch chiết n-hexan rễ Giá (Excoecaria agallocha L.) thu vùng cửa sông Godavary, Ấn Độ là: ent-13-epi-8,13-epoxy- 4,6α-dihydroxy3,4-secolabd-14-en-3-oat (14); ent-13-epi-8,13-epoxy-2,3-secolabd-14-en-2,11- olid-3-oat (15); ent-17-hydroxy-3,4-secokaura-4(19),15-dien-3-oat (16) [6] Page Năm 2003, Tenji Konishi đồng ông phân lập ba diterpen khung secolabdan có tên excoecarin S, T1 T2 từ dịch chiết nhexan mủ Giá (Excoecaria agallocha L.), cấu trúc diterpen xây dựng dựa sở liệu quang phổ 13C, 1H NMR X-Ray đơn tinh thể là: 13-epi-12-hydroxy-2,3-secolabda-14-en (17), axit ent-14S,15epoxy-2,3-seco-13-epi-labdan-2,3-dioic (18) axit ent-14R,15-epoxy-2,3-seco13-epi-labdan-2,3-dioic (19) Trong T1và T2 có công thức Và diterpen biết axit ent-12-oxo-2 ,3-secobeyer-15-en-2,3-dioic (20); agallochin H (21); ent-15-epoxy-beyeran-3α-ol (22) [7] Gần đây, phorbol este có tên 12-deoxyphorbol-13-(3E, 5E-decadienoat), với đặc tính chống HIV, phân lập từ thân Giá (Excoecaria agallocha L.) nghiên cứu Tây bắc Australia Trong trình nghiên cứu người ta thấy thành phần diterpen có khả ức chế hiệu với virus Epstein-Barr gây ung thư [1], [8] Page Năm 2007, Ji-Dong Wang đồng ông phân lập diterpen từ dịch chiết etyl axetat từ thân Giá ( Excoecaria agallocha L.) sử dụng phương pháp sắc ký cột sử dụng silica gel, Sephadex LH-20 Bằng phương pháp phổ phổ hồng ngoại (IR), 13C 1H NMR xác định cấu trúc loại diterpen đặt tên excoagallochaols A-D là: Excoagallochaol A (23), Excoagallochaol B (24), Excoagallochaol C (25), Excoagallochaol D(26) Trong Excoagallochaol D(26) đồng phân Excoagallochaol C (25) [8] Page Năm 2009, Zhan Chang Wang cộng phân lập từ dịch chiết etanol vỏ Giá (Excoecaria agallocha L.) diterpen diterpen ba diterpen biết Đó ent-16α-hydroxy-atisan-3,4-lacton (30); ent-16αhydroxy-atisan-3-on (27); ent-atisan-3β,16α-diol (28); axít ent-3,4-seco-16αhydroxyatis- 4(19)-en -3-oic (29) [9] Một số diterpen phân lập từ gỗ Giá (Excoecaria agallocha L.) cho thấy hoạt tính chống khối u ngăn chặn chống gỉ số loài sinh vật sò, giun ống, rong biển [4], [9] Page Năm 2010, Yongxin Li cộng phân lập từ dịch chiết metanol thân cành Giá (Excoecaria agallocha L.) Trung Quốc Từ phân lập sáu diterpen khung ent-kauran có tên agallochaol K-P : Agallochaol K (axít ent-17-hydroxy-3,4-secokaur-4(18),15-die-3-oic ) (31) ; Agallochaol L (axít ent-17-caffeoyloxy-3,4-secokaur-4(18),15-die-3-oic ) (32); Agallochaol M (axít ent-17-coumaroyloxy-3,4-secokaur-4(18),15-die-3-oic ) (33); Agallochaol N (axít ent-3,4-secokaur-4(18),15-dien-3-oic ) (34); Agallochaol O (ent-17caffeoyloxykaur-15-en-3-on) (35); Agallochaol P (ent-kaur-15-en-3b,17-diol-2-on) (36); Agallochaol M (axít ent-3,4-secoatisan-4(18),16-dien-3-oic) (37) Và có diterpen biết là: agallochin O (38); ent-17-hydroxykaur-15-en-3on (39); ent-kaur-15-en-3β,17-diol (40); 7-deoxogeayin (41); ent-15-hydroxylabd8(17),13E-dien-3-on (42); ent-15,18-dihydroxylabd-8(17),13E-dien (43); ent-3β, 11α-dihydroxyisopimara-8(14),15-dien-2-on (44); ent-3β-hydroxybeyer-15-en2,12-dion (45) Trong diterpen Agallochaol K (axít ent-17-hydroxy-3,4-secokaur4(18),15-die-3-oic ) (31), Agallochaol O (ent-17-caffeoyloxykaur-15-en-3-on) (35), Agallochaol M (axít ent-3,4-secoatisan-4(18),16-dien-3-oic) (37), ent-17hydroxykaur-15-en-3-on (39), ent-kaur-15-en-3β,17-diol (40), ent-15,18dihydroxylabd-8(17),13E-dien (43) cho thấy tiềm chống viêm hiệu [10] Page 10 Page 11 1.3 Các flavonoid Flavonoid hợp chất polyphenol, đa dạng cấu trúc hóa học sinh học Chúng có hầu hết phận cây, đặc biệt tế bào thực vật quang hợp Các flavonoid không tổng hợp người động vật Năm 2010, Yusnita Rifai đồng ông phân lập từ dịch chiết metanol, n- hexan, etylaxetat butanol từ Giá (Excoecaria agallocha L.) flavonoid Cấu trúc chất xây dựng nhờ sử dụng phương pháp phổ, có flavonoid (45), (46) flavonoid glycosid biết: afzelin (47); quercitrin (48); rutin (49); kaempferol-3-O-(2-O-acetyl-α-Lrhamnopyranosid (50); kaempferid O-α-L-rhamnopyranosid (51) kaempferol 3-Oa-Larabinofuranosid (52) Ba glycoside flavonoid bao gồm hợp chất (45 46) phân lập từ Giá (Excoecaria agallocha L.) chất ức chế chống lại tế bào ung thư tuyến tụy người tế bào ung thư tuyến tiền liệt mang lại nhiều hiệu tích cực [11] Page 12 Page 13 Năm 2011, Yongxin Li đồng ông phân lập từ dịch chiết butanol Giá (Excoecaria agallocha L.) Bằng phương pháp phân tích quang phổ IR, MS, NMR xác định cấy trúc bốn flavonoid Bốn flavonoid phân lập là: Excoecariphenol A (53); Excoecariphenol B (54) ; Excoecariphenol C (55) ; Excoecariphenol D (56) Những flavonoid thử nghiệm cho kết tích cực phòng chống bệnh viêm gan HCV [12] Hoạt tính sinh học giá (Excoecaria agallocha L.) Cây Giá Excoecaria agallocha hoạt động tốt nhờ chứa thành phần hóa học, đặc biệt là: - Diterpen Triterpen Và flavonloid Page 14 Một số đặc tính trị liệu Giá: Được sử dụng theo truyền thống để chữa trị: - Những vết thương Những vết chích số loài động vật biển Những bệnh gây lở loét Được xem thuốc tẩy xổ làm nôn Rễ Giá chữa trị đau rang sung Nước ép Giá đun sôi dầu áp dụng trong: - Những bệnh thấp khớp - Bệnh phong cùi - Bệnh bại liệt Nước nấu sắc Giá dung chữa bệnh động kinh bệnh lở loét Vỏ Giá chất tẩy xổ làm nôn Dầu từ vỏ Giá có hiệu chống bệnh thấp khớp, bệnh phong cùi bệnh tê liệt Page 15 II KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Thực nghiệm mẫu Giá: Sơ đồ 1: Quy trình chiết mẫu thực vật Mẫu khô 5.7kg Chiết với MeOH 95% Cất loại MeOH Cặn MeOH 530g Thêm 2lit H2O Chiết với ethyl axetat cất loại dm Cặn chiết EtOAc 54.5g