PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Bệnh Gumborodo hay bệnh viêm túi Fabricius truyền nhiễm – Infectious Bursal Disease (IBD) Infectious Bursal Disease Virus (IBDV) thuộc chi Avibirnavirus, họ Birnaviridae gây gà - 12 tuần tuổi [24] Virus gây bệnh làm tê liệt hệ thống miễn dịch gây suy giảm miễn dịch gà Bệnh lây lan cực nhanh, thường xảy gà giai đoạn từ - tuần tuổi, tỷ lệ nhiễm bệnh lên đến 100% tỷ lệ chết từ 20 - 50%[8] Do đó, việc phòng bệnh Gumboro cho gà điều cần thiết Ở Việt Nam bệnh phát vào năm 1981 số trại nuôi gà công nghiệp thuộc tỉnh phía Bắc, vào năm 1987 - 1993 bệnh phát triển mạnh gây chết nhiều gà Theo điều tra gần nước ta, gà công nghiệp có tỷ lệ mắc bệnh cao, gà ta nuôi theo phương thức bán công nghiệp mắc bệnh nhiều đàn tỷ lệ chết lên đến 20 - 25% Không gây tác hại đàn gà công nghiệp, bệnh Gumboro thấy xuất đàn gà Ri Việt Nam Khả bệnh lây lan trước không đầu tư nghiên cứu để có biện pháp phòng chống thích đáng [1] Đặc biệt tình trạng kiểm soát vệ sinh giết mổ nước ta khó quản lý, mầm bệnh Gumboro lây lan thông qua lò mổ, từ trình vận chuyển, giết mổ, xử lý chất thải… Cho tới chưa có nhiều nghiên cứu đánh giá ảnh hưởng lò mổ tới tình hình dịch Gumboro vùng xung quanh Để kiểm soát bệnh hiểu rõ độc tính mầm bệnh lưu hành tỉnh Thừa Thiên Huế, chẩn đoán nhanh có đề xuất liên quan đến việc đảm bảo vệ sinh thú y lò mổ gia cầm, cho phép trường Đại học Nông Lâm Huế, đồng ý giáo viên hướng dẫn PGS TS Phạm Hồng Sơn thực đề tài “Nghiên cứu tình hình miễn dịch chống bệnh Gumboro gà giết mổ cảm nhiễm virus Gumboro gà giết mổ, gà nuôi liền kề xa lò mổ Thủy Dương phương pháp IHA SSIA” 1.2 Mục đích đề tài Đánh giá ảnh hưởng dịch tễ lò mổ gia cầm đến tình hình nhiễm bệnh Gumboro địa bàn xung quanh thành phố Huế từ đề xuất biện pháp ngăn ngừa dịch bệnh từ lò mổ đến hộ gia đình 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn 1.3.1 Ý nghĩa khoa học -Đánh giá khả kháng bệnh nguồn gia cầm nhập vào lò mổ (kháng thể nguồn gà nhập, tỉ lệ tiêm phòng), lưu hành virus cúm Gumboro địa bàn huyện Hương Thủy - Khảo sát tỉ lệ gia cầm mắc bệnh Gumboro sở giết mổ gia cầm Thủy Dương (Hương Thủy) đàn gia cầm địa bàn lân cận - Đánh giá hoàn chỉnh phương pháp SSIA thông qua thực tiễn 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn - Kết nghiên cứu phản ánh tình hình gia cầm nhiễm bệnh lò mổ, tìm ảnh hưởng định công tác vệ sinh thú y lò mổ tới lưu hành virus Gumboro hai địa bàn - Qua kết nghiên cứu, mong muốn giúp người chăn nuôi lò mổ có ý thức việc đảm bảo môi trường chăn nuôi giết mổ phù hợp nhằm phòng tránh bệnh Gumboro PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Khái quát điều kiện tự nhiên thị xã Hương Thủy 2.1.1 Vị trí địa lý Thị xã Hương Thủy nằm khu vực trung tâm tỉnh Thừa Thiên - Huế, phía Đông Nam thành phố Huế, không tiếp giáp với biển Đông [37] Địa giới hành chính: - Phía Đông giáp huyện Phú Lộc - Phía Tây giáp thị xã Hương Trà huyện A Lưới - Phía Nam giáp huyện Nam Đông - Phía Bắc giáp thành phố Huế huyện Phú Vang Thị xã Hương Thủy nằm trục đường giao thông quan trọng xuyên suốt Bắc - Nam quốc lộ tuyến đường sắt xuyên Việt chạy dọc theo tỉnh, trục hành lang Ðông - Tây nối Thái Lan - Lào - Việt Nam theo đường Toàn huyện có 11 xã thị trấn, có hai xã vùng núi [37] 2.1.2 Khí hậu Mùa mưa trùng với mùa bão lớn từ tháng đến tháng 11 với lượng mưa trung bình từ 2.500 - 2.700 mm Mùa khô kéo dài từ tháng đến tháng 7, mưa ít, lượng nước bốc lớn, thường xuyên bị hạn hán, nước mặn đe dọa Nhiệt độ trung bình hàng năm cao 35,9 oC, thấp 12 oC, nhiệt độ trung bình năm 21,9 oC, tháng lạnh tháng 11 Ðộ ẩm tương đối trung bình tháng năm 87,3% [37] 2.1.3 Địa hình đất đai Toàn lãnh thổ huyện thuộc lưu vực sông Tả Trạch, thuộc hệ thống sông Hương Sông Tả Trạch nhánh sông bắt nguồn từ vùng núi trung bình huyện Nam Đông với độ cao tuyệt đối 900 m Sông chảy theo hướng chung Nam Đông Nam – Bắc Tây Bắc ngã ba Tuần hội nhập với sông Hữu Trạch trở thành sông Hương Tổng chiều dài sông Hữu Trạch chảy qua huyện Hương Thủy khoảng 32km, chảy qua địa bàn xã Dương Hòa Thủy Bằng Tổng diện tích đất tự nhiên huyện 457,34 km2 Dân số toàn huyện 95.336 (2006), mật độ dân số 208,5 người/km Huyện có 11 xã thị trấn huyện lỵ, dân số toàn huyện phân bố theo địa bàn hành 2 Tình hình chăn nuôi gia cầm thị xã Hương Thủy số lượng gia cầm du nhập tỉnh Thừa Thiên Huế 2.2.1 Tình hình chăn nuôi gia cầm thị xã Hương Thủy Chăn nuôi gia cầm thị xã Hương Thủy tồn nhiều hình thức trang trại, gia trại, nuôi nhốt, thả vườn… Đến toàn huyện có khoảng 50 hộ chăn nuôi gia cầm có quy mô gia trại từ 100 trở lên Trên địa bàn ccó khoảng 12 sở ấp nở gia cầm thủy cầm giống có công suất từ 11 ngàn đến 14 ngàn con, chưa đáp ứng nguồn giống chăn nuôi trứng thành phẩm chỗ… Do đầu tư chưa thỏa đáng nên phần lớn hộ dân địa bàn tỉnh chủ yếu chăn nuôi theo phương thức nhỏ lẻ, tự phát Theo thông tư 24 Bộ NN&PTNT mô hình có doanh thu từ tỷ đồng trở lên gọi trang trại Như vậy, nói cách nghĩa địa bàn tỉnh Thừa Thiên - Huế có khoảng 10 trang trại