TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA SƯ PHẠM BỘ MÔN SƯ PHẠM SINH HỌC THỰC HIỆN BỘ TIÊU BẢN CỐ ĐỊNH TẬP ĐOÀN VOLVOX LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP Chuyên ngành SƯ PHẠM SINH HỌC Cán hướng dẫn Sinh viên thực ThS PHẠM THỊ BÍCH THỦY SƠN THỊ MỸ NƯƠNG Lớp: Sư Phạm Sinh K35 MSSV: 3092225 NĂM 2013 Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35- 2013 Trường Đại học Cần Thơ CẢM TẠ Với vốn kiến thức hạn hẹp nên trình thực đề tài, gặp nhiều khó khăn Tuy nhiên, khó khăn khắc phục vượt qua với với giúp đỡ tận tình quý Thầy Cô bạn môn Sư phạm Sinh học giúp hoàn thành tốt đề tài luận văn Để đáp lại giúp đỡ đó, xin chân thành gửi lời cảm tạ đến: Cô Phạm Thủy Bích Thủy tận tình hướng dẫn cung cấp nhiều tài liệu giúp hoàn thành tốt đề tài Cô Phùng Thị Hằng tận tình giúp đỡ cho nhiều ý kiến giúp hoàn thành đề tài Cán phòng thí nghiệm thực vật giúp đỡ tạo điều kiện tốt cho suốt thời gian làm luận văn Quý Thầy Cô truyền đạt kiến thức quý báo cho suốt bốn năm học qua Anh Nguyễn Phú Cường tất bạn học khóa giúp đỡ động viên trình thực đề tài Bạn Trần Thị Ngọc Giàu, Phạm Thị Bích Ngọc giúp đỡ trình thu mẫu Cha Mẹ ủng hộ tinh thần lẫn vật chất giúp cho vượt qua khó khăn học tập sống Rất mong quý Thầy Cô, bạn bè Cha Mẹ nhận lời cảm tạ chân thành đầy thân Cần Thơ, ngày 29 tháng 04 năm 2013 Sinh viên thực Sơn Thị Mỹ Nương Chuyên ngành Sư phạm Sinh học i Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35- 2013 Trường Đại học Cần Thơ TÓM LƯỢC Trong thời gian từ tháng 10/2012 đến 05/2013, tiến hành thử nghiệm nghiệm thức trữ mẫu, nhuộm mẫu, khử nước,… phòng thí nghiệm thực vật môn Sinh học khoa Sư phạm trường Đại học Cần Thơ, tìm quy trình thực tiêu hiển vi cố định tập đoàn tảo lục Volvox, nhuộm mẫu với thuốc nhuộm Methyl Green (1 30 phút), rửa lại với nước cất (30 giây), khử nước qua nồng độ cồn, n- butanol (30 giây), làm mẫu với dung dịch xylen (30 giây), dán mẫu Baume canada pha xylen (1 : 1) Hoàn thành 30 tiêu hiển vi đạt yêu cầu hình thức nội dung, tiêu bắt màu tương đối đẹp, quan sát rõ cấu trúc tập đoàn Volvox: tập đoàn con, cầu nối nguyên sinh chất, đồng thời thực mẫu ngâm gồm lọ 50 ml tập đoàn Volvox formol 5% Chuyên ngành Sư phạm Sinh học ii Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35- 2013 Trường Đại học Cần Thơ MỤC LỤC CẢM TẠ i TÓM LƯỢC ii MỤC LỤC iii DANH SÁCH HÌNH vi CHƯƠNG I GIỚI THIỆU 1 Đặt vấn đề .1 Mục tiêu đề tài CHƯƠNG I LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU Đặc điểm chung ngành tảo lục 1.1 Tổ chức thể 1.2 Cấu tạo tế bào 1.3 Sinh sản 1.4 Phân loại 1.5 Volvox Kỹ thuật thực tiêu hiển vi cố định .7 2.1 Cố định mẫu .7 2.2 Nhuộm mẫu 2.3 Khử nước 2.4 Dán lamelle Tình hình nghiên cứu .9 CHƯƠNG III PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 11 Phương tiện 11 1.1 Mẫu vật 11 1.2 Thiết bị dụng cụ .11 1.2.1 Thiết bị 11 1.2.2 Dụng cụ 11 Chuyên ngành Sư phạm Sinh học iii Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35- 2013 Trường Đại học Cần Thơ 1.3 Vật tư hóa chất 12 1.3.1 Vật tư 12 1.3.2 Hóa chất 12 Phương pháp .13 2.1 Thu mẫu 13 2.2 Trữ mẫu 13 2.3 Nhuộm mẫu 14 2.4 Khử nước 15 2.5 Làm mẫu .16 2.6 Dán mẫu .17 2.7 Dán nhãn 18 