BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC - - LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH VI SINH VẬT HỌC PHÂN LẬP CÁC DÒNG VI KHUẨN NỘI SINH TRONG CÂY DIẾP CÁ (Houttuynia cordata T.) Ở TỈNH CÀ MAU CÁN BỘ HƯỚNG DẪN PGS.TS NGUYỄN HỮU HIỆP SINH VIÊN THỰC HIỆN VÕ CHÍ MẢI MSSV: 3113728 Lớp: Vi Sinh Vật Học K37 Cần Thơ, Tháng 7/2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC - - LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH VI SINH VẬT HỌC PHÂN LẬP CÁC DÒNG VI KHUẨN NỘI SINH TRONG CÂY DIẾP CÁ (Houttuynia cordata T.) Ở TỈNH CÀ MAU CÁN BỘ HƯỚNG DẪN PGS.TS NGUYỄN HỮU HIỆP SINH VIÊN THỰC HIỆN VÕ CHÍ MẢI MSSV: 3113728 Lớp: Vi Sinh Vật Học K37 Cần Thơ, Tháng 7/2014 Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT PHẦN KÝ DUYỆT CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN (Ký tên) (Ký tên) PGS.TS Nguyễn Hữu Hiệp Võ Chí Mải PHÊ DUYỆT CỦA HỘI ĐỒNG BẢO VỆ LUẬN VĂN ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… Cần Thơ, ngày tháng năm 2014 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG (Ký tên) Chuyên ngành Vi sinh vật học ii Viện NC & PT Công nghệ sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT LỜI CẢM TẠ Bốn năm học tập nghiên cứu trường Đại học Cần Thơ, thời gian dài đời khoảng thời gian không quên tâm trí Đến hoàn thành Luận văn tốt nghiệp Đại học, chuyên ngành Vi Sinh Vật Học Trong thời gian học tập nghiên cứu, hỗ trợ động viên từ gia đình, quý Thầy Cô bạn bè giúp vượt qua khó khăn, hoàn thành tốt luận văn tốt nghiệp Với lòng biết ơn sâu sắc, xin chân thành gửi lời cảm ơn đến: Cha mẹ gia đình tôi, họ nguồn động viên, an ủi gặp khó khăn Phó Giáo sư - Tiến sĩ Nguyễn Hữu Hiệp, Phó Trưởng Bộ môn Công nghệ Sinh học Vi sinh vật, Viện Nghiên cứu Phát triển Công nghệ Sinh học, Trường Đại học Cần Thơ, Thầy hướng dẫn đề tài, tận tình truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm học tập nghiên cứu khoa học Quý thầy cô Viện NC & PT Công nghệ sinh học, truyền đạt kiến thức bổ ích cho việc hoàn thành luận văn tìm kiếm việc làm sau Cán quản lí phòng thí nghiệm vi sinh vật, anh chị cao học K19, em sinh viên K38, tập thể lớp Vi sinh vật K37 nhiệt tình giúp đỡ để hoàn thành luận văn thật tốt đẹp Cuối cùng, xin gửi lời chúc sức khỏe đến cha mẹ, người thân, quý Thầy Cô tất bạn bè Xin chân thành cảm ơn! Cần thơ, ngày 17, tháng 11, năm 2014 Võ Chí Mải Chuyên ngành Vi sinh vật học iii Viện NC & PT Công nghệ sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT TÓM TẮT Diếp cá trồng phổ biến Việt Nam, chúng dùng loại rau hàng ngày sống, số nghiên cứu cho thấy Diếp cá có hoạt tính kháng khuẩn ứng dụng để điều trị số bệnh thông thường Tuy nhiên việc nghiên cứu tập đoàn vi khuẩn nội sinh Diếp cá chưa nghiên cứu nhiều, đề tài phân lập vi khuẩn nội sinh Diếp cá thực Từ mẫu Diếp cá trồng Cà Mau, phân lập 21 dòng vi khuẩn môi trường PDA đặc Đa số dòng vi khuẩn có dạng hình que, gram âm có khả chuyển động, chúng có đặc tính cố định đạm, tổng hợp IAA hòa tan lân Kết khảo sát khả cố định ammonium tổng hợp IAA vi khuẩn cho thấy dòng vi khuẩn tổng hợp lượng ammonium cao ngày sau chủng giảm ngày Trong đó, dòng L1-DD1 có khả tổng hợp lượng ammonium cao (2,62 µg/mL) Nồng độ IAA sinh nhiều ngày thứ giảm ngày thứ 4,49 µg/mL (do dòng L2-DD2 tổng hợp) Tám dòng vi khuẩn có khả hòa tan lân khó tan, dòng R3-CM có khả hòa tan lân lớn lên đến 182,31% ngày thứ Kết thử hoạt tính kháng khuẩn chủng vi khuẩn Escherichia coli Aeromonas hydrophila cho thấy có dòng có hoạt tính kháng Escherichia coli, dòng có tính kháng Aeromonas hydrophila dòng có khả kháng Escherichia coli Aeromonas hydrophila dòngL1-DD1 R1DD2 Ba dòng vi khuẩn nhận diện cấp độ loài phương pháp giải trình tự 16S-rRNA Dòng L1-DD1 nhận diện Bacillus megaterium strain ATCC 14581 (ở mức độ 98%) Dòng R1-DD2 nhận diện Bacillus amyloliquefaciens subsp Plantarum strain FZB42 có độ tương đồng 93% với dòng T6-DD1 nhận diện Bacillus aerius strain 24K có độ tương đồng 94% Từ khóa: Bacillus megaterium, Bacillus amyloliquefaciens subsp Plantarum, Bacillus aerius, Diếp cá, kháng khuẩn, tổng hợp amonium - IAA, vi khuẩn nội sinh Chuyên ngành Vi sinh vật học iv Viện NC & PT Công nghệ sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT MỤC LỤC Trang PHẦN KÝ DUYỆT ii LỜI CẢM TẠ iii TÓM TẮT iv MỤC LỤC v DANH SÁCH BẢNG ix DANH SÁCH HÌNH x CÁC TỪ VIẾT TẮT xii CHƯƠNG I: GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài CHƯƠNG II: LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan Cà Mau 2.1.1 Vị trí địa lý 2.1.2 Điều kiện tự nhiên: 2.2 Tổng quan Diếp cá 2.2.1 Tên gọi phân loại 2.2.2 Mô tả: 2.2.3 Phân bố: 2.2.4 Thành phần hóa học: 2.2.5 Tác dụng dược lý: 2.2.6 Tính vị, công năng: 2.2.7 Công dụng: 2.3 Tổng quan vi khuẩn nội sinh: 2.3.1 2.4 Một số nhóm vi khuẩn nội sinh thường gặp: Một số vi khuẩn gây bệnh 15 2.4.1 Vi khuẩn Escherichia coli 15 2.4.2 Vi khuẩn Aeromonas hydrophila 17 2.5 Tình hình nghiên cứu Diếp cá nước 18 Chuyên ngành Vi sinh vật học v Viện NC & PT Công nghệ sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT 2.5.1 Trong nước 18 2.5.2 Ngoài nước 18 2.6 Kỹ thuật PCR (Polymerase Chain Reaction) 20 2.6.1 Nguyên lý chung kỹ thuật PCR 20 2.6.2 Mồi (primer) sử dụng kỹ thuật PCR 21 2.6.3 Điện di gel agarose 22 2.6.4 Phần mềm phân tích trình tự DNA giải mã 24 CHƯƠNG III: PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 3.1 Phương tiện nghiên cứu 25 3.1.1 Thời gian – Địa điểm thực 25 3.1.2 Vật liệu 25 3.1.3 Dụng cụ - Thiết bị 25 3.1.4 Hóa chất 26 3.2 Phương pháp nghiên cứu 30 3.2.1 Thu thập xử lý mẫu 30 3.2.2 Phân lập vi khuẩn nội sinh từ rễ, thân Diếp cá 30 3.2.3 Quan sát hình dạng, khả chuyển động kích thước vi khuẩn… ….31 3.2.4 Nhuộm Gram vi khuẩn 33 3.2.5 Xác định khả tổng hợp NH4+ số dòng vi khuẩn phân lập 34 2.3 Phương pháp xử lý số liệu: 41 CHƯƠNG IV: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 42 4.1 Kết phân lập đặc điểm khuẩn lạc dòng vi khuẩn 42 4.1.1 Kết phân lập vi khuẩn 42 4.1.2 Đặc điểm khuẩn lạc dòng vi khuẩn phân lập 43 4.1.3 Hình dạng khả di chuyển 21 dòng vi khuẩn: 46 4.2 Khả cố định đạm dòng vi khuẩn phân lập dựa lượng NH4+ (ammonium) tổng hợp 49 Chuyên ngành Vi sinh vật học vi Viện NC & PT Công nghệ sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 4.2.1 Trường ĐHCT So sánh khả cố định đạm dòng vi khuẩn phân lập từ rễ 50 4.2.2 So sánh khả cố định đạm dòng vi khuẩn phân lập từ thân 51 4.2.3 So sánh khả cố định đạm dòng vi khuẩn phân lập từ 52 4.2.4 So sánh khả cố định đạm dòng vi khuẩn triển vọng sống nội sinh Diếp cá 53 4.3 Khả tổng hợp indol-3-acetic acid (IAA) dòng vi khuẩn nội sinh phân lập từ Diếp cá 55 4.3.1 So sánh khả tổng hợp IAA dòng vi khuẩn phân lập từ rễ 55 4.3.2 So sánh khả tổng hợp IAA dòng vi khuẩn phân lập từ thân 56 4.3.3 So sánh khả tổng hợp IAA dòng vi khuẩn phân lập từ 58 4.3.4 So sánh khả tổng hợp IAA dòng vi khuẩn triển vọng nội sinh Diếp cá 59 4.4 Khả hòa tan lân khó tan dòng vi khuẩn phân lập 62 4.5 Khả kháng khuẩn dòng vi khuẩn phân lập: 64 4.5.1 Khả kháng khuẩn với vi khuẩn Escherichia coli 64 4.5.2 Khả kháng khuẩn với vi khuẩn Aeromonas hydrophila 66 4.6 Kết nhận diện số dòng vi khuẩn kỹ thuật PCR 69 CHƯƠNG V: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 72 5.1 Kết luận 72 5.2 Đề nghị 72 TÀI LIỆU THAM KHẢO 73 Tiếng việt: 73 Tiếng Anh 75 Trang web: 84 Chuyên ngành Vi sinh vật học vii Viện NC & PT Công nghệ sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT PHỤ LỤC……………………………………………………………………… PHỤ LỤC 1: KẾT QUẢ HÀM LƯỢNG NH4+ CỦA 21 DÒNG VI KHUẨN PHỤ LỤC 2: ĐƯỜNG CHUẨN NH4+ CỦA NGÀY ĐO PHỤ LỤC 3: KẾT QUẢ THỐNG KÊ HÀM LƯỢNG NH4+ CỦA 21 DÒNG VI KHUẨN PHỤ LỤC 4: KẾT QUẢ THỐNG KÊ HÀM LƯỢNG NH4+ CỦA CÁC DÒNG VI KHUẨN Ở RỄ PHỤ LỤC 5: KẾT QUẢ THỐNG KÊ HÀM LƯỢNG NH4+ CỦA CÁC DÒNG VI KHUẨN Ở THÂN PHỤ LỤC 6: KẾT QUẢ THỐNG KÊ HÀM LƯỢNG NH4+ CỦA CÁC DÒNG VI KHUẨN Ở LÁ PHỤ LỤC 7: KẾT QUẢ THỐNG KÊ HÀM LƯỢNG NH4+ CỦA CÁC DÒNG VI KHUẨN TRIỂN VỌNG PHỤ LỤC 8: KẾT QUẢ HÀM LƯỢNG IAA CỦA CÁC DÒNG VI KHUẨN PHỤ LỤC 9: ĐƯỜNG CHUẨN IAA CỦA NGÀY ĐO PHỤ LỤC 10: KẾT QUẢ THỐNG KÊ KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP IAA CỦA 21 DÒNG VI KHUẨN PHỤ LỤC 11: KẾT QUẢ THỐNG KÊ HÀM LƯỢNG IAA CỦA CÁC DÒNG VI KHUẨN Ở RỄ PHỤ LỤC 12: KẾT QUẢ THỐNG KÊ HÀM LƯỢNG IAA CỦA CÁC DÒNG VI KHUẨN Ở THÂN PHỤ LỤC 13: KẾT QUẢ THỐNG KÊ HÀM LƯỢNG IAA CỦA CÁC DÒNG VI KHUẨN Ở LÁ PHỤ LỤC 14: KẾT QUẢ THỐNG KÊ HÀM LƯỢNG IAA CỦA CÁC DÒNG VI KHUẨN TRIỂN VỌNG PHỤ LỤC 15: KẾT QUẢ THỐNG KÊ HIỆU SUẤT HÒA TAN LÂN CỦA CÁC DÒNG VI KHUẨN PHỤ LỤC 17 : KẾT QUẢ THỐNG KÊ KHẢ NĂNG KHÁNG VI KHUẨN A HYDROPHILA CỦA CÁC DÒNG VI KHUẨN NỘI SINH TRONG CÂY DIẾP CÁ PHỤ LỤC 18: KẾT QUẢ TRÌNH TỰ NUCLEOTIDE CỦA CÁC DÒNG VI KHUẨN ĐỊNH DANH Chuyên ngành Vi sinh vật học viii Viện NC & PT Công nghệ sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT DANH SÁCH BẢNG Trang Bảng 1: Thành phần chất phản ứng PCR 30 Bảng 2: Môi trường PDA 30 Bảng 3: Môi trường NFb (g/l) (Kirchhof et al., 1997) 30 Bảng 4: Thành phần dung dịch vi lượng 31 Bảng 5: Thành phần dung dịch Vitamin 31 Bảng 6: Môi trường NBRIP đặc (Nautiyal, 1999) 31 Bảng 7: Môi trường LB (Lauria Betani) … 31 Bảng 8: Nguồn gốc dòng vi khuẩn phân lập môi trường PDA ….