B ộ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI % % 'ỉ' % 'í' % ijí ífí iỊí ijí iịí >Ị í ĩ Ịc HỒNG NGỌC MAI GĨP PHẦN NGHIÊN cứu ALCALOID CỦA CÂY BỎNG Nổ Flueggea vỉrosa (Roxb ex Willd.) Voigt , Euphorbỉceae KHỐ LUẬN TỐT NGHIỆP Được sĩ ¡010 Á 1997 - 2002 Người hướng dẫn: GS - TS Phạm Thanh Kỳ Th.s Đỗ Qun Người thực Sinh viên Hồng Ngọc Mai Thời gian thực Từ 10/01/2001 đến 10/05, Hà Nội, Tháng năm 2002 LỜI CẢM ƠN Nhân dịp bảo vệ khố luận tốt nghiệp, em xin bày tỏ kính trọng lòng biết ơn sâu sắc giúp đỡ nhiệt tình,.sự quan tâm bảo ân cần thầy hướng dẫn GS TS Phạm Thanh Kỳ Th.s Đỗ Qun Bên cạnh em xin bày tỏ tình cảm trân trọng thây Bộ mơn đặc biệt Bộ mơn Dược liệu giúp đỡ, dạy bảo em suốt năm học; quan tâm chăm sóc tạo điều kiện gia đình động viên, hỗ trợ bè bạn tronci suốt thời gian qua MỤC LỤC * * Trang ĐẶT VẤN ĐỂ TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Đặc điểm thực vật Thành phần hố học 1.3 Tác dụng sử dụntí; NGUNUỆU VÀPHƯƠNGPHÁP NGHIÊN cú u II 2.1 Ngun liệu 11 2 Phương pháp nghiên cứu 11 THỰC NGHIỆM & KẾT QUẢ NGHIÊNCỨU /2 3.1 Định lượng alcaloid 12 3.1.1 Ngun tắc 12 3.1 Hàm lượng alcaloid Bỏng nổ 13 3.1.3 Hàm lượng alcaloid thân Bỏng nổ 75 3.1.4 Hàm lượng alcaloid rễ Bỏng nổ 17 3.1.5 Sự biến động hàm lượng alcaloid lá, 19 thân rễ Bỏng nổ Định tính alcaloid sắc kí lớp mỏng 21 3.3 Chiết xuất alcaloid tồn phần thân 23 Bỏng nổ 3.4 Phân lập alcaloid thân Bỏng nổ 26 3.5 Nhận dạng alcaloid phân lập 27 KẾT LUẬN VÀ ĐỂ NGHỊ 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO 33 PHỤ LỤC 34 ĐẶT VẤN ĐỂ Bỏng Nổ FIĩieggea Virosa (Roxb ex Willd.) Voigĩ, họ Thầu Dầu Euphorbỉaceae thuốc sử dụng theo kinh nghiệm dân gian nước ta nhiều nước giới Theo số kết nghiên cứu nước ngồi nước, Bỏng nổ có nhiều tiềm việc điều trị bệnh có liên quan đến thần kinh trung ương có khả giải độc nhóm thuốc tác dụng lên thần kinh trung ương nhóm thuốc barbituric Tác dụng thành phần alcaloid có Bỏng nổ Việt Nam, đề tài nghiên cứu Bỏng nổ thực hướng dẫn GS TS Phạm Thanh Kỳ Trong khn khổ thực đề tài khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học, chúng tơi thực phần mục tiêu nghiên cứu đề tài Chúng tơi tiến hành nghiên cứu (i) Hàm lượng alcaloid phận khác Bỏng nỗ (ii) Đánh giá biến động hàm lượng alcaloid theo tháng năm tìm mối liên hệ liên quan đến hàm lượng alcaloid phận khác cây, mùa năm q trình sinh trưởng Bỏng nổ (iii) Chiết, tách phân lập alcaloiđ thân Bỏng nổ (iv) Nhận dạng chất phân lập xây dựng cấu trúc chúng CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU KẾT QUẢ NGHIÊN cứu THEO TÀI LIỆU NƯỚC NGỒI 1.1 Đặc điểm thực vật chi Flueggea Willd - Euphorbiaceae Đặc điểm thực vật chi Flueggea Willd Cây bụi hay gỗ nhỏ, đơn tính khác gốc; phần lớn rụng lá; mọc so le (mọc vòng hay hai hàng lá), cuống ngắn, có kèm, gân hình lơng chim, mép ngun Hoa nách lá, đơn độc hay mọc thành bó Lá bắc khơng rõ Hoa đực: cuống mảnh dài, khơng có đốt; đài 4-7, lợp, thường mỏng vảy; đĩa nhị 4-7, mảnh, đơi dính lại; nhị 4-7, nhị rời, bao phấn lộ ngồi, mở dọc; hạt