chăn nuôi gia cầm có doanh thu từ tỷ đồng trở lên, số lại khoảng từ 400 - 500 gia trại vừa nhỏ [35] Tại Hương Thủy chưa có trang trại theo quy mô quy định 2.2.2 Số lượng gia cầm du nhập tỉnh Thừa Thiên Huế Một nghịch lý diễn hàng tháng số lượng gia cầm nhập vào địa bàn tỉnh Thừa Thiên - Huế lên đến hàng chục nghìn đến lò mổ Riêng tháng 9/2011 Thừa Thiên - Huế nhập 31.070 gia cầm, 8.250 vịt 6,7 thịt gà đông lạnh lúc thị trường đầu cho trang trại, gia trại gặp khó khăn Tại địa bàn Phú Lộc, nhiều trang trại, gia trại chăn nuôi gia cầm phải phát triển cách cầm chừng, số trang trại khác lại phá sản Qua tìm hiểu vấn lò mổ, lượng gia cầm du nhập chủ yếu từ tỉnh phía nam Đà Nẵng, Quảng Nam, Bình Định, Quãng Ngãi… 2.3 Giới thiệu bệnh Gumboro 2.3.1 Tình hình bệnh Gumboro giới Việt Nam Bệnh Cosgrove phát năm 1962 trại gà làng Gumboro, bang Delaware nước Mỹ [31] Sau công bố Mỹ, bệnh phát châu Âu, châu Á, châu Phi, Nam Mỹ trở thành vấn đề toàn giới Tại châu Âu người ta phát bệnh Gumboro sớm Ở nước Anh vào năm 1962 Năm 1966 bệnh Gumboro phát Ý Năm 1967 phát Đức… Tại châu Á năm 1966 phát bệnh Gumboro Israel, đến năm 1973 phát Thái Lan bắt đầu xuất bệnh Gumboro đàn gà nuôi công nghiệp Tại châu Úc, năm 1974 có dấu hiệu bệnh Gumboro xảy đàn gà Australia, sau tác giả phân lập mầm bệnh [4] Năm 1986 người ta đồng thời phát virus Gumboro có độc lực cao nhiều quốc gia châu Âu Hà Lan Anh, Pháp, Tây Ban Nha Các tác giả cho virus Gumboro có độc lực mạnh từ ổ dịch lan truyền thành vùng dịch Tại châu Phi năm 1986 bệnh Gumboro xảy quanh năm Negieria Năm 1991 Ai Cập, Malaysia, Kenia, Singapore, nhà nghiên cứu công bố dịch phân lập virus cường độc Ở nước ta, từ thức phát vào đầu năm 1980 đến nay, bệnh xảy ngày trầm trọng toàn diện toàn quốc, gây thiệt hại lớn cho ngành chăn nuôi gia cầm [1] Đến có nhiều nghiên cứu bệnh Gumboro Việt Nam, bệnh tiếp tục xảy chưa khống chế cách triệt để mối đe dọa to lớn [4] 2.4 Giới thiệu chung virus gây bệnh Gumboro Virus gây bệnh Gumboro (Infectious bursal disease virus – IBDV), hay thường gọi virus Gumboro, virus thuộc chi Avibirnavirus, họ Birnaviridae, họ hệ thống phân loại virus động vật người [4] Virus có dạng hình khối, gồm 20 mặt đều, kích thước khoảng 50 - 60 nm Một tế bào bị nhiễm chứa hay vài tập hợp virus chúng xếp đặn cạnh nhau, giống tổ ong nguyên sinh chất tế bào Virus Gumboro vỏ bọc mà dạng virus trần, bao gồm lõi chứa acid ribonucleic (ARN) bao quanh hệ gen ARN lớp vỏ protein hay gọi capsid Virus Gumboro bao gồm 32 đơn vị hình thái, mà đơn vị hình thái gọi capsomer, hợp thành lớp vỏ bọc capsid bao lấy acid ribonucleic bên [11], [4] 2.4.1 Đặc điểm hình thái phân loại virus Gumboro 2.4.1.1 Đặc điểm hình thái Virus Gumboro có dạng hình khối, gồm 20 mặt đều, kích thước khoảng 50 - 60 nm Một tế bào bị nhiễm chứa hay vài tập hợp virus chúng xếp đặn cạnh nhau, giống tổ ong nguyên sinh chất tế bào Virus Gumboro vỏ bọc mà dạng virus trần, bao gồm lõi chứa acid ribonucleic (ARN) bao quanh hệ gen ARN lớp vỏ protein hay gọi capsid Virus Gumboro bao gồm 32 đơn vị hình thái, mà đơn vị hình thái gọi capsomer, hợp thành lớp vỏ bọc capsid bao lấy acid ribonucleic bên [11], [4] 2.4.1.2 Các type, chủng virus Gumboro Virus Gumboro gồm có serotype serotype I gây bệnh gà, tùy thuộc vào mức độ độc lực, người ta chia thành nhóm nhóm cường độc, nhóm cổ điển, nhóm biến đổi nhóm nhược độc Giữa chủng serotype I có mức độ cộng đồng kháng nguyên không đồng đều, nhiều trường hợp chủng cho 30% miễn dịch chéo với chủng khác Do cần lưu ý việc sử dụng loại vaccine nhược độc phòng bệnh Gumboro Serotype II bao gồm tất chủng virus cường độc Gumboro gây nhiễm phân lập gà tây [4] Một số chủng virus Gumboro sử dụng giới Các chủng cường độc thuộc type I bao gồm - Chủng CVL 52/70 sử dụng làm chủng cường độc chuẩn theo đề nghị Tổ chức dịch tễ thú y giới (OIE) - Chủng ST-C, D78, IM, 2512, MC, MT… phân lập Mỹ trở nên chủng cường độc chuẩn Gumboro - Chủng LVN Lukert, chủng VNJO Pháp sử dụng làm vaccine vô hoạt - Các chủng nhược độc thuộc type I bao gồm chủng Sal, BB, Lukert, dùng để chế vaccine Gumboro nhược độc [4] 2.4.2 Cấu trúc phân tử virus Gumboro Virus Gumboro bao gồm hệ thống gen chứa hai sợi ARN phân bố hai phân đoạn khác gọi phân đoạn A phân đoạn B [24] Phân đoạn B có độ dài khoảng 2800 nucleotide, chứa cho cấu trúc gen mã hóa cho tổng hợp protein có tên gọi VP1 (VP – viral protein) VP1 có hoạt tính sinh học chịu trách nhiệm enzyme ARN-polymerase virus Enzyme có vai trò xúc tác trình tổng hợp nguyên liệu ARN, vật liệu di truyền virus [4] Phân đoạn A hệ gen virus Gumboro có độ dài tổng cộng 3200 nucleotide bao gồm phận gen tổng hợp Bộ phận thứ cấu trúc đơn gen (monocistronic) mã hóa cho tiền protein có phân tử lượng 108 kDa mà trình phân cắt thành protein cấu trúc có tên gọi VP1, VP2, VP4 [33] Bộ phận thứ phần ADN phân đoạn A, mã hóa cho loại protein khác có tên gọi VP5, mà chuỗi ADN lồng vào phần gen VP2 Do vậy, hai loại protein sử dụng chung phần chuỗi nucleotitde làm thành phần ba mã hóa cho thành phần acid amin