…….…44 Bảng 9: Đặc tính khuẩn lạc vi khuẩn phân lập môi trường PDA.… …… 45 Bảng 10: Hình dạng, kích thước, khả chuyển động cùa dòng vi khuẩn 48 Bảng 11: Kết nhuộm Gram 21 dòng vi khuẩn……………………… …49 Bảng 12: Kết giải trình tự số dòng triển vọng ……….………… 70 Chuyên ngành Vi sinh vật học ix Viện NC & PT Công nghệ sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 T3-DD2 T4-DD2 T6-DD1 3 3.2216 3.2595 3.9981 0.6699 0.7328 0.5460 Trường ĐHCT ( -* ) ( * -) ( -* -) + -+ -+ -+ 2.0 3.0 4.0 5.0 Pooled StDev = 0.6890 Grouping Information Using Fisher Method Dòng vi khuẩn T6-DD1 T1-DD2 T1-DD1 T4-DD2 T3-DD2 T3-CM T3-DD1 T1-CM N 3 3 3 3 Mean 3.9981 3.9602 3.9034 3.2595 3.2216 2.8996 2.5966 2.2178 Grouping A A A A B A B A B B B Means that not share a letter are significantly different Ngày 6: One-way ANOVA: Ngày versus Dòng vi khuẩn Source Dòng vi khuẩn Error Total S = 0.4025 Level T1-CM T1-DD1 T1-DD2 T3-CM T3-DD1 T3-DD2 T4-DD2 T6-DD1 N 3 3 3 3 DF 16 23 SS 21.372 2.593 23.965 MS 3.053 0.162 R-Sq = 89.18% Mean 0.1639 1.0577 3.0130 1.2067 2.1750 0.2942 0.5177 0.4432 StDev 0.1406 0.3635 0.5651 0.3489 0.3635 0.4041 0.1707 0.6154 F 18.84 P 0.000 R-Sq(adj) = 84.45% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( * ) ( * ) ( * ) ( * ) ( * ) ( * ) ( * ) ( -* ) -+ -+ -+ -+ -0.0 1.0 2.0 3.0 Pooled StDev = 0.4025 Grouping Information Using Fisher Method Dòng vi khuẩn T1-DD2 T3-DD1 T3-CM T1-DD1 T4-DD2 T6-DD1 T3-DD2 T1-CM N 3 3 3 3 Mean 3.0130 2.1750 1.2067 1.0577 0.5177 0.4432 0.2942 0.1639 Grouping A B C C D C D E D E E E Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT Công nghệ sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT Means that not share a letter are significantly different PHỤ LỤC 13: KẾT QUẢ THỐNG KÊ HÀM LƯỢNG IAA CỦA CÁC DÒNG VI KHUẨN Ở LÁ Ngày 2: One-way ANOVA: Ngày versus Dòng vi khuẩn Source Dòng vi khuẩn Error Total S = 0.2345 Level L1-CM L1-DD1 L1-DD2 L2-CM L2-DD2 L3-CM L4-DD2 N 3 3 3 DF 14 20 SS 1.3724 0.7700 2.1424 MS 0.2287 0.0550 R-Sq = 64.06% Mean 0.6184 0.5713 0.8539 0.7597 0.8539 0.3239 0.1237 StDev 0.2892 0.1593 0.2507 0.2207 0.1428 0.3678 0.0935 F 4.16 P 0.013 R-Sq(adj) = 48.66% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( * -) ( -* ) ( -* ) ( * -) ( -* ) ( -* ) ( * -) -+ -+ -+ -+ -0.00 0.35 0.70 1.05 Pooled StDev = 0.2345 Grouping Information Using Fisher Method Dòng vi khuẩn L1-DD2 L2-DD2 L2-CM L1-CM L1-DD1 L3-CM L4-DD2 N 3 3 3 Mean 0.8539 0.8539 0.7597 0.6184 0.5713 0.3239 0.1237 Grouping A A A A B A B B C C Means that not share a letter are significantly different Ngày 4: One-way ANOVA: Ngày versus Dòng vi khuẩn Source Dòng vi khuẩn Error Total S = 0.6950 Level L1-CM L1-DD1 N 3 DF 14 20 SS 18.987 6.762 25.749 R-Sq = 73.74% Mean 1.9148 3.6004 StDev 0.3936 0.7630 Chuyên ngành Vi sinh vật học MS 3.164 0.483 F 6.55 P 0.002 R-Sq(adj) = 62.48% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( * ) ( * ) Viện NC & PT Công nghệ sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 L1-DD2 L2-CM L2-DD2 L3-CM L4-DD2 3 3 1.9527 1.8201 4.4905 2.0852 2.7102 0.9781 0.5400 0.1826 0.2477 1.1406 Trường ĐHCT ( * ) ( * ) ( * -) ( * -) ( -* ) + -+ -+ -+ 1.2 2.4 3.6 4.8 Pooled StDev = 0.6950 Grouping Information Using Fisher Method Dòng vi khuẩn L2-DD2 L1-DD1 L4-DD2 L3-CM L1-DD2 L1-CM L2-CM N 3 3 3 Mean 4.4905 3.6004 2.7102 2.0852 1.9527 1.9148 1.8201 Grouping A A B B C C C C C Means that not share a letter are significantly different Ngày 6: One-way ANOVA: Ngày versus Dòng vi khuẩn Source Dòng vi khuẩn Error Total S = 0.6597 Level L1-CM L1-DD1 L1-DD2 L2-CM L2-DD2 L3-CM L4-DD2 N 3 3 3 DF 14 20 SS 13.226 6.092 19.318 MS 2.204 0.435 R-Sq = 68.46% Mean 1.4860 1.3371 1.0391 0.2570 2.8268 0.7412 0.4618 StDev 0.4469 1.5323 0.2903 0.1478 0.4965 0.2258 0.3077 F 5.07 P 0.006 R-Sq(adj) = 54.95% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( -* ) ( * ) ( * -) ( * ) ( * -) ( * ) ( * ) -+ -+ -+ -+ -0.0 1.2 2.4 3.6 Pooled StDev = 0.6597 Grouping Information Using Fisher Method Dòng vi khuẩn L2-DD2 L1-CM L1-DD1 L1-DD2 L3-CM L4-DD2 L2-CM N 3 3 3 Mean 2.8268 1.4860 1.3371 1.0391 0.7412 0.4618 0.2570 Grouping A B B C B C B C B C C Means that not share a letter are significantly different Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT Công nghệ sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT PHỤ LỤC 14: KẾT QUẢ THỐNG KÊ HÀM LƯỢNG IAA CỦA CÁC DÒNG VI KHUẨN TRIỂN VỌNG: Ngày 2: One-way ANOVA: Ngày versus Dòng vi khuẩn Source Dòng vi khuẩn Error Total S = 0.1485 Level L1-DD1 L2-DD2 T1-DD1 T1-DD2 T6-DD1 N 3 3 DF 10 14 SS 0.3979 0.2206 0.6185 MS 0.0995 0.0221 R-Sq = 64.33% Mean 0.5713 0.8539 0.6890 0.5595 0.3592 F 4.51 P 0.024 R-Sq(adj) = 50.07% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( -* ) ( * -) ( -* ) ( * -) ( * -) -+ -+ -+ -+ -0.25 0.50 0.75 1.00 StDev 0.1593 0.1428 0.1540 0.0204 0.2009 Pooled StDev = 0.1485 Grouping Information Using Fisher Method Dòng vi khuẩn L2-DD2 T1-DD1 L1-DD1 T1-DD2 T6-DD1 N 3 3 Mean 0.8539 0.6890 0.5713 0.5595 0.3592 Grouping A A B B C B C C Means that not share a letter are significantly different Ngày 4: One-way ANOVA: Ngày versus Dòng vi khuẩn Source Dòng vi khuẩn Error Total S = 0.6616 Level L1-DD1 L2-DD2 T1-DD1 T1-DD2 T6-DD1 N 3 3 DF 10 14 SS 1.232 4.378 5.610 MS 0.308 0.438 R-Sq = 21.97% Mean 3.6004 4.4905 3.9034 3.9602 3.9981 StDev 0.7630 0.1826 0.3007 1.0885 0.5460 Chuyên ngành Vi sinh vật học F 0.70 P 0.006 R-Sq(adj) = 0.00% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( -* ) ( -* -) ( -* -) ( * -) ( -* -) -+ -+ -+ -+ -2.80 3.50 4.20 4.90 Viện NC & PT Công nghệ sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT Pooled StDev = 0.6616 Grouping Information Using Fisher Method Dòng vi khuẩn L2-DD2 T6-DD1 T1-DD2 T1-DD1 L1-DD1 N 3 3 Mean 4.4905 3.9981 3.9602 3.9034 3.6004 Grouping A A A A A Means that not share a letter are significantly different Ngày 6: One-way ANOVA: Ngày versus Dòng vi khuẩn Source Dòng vi khuẩn Error Total S = 0.8276 Level L1-DD1 L2-DD2 T1-DD1 T1-DD2 T6-DD1 N 3 3 DF 10 14 SS 15.334 6.850 22.183 MS 3.833 0.685 R-Sq = 69.12% Mean 1.3371 2.8268 1.0577 3.0130 0.4432 StDev 1.5323 0.4965 0.3635 0.5651 0.6154 F 5.60 P 0.013 R-Sq(adj) = 56.77% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( * ) ( * -) ( * ) ( * ) ( * ) -+ -+ -+ -+ -0.0 1.2 2.4 3.6 Pooled StDev = 0.8276 Grouping Information Using Fisher Method Dòng vi khuẩn T1-DD2 L2-DD2 L1-DD1 T1-DD1 T6-DD1 N 3 3 Mean 3.0130 2.8268 1.3371 1.0577 0.4432 Grouping A A B B C C C Means that not share a letter are significantly different Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT Công nghệ sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT PHỤ LỤC 15: KẾT QUẢ THỐNG KÊ HIỆU QUẢ HÒA TAN LÂN CỦA CÁC DÒNG VI KHUẨN Bảng 11: Hiệu suất hòa tan lân dòng vi khuẩn STT Dòng vi khuẩn E ngày E ngày E ngày T3-CM 117,420c 110,660c 124,520c L1-CM 126,190b 143,600b 129,210c R3-CM 143,670a 162,700a 182,310a T1-DD1 0,000d 118,030c 140,810bc R1-DD2 0,000d 119,590c 142,240bc L1-DD1 0,000d 127,510bc 158,930b L2-DD2 0,000d 118,180c 151,380b T1-DD2 0,000d 0,000d 127,140c 10,44 9,17 7,46 CV(%) *Ghi chú: giá trị trung bình cột theo sau có mẫu tự giống biểu thị khác biệt ý nghĩa thống kê mức ý nghĩa 5% theo phép thử Duncan Bảng 12: Kích thước trung bình khuẩn lạc/halo STT Kích thước trung bình khuẩn lạc/halo (mm) Dòng vi khuẩn Ngày Ngày Ngày T3-CM 9,5/11,5 12,33/13,67 17,33/21,67 L1-CM 7,67/9,67 9,00/11,50 10,67/13,67 R3-CM 8,67/12,33 9,00/14,67 10,33/18,67 T1-DD1 0/0 11/13 11.67/16,33 R1-DD2 0/0 16/21 14,33/22,50 L1-DD1 0/0 7/9,67 7,33/11,67 T1-DD2 0/0 0/0 12,33/15,67 L2-DD2 0/0 11/13 13/16,67 Ngày 2: One-way ANOVA: Ngày versus Dòng vi khuẩn Source Dòng vi khuẩn Error Total S = 5.055 DF 16 23 SS 94814.0 408.9 95222.9 R-Sq = 99.57% Chuyên ngành Vi sinh vật học MS 13544.9 25.6 F 530.03 P 0.000 R-Sq(adj) = 99.38% Viện NC & PT Công nghệ sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Level L1-CM L1-DD1 L2-DD2 R1-DD2 R3-CM T1-DD1 T1-DD2 T3-CM N 3 3 3 3 Mean 126.19 0.00 0.00 0.00 143.67 0.00 0.00 117.42 StDev 2.06 0.00 0.00 0.00 11.68 0.00 0.00 7.98 Trường ĐHCT Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ (-*) (-*-) (-*-) (-*-) (-*) (-*-) (-*-) (*-) + -+ -+ -+ 40 80 120 Pooled StDev = 5.06 Grouping Information Using Fisher Method Dòng vi khuẩn R3-CM L1-CM T3-CM T1-DD2 T1-DD1 R1-DD2 L2-DD2 L1-DD1 N 3 3 3 3 Mean 143.67 126.19 117.42 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 Grouping A B C D D D D D Means that not share a letter are significantly different Ngày 4: One-way ANOVA: Ngày versus Dòng vi khuẩn Source Dòng vi khuẩn Error Total S = 10.32 Level L1-CM L1-DD1 L2-DD2 R1-DD2 R3-CM T1-DD1 T1-DD2 T3-CM N 3 3 3 3 DF 16 23 SS 49456 1705 51161 