phấn gần hình cầu, lỗ rãnh; nhụy lép khơng phát triển hay tiêu giảm hồn tồn, thường có 2-3 nhánh Hoa cái: cuống tròn hay có cạnh, khơng đốt; đài 4-7, lợp, mép ngun có nhỏ; bầu có (hiếm 4), có nỗn nghiêng, nhẵn, vòi nhụy rời, chẻ đơi Quả nang tự mở thành mảnh Mỗi chứa hạt Chi Flueggea Willd gồm 13 lồi, hầu hết phân bố nơi có khí hậu nhiệt đới gió mùa đai đất thấp thuộc vùng nhiệt đới cổ, có lồi phân bố vùng nhiệt đới Ở Việt Nam, theo nghiên cứu tiến sĩ thực vật học Nguyễn Nghĩa Thìn, chi Flueggea Willd có ba lồi F virosa ( Roxb ex Willd ) Voigt, Flueggea spirei Bei lie Flueggea juUienii (Beille) Webster, lồi Flueggea virosa phân bố rộng rãi, lồi Flueggea ịìienii gặp vài điểm phía Nam Việt Nam Lào Bỏng nổ Flueggea virosa ( Roxb ex Willd ) Voigt bụi nhỏ, cao 1-4 m, thường xanh, nhiều rụng rõ rệt nơi có mùa khơ kéo dài khắc nghiệt Cây phân cành nhiều, nhiều cành bên phần thân thường ngắn có phần tận biến thành gai; nhiều cành phần thường trơn Cây đơn tính khác gốc v ỏ nhẵn màu nâu sáng đến màu gỉ L mọc so le, nhẵn, hình van, có kích thước thay đổi Phiến dài 3,5-8.5 rộng 2,0 - 4,0 cm, mặl xanh đậm, mặt xanh nhại, hệ gân phụ rõ ràng mặl dưới, nhọn, cuống dài 4-9 mm Hoa đực hoa hai khác nhau; hoa nhỏ, màu vàng nhạt, dài khoảng 0,1-0,2 cm, có cuống nhỏ, mùi Ihơm, mọc Ihànlì bó nách Hoa lì hoa đực Hoa nở vào tháng - 10 Q uả mọng tròn, nạc, đường kính 0,5 - 0,8 cm, chín có màu trắng, chứa 3-4 hạt nhỏ, lất quyến rũ chim động vật Mùa tháng - 12 Trên giới, Bỏng nổ Flueggea virosa ( Roxb ex Willd ) Voigi lồi có phân bố rộng rãi nhấl số 13 lồi chi Flueggea Willd., gặp khắp vùng cổ nhiệt đới, lừ Tây Phi tới nhiệt đới Cliâu Á Châu úc Cây thường mọc rừng bụi dây leo vùng biển có giỏ mùa, mọc đụn cát bổi ổn định hoăc sườn đá ong liên bãi biển; rừng bui dây leo khơ đất sa thạch đá lộ Ihiên rừng thưa; bờ thấp sơng cạnh rừng thưa đất pha cát Việt Nam, đưực gặp khắp tỉnh từ Lạng Sơn đến Kiên Giang, Minh Hải số đáo Cơn Đảo Lồi thường mọc thành đám mảnh đất bỏ hoang sau canh tác trảng bụi xen cỏ thứ sinh, ven đường bãi bồi ven suối vùng đồi núi có độ cao vượt q 500 m so với mặt biển 1.2 Thành phẩn hóa học Theo V Snieckus [7] tổng kết nhổm alcaloid Securinega gồm 16 alcaloid, chủ yếu phân lập từ chi Securinega, Flueggea Phyllanlhus Securinin Norsecurinin hai alcaloid Irontì nhổm alcaloid 1.2.1 Nhóm alcaloỉd kiêu Securinin o Securinin lần phân lập lừ lồi Sehirineqa suffructicosci Rehder nhóm nghiên cứu người Nga vào năm 1956 cấu trúc nỏ xác định vào năm 1962 Các alcaloiđ thuộc kiểu Securinin gồm : 2R, 7S, 9S - Securinin Cơng thức phân tử : C UH 15N Khối lượng phân lử : 217,1103 Nhiệt độ nóng chảy : 141 -142 °c UV: có Xinflx256,4 nm XIliax 325,3 nin (MeOH) Nguồn gốc : Securinega spp., Phyĩlanthus discoides Schumacher o Securỉno] A Cơng thức phân lử : C ,,H 17N O , Khối lượng phân tử : 235,1208 Nhiệl độ nóng chảy : 135-136 °c UV: \,»x 214,4 nm (EtOH) Nguồn gốc : Securinega suffructicosa Rtder 2.2.2 Nhóm alcnloid kiểu Norsccurinin o Nhóm alcaloid kiểu Securinin thường bền vững nhổm alcaloid kiểu Norsecurinin dễ bị polymc hóa, tổn lại (Vdạng tự khoảng thời gian ngăn, luy nhiên nhổm alcaloid bền vữnu dang muối hydrochloric! Norsecurinin phân lập lần hởi Iketubosin Mathiesen từ lồi Securinega virosa tìaill mọc Nigeria Norsecurinin có cấu trúc tương tự Securinin chi' khác vòng A nhóm CH2 Nhóm alcaloid kiểu Norsecurinin gồm alcaloid sau : Norsecurinin o Cổng thức phân tử : C 12H u N Khối lượng phân tử : 203,0946 Nhiệt độ nóng chảy : 36-37 °c ƯV: có À.1Ilax 255,5 nm (ElOH) Nguồn gốc : Semrinega virosa Baiìì o D ỉliydronorsecurỉnỉn, V ỉrosine Cổng Ihức phân tử : C ,2H ,5N Khối lượng phân tử : 205,1103 Nhiệt độ nóng chảy : 134-135 °c UV: có Àmilx 214,4 nin ElOH Nguồn gốc : Sentrinega virosư tìaiìl 4-Methoxynorsecurỉnin Cồng thức phân tử : C ,,H I5NOj Khối lượng phân lử : 233,1052 UV: có Ằmax 256 nm (MeOH) Nguồn gốc : PỉiylìaiUhus Iiiniri Muì Mặt khác, Bỏng nổ có Tallin chiếm 4,8-7,6 % Acid hữu 10,4% Rutin xuất ỏ’ 1111 Hàm lượng alcaloid thay đổi Iheo mùa theo tài liệu 1111thì Bỏng nổ vùng Tashkent (Liên xơ cũ) có hàm lượng alcaloiil khổ 0,58-0,84%, vỏ Ihân Irong vỏ rễ 0.4-0,6% 1.3Tác dụng sử dụng Theo tài liệu [8, 9, 10] người thổ dân Châu ú c uống dịch sắc non để chữa đau bụng Dịch chiết dùng ngồi để chữa ngứa, mụn nhọt, phát ban mẩn đỏ, thủy đậu, vết thương ngồi da bệnh hủi Theo tài liệu Ân độ [9, 11] dịch chiết làm thành bột nhão với thuốc để diệt giun, sán ấu trùng Đồng thời dịch chiết sử dụng để nhuận tràng, hạ nhiệt sốt rửa vết thương Trong vỏ chứa Tanin sử dụng để thuộc da nhuộm thảm đen Vỏ cầm máu tốt dùng để chữa ngồi viêm phổi Rễ có tác dụng cầm máu, ngồi có tác dụng tẩy xổ, với đơi dùng để điều trị bệnh hoa liễu Dịch chiết vỏ thân đem tiêm da chuột gây chết 60% Quả chín ăn [1, 5, 8, 9] Ở Liên xơ tiến hành thí nghiệm chế phẩm alcaloid Securinin thay chế phẩm Strychnin hạt mã tiền tác dụng kích thích thần kinh trung ương tương tự Strychnin độc Do alcaloid điều trị bệnh liệt thể khơng hồn tồn mà ngun nhân bệnh nhiễm khuẩn hay rối loạn tâm thần [ 11] Thực tế Việt Nam Bỏng nổ chủ yếu sử dụng theo kinh nghiệm dân gian nước nấu lá, cành rễ để tắm cho người bị ghẻ, lở chí người bị hủi; uống nước sắc để chữa đau bụng Theo tài liệu Đỗ Tất Lợi [5] Phạm Hồng Hộ [1] dịch chiết cành Bỏng nổ có tác dụng trừ sâu, sát trùng vết thương KẾT QUẢ NGHIÊN cứu CÂY BỎNG Nổ VIỆT NAM Ở Việt Nam, cơng trình nghiên cứu Bỏng nổ chủ yếu thực nhóm nghiên cứu Phạm Thanh Kỳ, Đỗ Qun cộng [2, 3, 4, 6, 7], kết nghiên cứu trình bày tóm tắt sau : v ề thực vật • Mơ tả đặc điểm xác định tên khoa học Bỏng nổ • Mơ tả đặc điểm giải phẫu lá, thân rễ đặc điểm bột lá, thân rễ góp phần tiêu chuẩn hóa dược liệu Vê hóa học • Đã định tính nhóm chất khác alcaloid, glycosid tim, flavonoid, antraglycosid, coumarin, saponin phận lá, vỏ thân, vỏ rễ gỗ rễ phản ứng ống nghiệm cho thấy thành phần Bỏng nổ alcaloid • Khảo sát biến động hàm lượng alcaloid theo tháng năm vỏ thân Bỏng nổ thu hái Hà Nội Nhờ xác định thời gian thu hái dược liệu cho hàm lượng alcaloid cao vào tháng (2,01-2,11%) Đối với vỏ thân, hàm lượng alcaloid biến động khơng đáng kể • Phân lập alcaloid tinh khiết từ Bỏng nổ Căn vào độ chảy, phổ khối, phổ tử ngoại, phổ hồng ngoại, phổ cộng hưởng từ hạt nhân 'H, 13c phổ nhiễu xạ tia X nhận dạng alcaloid phân lập Securinin, Norsecurinin dự kiến chất thứ Dihydroallosecurinin Vê tác dụng sinh học • Đã tiến hành thử độc tính cấp Securinin, xác định liều tối đa an tồn 200 mg/kg chuột nhắt trắng, liều LD50 237mg/kg chuột nhắt trắng liều tối thiểu chí tử 300 mg/kg chuột nhắt trắng • Securinin có tác dụng lên thần kinh trung ương Thực nghiệm chúng tơi chứng minh chế tác dụng Securinin ức chế nhân đỏ não thỏ, làm luồng xung phát sinh từ nhân đỏ đến ức chế nhân tiền đình • Đã so sánh tác dụng Strychnin với tác dụng Securinin lên hoạt tính điện tế bào thần kinh bán cầu não chim bồ câu cho thấy tất cảdịch lửa giải (Vcác ống có RI' giống Cho hốc dung mơi thu 3alcaloid riêng biệt ký hiệu A,, Al, A y - Tiến hành tương tự với phân đoạn B lliu đưực alcaloid tinh klìiếl ký hiệu A ị • Kiểm tra độ tỉnh khiết alcaloid phân lập SKLM Chúng tơi kiểm lia độ linh khiết alcaloid phân lạp dược sắc ký lớp mỏng Sau chấm lên mỏng chất phân lập so sánh với cắn alcaloid tồn phần thân Bỏng nổ, đem khai triển với hai hệ dung mơi khác nhau: CHCI ,: MeOH : NH4OH 198 : : 11 CHC13 : MeOH 19 : 11 Sau phun thuốc màu Dragendoi I ỉ Chúng tơi thấy ehấl xuất vết, điều đỏ chứng tỏ alcaloid phân lập đơn chất 3.5 Nhận dạng alcaloid phân lập Alcaloid A - Thể chất: linh Ihể màu vàng, hình kim, dỗ tan ElOH, CHCI - Nhiệt độ nóng chảy : 140 - 142 °c - Phổ khối (MS, phụ lục I) cho biếl M+ = 217 lương ứng với cơng lliức phân tử C u H |jN O , dự kiến cơng Ihức cấu tạo Sccurinin - Phổ khối cho mảnh có số khối m/e 217, m/e 134, m/e 106 in/c 84, rn/e 78, m/e 56, đổ mảnh tạo pic bán có số khối m/c X4 (lần số pic 100%) - Phổ cộng hưởng lừ proton ('H NMR, 500 Hz, CDCI( phụ lục 2) cho kết chất Aị có 15 proton, với độ dịch chuyển hóa học lừ 1.2 4- 6.6 ppm - Phổ cộng hưởng từ carbon phổ DEPT (' 'c NMR CDP & DEPT phụ lục sỏ 3) cho kết q chấl Aị có 13 Carbon đổ có nhóm - CH:: nhóm - Cl I carbon bậc 27 * Đối chiếu alcaloid A với Securinin phân lập từ Bỏng nổ xác định cấu trúc cơng trình trước, trình bày bảng 11 Bảng 11 đối chiếu alcaloỉd A j với Securínin Alcaloid A l Thể chất Độ tan Securinin [7] Tinh thể màu vàng, hình kim Dễ tan EtOH, CHCI3 u Nhiệt độ nóng chảy Tinh thể màu vàng, hình kim Dễ tan tr o n g c n , C H C I 140 - 142°c MS M+ = 217 * C13H15N M+ = 217 =£ C13H15N ‘H- NMR Có 15 proton Có 15 proton 13c - NMR, DEPT Có 13C, có 5- CH2 Có 13C, có 5- CH2, CH, Cacbon bậc 5- CH , Cacbon bậc - Kết luận : Căn vào thể chất, độ chảy, phổ MS, 1H- NMR, 13c NMR, DEPT; đối chiếu với Securinin xác định, chúng tơi nhận dạng alcaloid A! phân lập từ thân Bỏng nổ Securinin (hình số 1) Như Securinin khơng có mà có thân Bỏng nổ - Cấu trúc Securinin (hình số 1) o • Alcaloid A2 - Thể chất : dạng dầu, màu nâu đỏ, dễ tan EtOH, MeOH CHC13 28 Phổ khối (MS, pìtụ lục 4) cho biết M-l = 234, hay M+ = 235 tươnu ứng với cơng thức phân lử C u I1|7N O v Phổ khối cho mảnh có số khối giống mánh Securinin ìn/c 217, m/e 134, m/c 106, m/e 84, m/c 78 lìi/c 56 Iron li mảnh tạo pic bán có số khối m/e 84 (lần số pie 100%) Như vậy, chúng tơi nhận định SƯ chất A, có khung Securinin v c liấ l A , mộí dãn chất Securinin So với cơng thức phân tử Securinin C13H 13N (M = 217) nhóm chấl A2 có khối ỉưựng phân tử 17 nhóm thố có thổ tương ứng với nhóm - OH Vì điều kiện chưa đo phổ cộng hưởng lừ hạt nhân prolon để xác định xác có mặt nhổm - OH chất A, Chíinu lòi tạm ihời nhân định chấl A2 có cấu tạo dẫn chất - ol Sccuriniiì Theo tài liệu chất Ai cổ thể Securinol A (hình số 2) o Alcaloid A3 Thể chất : dạng dầu, màu nâu, dễ tan EtOH, MeOH CHCI Phổ khối (MS, phụ lục 5) cho biết M+ = 247 tương ứng với cơnu thức phân lử C I4H I7N O v Giống chất A2, phổ khối chất A, cho mảnh có sơ' khối giống mảnh Securinin m/e 217, m/e 134, ni/c 106 29 m/e 84, m/e 78, m/e 56, mảnh tạo pic ban có số khối in/c 84 (lổn số pic 100%) Chúng lơi nhận định sơ hộ chất A, có khung Sccurinin chấl A, dãn cliấl Sccurinin So với cơng thức phân tử Securinin C ,,H 15N (M = ) nhổm Ihế chất A, có khối lượng phân tử 31, nhóm thê tương ứng với nhóm - OCH , Chúng tơi chưa giải gán thơng số phổ cộng hươnu lừ hạt nhân prolon cho chất A„ phổ cộng hương từ hạt nhân proton chất A, cho tín hiệu nhóm - OCH , vạch đơn có số proton độ dịch chuyển hóa học 3,8 ppm Như vây clning tơi nhân định hước đầu chất A, dãn chất methoxy Securinin hay gọi Sccuritinin (hình số 3) o Hình số : Securitinin Alcaloid A4 Thể chất : dạng dầu, đễ bị polyme hóa, tan tốt cồn nóng, ether, chloroform Phổ khối cho hiêt M+ = 203 lương ứng với cơng thức phân úr C12H |,N (phụ lục 7) dự kiến cơng thức cấu tạo Norsccurinin Phổ khối cho mảnh có số khối m/e 203, m/e 157, m/e 106 m/e 78, m/e 70 mảnh có số khối m/e 70 pic có lần số 100% 30 So sánh phổ khối chất A4 với phổ khối Norsecurinin có độ Irùng lặp > 90%, đỏ chúng tỏi nhận dạng chất A Norsectirinin (hình số 4) Ü Hình số : Norsecurinin 31 CHƯƠNG : KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ■ ■ 4.1 Kết luận Sau q trình thực nghiệm, chúng tơi thu kết sau : • Định lượng : xác định hàm lượng alcaloid phận rễ, thân Bỏng nổ năm từ tháng đến tháng 12 năm 2001 phương pháp acid base, qua xác định mối liên quan hàm lượng alcaloid phận với thời gian, mùa q trình sinh trưởng Bỏng nổ sau : - Kết định lượng cho thấy hàm lượng alcaloid lớn nhất, trung bình khoảng 1% alcaloid tính theo trọng lượng khơ tuyệt đối - Hàm lượng alcaloid thân rễ Bỏng nổ biến động từ tháng đến tháng 12 Vào mùa xn từ tháng đến tháng 4, hàm lượng alcaloid tăng mạnh đạt giá trị cao thời gian - Đối với phận lá, thân rễ Bỏng nổ thời gian thu hái cho hàm lượng alcaloid cao vào thời gian có nụ hoa bắt đầu hoa (mùa xn đầu mùa hè, từ tháng đến tháng 5) • Đã chiết xuất 25 gam alcaloid tồn phần từ thân Bỏng; nổ Bằng phương pháp sắc ký cột phân lập alcaloid tinh khiết, ký hiệu A 1? A2, A3 A4 Căn vào độ chảy số liệu phổ khối (MS), phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton carbon so sánh với Securinin xác định cấu trúc cơng trình trước chúng tơi nhận dạng chất Aj Securinin Căn vào tính chất số liệu phổ khối chúng tơi sơ dự kiến A2 Securinol A; A Securitinin A4 Norsecurinin - Ngồi phân lập 2,5 gam alcaloid Aị (securinin) để chuẩn bị thử tác dụng dược lý 4.2 Đề nghị Chúng tơi đề nghị cơng trình nghiên cứu Bỏng nổ cần tiếp tục nghiên cứu tác dụng sinh học phân lập xác định cấu trúc alcaloid 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO Phạm Hồng Hộ - Cây cỏ Việt Nam Nhà xuất Montreal Quyển II, tập trang 235, 1992 Lê Thị Thiên Hương - Cơng trình tốt nghiệp Đại học -1996 ĐHDHN Nguyễn Đăng Lâm - Cơng trình tốt nghiệp Đại học - 1997 ĐHDHN Phan K ế Long - Cơng trình tốt nghiệp Đại học - năm 1993 - ĐHTN Ạ Đỗ Tất Lợi - Những thuốc vị thuốc Việt Nam - In lần thứ - NXB KHKT Hà Nội 1999, trang 465 - 466 Đỗ Qun - Cơng trình tốt nghiệp Đại học - năm 1995 - ĐHDHN Đỗ Qun - cơng trình tốt nghiệp thạc sỹ dược học - 1999 - ĐHDHN r E V Lassak and T Mc Carthy, 1990, Australia Medicine Plants, page 139 - 140 > John Brock Top end Native Plants, page 191 10.RJ Petheran, B KOK Plants of the Kimberley region of western Australia, page 338 - 339 11.The wealth of India - Rew materials, vol IV, 1972 Publication and information directorate CSIR - New Dehli page 268 - 269 33 PHỤ LỤC Phổ khối (MS) alcaloid Aị Phổ cộng hưởng từ hạl nhân protoncủa chấl A, ('H NMR, 500Hz) Phổ cộng hưởng từ hạt nhân carbon chất A, ( ° c NMR, 5()0Hz) Phổ khối (MS) alcaloid A2 Phổ khối alcaloid A, Phổ cộng hương lừ hạt nhân prolon cliấl A , ('H NMR 500Hz) Phổ khối alcaloid A_ị 34 < K CO CDƯ) & Ư)jq p - p - pL> ? rt c I—I fD p> rt- b Hi o 0) o h Ợ) Ọ o Cd o 00 Í •• o ^ tr* Cd s • < CD DJ en œ iu t£) pƯ H V O‘C o'i? rt DƠ p ỈỆ DJ w K o c s CO ro o CO o rt H c > Ĩ-3 > < p- 2S >0 CD ầ Ư Ị M c C/5 oK H* Q) ro -J b U3 t r • o o > o o JQ s U) n U) U) CD rt hr o a Ỵ2 I1 Ỏ M *v 0.080; 000, 1.008“ 983 I 1.007 , HỊ Œ H 1.026 Q Ợ n 5" 1.014 H LO 1.027 H TTuT is 1.183^= w ĨT T ĨƠ ^ H o IT ^ = o 867 - "• ro I 1.128 0.130 5Õ nÕ rw ỵw * »M ỵ Õ ÕO ĨOwD^M DD X ư) » TJ 'V ^ Ir 1^ Ç O Ỵ-* O ỊỊ J !1 I H o O X > z ưl O O o o TD § H» O • • UJ Dj O WH O N) (li h- «J3 o U) K U )(M tl o o o o se fo co rt ?N £ *w ff N o H o o > ^ WpZWHDTJ H ü 'Ị H p iw s o o M í w Ơ) O D c H H- O) n3 r o Ễ Q •-3 rt> đ> I < w w I to z > §n D -3 e n •Ư c w3 rt 53 *® k; o c NJ p O CT O vo O m ow -J OD n ơ\ H- ÛJ >— M pũ o o (Ti • Ư1 KD Ợ Ư IN ỊỊ O O • ODM 00 ID K>n LHvQ c tn • en Oj o - 0 MM II — OHW 1► — 1UJ OJ n O o o o o reI! ơ> VD nIOO^W^OH o en o fD i rt (D (/)i rt> 01 ifi ỊĨ n n (t>đ > oa> N t o i K> u> en o U5 O _ sac sc tu N Ặ 00 en < *OH tỘCC w3: : n M u> O 2o Ọ vo o U) U) o o o o o o o O V£> O 00 o 00 o -J o cr> o cr> o en o o o o CjJ ÜJ o TJ ầ (JI o CDC13, C13CPD&DEPT ro o LU0NG_THI, o < s CO H* H* p PL) ) ? w ft) >o w i-' o "O rt c o X i H- c fD ^o 1tu Q œ t^r o I en o ^ < ƯỊr* ặ Ç£) uQ5 'TJ rç Ư vp*■< n rt 03 o àç à) E ? ro c S o co fi­ 3? fi ph-* c U) h-1 n > •• 00 H > 1—1 o § H- S CD ü M e ffi c/) o -J Hro b iQ S ' • > CD ro o Jà S CD rt nr o a s: a H 'D o a < s cọ >p H- Ho T5 H* 0) w c/) X i h-* Mo (V nj o oy Q tơ 00 ? •• en < < • i) g tr* OD il) ¿ i ^ fp M 1£>1< _ Ọ o tu n n Ä h~* 0) cg sỊK °) c /s C Ọ ri- h-* Ä U) H o ro H o b> H ro > o è s (D rt ? Ọ a s;I Ỏ 0 > = O \ 0Q0\\ i.ia s yb: 0 \\= 0.100 xz: KINH-QBl 135 0.203 0.050 Ỉ ,0 //0.050 % 0.235 0.038 0.247 0.227' ~1 238 0.292 Hl o , CDC13, H 0.088 0.291 2.509 0.336^ 0.212 £ 288 \\ _ 463Y= 1.236 V “ Ì : \ \ 325'' '— 610 850 0.359/” 0.8 /^ 1457/ = B/ y— w wKrn' n'püt-| ơt r MwDs ^H 07 s: ư> 0 ►—1 T> U) Ot u.' h{ OW &I H vi CJ rc u> en rD 0 0 s U) OD rt n> se s 14 ĨT l/> H-* w H iQ N w HDTỊ O Í-* z 2: m r (—1 (>J Mi CO U) vr lo • • II ơ> 0 H- i Ư I O O I II II s a c II 3: ón Ư ) II N ft) ii H-* fc» • VD • ơ\ H ^ ơ\ 0 -J 0 w Ln N) Ư1 ^ a 0 rr c c ÍT> w [fí O Het g g > ƯI 0 đ) đ) (/> rr ac (f ĩ ’ N 1v S c h-* n H ft M ư> N rj < H0 ro D 0 T3 w Hl LP ^ cniù c Ừ1 • en a w w n *-* ^ O H w Cl (ỵ r+ il' 10 < s ço M > o H* H*Ơ> p Ọ *0 HO J (/)3 0) ,û (DH H n tJH hr+aH- ^p ft> H fD p ^ rt c b § rD g h¡ rr n> ÇA p o DƠ œ¿Tr) o * Ln o ^ VD CK < INr* > 00 l) fP o UD'C C) rt tơ n 0K0oM c ^s ffi Lo o p &> ù r i K) > > s;I Ị M ) pƠ) o T -J en K ) *B p 0) ho b2 ẸT Ch Ư o > o S (D r+ br a 21 Ỏ 5ẸC u Q np [...]... phân alcaloid trong lá và thân cây Bỏng nổ íỊần giỏng nhan alcaloid trong lá cho 6 vêl và alcaloid trong thân cho 7 vết, Ironu d() các vết alcaloid của lá đều trùng với các vết alcaloid trong thân cay Bỏng nổ - Thành phần alcaỉoid trong rễ cây Bỏng nổ chỉ có 4 vết, Irony đó VÔI số 5 là thành phần chính trong rễ cây Bỏng nổ nhưng lại là thành phẩn thứ yếu trong lá cây 3.3 Chỉêt xuât alcaloỉd toàn phầntừthân... toàn phần Quá trình chiết xuất được trình bày ở sơ đổ I Chúng tôi đã chiết được khoảng 25 gam alcaloid toàn phần eúa ihân cây Bỏng nổ dùng để phân lập các alcaíoỉd có Irong thân và chuẩn hị cho thử tác dụng dược lý 24 25 3.4 Phân lập alcaloỉd trong thân cây Bỏng nổ - Phương pháp : phân lập alcaloid hằng sắc ký cột - Chuẩn bị chất hấp phụ và alcaloid loàn phần : Hòa lan alcaloid loàn phần của Ihân cây. .. VH (2) (3) Hàm lượng alcaloid trong lá cây Bỏng nổ Hàm lưựng alcaloid toàn phẩn trong lá Bỏng nổ mỗi lần định lưựng được tính theo công Ihứe ( 1), xử lý bàng phương pháp thống kê xác định hàm lượng alcaloid theo công thức (2) và (3) Kết quả hàm lượng alcaloid trong lá cây Bỏng nổ tháng 1 năm 2001 được trình bày ở bảng 1 Bảng 1 : Hàm lượng alcaloid trong 6 mẫu nguyên liệu lá Bỏng nổ tháng ỉ năm 2001... Sự biến dộng hàm lưựníi alcaloid toàn phần tronẹ chân cây Bỏníỉ nổ được biểu diễn dưới dạng đổ Iliị 2 16 Đồ thị 2 : Sự biêh động hàm lượng aỉcaloid trong thân Bỏng nổ theo các tháng trong năm Nhân x é t: - Hàm lượng alcaloid toàn phần trong thân cây Bỏng nổ ít biến động Từ tháng 5 đến tháng 12 hàm lượng alcaloid dao động nhẹ và hàm lượng alcaloid thấp < 0 ,5 % Thời kỳ này cây có hoa, quả và rụng lá... lượng alcaloid toàn phần trong rễ cây Bỏng nổ được biểu diễn ở đồ thị 3 Đồ thị 3 : Sự biêh động hàm lượng aìcaìoid trong rễ Bỏng nổ theo các tháng Nhân x é t: - Nhìn vào đồ thị chúng tôi thấy sự biến động hàm lượng alcaloid toàn phần trong rễ Bỏng nổ cũng giống như hàm lượng alcaloid trong thân, ít biến động trong thời gian cây có hoa và quả (khoảng từ tháng 6 đến tháng 12) Cũng giống như hàm lượng alcaloid. .. giữa hàm lượng alcaloid trong các bộ phận của cây với thời gian, mùa và quá trình sinh trưởng của cây Bỏng nổ như sau : - Kết quả định lượng cho thấy hàm lượng alcaloid trong lá là lớn nhất, trung bình khoảng 1% alcaloid tính theo trọng lượng khô tuyệt đối - Hàm lượng alcaloid trong thân và rễ cây Bỏng nổ ít biến động từ tháng 6 đến tháng 12 Vào mùa xuân từ tháng 1 đến tháng 4, hàm lượng alcaloid tăng... lá cây Bỏng nổ dược hiểu diễn ử dồ thị 1 14 Đồ thị 1 : Sự biến động hàm lượng aìcaloid trong lá Bỏng nổ theo các tháng Nhân x é t: - Nhìn chung hàm lượng alcaloid toàn phần trong lá BỎĨ12; nổ biến động rõ rệt theo các tháng trong năm, hàm lượng alcaloid thấp nhất là 0,31% và cao nhất là 1,48% tính theo trọng lượng khô tuyệt đối - Nhìn vào đường biểu diễn sự biến động hàm lượng alcaloid của lá cây Bỏng. .. 2, mùa này cây có nhiều lá mới và bắt đầu có nụ hoa 3.1.3 Hàm lượng alcaloid trong thân Bỏng nổ Tương tự để xác định hàm lượng alcaloid trong thân cây Bỏng nổ được thực hiện như mẫu nguyên liệu lá về phương pháp, tiến hành và cách xử lý kết quả Kết quả hàm lượng alcaloid thân Bỏng nổ tháng l được trình bày ở bảng 4 và bảng 5 15 Bảng 4 : Hàm lượng alcaloỉd trong 6 mẫu nguyên liệu thân Bỏng nổ tháng lnăm... trong lá, thân và rễ Bỏng nổ Chúng tôi biểu diễn hàm lượng alcaloid trong rễ, thân và lá cây Bỏng nổ theo các tháng năm 2001 ở biểu đồ 1 19 □ Hàm lượng Alcaloid trong lá HI làm lượng Alcaloid trong rễ ■ Hàm lượng Alcaloiđ trong thân BIỂU ĐỒ 1 : SỤ BIẾN ĐỘNG HÀM LƯỢNG ALCALOID TRO CÁC THÁNG TRONG NĂM 2001 Nhân x é t: Biểu đồ biểu diễn hàm lượng alcaloid trong thân, 1'ễ và lá cây Bỏng nổ theo tháng cho... môi thu được 3alcaloid riêng biệt ký hiệu là A,, Al, A y - Tiến hành tương tự với phân đoạn B lliu đưực 1 alcaloid tinh klìiếl ký hiệu là A ị • Kiểm tra độ tỉnh khiết của alcaloid phân lập được bằng SKLM Chúng tôi kiểm lia độ linh khiết của các alcaloid phân lạp dược bằng sắc ký lớp mỏng Sau khi chấm lên bản mỏng 4 chất phân lập được và so sánh với cắn alcaloid toàn phần của thân Bỏng nổ, đem khai triển ... Thỡn, chi Flueggea Willd cú ba loi F virosa ( Roxb ex Willd ) Voigt, Flueggea spirei Bei lie v Flueggea juUienii (Beille) Webster, ú loi Flueggea virosa phõn b rt rng rói, cũn loi Flueggea uỡỡienii... 3.1 nh lng alcaloid 12 3.1.1 Nguyờn tc 12 3.1 Hm lng alcaloid lỏ Bng n 13 3.1.3 Hm lng alcaloid thõn Bng n 75 3.1.4 Hm lng alcaloid r Bng n 17 3.1.5 S bin ng hm lng alcaloid. .. Snieckus [7] tng kt nhm alcaloid Securinega gm 16 alcaloid, ch yu c phõn lp t chi Securinega, Flueggea v Phyllanlhus Securinin v Norsecurinin l hai alcaloid chớnh Irontỡ nhm alcaloid ny 1.2.1 Nhúm