khác nhau, VP5 loại protein có trọng lượng phân tử nhỏ (17 kDa), phát gần có chức trình điều hòa chép tổng hợp protein, đặc biệt trình khởi phát “tự nguyện chết” tế bào dẫn đến suy giảm miễn dịch [22] Ngoài VP5 có vai trò quan trọng tiến trình gây bệnh, số thực nghiệm chứng minh virus thiếu thành phần khiếm khuyết thành phần VP5, dẫn đến khả phần hay hoàn toàn tính gây bệnh tức bệnh tích vi thể đại thể túi Fabricius [28] Protein VP2 VP3 protein cấu trúc, cấu tạo nên thành phần virus capsid Trong cấu trúc capsid, VP2 trình diện lên bề mặt, thành phần protein bề mặt, VP3 lặn sâu vào bên trong, thành phần cấu tạo bên VP4 protease loại enzyme có chức phân cắt protein có vai trò cắt rời chuỗi polypeptide toàn phân đoạn A tổng hợp gọi protein chung hay protein đa phần (polyprotein) Protein tổng hợp toàn cấu trúc đa gen (polycistronic) phân đoạn A [34] Protein VP2 chứng minh loại protein có tính kháng nguyên có tính chất bảo vệ virus, VP2 đại diện cho tính độc lực tính gây bệnh virus Protein bao gồm vùng gọi trung tâm kháng nguyên, mà có phần cấu trúc có chứa đoạn giới hạn khoảng 150 acid amin gọi epitope, có vai trò trình kích thích thể động vật bị nhiễm sản sinh kháng thể trung hòa [26] Sự biến đổi acid amin VP2 đề dẫn tới thay đổi định tính kháng nguyên tính gây bệnh Tuy nhiên có vùng hẹp cấu trúc gen VP2 gọi vùng “siêu biến đổi” (hypervariable region), có thành phần nucleotide acid amin thay đổi chủng khác nhau, định vị gen VP2 tính từ nucleotide thứ 103 đến nucleotide thứ 1176, bao gồm 474 nucleotide, với khoảng 150 acid amin, chịu trách nhiệm đặc biệt tính kháng nguyên Protein sử dụng vùng “quyết định kháng nguyên” để kích thích thể sản sinh kháng thể có tính chất thuộc loại kháng thể tham gia phản ứng trung hòa (VN – virus neutralization) Một dãy gồm 12 - 20 acid amin khung, xen kẽ acid amin khác vùng “siêu biến đổi” gọi epitope Epitope có cấu trúc vòm đặc biệt, chịu trách nhiệm kích thích kết hợp với kháng thể tương ứng Nếu vùng “siêu biến đổi” có thành phần nucleotide biến đổi giới hạn định, không làm thay đổi acid amin vùng “siêu biến đổi” nói chung dãy epitope nói riêng, tính miễn dịch đảm bảo quan hệ tương tác kháng nguyên - kháng thể virus Gumboro tương ứng Như vậy, VP2 loại hình kháng nguyên ts (type-specific) [3] Về hầu hết chủng virus Gumboro giống virus, giống gen quy định tổng hợp protein VP1, VP3, VP4 VP5 Chúng khác gen quy định tổng hợp protein VP2, hay xác chúng khác vùng “siêu biến đổi” gen VP2 Chính vậy, “vùng siêu biến đổi” dùng làm đích để so sánh, chẩn đoán chủng virus cường độc Gumboro, qua thao tác trung gian phương pháp sinh học phân tử Tóm lại, VP2 sử dụng nhằm phân biệt type độc lực khác chủng virus [4] Quá trình “nhược độc hóa” (biến đối từ chủng cường độc thành nhược độc yếu hơn) trở nên “vô độc” “lại độc” hệ trình biến đổi có tính quy luật acid amin làm khung nằm epitope protein VP2 VP3 thành phần protein làm khung cấu tạo nên capsid có tính kháng nguyên thuộc loại hình kháng nguyên gs (group-specific), kích thích thể sản sinh kháng thể kết tủa, mà virus Gumboro thuộc serotype I serotype II kích thích sản sinh Vì vậy, VP3 dễ dàng cho phản ứng kết tủa chéo có tác dụng nhận biết virus Gumboro với loại virus khác họ khác [32] 2.4.3 Cơ chế phân tử trình nhân lên virus Gumboro Sau virus thụ thể có bề mặt màng tế bào tiếp nhận virus thực trình xâm nhập sâu Thụ thể tế bào thành phần cấu trúc màng tế bào biến đổi đặc hiệu để tiếp nhận virus Gumboro Tiếp theo virus phải lột vỏ capsid để giải phóng hệ gen ARN Quá trình thực virus chép thông tin tổng hợp protein VP1, VP1 có giá trị làm enzyme xúc tác ARN-polymerase cho trình [29] Tiếp theo tổng hợp loại protein chung từ phân đoạn A ARN hệ gen virus Protein gọi tiền protein có phân tử lượng 108 kDa Trong giai đoạn tiếp theo, protein chung phân cắt thành hai loại protein khác Một loại có tên gọi VP2a có phân tử lượng 40 - 50 kDa Loại thứ hai chứa VP3 VP4 có phân tử lượng 35 - 60 kDa Giai đoạn gọi giai đoạn phân cắt Tiếp theo, sau cắt bỏ phần nhỏ không cần thiết, VP2a phân cắt tiếp thành VP2b có phân tử lượng 40 - 45 kDa thành phần bề mặt vỏ capsid có trách nhiệm tính kháng nguyên tính độc lực virus, hay thức gọi VP2 kháng nguyên thành phần tham gia phản ứng trung hòa Còn VP3 VP4 phân cắt thành hai loại hình protein riêng biệt Loại thứ có phân tử lượng bé (28 kDa) gọi VP4 có hoạt tính sinh học làm enzyme protease, giúp cho thao tác phân cắt protein khác virus Loại thứ hai có tên gọi VP3 (30 - 32 kDa) làm thành phần bên vỏ capsid, chịu trách nhiệm protein cấu trúc thành phần kháng nguyên tham gia phản ứng kết tủa khuếch tán thạch [4] Trong chuỗi ARN có nhiều phần ARN ngắn có tác dụng vấn đề chuyển nạp thông tin, điều hòa trình chép gen, đóng vai trò khởi động (promotor), kích hoạt (enhancer) làm vị trí cho protein bám vào (binding site) Một số chuỗi có cấu trúc lặp, cấu trúc vòm, cấu trúc bậc hai nhằm đảm bảo an toàn cho hệ gen virus Tất chuỗi thường nằm vùng 5’ hay 3’ tức trước sau cấu trúc gen virus ARN nhân lên để tạo nguyên liệu cho