MS 7065 107 R-Sq = 96.67% Mean 143.60 127.51 118.18 119.59 162.70 118.03 0.00 110.66 StDev 19.00 15.90 0.00 5.88 11.25 8.14 0.00 3.35 F 66.30 P 0.000 R-Sq(adj) = 95.21% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( *-) ( *-) ( *-) ( *-) ( *-) ( *-) ( * ) (-* ) -+ -+ -+ -+ -0 50 100 150 Pooled StDev = 10.32 Grouping Information Using Fisher Method Dòng vi khuẩn R3-CM L1-CM L1-DD1 R1-DD2 N 3 3 Mean 162.70 143.60 127.51 119.59 Grouping A B B C C Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT Công nghệ sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 L2-DD2 T1-DD1 T3-CM T1-DD2 3 3 118.18 118.03 110.66 0.00 Trường ĐHCT C C C D Means that not share a letter are significantly different Ngày 6: One-way ANOVA: Ngày versus Dòng vi khuẩn Source Dòng vi khuẩn Error Total S = 10.79 Level L1-CM L1-DD1 L2-DD2 R1-DD2 R3-CM T1-DD1 T1-DD2 T3-CM N 3 3 3 3 DF 16 23 SS 7914 1861 9775 R-Sq = 80.96% Mean 129.21 158.93 151.38 142.24 182.31 140.81 127.14 124.52 StDev 13.63 3.09 6.73 17.38 15.71 9.64 5.45 4.31 MS 1131 116 F 9.72 P 0.000 R-Sq(adj) = 72.63% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( -* ) ( -* ) ( -* ) ( * ) ( * ) ( * -) ( * ) ( * ) -+ -+ -+ -+ -125 150 175 200 Pooled StDev = 10.79 Grouping Information Using Fisher Method Dòng vi khuẩn R3-CM L1-DD1 L2-DD2 R1-DD2 T1-DD1 L1-CM T1-DD2 T3-CM N 3 3 3 3 Mean 182.31 158.93 151.38 142.24 140.81 129.21 127.14 124.52 Grouping A B B B C B C C C C Means that not share a letter are significantly different Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT Công nghệ sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT PHỤ LỤC 16: KẾT QUẢ THỐNG KÊ KHẢ NĂNG KHÁNG LẠI VI KHUẨN E.coli CỦA CÁC DÒNG VI KHUẨN NỘI SINH TRONG CÂY DIẾP CÁ Bảng 13: vòng vô khuẩn dòng vi khuẩn tạo ngày R1-DD2 Vòng vô khuẩn ngày (mm) 3,000ab Vòng vô khuẩn ngày (mm) 3,333a Vòng vô khuẩn ngày (mm) 3,333a L4-DD2 2,000b 3,000a 2,330ab L1-DD1 2,667ab 2,667a 3,000a T6-DD1 3,333a 3,000a 2,667a T3-DD2 0,000c 0,000b 2,500b CV(%) 3,42 24,05 6,90 Dòng vi khuẩn *Ghi chú: giá trị trung bình cột theo sau có mẫu tự giống biểu thị khác biệt ý nghĩa thống kê mức ý nghĩa 5% theo phép thử Duncan Kết thống kê khả kháng lại vi khuẩn E coli ngày One-way ANOVA: Ngày versus Dòng vi khuẩn Source Dòng vi khuẩn Error Total S = 0.7303 Level L1-DD1 L4-DD2 R1-DD2 T3-DD2 T6-DD1 N 3 3 DF 10 14 SS 21.067 5.333 26.400 MS 5.267 0.533 R-Sq = 79.80% Mean 2.6667 2.0000 3.0000 0.0000 3.3333 StDev 1.1547 1.0000 0.0000 0.0000 0.5774 F 9.87 P 0.002 R-Sq(adj) = 71.72% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( -* -) ( -* ) ( -* -) ( -* -) ( -* -) + -+ -+ -+ 0.0 1.5 3.0 4.5 Pooled StDev = 0.7303 Grouping Information Using Fisher Method Dòng vi khuẩn T6-DD1 R1-DD2 L1-DD1 L4-DD2 T3-DD2 N 3 3 Mean 3.3333 3.0000 2.6667 2.0000 0.0000 Grouping A A B A B B C Means that not share a letter are significantly different Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT Công nghệ sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT Kết thống kê khả kháng lại vi khuẩn E coli ngày One-way ANOVA: Ngày versus Dòng vi khuẩn Source Dòng vi khuẩn Error Total S = 0.5774 Level L1-DD1 L4-DD2 R1-DD2 T3-DD2 T6-DD1 N 3 3 DF 10 14 SS 22.267 3.333 25.600 MS 5.567 0.333 R-Sq = 86.98% Mean 2.6667 3.0000 3.3333 0.0000 3.0000 StDev 0.5774 0.0000 0.5774 0.0000 1.0000 F 16.70 P 0.000 R-Sq(adj) = 81.77% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( * ) ( * ) ( * ) ( * ) ( * ) -+ -+ -+ -+ -0.0 1.5 3.0 4.5 Pooled StDev = 0.5774 Grouping Information Using Fisher Method Dòng vi khuẩn R1-DD2 T6-DD1 L4-DD2 L1-DD1 T3-DD2 N 3 3 Mean 3.3333 3.0000 3.0000 2.6667 0.0000 Grouping A A A A B Means that not share a letter are significantly different Kết thống kê khả kháng lại vi khuẩn E coli ngày One-way ANOVA: Ngày versus Dòng vi khuẩn Source Dòng vi khuẩn Error Total S = 1.125 Level L1-DD1 L4-DD2 R1-DD2 T3-DD2 T6-DD1 N 3 3 DF 10 14 SS 4.93 12.67 17.60 MS 1.23 1.27 R-Sq = 28.03% Mean 3.000 2.333 3.333 1.667 2.667 StDev 1.000 1.528 0.577 1.528 0.577 F 0.97 P 0.004 R-Sq(adj) = 0.00% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+( -* -) ( -* ) ( -* -) ( -* -) ( -* -) + -+ -+ -+1.2 2.4 3.6 4.8 Pooled StDev = 1.125 Grouping Information Using Fisher Method Dòng vi Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT Công nghệ sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 khuẩn R1-DD2 L1-DD1 T6-DD1 L4-DD2 T3-DD2 N 3 3 Mean 3.333 3.000 2.667 2.333 1.667 Trường ĐHCT Grouping A A