CHƯƠNG IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 19 Thu mẫu trữ mẫu 19 Nhuộm mẫu 19 Khử nước 21 Làm mẫu 23 Dán mẫu .23 Quy trình tổng quát thực tiêu cố định 24 Tổng số tiêu thực 25 Một số hình ảnh từ tiêu hiển vi cố định 26 8.1 Hình ảnh từ nghiệm thức thử nghiệm .26 8.2 Hình ảnh thu từ qui trình thực tiêu 29 CHƯƠNG V KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 31 Kết luận 31 Đề nghị 31 TÀI LIỆU THAM KHẢO 32 Chuyên ngành Sư phạm Sinh học iv Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35- 2013 Trường Đại học Cần Thơ DANH SÁCH BẢNG Bảng 1: Nghiệm thức nhuộm mẫu với thuốc nhuộm Methyl Green Fast green 15 Bảng 2: Các nghiệm thức khử nước sau nhuộm mẫu 16 Bảng 3: Các nghiệm thức làm mẫu xylen 16 Bảng 5: Kết nghiệm thức nhuộm mẫu với thuốc nhuộm Methyl Green Fast Green .20 Bảng 6: Kết nghiệm thức khử nước mẫu nhuộm 22 Bảng 7: Kết nghiệm thức làm mẫu xylen 23 Bảng 8: Quy trình thực tiêu hiển vi cố định tập đoàn Volvox với thuốc nhuộm Methyl Green 24 Chuyên ngành Sư phạm Sinh học v Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35- 2013 Trường Đại học Cần Thơ DANH SÁCH HÌNH Hình 1: Cấu tạo Volvox Hình 2: Leodorina californica Hình 3: Một phần tập đoàn Volvox globator với tế bào sinh sản hữu tính Hình 4: Sinh sản vô tính hữu tính noãn giao Volvox Hình 5: Volvox năm 2013 vật kính 10X 11 Hình 6: Volvox năm 2004 vật kính 4X 11 Hình 7: Nơi thu mẫu Huyện Phong Điền – Thành Phố Cần Thơ 13 Hình 8: Cách đậy lamelle 17 Hình 9: Hình ảnh tiêu hiển vi cố định sau hoàn thành 18 Hình 10: Bộ mẫu ngâm Volvox 26 Hình 11: Volvox trữ năm 2004 nhuộm với Fast Green 26 Hình 12: Volvox thu năm 2013 nhuộm với Methyl Green thời gian 30 phút 26 Hình 13: Volvox năm 2004 nhuộm với Fast Green dễ bị vỡ tiến hành qui trình thực tiêu 27 Hình 14: Volvox năm 2013 nhuộm với Fast Green 27 Hình 15: Volvox bị đen khô xylen trước dán Baume Canada 27 Hình 16: Volvox năm 2004 nhuộm với Methyl Green thời gian phút 27 Hình 17: Volvox bắt màu nhạt với thuốc nhuộm Methyl Green thời gian 20 phút 28 Hình 18: Volvox bắt màu nhạt với thuốc nhuộm Methyl Green thời gian 60 phút……… 28 Hình 19: Volvox nhuộm với Methyl Green thời gian 20 phút màu sau tháng……28 Hình 20: Volvox nhuộm với Methyl Green thời 60 phút màu sau tháng .28 Hình 21: Volvox bị nhòe màu khử nước chưa 29 Hình 22: Volvox bị teo 29 Hình 23: Cấu tạo tập đoàn Volvox vật kính 10X 29 Hình 24: Cầu nối nguyên sinh chất vật kính 40X 29 Hình 25: Các tộc đoàn Volvox 30 Chuyên ngành Sư phạm Sinh học vi Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35- 2013 Trường Đại học Cần Thơ CHƯƠNG I GIỚI THIỆU Đặt vấn đề Tảo lục ngành tảo lớn biết Cơ thể tổ chức từ cấp độ đơn bào đến đa bào Phân bố rộng rãi khắp nơi có ánh sáng, chủ yếu nước số nước mặn, đất ẩm … Sinh sản hình thức vô tính hữu tính Đặc biệt tảo lục Volvox có lối sống tập đoàn, tập đoàn hình cầu có kích thước 0,5 - mm, phân bố hầu hết ao hồ Ngày nay, công nghiệp ngày phát triển, đất nông nghiệp thu hẹp, khả tìm thấy Volvox ngày Hơn nữa, tiêu cố định có nhiều ưu điểm giữ mẫu thời gian dài, quan sát tiện lợi không thời gian để thực tiêu nhiều lần Bên cạnh đó, nhu cầu sinh viên năm cuối cần trang bị số kiến thức kỹ thuật hiển vi, để trường biết cách chủ động chuẩn bị mẫu vật, phục vụ cho giảng lý thuyết thí nghiệm thực hành sinh học trường phổ thông Với ý nghĩ thúc chọn đề tài: “THỰC HIỆN BỘ TIÊU BẢN CỐ ĐỊNH TẬP ĐOÀN VOLVOX” Mục tiêu đề tài Với đề tài “Thực tiêu cố định tập đoàn Volvox” nhằm bổ sung cho phòng thí nghiệm thực vật lượng tiêu hiển vi cố định, phục vụ cho sinh viên học tốt học phần phân loại thực vật, thực vật học giảng dạy lý thuyết giáo viên Đề tài thực với mục tiêu sau: Thực mẫu ngâm Volvox khoảng lọ Tìm quy trình thực tiêu hiển vi cố định Volvox Hoàn thành 30 tiêu hiển vi cố định Chuyên ngành Sư phạm Sinh học Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35- 2013 Trường Đại học Cần Thơ CHƯƠNG II LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU Đặc điểm chung ngành tảo lục Ngành tảo lục ngành tảo lớn nhất, đa dạng tất ngành tảo biết Cho đến người ta tìm thấy ngành có khoảng 8000 loài, phần lớn sống nước ngọt, nước mặn chủ yếu chi sau: Enteromorpha, Ulva, Ulothrix, Cladophora, Valonia, Boergessenia, Caulerpa, Bryopsis, Codium…Sự khác biệt tảo lục với tảo khác chỗ thể luôn có màu xanh lục chất dự trữ tinh bột (bắt màu với iod) (Đặng Minh Quân, 2011) 1.1 Tổ chức thể Tản có thể đơn bào, tập đoàn hay đa bào hình sợi đơn, phân nhánh hình mỏng, có có cấu tạo cộng bào (tản hình ống thông, chứa nhiều nhân) (Hoàng Thị Sản, 1999) 1.2 Cấu tạo tế bào Vách tế bào thường celluloz, pectin hóa nhầy, số dạng nguyên thủy tế bào trần (màng màng nguyên sinh chất), lạp có nhiều hình dạng khác nhau: hình chuông, hình phiến, hình hạt, hình nhiều cạnh, đai vành móng ngựa (hình nhẫn), xoắn lò xo, mắt lưới…, sắc tố (pygment) chủ yếu diệp lục tố a, diệp lục tố b, carotene, xanthophin (với 10 loại chất khác nhau), diệp lục tố a,b chiếm ưu so với sắc tố phụ trội khác nên tản có màu xanh lục Chất dự trữ tinh bột quanh hạch lạp nằm lục lạp, chất dự trữ giọt dầu (giọt lipit) Tế bào tảo lục chứa hay nhiều nhân, nhân thường nằm khoang túi dịch bào, hay sát bên thành lớp nguyên sinh Một số tảo lục đơn bào tộc đoàn di động trạng thái dinh dưỡng nhờ có roi, tảo lục khác có bào tử hay giao tử có roi di động (Đặng Minh Quân, 2011) Chuyên ngành Sư phạm Sinh học Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35- 2013 Trường Đại học Cần Thơ 1.3 Sinh sản Tảo lục sinh sản sinh dưỡng phân đôi tế bào (đơn bào) khúc tản (dạng sợi), sinh sản vô tính động bào tử, hình thành túi bào tử Động bào tử có cấu tạo giống với trùng roi: hình lê, có roi, mắt không bào co rút Khi rời khỏi túi bào tử, động bào tử bơi lội thời gian nước, sau định cư lại, roi, tự tạo lấy màng nảy mầm thành thể (Lương Ngọc Toản Võ Văn Chi, 1978) Sinh sản hữu tính ba hình thức: đẳng giao, dị giao noãn giao, số sinh sản theo kiểu tiếp hợp hai tế bào sinh dưỡng Hợp tử hình thành thường tiết màng bọc, sau thời gian nghỉ, nảy mầm phân chia giảm nhiễm cho tản (Hoàng Thị Sản, 1999) Tảo lục có quan hệ với tảo mắt động bào tử chất màu chúng giống (Hoàng Thị Sản, 1999) 1.4 Phân loại Ngành tảo lục chia làm lớp (Phạm Hoàng Hộ, 1972) - Lớp tảo lục (Chlorophyceae) - Lớp tảo tiếp hợp (Zygophyceae) - Lớp tảo vòng (Charophyceae) Trong đó, lớp tảo lục (Chlorophyceae) lớp quan trọng