Dịch nước lại 310g Chiết với n-hexan cất loại dm Cặn chiết n-hexan 96.1g Page 16 Sơ đồ 2: Quy trình phân lập chất từ cặn n-hexan Giá 50g cặn n-hexan Sắc ký cột silicagel (10/1) n-hexan/EtOAc 5% EtOAc 10% EtOAc PĐ1 6.6g I.1 PĐ2 12.4g I.2 I.3 Page 17 20%-50% EtOAc PĐ3-PĐ7 EA1 (1) EA3 (2) (taraxerone) (epitaraxerol) EA2 (3) (taraxerol) 5.7kg bột khô Giá chiết siêu âm MeOH 95% 3lần (3 tiếng/lần) Dịch chiết tổng cô quay áp suất giảm thu 530g cặn tổng MeOH Đem pha loãng cặn tổng MeOH với 2lit nước chiết phân bố với n-hexan etyl axetat, cô quay giảm áp thu 96.1g cặn n-hexan, 54.5g cặn etyl axetat 310g cặn nước Tiến hành phân lập chất từ 50g cặn n-hexan dịch chiết tổng MeOH từ giá sắc ký cột silica gel (tỷ lệ chất/silica gel=10/1) với hệ dung môi n-hexan/etyl axetat, tăng dần tỷ lệ etylaxetat từ 0%-100% thu phân đoạn Phân đoạn 1(6.6g) thu rửa gải hệ n-hexan/etyl axetat với tỷ lệ etyl axetat 5% Phân đoạn tinh chế sắc ký cột (tỷ lệ chất/silica gel=1/25), với hệ dung môi rửa giải n-hexan/etyl axetat = 65/1 thu phân đoạn I.1, I.2, I.3 Kết tinh phân đoạn I.1 n-hexan, rửa lại n-hexan lạnh thu 0.15g chất EA1(taraxer-14-en-3-one) tinh thể hình kim, màu trắng, Rf= 0.52 (n-hexan/etylaxetat = 20/1), t onc= 241-243oC Phân đoạn I.3 kết tinh lại n-hexan thu 96mg EA3 (epitaraxerol) tinh thể hình kim, màu trắng, Rf=0.33 (n-hexan/etylaxetat = 20/1), tonc= 268-269oC Phân đoạn 2(12.4g) thu rửa gải hệ n-hexan/etyl axetat với tỷ lệ etyl axetat 10% Sắc ký cột phân đoạn (tỷ lệ chất/silica gel=30/1), dung môi rửa giải nhexan/etylaxetat=50/1 thu 1phân đoạn Kết tinh CH 2Cl2 rửa lại CH2Cl2 lạnh thu 0.60g chất EA2 (taraxerol), dạng tinh thể hình phiến màu trắng, Rf= 0.61 (nhexan/etylaxetat = 10/1), tonc= 279-280oC * Thảo luận kết Page 18 Hợp chất EA1 (1): 14-taraxerene-3-one Page 19 Hợp chất EA1 thu từ cặn chiết n-hexan dịch chiết tổng metanol loài Excoecaria agallocha L chất kết tinh hình kim, màu trắng Phổ 1H-NMR có dạng phổ hợp chất triterpen có xuất nhóm metyl bậc bốn phân tử thể qua tín hiệu singlet δH 0.83 (3H), 0.91 (3H), 0.92 (3H), 0.95 (3H), 1.06 (3H), 1.08 (3H), 1.09 (3H), 1.14 (3H) Ngoài ra, phổ thấy xuất tín hiệu proton olefin δH 5.55 (1H, dd, J = 8.0, 3.5 Hz) Phổ 13C-NMR xuất tín hiệu 30 cacbon, dựa vào kết phổ DEPT cho thấy hợp chất có cacbon bậc bốn δC 217.5, 157.6, 47.5, 38.8, 37.7, 37.5, 35.7, 28.7; nhóm metin δC 117.1, 55.7, 48.8, 48.7; 10 nhóm metylen δC 40.6, 38.3, 37.6, 36.6, 35.1, 34.1, 33.5, 33.1, 19.9, 17.4; nhóm metyl δC 33.3, 29.9, 29.8, 26.1, 25.5, 21.4, 21.3 14.8 Trong tín hiệu nhóm cacbonyl xác định δC 217.5, nối đôi bị vị trí δC 157.6 (C) 117.1 (CH) Trên phổ ESI-MS ion dương chất EA1 cho pic ion phân tử m/z = 425 [M + H]+ Công thức phân tử xác định thông qua liệu phổ MS 13C-NMR C 30 H 48 O Phân