A B B Means that not share a letter are significantly different PHỤ LỤC 17 : KẾT QUẢ THỐNG KÊ KHẢ NĂNG KHÁNG VI KHUẨN A HYDROPHILA CỦA CÁC DÒNG VI KHUẨN NỘI SINH TRONG CÂY DIẾP CÁ Bảng 14: vòng vô khuẩn dòng vi khuẩn tạo ngày Vòng vô khuẩn ngày Vòng vô khuẩn ngày Vòng vô khuẩn ngày (mm) (mm) (mm) L1-DD1 5,333a 6,000a 4,667a R1-DD2 3,000ab 4,333b 3,000b T4-DD2 2,000b 0,000c 0,000c T1-DD2 0,900b 0,000c 0,000c CV(%) 5,25 8,69 13,63 Dòng vi khuẩn *Ghi chú: giá trị trung bình cột theo sau có mẫu tự giống biểu thị khác biệt ý nghĩa thống kê mức ý nghĩa 5% theo phép thử Duncan Kết thống kê khả kháng lại vi khuẩn A hydrophila ngày One-way ANOVA: Ngày versus Dòng vi khuẩn Source Dòng vi khuẩn Error Total S = 1.348 Level L1-DD1 R1-DD2 T1-DD2 T4-DD2 N 3 3 DF 11 SS 32.12 14.53 46.65 MS 10.71 1.82 R-Sq = 68.86% Mean 5.333 3.000 0.900 2.000 StDev 1.528 1.732 0.964 1.000 F 5.90 P 0.020 R-Sq(adj) = 57.18% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( * -) ( * ) ( -* ) ( * ) + -+ -+ -+ 0.0 2.5 5.0 7.5 Pooled StDev = 1.348 Grouping Information Using Fisher Method Dòng vi khuẩn L1-DD1 R1-DD2 T4-DD2 N 3 Mean 5.333 3.000 2.000 Grouping A A B B Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT Công nghệ sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 T1-DD2 0.900 Trường ĐHCT B Means that not share a letter are significantly different Kết thống kê khả kháng lại vi khuẩn A hydrophila ngày One-way ANOVA: Ngày versus Dòng vi khuẩn Source Dòng vi khuẩn Error Total S = 1.258 Level L1-DD1 R1-DD2 T1-DD2 T4-DD2 N 3 3 DF 11 SS 84.25 12.67 96.92 MS 28.08 1.58 R-Sq = 86.93% Mean 6.000 4.333 0.000 0.000 StDev 2.000 1.528 0.000 0.000 F 17.74 P 0.001 R-Sq(adj) = 82.03% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+-( * ) ( -* ) ( * ) ( * ) -+ -+ -+ -+-0.0 2.5 5.0 7.5 Pooled StDev = 1.258 Grouping Information Using Fisher Method Dòng vi khuẩn L1-DD1 R1-DD2 T4-DD2 T1-DD2 N 3 3 Mean 6.000 4.333 0.000 0.000 Grouping A A B B Means that not share a letter are significantly different Kết thống kê khả kháng lại vi khuẩn A hydrophila ngày One-way ANOVA: Ngày versus Dòng vi khuẩn Source Dòng vi khuẩn Error Total S = 2.614 Level L1-DD1 R1-DD2 T1-DD2 T4-DD2 N 3 3 DF 11 SS 48.25 54.67 102.92 R-Sq = 46.88% Mean 3.000 4.667 0.000 0.000 StDev 2.646 4.509 0.000 0.000 MS 16.08 6.83 F 2.35 P 0.008 R-Sq(adj) = 26.96% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( -* -) ( -* ) ( -* -) ( -* -) + -+ -+ -+ -3.0 0.0 3.0 6.0 Pooled StDev = 2.614 Grouping Information Using Fisher Method Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT Công nghệ sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Dòng vi khuẩn R1-DD2 L1-DD1 T4-DD2 T1-DD2 N 3 3 Mean 4.667 3.000 0.000 0.000 Trường ĐHCT Grouping A B C C Means that not share a letter are significantly different PHỤ LỤC 18: KẾT QUẢ TRÌNH TỰ NUCLEOTIDE CỦA CÁC DÒNG VI KHUẨN ĐỊNH DANH: Trình tự nucleotide dòng R1-DD2 GTGCTAAGCTATACATACACATGCAGTCGTAACAAGAGATGAAGTCGC AGAGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGT AACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGA TGGTTGTCTGAACCGCATGGTTCGGACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACT TACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCA AGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTG AGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAAT GGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGAT CGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCCGTTCAAATAGGGCGGCA CCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCG CGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGC TCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGA GGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGAGAGTGGAATCCAC GTGTAGCGGTGAAATGCGTAAAGATGTGGAGGAACACAGTGGCGAAGGCG ACTCTCTGGTCTGTACTGACGCTGAGGAGCGAAGCGTGGGGAGCAACAGGA TAGATCCCTGGTATCACGCCGTAACGATGAGGCTACTGTTAGGGGTTCCGCC CTTATGCTGAGCTACGCTTAAGCACTCCCCTGGGGAGTACGGCGCAGACTG AACTCAAGGATTGACGGGGCCGCACAACGGGGAGATGTGTTTATTCGAGCA CGCGAAACTTACAGGCTGACTCTCTACATCTAGAATAGACGTCCCTCGGGGC GATGAAGGTGTGCTGGTGCTCACTCTGTCTGAAAGTTGGTAATCCCCACAAC GCACCTTGACTAGTGCACATCATTGGCCCTAGTATGCGTGCACCGAGGAGG GGGGGGATTAATCTCTGCCTTTACTGGTACACGGTCATGAAAACAAGGGGA ACCCGGTAACATCCCAATTTTTTTTGACAACCGACCACGGGAAGGAACTTAA ACGAACAGCCGGAACTCCGCTTCCCCCCCCCAATTACCACGGGCTACCCTG AAGGGAGGAATGCAGGAGGAGGAGGGGGGAGAAAAAAAAGAAAAAAAGA AGAAAATAAAAAATCAAACAGGCGGCAAGGGGTAGAATAGGGAAACGGAG GAGCCCACCTGCTTCTTTTTTTTCCCTTTGTTCATCCACGCCGGCGGGCCGCC