ngành tảo lục, phân bố rộng (Phạm Hoàng Hộ, 1972) * Đặc điểm chung lớp tảo lục Tản sống đơn bào, sống đơn độc hay tộc đoàn; hình sợi (chia nhánh không), hình phiến mỏng (Đặng Minh Quân, 2011) Lạp thường có hình chuông tản đơn bào (ở Chlamydomonas, Chlorella) hay hình (ở Asterococus) với hạch lạp tế bào nhiều nhánh ngoại biên; lạp hình phiến quấn tròn, hình nhẫn (ở Ulva); hình sợi tiếp giao (ở Oedonium) Mỗi lạp có hạch lạp lạp Lạp lục lạp, có cấu chi noãn thực vật (Đặng Minh Quân, 2011) Nhân: tế bào có nhiều nhân (Đặng Minh Quân, 2011) Chuyên ngành Sư phạm Sinh học Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35- 2013 Trường Đại học Cần Thơ Bảng 5: Kết nghiệm thức nhuộm mẫu với thuốc nhuộm Methyl Green Fast Green Thuốc nhuộm Thời gian Kết Độ bền màu sau tháng phút Mẫu không bắt màu với thuốc nhuộm 10 phút Methyl 20 phút Mẫu bắt màu nhạt với thuốc nhuộm 30 phút Mẫu bắt màu nhạt với thuốc nhuộm Green Mẫu bắt màu nhạt với thuốc nhuộm, khó 60 phút 30 Fast Mẫu màu dần quan sát tộc đoàn Mẫu bắt màu tốt với thuốc nhuộm, Độ bền màu chưa có phút tộc đoàn rõ thay đổi Mẫu không bắt màu với thuốc nhuộm Green 12 Mẫu bắt màu nhạt với thuốc nhuộm, khó quan sát tộc đoàn Không có thay đổi màu sắc Mẫu bắt màu tốt với thuốc nhuộm, tộc đoàn rõ Kết bảng cho thấy Volvox bắt màu tốt với thuốc nhuộm Methyl Green, với thời gian nhuộm ngắn (1 30 phút) sau hai tháng theo dõi mẫu giữ màu tốt với thuốc nhuộm Tập đoàn Volvox bắt màu tốt với phẩm nhuộm Fast Green không thay đổi màu sau hai tháng theo dõi Tuy nhiên thời gian để mẫu bắt màu thuốc nhuộm dài (12 giờ), điều gây khó khăn trình nhuộm mẫu Vì thực nhuộm mẫu lame, giọt thuốc nhuộm bị khô sau khoảng hai giờ, mặt khác, thực ngâm mẫu dung dịch thuốc nhuộm (trong chai) mẫu bắt màu với thuốc nhuộm đồng thời bụi bẩn tảo khác bắt màu với dung dịch thuốc nhuộm (do tảo thu tự nhiên nên mật độ Volvox thấp, bụi Chuyên ngành Sư phạm Sinh học 20 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35- 2013 Trường Đại học Cần Thơ bẩn nhiều) tiến hành bắt mẫu kính lúp khó phân biệt Volvox bụi bẩn) Vậy để sử dụng thuốc nhuộm Fast Green, phải có mẫu tiến hành dễ dàng, thực tế mẫu tảo thu tự nhiên lẫn nhiều loại tảo khác tạp chất, tiến hành nuôi môi trường lại không thích hợp nên khó thực Khử nước Qua kết nghiệm thức khử nước cho thấy: dãy hóa chất thời gian khử nước 30 giây thích hợp Vì giai đoạn mẫu nước không bị teo quan sát rõ tế bào, cầu nối nguyên sinh chất, tộc đoàn con, Chuyên ngành Sư phạm Sinh học 21 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35- 2013 Trường Đại học Cần Thơ Bảng 6: Kết nghiệm thức khử nước mẫu nhuộm Thời gian STT Dãy hóa chất Kết (giây) Cồn100 cồn 50 cồn 20 0 cồn 60 cồn 900 cồn 300 cồn 70 cồn TĐ cồn 400 10 Mẫu khử chưa 20 nước 30 Mẫu nước 10 Mẫu chưa 20 nước cồn 80 cồn TĐ n- butanol 100% n- butanol 100% Mẫu nước mẫu bị Cồn 300 cồn 50 cồn TĐ cồn 700 cồn 900 nhòe màu nên 30 n- butanol 100% khó phân biệt tộc đoàn tế bào chất 10 Cồn 500 cồn 60 cồn 900 100 cồn 700 cồn 80 nước, mẫu bị teo n- butanol 100% n- butanol 100% Chuyên ngành Sư phạm Sinh học bị nhòe màu không 20 cồn TĐ Mẫu 30 22 Mẫu bị teo vào cồn 500 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35- 