virus VP1 xúc tác ARN polymerase để tổng hợp nên sợi ARN hệ gen - phân đoạn A B Các phân đoạn tập hợp với coi sợi dương làm khuôn cho virus tổng hợp nên sợi âm Các sợi thành phần hệ gen virus Sau nhồi vào vỏ capsid phân đoạn A lại kết hợp với phân đoạn B tạo nên hình thái ARN hai sợi Các virus hình thành tiếp cận màng tế bào (lympho B) gây áp lực lên màng tế bào làm thành phần màng tế bào biến đổi giúp virus trồi màng tế bào Giai đoạn giai đoạn “nảy chồi” Có hàng chục nghìn virus giải phóng khỏi tế bào theo chế [4] 2.4.4 Đặc tính nuôi cấy 2.4.4.1 Nuôi cấy phôi gà Phôi gà 10 - 11 ngày, tiêm bệnh phẩm chứa virus, vào màng niệu, vào xoang niệu mô, vào túi lòng đỏ Trong phương pháp tiêm vào màng niệu tốt Sau tiêm virus, phôi chết từ ngày thứ - 5, bệnh tích chủ yếu gây sung huyết, xuất huyết màng niệu, màng dày lên, phôi bị sung huyết, thùy thũng vùng bụng, có điểm xuất huyết da, vùng da đùi, đầu hai bên sườn phôi, gan sưng có điểm xuất huyết hoại tử [16] 2.4.4.2 Nuôi cấy môi trường tế bào Bao gồm tế bào có nguồn gốc từ phôi tế bào phôi gà, tế bào Phôi gà tây, tế bào phôi vịt tế bào thận thỏ, thận khỉ… Nhưng virus không thích ứng nuôi cấy môi trường tế bào, mà phải qua vài đợt cấy chuyển tiếp đời virus thích ứng gây bệnh tích cho tế bào Hiện hay dùng môi trường tế bào tổ chức xơ phôi gà để phân lập nhân giống nghiên cứu tính kháng nguyên virus, thường 48 - 96 sau nuôi cấy virus, quan sát hủy hoại tế bào tế bào co cụm lại, biến dạng Nếu cấy chuyển liên tiếp nhiều đợt qua môi trường tế bào tổ chức độc lực virus giảm dần sử dụng giống virus làm vaccine [16] 2.4.4.3 Nuôi cấy gà thí nghiệm Dùng gà - tuần tuổi để nuôi cấy virus, chọn gà chưa tiêm phòng Gumboro kiểm tra huyết gà kháng thể Gumboro Gà tiêm virus sau 24 - 72 virus nhân lên quan lympho đặc biệt túi Fabricius, làm túi bị viêm, sưng, tổ chức túi bị phá hủy, biến màu, túi tăng kích thước trọng lượng Nếu thu hoạch túi Fabricius vào thời điểm 48 - 72 sau gây nhiễm thu lượng virus lớn độc lực virus mạnh Ngoài biểu đặc trưng túi Fabricius, gà có triệu chứng lâm sàng bệnh tích đặc trưng bệnh Gumboro Virus Gumboro cấy chuyển nhiều đợt phôi gà - tuần tuổi độc lực virus tăng cường [16] 2.4.5 Sức đề kháng Virus có sức đề kháng cao tự nhiên, đặc tính nguyên nhân tồn mầm bệnh trại nuôi gà, không thực triệt để công tác vệ sinh tiêu độc sau hết dịch Virus bị vô hoạt độ pH 12 pH 2, nhiệt độ 56 °C virus bị diệt giờ, 60 °C 30 phút, 70 °C virus chết nhanh chóng Các chất hóa học thông thường diệt virus formalin 0,5% giờ, phenol 0,6% giờ, chloramin 0,5% 10 phút Trong phân rác, chất độn chuồng chồng gà bị nhiễm, virus tồn lâu, nguồn tồn trữ virus dẫn đến việc bệnh xảy lưu cữu quanh năm [16] 10 số gà mắc bệnh chưa tiêm vaccine đưa vào nên nguy lây lan dịch bệnh từ sở vẩn tồn Kết luận chung: Tỷ lệ gà mang kháng thể lò giết mổ cao, độ an toàn (thể qua số mẫu bảo hộ) cao nên khả bùng phát dịch chuồng nuôi nhốt chờ giết mổ lò mổ không cao Tuy nhiên không nên chủ quan công tác vệ sinh giết mổ, phòng bệnh xử lý nguồn nước thải tồn cá thể mắc bệnh mà khả lây lan tồn tự nhiên virus Gumboro cao [16] Ngoài nhiều mầm bệnh khác chưa khảo sát 4.2 Tỷ lệ nhiễm cường độ nhiễm virus Gumboro lò mổ Thủy Dương, vùng liền kề xa lò mổ Xét nghiệm mẫu phân gà lấy từ huyện Hương Thủy thể qua bảng đây: Bảng 4.2 Phân bố hiệu giá kháng nguyên gà huyện Hương Thủy Địa điểm lấy mẫu Đợt lấy Lò mổ Thủy Dương Tổng Liền kề Tổng Ở xa tổng Tổng Tỷ lệ Số mẫu Số mẫu dương xét dương tính nghiệm tính (%) 41 17 41,46 40 19 47,5 55 29 52,73 136 65 47,79 32 11 34,38 52 38 73,08 34 20,59 118 56 47,46 30 16,67 39 22 56,41 31 19,35 100 33 33 354 154 43,5 Phân bố hiệu giá kháng nguyên (xlog2) 19 21 47 21 23 14 19 89 14 14 16 10 40 0 10 0 15 0 0 0 10 GMT 1,69 1,39 1,59 1,56 2,28 2,17 1,41 1,94 1,48 1,7 1,17 1,45 1,64 37 Kết phân bố hiệu giá kháng thể bảng 4.2 cho thấy Tại lò mổ Thủy Dương: Tỷ lệ dương tính với kháng nguyên cao Thấp tháng với tỉ lệ 52,73% cao 43,48% vào tháng Hiệu giá xê lệch ngưng kết gián tiếp chuẩn chủ yếu tập trung 1log2 Hiệu giá 3log2 có mẫu 4log2là mẫu nên hiệu giá trung bình nhân GMT không cao Kết cho thấy đàn gà có tiếp xúc với mầm bệnh chưa gây thành dịch (có thể trình nuôi nhốt chung, vận chuyển, vừa tiêm vaccine) Tuy nhiên xuất nhiều mẫu có hiệu giá 3log2 nên GMT lò mổ thủy Dương cao nguy lưu giử mầm bệnh lây lan bên lớn Liền kề lò mổ Thủy Dương: Tỷ lệ dương tính với kháng nguyên cao Không đồng tháng, thấp tháng với tỉ lệ 20,59% cao 73,08% vào tháng Hiệu giá xê lệch ngưng kết gián tiếp chuẩn chủ yếu tập trung 1log2 (23 mẫu), hiệu giá 3log2 (10 mẫu) 4log2 (7 mẫu) xuất nhiều nên hiệu giá trung bình nhân GMT cao (GMT trung bình đợt 1,94) Kết cho thấy tình hình đáng báo động đàn gia cầm xung quanh lò Thủy Dương, dịch Gumboro bùng phát mạnh gây thiệt hại kinh tế lớn hình thức chăn thả hộ nông dân gần xen kẻ với trang trại gia cầm địa bàn Ở xa lò mổ Thủy Dương: Tỷ lệ dương tính với kháng nguyên cao thấp tháng với tỉ lệ 16,67% cao 56,41% vào tháng Hiệu giá xê lệch ngưng kết gián tiếp chuẩn chủ yếu tập trung 1log2 2log2 Hiệu giá 3log2 có mẫu 4log2là mẫu nên hiệu giá trung bình nhân GMT không cao Nhận xét chung: Tháng thường tháng có tỉ lệ cảm nhiễm cường cao Tại lò mổ Thủy Dương tỉ lệ dương tính 47,5% GMT 1,39 Liền kề lò mổ Thủy Dương tỉ lệ dương tính 73,08% GMT 2,17 Ở xa lò mổ Thủy Dương tỉ lệ dương tính 56,41% GMT 1,7 Giả thiết đặt giai đoạn cận Tết, thời tiết lạnh, mưa phùn có gió Đông Bắc hoạt động điều kiện gây bệnh cho gà, đặc biệt sau Tết số 38 gà bên thường nuôi gà (gà thịt lớn bán nhu cầu trước Tết cao) đối tượng gà dể mắc bệnh Mặc dù tỉ lệ gà giết mổ mang kháng thể cao tỉ lệ nhiễm cường độ nhiễm cao lí có cá thể chưa chủng ngừa mắc bệnh nặng, cá thể chủng ngừa tiếp xúc nhiều với nguồn bệnh nên mầm bệnh khu trú tổ chức khác bị đào thải phân Với kết trên, ta thấy tình trạng mang trùng virus Gumboro đàn gà đưa vào giết mổ xung quanh lò mổ huyện Hương Thủy thuộc tỉnh Thừa Thiên Huế đáng lo ngại Nếu việc xử lý vệ sinh giết mổ không đảm bảo, khâu tiêm phòng không áp dụng triệt để với tỷ lệ bảo hộ thấp khả bùng phát dịch cao 4.3 Ảnh hưởng lò mổ Thủy Dương đến tỉ lệ nhiễm cường độ nhiễm virus Gumboro khu vực xung quanh Số liệu thu ta có bảng 4.3 thể mối quan hệ tỉ lệ nhiễm cường độ nhiễm đợt khu vực lấy mẫu Bảng 4.3: Tỉ lệ nhiễm cường độ nhiễm đợt khu vực lấy mẫu Đợt lấy mẫu Địa điểm Tại lò Liền kề Ở xa Tại lò Liền kề Ở xa Tại lò Liền kề Ở xa Tỉ lệ nhiễm (%) 41,46 43,38 16,67 47,5 73,08 56,41 16,67 56,41 19,35 Cường độ nhiễm (GMT) 1,69 2,28 1,48 1,39 2,17 1,7 1,59 1,7 1,17 Từ bảng ta có biểu đồ (hình hình 2) thể trực quan tỉ lệ nhiễm cường độ nhiễm đợt khu vực lấy mẫu: 39 Hình 1: Biểu đồ so sánh tỉ lệ nhiễm Hình 2: Biểu đồ so sánh cường độ nhiễm 40 Từ bảng số liệu biểu đồ ta nhận thấy Tỉ lệ dương tính kháng nguyên (tỉ lệ nhiễm) ngòai lò mổ cao Tỉ lệ chung khu vực lò mổ Thủy Dương 47,79% Liền kề lò mổ Thủy Dương 47,46%, xa lò mổ Thủy Dương 36,67% Cường độ nhiễm (GMT) đợt cao Thấp 1,17 vào tháng km cao 2,28 vào tháng khu vực liền kề Ta dể dàng nhận thấy tỉ lệ nhiễm cường độ nhiễm khu vực xung quanh lò mổ thường cao lò mổ khu vực xa lò mổ Để giải thích ta đặt giả thiết ảnh hưởng lâu dài lò mổ (dù tỉ lệ nhiễm mầm bệnh tích tụ ngày qua ngày khác tạo thành ổ dịch nơi lưu trú mầm bệnh, vius Gumboro lại bền vững khó tiêu diệt môi trường) Tuy nhiên từ kết tỷ lệ dương tính cường độ nhiễm lò mổ Thủy Dương tháng lấy mẫu không đồng quy luật chung (tỉ lệ thuận) nên chưa thể kết luận ảnh hưởng lò mổ đến tỉ lệ nhiễm cường độ nhiễm virus Gumboro khu vực xung quanh yếu tố 4.4 So sánh tỷ lệ nhiễm virus Gumboro gà nuôi khu vực liền kề xa lò mổ Thủy Dương huyện Hương Thủy: Từ kết cho thấy tỉ lệ dương tính kháng nguyên (tỉ lệ nhiễm) khu vực liền kề cao khu vực xa lò mổ (47,46% so với 33%) Tuy nhiên, để đánh giá sai khác có thực chất hay không cần phân tích thống kê Chúng sử dụng số χ2 trình bày mục Phương pháp nghiên cứu để kiểm định Bảng 4: Kết xét nghiệm mẫu thu khu vực liền kề xa lò mổ Liền kề lò mổ Ở xa lò mổ Số mẫu dương tính 56 33 Số mẫu âm tính 62 77 Tính χ2 thực nghiệm = 4,68, so sánh kết với hàm chuẩn χ2 α=0,05, df=1 = 3,84 Ta thấy χ2 thực nghiệm >χ2 α=0,05, df=1 = 3,84, ta kết luận tỉ lệ dương tính kháng nguyên (tỉ lệ nhiễm) khu vực liền kề khu vực xa lò mổ có sai khác có ý nghĩa thống kê Với xác suất sai lầm 5% ta kết luận khu vực liền kề chịu ảnh hưởng lây lan mầm bệnh Gumboro từ lò mổ Thủy Dương Khu vực cách xa lò mổ không chịu ảnh hưởng lây 41 lan mầm bệnh Gumboro từ lò mổ Điều chứng tỏ công tác quản lý, vệ sinh giết mổ lò mổ Thủy Dương chưa đảm bảo Mầm bệnh phân rác, chất độn chuồng chồng gà nuôi nhốt bị nhiễm, virus tồn lâu, nguồn tồn trữ virus dẫn đến việc bệnh xảy lưu cữu quanh năm [16] Chất thải giết mổ yếu tố đưa mầm bệnh bên kiểm soát chất thải giết mổ điều cần thiết 42 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Từ kết nghiên cứu trình bày có số kết luận sau: - Thực trạng gà đưa vào giết mổ lò mổ Thủy Dương thuộc tỉnh Thừa Thiên Huế mang trùng với tỷ lệ cao Cụ thể sở giết Thủy Dương chung đợt 47,79% đáng ngại Sự tiềm ẩn virus động vật mang trùng xem khả tiềm tàng cho việc bùng phát dịch phạm vi rộng - Tỷ lệ bảo hộ lò mổ cao 70,44%, chứng tỏ nguồn gà giết mổ nhập vào có tỉ lệ tiêm phòng tốt Tuy nhiên không nên chủ quan công tác vệ sinh giết mổ, phòng bệnh xử lý nguồn nước thải tồn cá thể mắc bệnh, tỷ lệ mang trùng cao mà khả tồn lây lan tự nhiên virus Gumboro mạnh, nhiều mầm bệnh nguy hiểm khác chưa khảo sát - Tỷ lệ kháng nguyên cường độ mang mầm bệnh gà nuôi khu vực liên kề huyện Hương Thuỷ cao, tỷ lệ gà mang kháng nguyên 47,46% với cường độ nhiễm đàn 1,94 Mô hình nuôi gà thả vườn tỉ lệ mang kháng nguyên cao mẫu phân gà nuôi cao vấn đề đáng quan tâm động vật mang trùng nguy tiềm tàng cho việc bùng phát dịch bệnh địa phương - Khả lây lan từ gà giết mổ lò Thủy Dương gà nuôi xung quanh cao Vì kiểm soát chất thải giết mổ điều cần thiết Sự ảnh hưởng lò mổ địa bàn đến khu vực xung quanh rỏ ràng nhiều yếu tố ảnh hưởng khác đến số lượng gà cảm nhiễm - Tỉ lệ tiêm phòng lò mổ cao 