GCTCCCCCCCCTGCAAAACAA Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT Công nghệ sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT Trình tự nucleotide dòng L1-DD1 GGCAATGGCGCGTGCTATACATGCAGTCGAGCGAACTGATTAGAAGCTTG CTTCTATGACGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGCAACCTGCC TGTAAGACTGGGATAACTTCGGGAAACCGAAGCTAATACCGGATAGGATC TTCTCCTTCATGGGAGATGATTGAAAGATGGTTTCGGCTATCACTTACAG ATGGGCCCGCGGTGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGC AACGATGCATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGA CACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGG ACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGCTTTCGGGTC GTAAAACTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTACGAGAGTAACTGCTTGTAC CTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCG CGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTATCCGGAATTATTGGGCGTAAAGCG CGCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCACGGCTCAACCGTG GAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGAAAAGCGGAAT TCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCG AAGGCGGCTTTTTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCGCGAAAGCGTGGGGA GCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCT AAGTGTTAGAGGGTTTCCGCCCTTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCA CTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGG GGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAG AACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAACTCTAGAGATAGAGCGTTC CCCTTCGGGGGACAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCCTG TCGTGAAATGTTTGGGTTAAGTCCCGCAACAAGCGCAACCCTTGATCTTA GTTTGCAGCATTTAGTTGGGCATTCTAAAGTGACTGCCGGTGGCAACCCG AGGAAAAAGTGGGGATGAGGTCGATCATCATGCCCCTTATAACTTGGGCT ACAACGTGCTACAATGGATGGTTCAAAAGGTGGGGAACCCCAAGGGAGGC CAACCCCGGAACCTTTTTCATTTCAATTTAACCTCCCACCCCCCCCCTTA AACCGGAAACCTAAAAGATCAGTAATTTTCTCCCTGAAAAAAGATACCAC GAATTGCGAGTTCGGGGTCCGCGCGGGCTTGACCCCAGTCCGGCGAACTT AAACTCCCTTTGGGATTCGGGTCCGGGCACGGGGGGCGGGGAAGAAAAGG CAAGGTAAAAAAGAAAATGCTCTTAGAACTCACGGAAAAATATCATTATT TTTATTTAAAAAATGAAGAAGAATTAAAAATCGAAATTGAAATGGGGGAA GGGGGAAAAAAAAGGGGGAATAAAAAAGGGTTAAAAAGGAG Trình tự nucleotide dòng T6-DD1 CGCAATGCGCATGCTATACATGCAGTCGAGCGGACAGAAGGGAGCTTGCTC CCGGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAA GACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGAGCTAATACCGGATAGTTCCTTGAAC CGCATGGTTCAAGGATGAAAGACGGTTTCGGCTGTCACTTACAGATGGACC CGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATGC GTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCA GACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCT GACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTG TTGTTAGGGAAGAACAAGTGCAAGAGTAACTGCTTGCACCTTGACGGTACC TAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAG GTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTT CTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAA Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT Công nghệ sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT CTGGGAAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTG AAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTC TGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATA CCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAATGTTAGGGGGGTTTCCC CCCCTTATTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCCGGGGAGTACGGTC GCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCCCAACCCTGGAGC ATGTGGTTTATTCCAATCACCCCGAAAAACTTAACAAGTCGTGGAGTCCGCT GACAACCCTACAAATAGGGTTTTCCTTCTCCGAAGAAATGACAAATGGTGC ATGGTTGTCTTTCCTTCCTTCCAGAGAAGTTGGGTTAAGTCCGCAACCTCCC CAACCCTGGGCTTCTTGCCACTATTAATTCGGCACTTAAGGGACATCCTGGG CCAGCCCCGGAAAGAGGGGTGGGGGGAGGGTAATTCCCATTAAACCACCCC CCCACGGCGGGAAGCCACGAGAAGAGAGGGGAAACAAACGTGAATGAAGC CGGGCGGTTGCCTCTCATATTATATTTCTCCCATCCCCAATCGGGAGCGGGG AGGTGGAGGAATACTGGATTTGGCCCGGGTCTTCAGCCTTCTCCCGCGCGGC CCGTTCCCTTTACCCCGCCTACGACCCGCAGCTGTTATCTTTGGCAGGGGCC GGAAATGGATAAAGAAACAAGGTGAACGACGAACATAGAGAGAATAAGAC ATACGGAAAAAAAGGGTTGGAGGGAACGGGCGGGGAAAAAGAAGGAAGG GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGAGGGGGGGGGGGGAGGAGGAAGGGGAAGG GGGGGGAAAAGAGGAGGGGGCGGCCGCGGTATAAGGAAGGTTGCGAAAAA ACCCCT Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT Công nghệ sinh học [...]