2013 Trường Đại học Cần Thơ Làm mẫu Bảng 7: Kết nghiệm thức làm mẫu xylen Thời gian Hóa chất Kết (Giây) 10 Mẫu bị đen 20 Mẫu chưa sạch, không quan sát rõ cấu trúc tảo Xylen 100% 30 Mẫu không bị co, nước hơn, quan sát rõ cấu trúc Volvox Xylen 100% 40 50 Mẫu bị co Kết bảng cho thấy, nghiệm thức làm mẫu xylen 30 giây thích hợp nhất, với khoảng thời gian tiêu nước, quan sát rõ cấu trúc tập đoàn Volvox Qua trình thực tiêu nhận thấy, mẫu trữ phòng thí nghiệm thực vật năm 2004 to đẹp quan sát tiêu hiển vi tạm thời, mẫu ngâm thời gian lâu nên cấu trúc dễ bị hủy, mẫu bị mềm, dễ rã Vì tiêu hiển vi thực thường bị vỡ teo Mặt khác, mẫu thu tự nhiên có kích thước nhỏ hơn, lại có nhiều ưu điểm thuận lợi cho việc thực tiêu như: quan sát rõ liên kết tế bào thông qua cầu nối nguyên sinh chất, tập đoàn con, Vì vậy, chọn mẫu vật thu tự nhiên để thực tiêu cố định Dán mẫu Sau tiến hành thí nghiệm với hai cách dán mẫu cách cách Chúng thấy cách dán mẫu dễ thực hơn, mẫu dán bọt khí, mẫu không bị móp méo Cách khó thực Baume canada pha xylen với tỉ lệ : nhỏ vào lamelle Baume chảy xuống trước tiếp xúc với Baume lame, Chuyên ngành Sư phạm Sinh học 23 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35- 2013 Trường Đại học Cần Thơ pha với tỉ lệ 1:1 Baume đặc làm cho hình dạng tập đoàn Volvox bị biến dạng Quy trình tổng quát thực tiêu cố định Qua kết thí nghiệm từ nghiệm thức thực hiện, quy trình thực tiêu hiển vi cố định tập đoàn Volvox tóm tắt bảng 8: Bảng 8: Quy trình thực tiêu hiển vi cố định tập đoàn Volvox với thuốc nhuộm Methyl Green Giai đoạn Thời Thao tác Hóa chất giai đoạn Ghi gian - Dùng lưới phiêu sinh kéo nhiều lần I Thu mẫu để thu mật độ tảo nhiều nhất, sau cho vào lọ có nắp đậy - II Trữ mẫu Ngâm - Formol 5% formol 5% - Trên tháng - Mẫu bắt kính lúp - 10 phút III Chuyển mẫu ống hút, sau dàn lên lame lên lame chuẩn bị sẵn Để khô tự nhiên IV Nhuộm mẫu - Nhỏ thuốc nhuộm - Methyl Green - 30 lên mẫu phút dàn khô tự nhiên lame - Rửa nước V Khử nước - Nước cất - Cho mẫu nhuộm Cồn 100 - 30 giây 30 giây qua lọ cồn, n- Chuyên ngành Sư phạm Sinh học 24 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35- 2013 butanol Trường Đại học Cần Thơ Cồn 200 Cồn 300 Cồn 400 Cồn 500 Cồn 600 Cồn 700 Cồn 800 Cồn 900 Cồn TĐ Cồn TĐ n- butanol 100% n- butanol 100% Làm VI Trong mẫu xylen Không để mẫu Xylen 100% Xylen 100% 30 giây mẫu khô xylen VII Dán mẫu Dán mẫu Baume canada Baume canada : Tránh bọt Xylen (1 : 2) khí Tổng số tiêu thực Dựa vào qui trình thực 30 tiêu cố định quan sát rõ cấu trúc mẫu vật cầu nối nguyên sinh chất, lục lạp Khi so sánh tiêu thực với tiêu sinh viên khóa trước cụ thể Nguyễn Thị Thanh Tú (2001), thực tiêu cố định tập đoàn tảo lục Volvox dung dịch Đồng- lactophenol Nguyễn Lê Anh Thư (2005), Thực tiêu hiển vi cố định số giống thuộc hai ngành tảo lam (Cyanophyta) tảo lục (Chlorophyta) nước có điểm bật hơn: quan sát rõ cầu nối nguyên sinh chất, hình dạng lục lạp Tuy nhiên, mẫu có kích thước nhỏ nên khó quan sát nhân Chuyên ngành Sư phạm Sinh học 25 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35- 2013 Trường Đại học Cần Thơ Ngoài ra, đề tài thực mẫu ngâm gồm lọ Volvox trữ formol 5% Hình 10: Bộ mẫu ngâm