70,44%, không đảm bảo mầm bệnh hoàn toàn bị kiểm soát làm giảm nguy bùng phát dịch - Sử dụng phản ứng ngưng kết hồng cầu gián tiếp IHA để phát kháng thể máu gà phản ứng xê lệch ngưng kết gián tiếp chuẩn SSIA để phát kháng nguyên Gumboro phân gà đem lại kết tốt Tuy nhiên số hạn chế phương tiện bảo quản mẫu nguyên liệu làm sai khác phần kết 43 5.2 Kiến nghị - Bệnh truyền nhiễm Gumboro gà không gây chết hàng loạt song thiệt hại mà gây đáng kể Việc chẩn đoán giám sát lưu hành virus Gumboro cần thực cách thường xuyên triệt để nhằm có chiến lược phòng chống dịch thích hợp - Tỉnh Thừa Thiên Huế nên có chương trình xây dựng vùng an toàn dịch , trọng khu vực liền kề lò mổ, ý tới công tác giống phát triển chăn nuôi, nâng cao tỷ lệ tiêm phòng cho địa phương cần đề chương trình tiêm phòng vaccine phòng bệnh Gumboro hợp lý cho đàn gia cầm địa phương, đặc biệt vào tháng dương lịch - Chú trọng công tác kiểm tra, kiểm soát lò mổ, nguồn gia cầm phương tiện vận chuyển … Hệ thống xử lí, vệ sinh cần nâng cấp toàn diện, đồng Các hộ chăn nuôi nên ý thường xuyên khử trùng tiêu độc chuồng trại dụng cụ chăn nuôi, tuân thủ nghiêm giải pháp kỹ thuật vệ sinh phòng dịch đảm bảo vệ sinh giết mổ, xử lý nước thải lò mổ địa bàn - Áp dụng hai phương pháp IHA SSIA để phát kháng thể kháng nguyên Gumboro gà địa phương, giúp cho cán thú y kiểm soát bệnh dịch tốt tiết kiệm 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu tiếng Việt [1] Nguyễn Tiến Dũng, 1996 Nhìn lại bệnh Gumboro Việt Nam Khoa học kỹ thuật Thú y III-1: 94-98 [2] Lê Thanh Hòa, 1992 Bệnh Gumboro suy giảm miễn dịch gia cầm Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội [3] Lê Thanh Hòa, 2002 Đặc tính phân tử chủng virus Gumboro cường độc Việt Nam qua khảo sát chuỗi gen kháng nguyên VP2 Khoa học kỹ thuật thú y IX-4: 6-14 [4] Lê Thanh Hòa, 2003 Sinh học phân tử virus Gumboro, nghiên cứu ứng dụng Việt Nam Nhà xuất Nông Nghiệp, Hà Nội [5] Lê Thanh Hòa, 2004 Biến đổi phân tử epitope gen kháng nguyên VP2 số chủng virus cường độc Gumboro phân lập Việt Nam Khoa học kỹ thuật thú y XI-4: 6-13 [6] Đinh Thị Bích Lân, 2007 Giáo trình Miễn dịch học Thú y Nhà xuất Đại Học Huế 74, 131-133 [7] Đinh Thị Bích Lân, Nguyễn Hữu Tình Lê Thanh Hòa, 2005 Khảo sát vùng siêu biến đổi chuỗi gen VP2 mẫu virus Gumboro phân lập Thừa Thiên Huế phương pháp sinh học phân tử Khoa học kỹ thuật thú y XII-2: 33-39 [8] Phạm Sỹ Lăng Nguyễn Thiện, 2002 Một số bệnh virus gia súc, gia cầm nhập nội biện pháp phòng trị Nhà xuất Nông Nghiệp, Hà Nội [9] Phương Song Liên, 1996 Nghiên cứu dịch tễ bệnh Gumboro gà công nghiệp số tỉnh phía Bắc Việt Nam Luận án phó tiến sỹ khoa học Nông Nghiệp [10] Lê Đình Phùng, 2010 Giáo trình phương pháp thí nghiệm chăn nuôi thú y Nhà xuất Nông Nghiệp, Hà Nội 156-160 [11] Phạm Hồng Sơn, Phan Văn Chinh, Nguyễn Thị Thanh Phạm Quang Trung, 2002 Giáo trình vi sinh vật học thú y Nhà xuất Nông Nghiệp, Hà Nội 179-192, 230-232 [12] Phạm Hồng Sơn, 2004 Sử dụng phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu gián tiếp phát kháng nguyên dịch tả lợn Khoa học Kỹ thuật Thú y XI-1 87-89 45 [13] Phạm Hồng Sơn, 2004 Tình hình bệnh dịch tả lợn qua chẩn đoán huyết học Thừa Thiên - Huế Khoa học Kỹ thuật Thú y XI-2 11-18 [14] Phạm Hồng Sơn, Bùi Quang Anh, 2006, Giáo trình bệnh truyền nhiễm thú y (phần đại cương) Nhà xuất Nông Nghiệp 17-18 [15] Phạm Hồng Sơn, 2009 Nghiên cứu tạo kháng nguyên ngưng kết hồng cầu gián tiếp gắn virus cúm A vận dụng chẩn đoán bệnh cúm gia cầm Khoa học kỹ thuật thú y XVI-2 14-22 [16] Nguyễn Như Thanh, Nguyễn Bá Hiên Trần Thị Lan Hương, 1997 Giáo trình Vi sinh vật Thú y Nhà xuất Nông Nghiệp 246-251 [17] Nguyễn Như Thanh, Phùng Quốc Chướng, 2006 Phương pháp thực hành Vi sinh vật Thú y Nhà xuất Nông Nghiệp Hà Nội 78-81, 168-169, 195-197 [18] Nguyễn Thị Thanh, 2004 Tài liệu Bệnh truyền nhiễm 125-127 [19] Nguyễn Bá Thành, 2001 Khảo sát tình hình bệnh Gumboro Thủ Dầu Một, tỉnh Bình Dương từ 1997 - 1999 Khoa học kỹ thuật Thú y VIII-1 13-19 [20] Bitay Zoltan, Trần Minh Châu Dương Công Thuận (1984) Phát bệnh Gumboro gà công nghiệp Kết nghiên cứu khoa học kỹ thuật thú y 1978 - 1984 28-31 II Tài liệu tiếng Anh [21] Alexander D J., 1997 Newcastle disease and other avian paramyxoviruses In Calnek B W (ed) Disease of poultry, 10th edition Iowa State University Press, Ames 541-569 [22] Mundt E., Beyer J and Muller H., 1995 Identification of a novel viral protein in infectious bursal disease virus-infected cells Journal of General Virology, 76: 437-443 [23] Kibenge F S B., Qan B., Cleghorn J R and Martin C K., 1997 Infectious bursal disease virus polyprotein processing does not involve cellular proteases Archives of Virology, 142(12): 2401-2419 [24] Lukert and Saif, 1991 [25] Boot H J., ter Huurne A H and Peeters B P., 2000 Generation of fulllength cDNA of two genomic dsRNA segments of infectious bursal disease virus Journal of Virological Methods 84: 49-58 [26] Sanchez-Vizcaino J M and Alvarez C M., 1987 Enzyme immunoassay techniques, ELISA, in animal and plant disease Technical