... m ) và ngăn cản sự ph t triển của các siêu vi khuẩn cúm Còn theo Kim et al., (201 0) cây Diếp cá còn có khả năng ức chế sự ph t triển của vi khuẩn E Coli O157-H7 Ho t ch t quercitrin có trong diếp cá có t c dụng lợi tiểu mạnh M t số ho t ch t có t c dụng điều trị lo t dạ dày được phân lập t cây diếp cá M t ch t sterol, t ơng t sitosterol phân lập t thân rễ, kích thích ti t các ch t kháng sinh t ... cứu các thành phần của cây Diếp cá, t ch chi t các hợp ch t đó để dùng phục vụ trong y học Tuy nhiên vi c nghiên cứu t p đoàn vi sinh v t nội sinh trong cây dược liệu đặc bi t là cây Diếp cá còn t Vi c nghiên cứu t p đoàn vi sinh v t sống nội sinh trong cây Diếp cá r t có t cho sự ph t triển cây dược liệu sau này, vì m t số vi sinh nội sinh trong cây dược liệu có khả năng cố định đạm, hòa tan lân, t ng... vào các mô xuyên qua khí khổng hay các vị trí bị t n thương của lá (Roos và Hattingh, 198 3). Sau khi xâm nhập vào cây chủ, các vi khuẩn nội sinh có thể t p trung t i vị ví xâm nhập hay ph t tán khắp nơi trong cây đến các t bào bên trong, đi vào các khoảng trống gian bào hay vào trong hệ mạch (Zinniel et al., 200 2) M t số của quần thể vi khuẩn nội sinh r t biến thiên, phụ thuộc chủ yếu vào loài vi khuẩn. .. các dòng vi khuẩn sống nội sinh trong cây Diếp cá ở t nh Cà Mau Chuyên ngành Vi sinh v t học 2 Vi n NC & PT Công nghệ sinh học Luận văn t t nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT CHƯƠNG II LƯỢC KHẢO T I LIỆU 2.1 T ng quan về Cà Mau 2.1.1 Vị trí địa lý Cà Mau là t nh ven biển nằm ở cực nam t quốc Vi t Nam và nằm trong các t nh thuộc khu vực vùng Đồng bằng sông Cửu Long, nằm ở t a độ t 8o30’ – 9o10’... (Magnoliidae) - Bộ Hồ tiêu (Piperales) - Họ Lá giấp (Saururaceae) - Chi Diếp Cá (Houttuynia Thunb .) - Diếp Cá (Houttuynia cordata Thunb .) (Nguồn: Phạm Thành Hộ, 199 9)  Hình 2: Diếp cá (Houttuynia cordata T) (Hình chụp, ngày 07/06/201 4) Chuyên ngành Vi sinh v t học 5 Vi n NC & PT Công nghệ sinh học Luận văn t t nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT 2.2.2 Mô t : Cây thảo, sống lâu năm, cao 20-40 cm Thân ngầm... Hàm lượng trung bình NH4+ của các dòng vi khuẩn phân lập t lá …… 54 Hình12: Hàm lượng trung bình NH4+ của các dòng vi khuẩn triển vọng …….……55 Hình 13: Hàm lượng trung bình IAA của các dòng vi khuẩn phân lập t rễ ….… 57 Hình 14: Hàm lượng trung bình IAA của các dòng vi khuẩn phân lập t thân … 59 Hình 15: Hàm lượng trung bình IAA của các dòng vi khuẩn phân lập t lá… … 60 Hình 16: Hàm lượng trung bình... chữa s t r t, sài gi t trẻ em, đau răng, trâu bò bị cắn Ở Trung Quốc, m t số hợp ch t kháng khuẩn đã được phân lập t cây diếp cá và bào chế thành thuốc vi n và thuốc tiêm để trị bệnh nhiễm khuẩn Ở Ấn Độ, Trung Quốc, thân rễ diếp cá được ăn như rau, dùng sống hoặc nấu chin Ở Nh t Bản, thân rễ cây diếp cá có trong thành phần m t số chế phẩm thuốc dùng để chữa m t số bệnh phụ nữ Ở Trung Quốc, diếp cá còn... hợp IAA, có t nh kháng khuẩn 2.5.2 Ngoài nước Hiện nay thế giới đang nghiên cứu t p đoàn vi sinh v t sống nội sinh trong cây dược liệu, đặc bi t các cây dược liệu sống ở các vùng nhi t đới, như cây Diếp Cá, cây Sài Đ t (Wedelia chinensis M), cây Diệp hạ châu (Phyllanthus urinaria L)… Gon et al., (201 2) khi nghiên cứu công dụng của cây Diếp cá (Houttuynia cordata T. ) cho bi t dịch chi t của cây này có... với sự t c động của các nhân t vô sinh và hữu sinh (Hallmann et al., 199 7) Vùng rễ là nơi tiếp giáp giữa rễ thực v t và đ t, là nơi lắng động các ch t hữu cơ, và là nơi xu t ph t của các môi trường sống và các nguồn sống khác nhau cho các vi sinh v t đ t Thực v t có thể thay đổi vùng rễ của chúng nhờ sự hấp thu các ch t dinh dưỡng, độ ẩm và oxy t vùng rễ; và các ch t do rễ ti t ra (El-Shatnawi và... lớn trước khi xâm nhập vào bên trong mô thực v t Hurek et al, (199 4) cho rằng sự phân c t hay sinh sản của vi khuẩn Azoarcus sp, được t m thấy bên ngoài và bên trong mô rễ lúa và cỏ Kallar M t số nhóm vi khuẩn nội sinh không gây hại hay gây bệnh cho cây chủ, mà trái lại chúng có thể thúc đẩy sự ph t triển của cây trồng bằng cách sản xu t các ch t kích thích sự sinh trưởng thực v t và sự cố định đạm t ... THƠ VI N NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC - - LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH VI SINH VẬT HỌC PHÂN LẬP CÁC DÒNG VI KHUẨN NỘI SINH TRONG CÂY DIẾP CÁ (Houttuynia cordata. .. IAA dòng vi khuẩn phân lập từ thân 56 4.3.3 So sánh khả tổng hợp IAA dòng vi khuẩn phân lập từ 58 4.3.4 So sánh khả tổng hợp IAA dòng vi khuẩn triển vọng nội sinh Diếp cá. .. tan lân khó tan dòng vi khuẩn phân lập 62 4.5 Khả kháng khuẩn dòng vi khuẩn phân lập: 64 4.5.1 Khả kháng khuẩn với vi khuẩn Escherichia coli 64 4.5.2 Khả kháng khuẩn với vi khuẩn Aeromonas