Volvox Một số hình ảnh từ tiêu hiển vi cố định 8.1 Hình ảnh từ nghiệm thức thử nghiệm Hình 11: Volvox trữ năm 2004 nhuộm với Fast Green Chuyên ngành Sư phạm Sinh học Hình 12: Volvox thu năm 2013 nhuộm với Methyl Green thời gian 30 phút 26 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35- 2013 Hình 13: Volvox năm 2004 nhuộm với Fast Green dễ bị vỡ tiến hành qui trình thực tiêu Trường Đại học Cần Thơ Hình 14: Volvox năm 2013 nhuộm với Fast Green Hình 15: Volvox năm 2004 bị đen khô xylen trước dán Baume canada Chuyên ngành Sư phạm Sinh học Hình 16: Volvox năm 2004 nhuộm với Methyl Green thời gian phút 27 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35- 2013 Trường Đại học Cần Thơ Hình 17: Volvox bắt màu nhạt với thuốc nhuộm Methyl Green thời gian 20 phút Hình 18: Volvox bắt màu nhạt với thuốc nhuộm Methyl Green thời gian 60 phút Hình 19: Volvox nhuộm với Methyl Green thời gian 20 phút màu sau tháng Chuyên ngành Sư phạm Sinh học Hình 20: Volvox nhuộm với Methyl Green thời 60 phút màu sau tháng 28 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35- 2013 Trường Đại học Cần Thơ Hình 21: Volvox bị nhòe màu khử nước chưa Hình 22: Volvox bị teo 8.2 Hình ảnh thu từ qui trình thực tiêu Tế bào sinh dưỡng Tộc đoàn Tộc đoàn mẹ Hình 23: Cấu tạo tập đoàn Volvox vật kính 10X Cầu nối nguyên sinh chất Hình 24: Cầu nối nguyên sinh chất vật kính 40X Chuyên ngành Sư phạm Sinh học 29 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35- 2013 Trường Đại học Cần Thơ 1 1 1 Hình 25: Các tộc đoàn Volvox (1) Tộc đoàn Chuyên ngành Sư phạm Sinh học 30 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35- 2013 Trường Đại học Cần Thơ CHƯƠNG V KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận Tập đoàn Volvox trữ phòng thí nghiệm thực vật năm 2004 sử dụng làm tiêu hiển vi cố định dễ bị vỡ teo Tìm quy trình thực tiêu hiển vi cố định tập đoàn Volvox Kết thực 30 tiêu bắt màu tương đối rõ đẹp với phẩm nhuộm Methyl Green, quan sát lục lạp, cầu nối nguyên sinh chất tộc đoàn con, Thực mẫu ngâm gồm lọ 30ml Đề nghị Tìm phương pháp nhuộm thích hợp để quan sát roi, nhân tế bào tập đoàn Nghiên cứu tìm môi trường thích hợp nuôi tảo lục Volvox nhằm tạo mẫu thuần, thuận lợi cho việc thực tiêu Tiếp tục theo dõi độ bền màu tiêu Chuyên ngành Sư phạm Sinh học 31 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35- 2013 Trường Đại học Cần Thơ TÀI LIỆU THAM KHẢO Đặng Minh Quân 2011 Bài giảng phân loại học thực vật Tập I Thực vật bậc thấp Trường Đại học Cần Thơ Đặng Ngọc Thanh, Trương Quang Học ctv 2001 Hướng dẫn thực tập động vật không xương sống Nhà xuất Đại học Quốc gia Hà Nội Đặng Ngọc Thanh 1980 Thực tập động vật không xương sống Nhà xuất Đại học trung học chuyên nghiệp Dương Đức Tiến Võ Hành 1997 Tảo nước Việt Nam phân loại tảo lục (Chlorococcales) Nhà xuất nông nghiệp Hà Nội Hoàng Thị Sản 1999 Phân loại thực vật Nhà xuất giáo dục Lam Mỹ Lan 2000 Bài giảng thực vật thủy sinh Nhà xuất Đại học Cần Thơ Lương Ngọc Toản, Võ Văn Chi ctv 1978 Phân loại thực vật tập I Nhà xuất giáo dục Lương Ngọc Toản 1977 Phân loại học thực vật Nhà xuất giáo dục Nguyễn Lê Anh Thư 2005 Thực tiêu hiển vi cố định số giống thuộc ngành tảo lam (Cyanophyta) tảo lục (Chlorophyta) nước Luận văn tốt nghiệp Nguyễn Thị Thanh Tú 2001 Thực tiêu phương pháp dán vài đại diện trùng roi (Lớp phụ: Phytomastigina) trùng tiêm mao (Lớp phụ: Ciliata) Luận văn tốt nghiệp Phạm Hoàng Hộ 1967 Tảo học Nhà xuất giáo dục Phạm Hoàng Hộ 1972 Tảo học Trung tâm học liệu giáo dục Thái Trần Bái Nguyễn Văn Khang 2009 Động vật học không xương sống Nhà xuất Đại học Sư phạm Trần Công Khánh 1980 Kĩ thuật hiển vi Nhà xuất y học http://medbiol.ru/medbiol/dog/00127ae8.htm http://rainer-weiher.de/bio/gruenalgen.htm http://www.biocyclopedia.com/index/general_zoology/representative_types.php http://www.jochemnet.de/fiu/bot4404/BOT4404_28.html Chuyên ngành Sư phạm Sinh học 32 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35- 2013 Trường Đại học Cần Thơ PHỤ LỤC BAUME CANADA Tùy theo độ đặc bôm mà chọn mà chọn tỷ lệ bôm xylen cho thích hợp: 1Baume Canada: Xylen Baume Canada : Xylen (Trần Công Khánh, 1980) a Chuẩn bị - Baume Canada - Xylen b Cách tiến hành Chọn hai tỉ lệ thích hợp, sau để hủ Baume Canada vừa pha vào tủ sấy cho Baume Canada tan hết, dùng phễu thủy tinh có giấy lọc để lọc Baume Canada tủ sấy GLIXERIN- LÒNG TRẮNG TRỨNG a Chuẩn bị: - trứng gà ta - Glycerin b Tiến hành: Lấy thể tích lòng trắng trứng gà (trứng tươi) trộn với thể tích glixerin theo tỷ lệ 1:1 Cho thêm tinh thể thymol phenol fomol để bảo quản Trộn lọc Bảo quản lọ kín (Trần Công Khánh, 1980) Chuyên ngành Sư phạm Sinh học I Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35- 2013 Trường Đại học Cần Thơ CÁCH PHA CỒN Nồng độ cồn cần pha Cồn gốc 9605 (ml) Lượng nước (ml) 100 7,5 67,5 200 15 60 300 22,5 52,5 400 30 45 500 37,5 37,5 600 45 30 700 52,5 22,5 800 60 15 900 67,5 7,5 1000 75 75ml Thuốc nhuộm: METHYL GREEN a Chuẩn bị: - gram thuốc nhuộm methyl green, 40 ml nước cất b Tiến hành: Cho gram thuốc nhuộm vào lọ, đổ nước cất vào từ từ, dùng đũa thủy tinh khấy cho tan hết thuốc nhuộm sau tiến hành lọc để thu lấy dung dịch thuốc nhuộm Thuốc nhuộm: FAST GREEN a Chuẩn bị - 0,5 gram thuốc nhuộm Fast Green, 30 ml nước cất b Tiến hành Cho 0,5 gram thuốc nhuộm vào lọ, đổ nước cất vào từ từ, dùng đũa thủy tinh khấy cho tan hết thuốc nhuộm sau tiến hành lọc để thu lấy dung dịch thuốc nhuộm Chuyên ngành Sư phạm Sinh học II Bộ môn Sư phạm Sinh học [...]... pha với tỉ lệ 1:1 thì Baume quá đặc làm cho hình dạng tập đoàn Volvox bị biến dạng 6 Quy trình tổng quát thực hiện tiêu bản cố định Qua kết quả thí nghiệm từ các nghiệm thức đã thực hiện, quy trình thực hiện tiêu bản hiển vi cố định tập đoàn Volvox được tóm tắt trong bảng 8: Bảng 8: Quy trình thực hiện tiêu bản hiển vi cố định tập đoàn Volvox với thuốc nhuộm Methyl Green Giai đoạn Thời Thao tác trong... đã thực hiện Dựa vào qui trình trên đã thực hiện được 30 tiêu bản cố định quan sát rõ được các cấu trúc của mẫu vật như cầu nối nguyên sinh chất, lục lạp Khi so sánh tiêu bản thực hiện được với tiêu bản của các sinh viên khóa trước cụ thể là Nguyễn Thị Thanh Tú (2001), thực hiện tiêu bản cố định tập đoàn tảo lục Volvox bằng dung dịch Đồng- lactophenol và Nguyễn Lê Anh Thư (2005), Thực hiện tiêu bản. .. nguyên tắc khi cố định mẫu vật: - Mẫu vật cố định phải thật tươi, làm