tích tín hiệu proton nhóm metyl phổ 1H-NMR độ chuyển dịch hóa học nguyên tử cacbon phổ 13C-NMR khẳng định EA1 triterpen khung taraxeran So sánh liệu phổ EA1 với tài liệu [] cho phép kết luận EA1 14-taraxeren-3-one Hợp chất EA3 (2): 14-taraxerene-3α-ol (epitaraxerol) Hợp chất EA3 thu dạng tinh thể màu trắng Trên phổ ESI-MS ion dương chất EA3 cho pic ion phân tử m/z = 427 [M + H]+ Công thức phân tử xác định thông qua liệu phổ MS 13C-NMR C 30 H 50 O Trên phổ 1H-NMR EA3 xuất tín hiệu nhóm metyl bậc bốn δH 0.82, 0.86, 0.91(6H), 0.94(9H), 1.09 dạng singlet, tín hiệu proton nối đôi δH 5.52 (dd, J = 8.0, 3.5Hz) tín hiệu proton δH 3.40 (1H, br) Nhìn chung, phổ 1H-NMR EA3 giống với hợp chất EA1, phổ EA3 có xuất thêm tín hiệu proton δH 3.40 tín hiệu nhóm oximetin Điều cho phép dự đoán EA3 dẫn xuất bị khử nhóm cacbonyl (>C=O) EA1 Phổ 13C-NMR EA3 xuất tín hiệu 30 cacbon giống với hợp chất EA1 Tuy nhiên, phổ 13C-NMR EA3 không thấy xuất tín hiệu nhóm cacbonyl (δC 217.5) mà thay vào tín hiệu nhóm oxymethine δC 76.2 Điều lần khẳng định dự đoán phù hợp Phân tích kiện phổ thu so sánh Page 20 với tài liệu công bố [], hợp chất EA3 xác định epitaraxerol, dẫn xuất taraxerone Hợp chất EA2 (3): 14-taraxerene-3β-ol (taraxerol) Hợp chất EA2 thu dạng tinh thể hình phiến màu trắng, có nhiệt độ nóng chảy tonc= 279-280oC Phổ 1H-NMR EA2 xuất tín hiệu singlet nhóm metyl bậc bốn δH 0.80 (3H), 0.82(3H), 0.91(6H), 0.93(3H), 0.95(3H), 0.97(3H), 1.09(3H), tín hiệu proton nối đôi δH 5.54(dd, J = 8.0, 3.5 Hz), tín hiệu proton δH 3.19 (1H, m) Phổ 13C-NMR EA2 xuất tín hiệu 30 nguyên tử Các phổ 1H- 13C-NMR EA2 EA3 hoàn toàn tương đồng với Chỉ có điểm khác biệt độ chuyển dịch proton cacbon nhóm oximethine là: tín hiệu proton nhóm oximethine EA2 (δH 3.19) chuyển dịch phía trường mạnh EA3 (δH 3.40), tín hiệu cacbon nhóm oxymethine EA2 (δC 78.8) chuyển dịch phía trường thấp EA3 (δC 76.2) điều cho phép dự đoán EA2 đồng phân EA3 với nhóm oxymethine nằm vị trí 3β Phân tích kiện phổ thu so sánh với tài liệu công bố [], hợp chất EA2 xác định taraxerol Như nhóm cacbonyl (>C=O) EA1 bị khử hóa thu hai dạng đồng phân 14taraxerene-3α-ol (EA3) 14-taraxerene-3β-ol (EA2) Đây lần hợp chất phân lập từ loài E.Agalocha Khi nghiên cứu khả ức chế enzym acetylcholinesterase (AchE) từ số loài thực vật nấm, Peter J Houghton cộng phát khả ức chế AchE 14-taraxeren-3β-ol với giá trị IC50 79µM [63] Vị trí Taraxerone 3β-taraxerol 3α-taraxerol 23 4α 1.08s 0.93s 0.94s 24 4β 1.06s 0.80 s 0.82s 25 10β 1.09s 0.91s 0.94s 26 8β 1.14s 0.97s 1.09s 27 13α 0.92s 1.09s 0.91s 28 17β 0.83s 0.82s 0.86s 29 20α 0.91s 0.91s 0.91s Page 21 30 20β 0.95s 0.95s 0.93s Hợp chất EA1, EA2, EA3 Vị trí EA1 (1) EA2 (3) EA3 (2) 14-taraxeren-3-on 14-taraxeren-3β-ol 14-taraxeren-3α-ol [TL1,2] [TL2] (epitaraxerol) [TL3] C δ C (CDCl3, 125MHz) δ H (CDCl3, 500MHz) δ C (CDCl3, 125MHz) 38.3(CH2) 34.1(CH2) 217.5(C) 78.8 47.5(C) 2.56 (1H, ddd, J=16.0, 7.6, 3.5 Hz, Ha-2), 2.32(1H, ddd, J=16.0, 6.5, 3.5 Hz, Hb-2) δ H (CDCl3, 500MHz) δ C (CDCl3, 125MHz) 37.6 37.7(CH2) 26.7 25.0(CH2) 76.2(CH) 3.40(br) 38.8 39.1(C) - 55.7(CH) 55.4 49.2(CH) 19.9(CH2) 18.6 18.7(CH2) 35.1(CH2) 35.0 33.7(CH2) 38.8(C) 38.6 38.0(C) 48.7(CH) 48.6 48.9(CH) 10 35.7(C) 37.4 37.5(C) 11 17.4(CH2) 17.3 17.4(CH2) 12 37.6(CH2) 37.5 35.1(CH2) 13 37.7(C) 35.6 37.3(C) 14 157.6(C) 158.0 158.2(C) 15 117.1(CH) 5.55(dd, J=8.0, 3.5, H-15) 116.7 Page 22 3.19 (m) δ H (CDCl3, 500MHz) 5.54(dd, J=8.0, 3.5) 116.7(CH) 5.52(dd, J=8.0, 3.5) 16 36.6(CH2) 36.5 36.7(CH2) 17 37.5(C) 37.8 35.8(C) 18 48.8(CH) 49.5 48.7(CH) 19 40.6(CH2) 41.2 41.2(CH2) 20 28.7(C) 28.6 28.8(C) 21 33.5(CH2) 33.5 33.1(CH2) 22 33.1(CH2) 32.9 32.2(CH2) 23 26.1(CH3) 1.08s 27.7 0.93s 33.3(CH3) 0.94s 24 21.3(CH3) 1.06s 15.3 0.80s 22.1(CH3) 0.82s 25 14.8(CH3) 1.09s 15.2 0.91s 29.9(CH3) 0.94s 26 29.8(CH3) 1.14s 29.6 0.97s 26.0(CH3) 1.09s 27 25.5(CH3) 0.92s 25.7 1.09s 29.8(CH3) 0.91s 28 29.9(CH3) 0.83s 29.7 0.82s 21.2(CH3) 0.86s 29 33.3(CH3) 0.91s 33.1 0.91s 28.2(CH3) 0.91s 30 21.4(CH3) 0.95s 21.1 0.95s 15.2(CH3) 0.93s KẾT LUẬN Trong trình nghiên cứu này, thu số kết sau: Page 23 Đã xử lý mẫu Giá tạo cao chiết tổng cao chiết phân đoạn dung môi hữu khác Bằng việc kết hợp phương pháp sắc ký phân lập hợp chất từ cao chiết n-hexan Giá, kết hợp với phương pháp phổ đại bao gồm cộng hưởng từ hạt nhân chiều (1H-NMR, 13C-NMR, DEPT), phổ khối lượng (ESI-MS) phân lập cấu trúc hóa học hợp chất Các hợp chất là: - Hợp chất EA1 (1): 14-taraxerene-3-one - Hợp chất EA3 (2): 14-taraxerene-3α-ol (epitaraxerol) - Hợp chất EA2 (3): 14-taraxerene-3β-ol (taraxerol) TÀI LIỆU NGHIÊN CỨU Tuyển tập báo cáo Hội nghị Sinh thái Tài nguyên sinh vật lần thứ 3, 22/10/2009 - Viên ST&TNSV - Viện KH&VN Việt Nam Page 24 Lã Đình Mỡi, Dương Đức Huyến, Nguyễn Tiến Bân (2004), Chi Đơn tía (Excoecaria L.), chi Lãnh công (Fissistigma Griff.) Tài nguyên thực vật Đông Nam Á, Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội, tập 9(6), trang 3-18 Phạm Hoàng Hộ,Cây cỏ Việt Nam, trang 284 Ammanamanchi S.R Anjaneyulu , Vadali Lakshmana Rao, (2000),Phytochemistry, V 55, p 891-893 Tenji Konishi, Takao Konoshima, Takashi Maoka and Yasuhiro Fujiwara, (2000), Tetrahedron Letters, V.41, p 3419 Ammanamanchi S.R Anjaneyulu, Vadali Lakshmana Rao, (2002), Phytochemistry, V.62, p 585-586 Tenji Konishi, Takao Konoshima, Takashi Maoka and Yasuhiro Fujiwara, (2003), Phytochemistry, V.64, p 835- 840 Ji-Dong Wang , Wen Zhang , Zhen-Yu Li , Wen-Sheng Xiang ,Yue-Wei Guo , Karsten Krohn, (2007), Phytochemistry, V.68, p 2436-2440 Zhan Chang Wang , Yi Ming Lin , Dan Qin Feng , Cai Huan Ke , Peng Lin , Chong Ling Yan and Jun De Chen, (2009), Open Access, V.14, p.414- 420 10 Yongxin Li, Jun Liu, Shanjiang Yu , Peter Proksch, Jun Gu, Wenhan Lin, Phytochemistry, (2010), V.71, p 2124- 2130 11 Yusnita Rifai, Midori A Arai, Samir K Sadhu, Firoj Ahmed, Masami Ishibashi, (2011), Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters V.21, p.718- 722 12 Yongxin Li, Shanjiang Yu, Dong Liu, Peter Proksch, Wenhan Lin, (2011), Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters , p.1-3 13 Nguyễn Đình Triệu, Các phương pháp vật lý đại ứng dụng hóa học, Nhà xuất Đại học quốc gia Hà Nội, 2012 PHỤ LỤC Page 25 [...]... Các flavonoid Flavonoid l các hợp chất polyphenol, đa dạng về cấu trúc hóa học và sinh học Chúng có ở hầu hết các bộ phận của cây, đặc biệt l trong các tế bào thực vật quang hợp Các flavonoid không được tổng hợp ở người và động vật Năm 2010, Yusnita Rifai và các đồng sự của ông đã phân l p được từ dịch chiết metanol, n- hexan, etylaxetat và butanol từ l của cây Giá (Excoecaria agallocha L. ) 8 flavonoid... các chất được xây dựng nhờ sử dụng các phương pháp phổ, trong đó có 2 flavonoid mới (4 5), (4 6) và 6 flavonoid glycosid đã biết: afzelin (4 7); quercitrin (4 8); rutin (4 9); kaempferol-3-O-(2-O-acetyl-α-Lrhamnopyranosid (5 0); kaempferid 3 O-α -L- rhamnopyranosid (5 1) và kaempferol 3-Oa-Larabinofuranosid (5 2) Ba glycoside flavonoid bao gồm 2 hợp chất mới (45 và 4 6) được phân l p từ cây Giá (Excoecaria agallocha. .. được phân l p l : Excoecariphenol A (5 3); Excoecariphenol B (5 4) ; Excoecariphenol C (5 5) ; Excoecariphenol D (5 6) Những flavonoid mới này được thử nghiệm và cho kết quả tích cực trong phòng chống bệnh viêm gan HCV [12] 2 Hoạt tính sinh học của cây giá (Excoecaria agallocha L. ) Cây Giá Excoecaria agallocha được hoạt động tốt nhờ chứa những thành phần hóa học, đặc biệt l : - Diterpen Triterpen Và những... l cây Giá được dung trong chữa bệnh động kinh và những bệnh l loét Vỏ cây Giá l chất tẩy xổ và l m nôn Dầu từ vỏ cây Giá có hiệu quả chống những bệnh thấp khớp, bệnh phong cùi và bệnh tê liệt Page 15 II KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Thực nghiệm mẫu l cây Giá: Sơ đồ 1: Quy trình chiết mẫu thực vật Mẫu l khô 5.7kg 1 Chiết với MeOH 95% 2 Cất loại MeOH Cặn MeOH 530g Thêm 2lit H2O Chiết với ethyl axetat cất loại... ký đã phân l p được 3 hợp chất từ cao chiết n-hexan của cây Giá, kết hợp với các phương pháp phổ hiện đại bao gồm cộng hưởng từ hạt nhân một chiều (1H-NMR, 13C-NMR, DEPT), phổ khối l ợng (ESI-MS) đã phân l p được cấu trúc hóa học của 3 hợp chất Các hợp chất đó l : - Hợp chất EA1 ( 1): 14-taraxerene-3-one - Hợp chất EA3 ( 2): 14-taraxerene-3α-ol (epitaraxerol) - Hợp chất EA2 ( 3): 14-taraxerene-3β-ol (taraxerol)... 