Series No 7, Second Edition, Paris, France [27] Fahey K J., Erny K and Crooks J., 1989 A conformational immunogen on VP2 of infectious bursal disease virus that induces virus-neutralizing 46 antibodies that passively protect chickens Journal of Grenal Virology 70(6) 1473-1481 [28] Yao K , Gooddwin M A and Vakharia V N , 1998 Generation of a mutant infectious bursal disease virus that does not cause bursal lesions Journal of Virology, 72(4): 2647-2654 [29] Nagarajan M M and Kibenge F S., 1997 Infectious bursal disease virus a review of molecular basis for variations in antigenicity and virulence Canadian Journal of Veterinary Research 61(2): 81-88 [30] Hudson P J., Mckern N M., Power B E and Azad A A., 1986 Genomic structure of the large RNA segment of infectious bursal disease virus Nucleic Acids Research 14(12): 5001-5012 [31] Cosgrove S D., 1962 An apparently new disease of chickens - avian nephrosis, Avian Disease 6: 385-389 [32] Oppling V , Muller H and Becht H , 1991 The structural polypeptide VP3 of infectious busal disease virus and serotype-specific epitopes Journal of General Virology 72: 2275-2278 [33] Steward W C , 1981 Hog cholera In Diseases of swine, Laman A D., Glock R D , Mengeling W L., Penny R H C., Scholl E & Straw B (eds), The Lowa State University Press, Ames, IA 224-235 III Các Website [34] http//cema.gov.vn/modules.php?name=Content&op=details&mid=7811 [35].http//dulichhue.com.vn/gian-nan-tim-dau-ra-cho-san-pham-o-cac-trangtrai-chan-nuoi-5715.html [36].http//marphavet.com/modules.php? name=News&opcase=detailsnews&mid=29&mcid=330 [37].http//vi.wikipedia.org/wiki/Th%E1%BB%ABa_Thi%C3%AAn_-_Hu %E1%BA%BF 47 MỘT SỐ CỤM TỪ VIẾT TẮT SSIA: Trắc nghiệm xê lệch ngưng kết gián tiếp chuẩn (Shifting assay of standardized indirect agglutination) HA: Ngưng kết hồng cầu (Haemagglutination) HI: Ngăn trở ngưng kết hồng cầu (Haemagglutination Inhibition) IHA: Ngưng kết hồng cầu gián tiếp (Indirect haemagglutination) GMT: Giá trị trung bình nhân (Geometric Mean Titre) OIE: Tổ chức thú y giới (L’Office international des Epizooties) FAO: Tổ chức nông lương giới (Food and Agriculture Organization) CRD: Hô hấp mãn tính (chronic respiratory disease) PBS: Dung dịch muối đệm Phosphate (Phosphate-Buffered Saline) ctv: Cộng tác viên NXB: Nhà xuất 48 PHỤ LỤC Hình 3: Hồng cầu gắn kháng nguyên Hình 6: Phản ứng SSIA Hình 4: lấy mẫu lò Hình 5: Huyết chờ tận thu 49 MỤC LỤC PHẦN .1 MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích đề tài 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn 1.3.1 Ý nghĩa khoa học 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn .2 .2 PHẦN .3 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Khái quát điều kiện tự nhiên thị xã Hương Thủy 2.1.1 Vị trí địa lý 2.4 Giới thiệu chung virus gây bệnh Gumboro 2.4.1.1 Đặc điểm hình thái .5 2.4.1.2 Các type, chủng virus Gumboro 2.4.2 Cấu trúc phân tử virus Gumboro 2.4.3 Cơ chế phân tử trình nhân lên virus Gumboro 2.4.4 Đặc tính nuôi cấy 2.4.4.1 Nuôi cấy phôi gà 2.4.4.2 Nuôi cấy môi trường tế bào 10 2.4.4.3 Nuôi cấy gà thí nghiệm .10 2.4.5 Sức đề kháng 10 2.4.6 Tính gây bệnh 11 2.4.7 Đường lây truyền 11 2.5 Cơ chế sinh bệnh 11 2.6 Triệu chứng lâm sàng bệnh tích 13 2.6.1 Triệu chứng lâm sàng 13 2.6.2 Bệnh tích .13 2.7 Miễn dịch thể nhiễm virus 14 2.7.1 Miễn dịch không đặc hiệu .14 2.7.2.1 Miễn dịch thụ động 15 2.7.2.2 Miễn dịch chủ động 16 2.8 Vaccine phòng bệnh Gumboro 16 2.8.1 Khái niệm vaccine phòng bệnh Gumboro 16 2.8.2 Vaccine ADN hệ phòng chống bệnh Gumboro .16 2.8.2.1 Khái niệm vaccine ADN hệ .16 2.8.2.2 Tính cần thiết việc nghiên cứu vaccine hệ .17 2.9 Chương trình tiêm chủng 18 2.10 Các phương pháp chẩn đoán bệnh Gumboro 19 2.10.1 Chẩn đoán lâm sàng bệnh tích 20 2.10.2 Chẩn đoán phân biệt 20 2.10.3 Chẩn đoán phương pháp phân lập virus .20 2.10.4 Chẩn đoán virus học 20 2.10.5 Chẩn đoán phương pháp huyết học 21 2.10.5.2 Phản ứng ngưng kết gián tiếp hồng cầu (IHA) 22 2.10.5.3 Phản ứng xê lệch ngưng kết gián tiếp chuẩn (SSIA: Shifting assay of standardized indirert agglutination) .23 2.10.5.4 Phản ứng trung hòa virus (virus neutralization test - VN) .23 50 2.10.5.5 Phản ứng miễn dịch đánh dấu enzyme (ELISA:Enzyme-linked immunosorbent assay) .24 2.10.5.6 Chẩn đoán phương pháp phân tích genome virus 25 2.11 Phòng trị bệnh 25 2.11.1 Phòng bệnh 25 2.11.2 Điều trị bệnh 26 ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .27 3.1 Đối tượng, thời gian địa điểm nghiên cứu 27 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu 27 3.1.3 Địa điểm nghiên cứu .27 3.2 Nội dung nghiên cứu 27 3.3 Vật liệu phương pháp nghiên cứu .27 3.3.1 Vật liệu nghiên cứu .27 3.3.2 Phương pháp nghiên cứu .28 3.3.2.1 Phương pháp pha hóa chất 28 2.3.3.2 Phương pháp chế kháng nguyên hồng cầu gắn virus 29 3.3.2.2 Phản ứng ngưng kết hồng cầu gián tiếp (IHA) 31 3 Phản ứng xê lệch ngưng kết gián tiếp chuẩn (SSIA) .32 3.3.2.3 Phương pháp xử lý số liệu 35 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 36 4.1 Tình hình đáp ứng miễn dịch chống lại bệnh Gumboro lò mổ Thủy Dương huyện Hương Thủy 36 4.3 Ảnh hưởng lò mổ Thủy Dương đến tỉ lệ nhiễm cường độ nhiễm virus Gumboro khu vực xung quanh 39 PHẦN 43 5.1 Kết luận 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO .45 MỤC LỤC .50 51 [...]... 26 ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Đối tượng, thời gian và địa điểm nghiên cứu 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu - Gà được giết mổ tại lò mổ gia cầm Thủy Dương huyện Hương Thủy - Gà nuôi trên địa bàn huyện Hương Thủy liền kề lò mổ Thủy Dương (bán kính 3km) - Gà nuôi trên địa bàn huyện Hương Thủy cách xa lò mổ Thủy Dương (ngoài bán kính 3km) 3.1.2 Thời gian nghiên cứu Từ 05/01/2012 đến 05/05/2012... tại lò mổ gia cầm Thủy Dương huyện Hương Thủy (sử dụng IHA) - Xác định tỉ lệ và cường độ nhiễm của gà trong và ngoài lò mổ gia cầm Thủy Dương huyện Hương Thủy (sử dụng SSIA) - So sánh và đánh giá ảnh hưởng của các lò mổ gia cầm đến tình hình nhiễm bệnh Gumboro ở khu vực trong, liền kề và ở xa lò mổ 3.3 Vật liệu và phương pháp nghiên cứu 3.3.1 Vật liệu nghiên cứu - Các loại hóa chất NaCl (sodium chloride),... dùng cho gà trưởng thành, gà bố mẹ, thường sau khi tiêm 7 ngày gà có miễn dịch và lượng kháng thể đạt cao nhất vào ngày thứ 21 đến 30, sau khi tiêm và miễn dịch này có thể truyền cho gà con sau khi nở 25 Vaccine nhược độc dùng gây nhiễm cho gà con, gà mới nở bằng phương pháp nhỏ mắt, mũi, miệng hoặc cho uống vào lúc 7, 14, 21 ngày tuổi - Vệ sinh thú y: Xử lý chuồng trại một cách thường xuyên và định... điểm nghiên cứu - Địa điểm thí nghiệm phòng thí nghiệm vi sinh vật học, bộ môn Kí sinh -Truyền nhiễm, khoa Chăn nuôi Thú y, trường Đại học Nông Lâm Huế - Địa điểm lấy mẫu lò mổ Xuân Phú, huyện Phú Vang và lò mổ Thủy Dương, huyện Hương Thủy tỉnh Thừa Thiên Huế và các hộ gia đình xung quanh lò mổ trên 3.2 Nội dung nghiên cứu - Xác định hiệu giá kháng thể của gà được giết mổ tại lò mổ gia cầm Thủy Dương. .. khối u - Bệnh liên cầu khuẩn cũng gây xuất huyết cơ đùi, cơ ngực nhưng không có bệnh tích ở túi Fabricius [4] 2.10.3 Chẩn đoán bằng phương pháp phân lập virus Tiêm hỗn hợp dung dịch 10 - 20% túi Fabricius và lách gà bệnh cho phôi gà 9 - 10 ngày tuổi vào xoang niệu mô Theo dõi phôi gà trong 7 - 8 ngày sau khi tiêm Nếu có virus, phôi gà sẽ chết bắt đầu vào ngày thứ 3 và kéo dài đến ngày thứ 7 Bệnh tích... không cho chúng gây bệnh tích, gia cầm không bị suy giảm miễn dịch ảnh hưởng đến các chương trình vaccine khác Sự tác hại của sự suy giảm miễn dịch có thể còn trầm trọng hơn nhiều so với chính tác hại của virus gây ra Tiến trình và mức độ suy giảm miễn dịch do virus Gumboro gây ra có thể tóm tắt như sau: - Nếu gà bị nhiễm virus cường độc Gumboro vào lúc một vài ngày tuổi sau khi nở, thì gà con sau khi lớn... bị suy giảm miễn dịch suốt đời Gà bị bệnh ở lứa tuổi này thường bị bệnh ở thể cận lâm sàng hoặc thể ẩn nhiễm, nhưng các cơ quan và các tế bào thẩm quyền miễn dịch bị tổn thương trầm trọng dẫn đến suy giảm miễn dịch nặng nề Các chương trình vaccine sau này trở nên vô hiệu - Nếu bị nhiễm virus cường độc ở lứa tuổi 1 - 2 tuần tuổi, thì sự suy giảm miễn dịch sau này có thể nhẹ hơn Các cơ quan và tế bào có... 70% trở lên Tỷ lệ bảo hộ (%) = (Số mẫu đạt hiệu giá kháng thể bảo hộ/Số mẫu xét nghiệm) * 100 3.3.2.3.4 Tỷ lệ nhiễm Tỷ lệ nhiễm (tỷ lệ dương tính) = Số mẫu dương tính * 100 Số mẫu xét nghiệm 3.3.2.3.5 Tỷ lệ tiêm phòng Tỷ lệ tiêm = Số con được tiêm * 100 Số con tổng đàn 35 PHẦN 4 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 4.1 Tình hình đáp ứng miễn dịch chống lại bệnh Gumboro tại lò mổ Thủy Dương huyện Hương Thủy. .. thể tự bảo vệ mình bằng các cơ chế miễn dịch không đặc hiệu và miễn dịch đặc hiệu 2.7.1 Miễn dịch không đặc hiệu Có ba cơ chế chính của miễn dịch tự nhiên chống virus + Tăng sản xuất interferone (IFN) từ tế bào nhiễm chức năng quan trọng nhất của IFN là cảm ứng để tế bào sản sinh ra protein ngăn cản sự khởi đầu dịch mã và phá hủy ARN thông tin của virus do đó ức chế sự nhân lên của virus tại chỗ cũng... chống lại bệnh Gumboro tại lò mổ Thủy Dương huyện Hương Thủy Số đợt lấy mẫu tại lò mổ gia cầm Thủy Dương chia làm 3 đợt: đợt 1 vào tháng 1, đợt 2 vào tháng 2 và đợt 3 vào tháng 3 Xét nghiệm bằng IHA ta có kết quả ở bảng sau: Bảng 4.1 Phân bố hiệu giá kháng thể của gà ở các lò mổ Thủy Dương Địa điểm lấy mẫu Thủy Dươn g Mẫu Mẫu Số dương bảo Đợt mẫu tính hộ lấy xét Số Tỷ lệ nghiệm lượng (%) 1 41 40 97,56 2 ... bệnh Gumboro Việt Nam, bệnh tiếp tục xảy chưa khống chế cách triệt để mối đe dọa to lớn [4] 2.4 Giới thiệu chung virus gây bệnh Gumboro Virus gây bệnh Gumboro (Infectious bursal disease virus. .. bursal disease virus – IBDV), hay thường gọi virus Gumboro, virus thuộc chi Avibirnavirus, họ Birnaviridae, họ hệ thống phân loại virus động vật người [4] Virus có dạng hình khối, gồm 20 mặt đều,... nhân lên virus Gumboro Sau virus thụ thể có bề mặt màng tế bào tiếp nhận virus thực trình xâm nhập sâu Thụ thể tế bào thành phần cấu trúc màng tế bào biến đổi đặc hiệu để tiếp nhận virus Gumboro