ngay sau khi cắt khỏi cây (thực vật bậc cao) hoặc tách khỏi nơi sống của nó (thực vật bậc thấp như tảo, nấm… ) - Dung dịch cố định cần đúng nồng độ và thể tích (thể tích dung dịch cố định gấp 50- 100 lần thể tích vật cố định) - Dùng dung dịch formol 4 - 5% để làm chất cố định hoặc ngâm các nguyên liệu thực vật Thời gian cố định thay đổi... tả từng bước để thực hiện được một tiêu bản hiển vi cố định Từ đó, đề tài tiêu bản hiển vi cố định đã thu hút người người nghiên cứu thực hiện trên nhiều đối tượng khác nhau Ở trường Đại học Cần Thơ, có một số đề tài luận văn tốt nghiệp đại học tiến hành trên đối tượng tảo như năm 2001, Nguyễn Thị Thanh Tú thực hiện luận văn tốt nghiệp với đề tài Thực hiện tiêu bản phương pháp dán vài đại diện trùng... mềm, dễ rã Vì thế những tiêu bản hiển vi thực hiện được thường bị vỡ và teo Mặt khác, mẫu thu ngoài tự nhiên có kích thước nhỏ hơn, nhưng lại có rất nhiều ưu điểm thuận lợi cho việc thực hiện tiêu bản như: quan sát rõ sự liên kết giữa các tế bào thông qua các cầu nối nguyên sinh chất, tập đoàn con, Vì vậy, chúng tôi chọn mẫu vật thu ngoài tự nhiên để thực hiện tiêu bản cố định 5 Dán mẫu Sau khi tiến... gian thực hiện tiêu bản để quan sát lại nếu cần Vì thế, một số tác giả đã đưa ra phương pháp thực hiện tiêu bản hiển vi cố định hay còn gọi là tiêu bản hiển vi “vĩnh viễn”, trong đó có Trần Công Khánh, năm 1980, đã viết “Kỹ thuật hiển vi”, quyển sách đã mô Chuyên ngành Sư phạm Sinh học 9 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35- 2013 Trường Đại học Cần Thơ tả từng bước để thực hiện. .. các cấu trúc của Volvox Xylen 100% 40 50 Mẫu bị co Kết quả bảng 7 cho thấy, nghiệm thức làm trong mẫu bằng xylen ở 30 giây là thích hợp nhất, vì với khoảng thời gian này tiêu bản sạch nước, trong hơn và quan sát rõ cấu trúc của tập đoàn Volvox Qua quá trình thực hiện tiêu bản chúng tôi nhận thấy, mẫu trữ của phòng thí nghiệm thực vật năm 2004 mặc dù rất to và đẹp khi quan sát tiêu bản hiển vi tạm thời,... mặt tích cực và tiêu cực của tảo đối với môi trường sống Kính hiển vi là một thiết bị dùng để quan sát các vật thể có kích thước nhỏ bé mà mắt thường không thể quan sát được bằng cách tạo ra các hình ảnh phóng đại của vật thể đó Muốn qua sát được dưới kính hiển vi chúng ta phải thực hiện tiêu bản hiển vi Với tiêu bản hiển vi tạm thời, dễ thực hiện, quan sát ngay sau khi thực hiện tiêu bản, tuy nhiên... và các động vật khác ở nước có thể hô hấp được (Lương Ngọc Toản, 1977) 2 Kỹ thuật thực hiện tiêu bản hiển vi cố định 2.1 Cố định mẫu Cố định là giữ nguyên cấu trúc của mô cũng như của tế bào bằng cách giết chết tức khắc đối tượng thực vật đang sống Qua đó mà hình thái cấu tạo của nó ít Chuyên ngành Sư phạm Sinh học 7 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35- 2013 Trường Đại học Cần... Khóa 35- 2013 Trường Đại học Cần Thơ Hình 21: Volvox bị nhòe màu do khử nước chưa sạch Hình 22: Volvox bị teo 8.2 Hình ảnh thu được từ qui trình thực hiện tiêu bản Tế bào sinh dưỡng Tộc đoàn con Tộc đoàn mẹ Hình 23: Cấu tạo tập đoàn Volvox ở vật kính 10X Cầu nối nguyên sinh chất Hình 24: Cầu nối nguyên sinh chất ở vật kính 40X Chuyên ngành Sư phạm Sinh học 29 Bộ môn Sư phạm Sinh học