25.0(CH 2) 76.2(CH) 3.40(br) 38.8 39.1(C) - 55.7(CH) 55.4 49.2(CH) 6 19.9(CH 2) 18.6 18.7(CH 2) 7 35.1(CH 2) 35.0 33.7(CH 2) 8 38.8(C) 38.6 38.0(C) 9 48.7(CH) 48.6 48.9(CH) 10 35.7(C) 37.4 37.5(C) 11 17.4(CH 2) 17.3 17.4(CH 2) 12 37.6(CH 2) 37.5 35.1(CH 2) 13 37.7(C) 35.6 37.3(C) 14 157.6(C) 158.0 158.2(C) 15 117.1(CH) 5.55(dd, J=8.0, 3.5, H-1 5) 116.7 Page 22 3.19 (m) δ H (CDCl3, 500MHz) 5.54(dd, J=8.0, 3. 5) 116.7(CH)... agallocha L. ) l chất ức chế và chống l i tế bào ung thư ở tuyến tụy của người và tế bào ung thư tuyến tiền liệt mang l i nhiều hiệu quả tích cực [11] Page 12 Page 13 Năm 2011, Yongxin Li và các đồng sự của ông đã phân l p được từ dịch chiết butanol của cây Giá (Excoecaria agallocha L. ) Bằng các phương pháp phân tích trên quang phổ IR, MS, NMR đã xác định được cấy trúc của bốn flavonoid mới Bốn flavonoid... Hợp chất EA1, EA2, EA3 Vị trí EA1 ( 1) EA2 ( 3) EA3 ( 2) 14-taraxeren-3-on 14-taraxeren-3β-ol 14-taraxeren-3α-ol [TL1,2] [TL2] (epitaraxerol) [TL3] C δ C (CDCl3, 125MHz) δ H (CDCl3, 500MHz) δ C (CDCl3, 125MHz) 1 38.3(CH 2) 2 34.1(CH 2) 3 217.5(C) 78.8 4 47.5(C) 5 2.56 (1H, ddd, J=16.0, 7.6, 3.5 Hz, Ha- 2), 2.32(1H, ddd, J=16.0, 6.5, 3.5 Hz, Hb- 2) δ H (CDCl3, 500MHz) δ C (CDCl3, 125MHz) 37.6 37.7(CH 2) 26.7... Cặn chiết EtOAc 54.5g Dịch nước còn l i 310g Chiết với n-hexan cất loại dm Cặn chiết n-hexan 96.1g Page 16 Sơ đồ 2: Quy trình phân l p chất từ cặn n-hexan của l cây Giá 50g cặn n-hexan Sắc ký cột silicagel (10/ 1) n-hexan/EtOAc 5% EtOAc 10% EtOAc PĐ1 6.6g I.1 PĐ2 12.4g I.2 I.3 Page 17 20%-50% EtOAc PĐ3-PĐ7 EA1 ( 1) EA3 ( 2) (taraxerone) (epitaraxerol) EA2 ( 3) (taraxerol) 5.7kg bột l khô của cây Giá. .. Page 19 Hợp chất EA1 thu được từ cặn chiết n-hexan của dịch chiết tổng metanol của loài Excoecaria agallocha L là chất kết tinh hình kim, màu trắng Phổ 1H-NMR có dạng phổ của một hợp chất triterpen trong đó có sự xuất hiện của 8 nhóm metyl bậc bốn trong phân tử thể hiện qua 8 tín hiệu singlet tại δH 0.83 (3H), 0.91 (3H), 0.92 (3H), 0.95 (3H), 1.06 (3H), 1.08 (3H), 1.09 (3H), và 1.14 (3H) Ngoài ra, ... L.) 1.1 Tình hình nghiên cứu giá (Excoecaria agallocha L.) Trên giới, Cây Giá nghiên cứu nhiều thành phần hóa học hoạt tính sinh học Các chất tách chủ yếu thuộc vào lớp chất diterpen flavonoid... 2010, Yongxin Li cộng phân lập từ dịch chiết metanol thân cành Giá (Excoecaria agallocha L.) Trung Quốc Từ phân lập sáu diterpen khung ent-kauran có tên agallochaol K-P : Agallochaol K (axít ent-17-hydroxy-3,4-secokaur-4(18),15-die-3-oic... sinh học giá (Excoecaria agallocha L.) Cây Giá Excoecaria agallocha hoạt động tốt nhờ chứa thành phần hóa học, đặc biệt là: - Diterpen Triterpen Và flavonloid Page 14 Một số đặc tính trị liệu Giá: