BỘ Y TÊ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI ĐÀO ĐÌNH L ực GÓP PHẩN NGHIỀN cứu CHếBIỂN VỈ THUỐC MÃU ĐƠN BÌ (KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Dược s ĩ KHÓA 1997-2002): Người hướng dẫn: PGS TS PHẠM XUÂN SINH THS ĐÀO TH Ị VUI Nơi thực hiện: Bộ môn Dược học cổ truyền Bộ môn Dược lý Phòng Vi sinh Bộ môn Công nghiệp Dược Trường Đại học Dược Hà Nội Phòng Đông y thực nghiệm Viện YHCT Việt Nam \ Thời gian thực hiện: Từ 2/2002 đến 5/20Ỏ2 /éjỵj /0 o ì - \C \ KỊ boUỳ HÀ NỘI 5-2002 Lời cảm ơn Với lòng kính trọng biết ơn sâu sắc nhất, xin chân thành cảm ơn: *PGS TS Phạm Xuân Sinh *THS Đào Thị Vui Những người thầy dã trực tiếp hướng dẫn, dành nhiều công sức thòi gian truyền thụ kiến thức quỷ báu cho suốt trình thực uà hoàn thành khóa luận Khi triển khai thực luận ưăn nhận giúp đỡ quỷ báu cán Bộ môn Dược học cổ truyền, Bộ môn Dược lỷ, TS Cao Văn Thu Bộ môn Công nghiệp Dược, X í nghiệp Dược phẩm Trung ương III, Phòng Đông y thực nghiệm-Viện YHCT Việt Nam đặc biệt /à TS Trần Lưu Vân Hiền CN Tạ Thị Phòng, người tận tình giúp đỡ trình thực đề tài Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến thầy cô giáo uà cán nhân viên Bộ môn Dược học cổ truyền, Bộ môn Dược ỉỷ - Trường Đại học Dược Hà Nội, Phòng Đông y thực nghiệm-Viện YHCT Việt Nam Hà Nội ngày 28 tháng năm 2002 Sinh viên Đào Đình Lực MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỂ PHẦN I: TỔNG QUAN 1.1 Mẫu đơn bì 1.1.1 Đặc điểm thực vật, phân bố, thu hái 1.1.2 Chế biến cổ truyền 1.1.3 Thành phần hóa học 1.1.4 Tác dụng sinh học 1.1.5 Công dụng 1.1.6 Một số phương thuốc y học cổ truyền có chứa vị Mẫu đơn bì 1.2 Quá trình Peroxy hóa lipid (POL) PHẦN II: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 2.1 Nguyên liệu, phương tiện phương pháp nghiên cứu 2.1.1 Nguyên liệu 2.1.2 Phương tiện 2.1.3 Phương pháp nghiên cứu 2.2 Nghiên cứu tác dụng sinh học 2.2.1 Nghiên cứu tác dụng vị thuốc lên thời gian đông máu thỏ 2.2.2 Nghiên cứu tác dụng vị thuốc lên thời gian chảy máu chuột nhắt trắng 2.2.3 Đánh giá tác dụng chống oxy hóa in vitro 2.2.4 Thử tác dụng kháng khuẩn - kháng nấm 2.2.5 Phương pháp xử lý kết nghiên cứu 2.3 Kết nghiên cứu 14 2.3.1 Xác định dược liệu 14 2.3.2 Chế biến 14 2.3.3 Định tính 16 2.3.4 Định lượng 21 2.4 Tác dụng sinh học 23 2.4.1 Tác dụng thuốc lên thời gian đông máucủa thỏ 23 2.4.2 Tác dụng thuốc lên thời gian chảy máucủa chuột 24 nhắt trắng 2.4.3 Tác dụng thuốc lên trình POL 26 2.4.4 Thử tác dụng kháng khuẩn - kháng nấm 30 2.5 Bàn luận 34 PHẦN III: KẾT LUẬN VÀ ĐỂ NGHỊ 36 TÀI LIỆU THAM KHẢO 37 KÝ HIỆU - CHỮ VIẾT TẮT TRONG LUẬN VĂN GTTB Giá trị trung bình MDA Malonyl dialdehyde MĐB Mẫu đơn bì MĐBĐ Mẫu đơn bì đen MĐBR Mảu đơn bì trích rượu MDBS Mẫu đơn bì sống MĐBV Mẫu đơn bì vàng POL Peroxy hóa lipit YHCT Y học cổ truyền v sv Vi sinh vật Đ Ậ T VẤN Đ Ề Mẫu đơn bì vị thuốc Y học Phương Đông có Việt Nam sử dụng từ sớm; thành phần thiếu phương thuốc Lục vị, Bát vị Đó phương thuốc danh y Nguyễn Trọng Cảnh đời nhà Hán - Trung Quốc xây dựng nên sau này, đến kỷ 18 Hải Thượng Lãn Ông dùng phép biến phương thuyết Thuỷ - Hoả xây dựng nên nhiều phương thuốc khác Kỷ cúc địa hoàng hoàn, Minh mục địa hoàng hoàn, Thất vị địa hoàng hoàn, Thất vị độ khí hoàn ( Lục v ị ); Kim quy thận khí hoàn, Tế sinh thận khí hoàn, Tư âm bát vị hoàn ( Bát v ị ), để chữa 50 chứng bệnh khác Khi dùng vị thuốc, Mẫu đơn bì qua chế biến Có nhiều cách chế biến khác nhau, cách chế biến đưa lại công dụng khác Tuy nhiên có công trình nghiên cứu khoa học mối liên quan công dụng chế biến biến đổi thành phần hoá học vị thuốc Mẫu đơn bì qua cách chế biến Do tiến hành đề tài "Góp phần nghiên cứu ch ế biến vị thuốc Mẫu đơn bì” phần đề tài cấp Bộ "Xây dựng quy trình chế biến chuẩn cho nám vị dược liệu Trạch Tả, Đẳng Sàm, Mẫu đơn bì, Táo Nhục, Ba Kích " nghiệm thu năm 2001 báo cáo Hội nghị Khoa học tuổi trẻ lần thứ X Trường Đại học Dược Hà Nội 2002 Đề tài tiến hành với muctịêiLsau: - Tiến hành chế biến vị thuốc Mẫu đơn bì theo phương pháp trích rượu, vàng, đen - Nghiên cứu thay đổi thành phần hoá học vị thuốc trước sau chế biến - Nghiên cứu vài tác dụng sinh học vị thuốc Mẫu đơn bì trước sau chế biến PHẦN I : TỔNG QUAN 1.1 MẪU ĐƠN BÌ: 1.1.1): Đặc điểm thực vật, phân bố, thu hái: Mẫu đơn bì vỏ rễ Mẫu đơn có tên khoa học: Paeonia suffruticosa Andr Họ Mao lương - Ranunculaceae Bộ phận dùng: v ỏ rễ Cortex Paeoniae radicis Cây cao 1- l,5m Lá mọc so le thường chia thành chét, chét lại chia thành thuỳ, mặt xanh, mặt trắng nhạt có lông Cuống dài Hoa to, mọc đơn độc đầu cành, đường kính từ 15-20cm, màu đỏ, tím trắng Mùi thơm Cây hoa Mẫu đơn nguồn gốc Trung Quốc, sau di thực sang châu Âu làm cảnh Tại Việt Nam di thực phạm vi thí nghiệm vùng mát (Sa pa) Tại Trung Quốc người ta thu hoạch vỏ rễ trồng 3-5 năm, vào tháng đào lấy rễ, rửa đất cát, bổ dọc vỏ rễ, bỏ lõi, phoi khô Hoặc trước bổ vỏ dùng dao nứa hay mảnh bát, mảnh thuỷ tinh cạo vỏ nậy lấy vỏ phơi khô Cách cho vị nguyên đơn bì, cách cho vị Quát đơn bì [10] Cần phân biệt vị thuốc với rễ hoa Mẫu đơn họ Cà Phê (Rubiaceae) thường trồng chùa chiền, lấy hoa thờ cúng 1.1.2.C hế biến cổ truyền: Tuỳ theo chứng bệnh khác mà ta có phương pháp chế biến sau: 1.1.2.1 Phương pháp tẩm rượu: Tẩm rượu với tỉ lệ 100ml rượu 35 40° cho 1000g Mẫu đơn bì, ủ sau vi nhiệt độ thấp 70 80°c đến khô, có mùi thơm đặc trưng Mẫu đơn bì [11,15] 1.1.2.2.Phương pháp vàng: 1000g Mẫu đơn bì đem nhiệt độ 140 - 150°c, đến vỏ có màu vàng đậm, mùi thơm đặc trưng Mẫu đơn bì [11,15] 1.1.2.3.Phương pháp đen: 1000g Mẫu đơn bì đem nhiệt độ 180 - 200°c, đến vỏ có màu đen, bên có màu vàng, mùi thơm Mẫu đơn bì [11,15] 1.1.2.4.Phương pháp cháy: 1000g Mẫu đơn bì đem nhiệt độ 180 - 200°c, đến vỏ có màu đen cháy, bên đen, không mùi thơm Mẫu đơn bì [11,15] 1.1.3.Thành phần hoá học: Trong rễ có glycoside gọi paeonolide (C2 0H28O12), rễ chất tiếp xúc với chất men có vỏ cây, bị thuỷ phân tạo paeonoside (C15H20O8), paeonol (CgHjoOg), paeoniflorin, astragalin (C2 iH2oOn), paeonin (C2 H 3 16 C1 H2 ), pelargonin (C21H310 15C1.31/2 H20) [17,18,19,20,21] Ngoài có acid benzoic, tinh dầu, hợp chất sterol, glucose, arabinose, saponin [8,10] Công thức hoá học: ÇOCH ÇOCH o - P-D-glucose o - Ị3-D-glucose - o - a - L-arabinose OCH OCH Peonoside Paeonolide OCH OH OCH Astragalin Paeonol 'O—gỉucose o —glucose Ó—glucose _ glucose Pelargonin Paeonin l.lA.Tác dụng sinh học: - Mẫu đơn bì có tác dụng hạ áp động vật thí nghiệm, tác dụng chất paeonol gây Có thể tiêm tĩnh mạch với liều 0,15-lg/kg thể trọng ngày trì tuần, thấy có tác dụng hạ huyết áp rõ rệt Ngoài mẫu đơn bì có tác dụng gây xung huyết tử cung động vật thí nghiệm, từ đưa lại công điều kinh vị thuốc [20,21,22] - LD50 paeonol 4,9g/kg chuột nhắt trắng đường uống [20,21] Paeonol tiêm phúc mạc chuột nhắt với caíein có tác dụng trấn tĩnh hoạt động hưng phấn cuả chuột Ngoài có tác dụng chống viêm khớp chuột cống, ức chế tử cung cô lập chuột cống [20,21,22] - Mẫu đơn bì có tác dụng ức chế nhiều loại vi khuẩn như: ức chế liên cầu khuẩn nhóm A với độ pha loãng 1: 640 (dùng nước sắc pha loãng); 1:320 lỵ trực khuẩn, 1:80 Tụ cầu vàng,trực khuẩn bạch hầu; 1:40 đối vói trực khuẩn thương hàn, phế cầu khuẩn [10,17,20,21,22] 1.1.5.Công dụng' Mẫu đơn bì dùng để trị bệnh cao huyết áp mà đặc biệt cao huyết áp gan, bệnh xơ cứng động mạch đáy mắt, tăng nhãn áp Mẫu đơn bì trích rượu làm tăng tác dụng hoạt h u y ết, tăng quy kinh thuốc Do công hoạt huyết, nên Mẫu đơn bì dùng để điều hoà kinh nguyệt, bệnh bế kinh, tích huyết, đau xương cốt mồ hôi không thoát Phối hợp với đào nhân, hồng hoa Trị viêm ruột thừa cấp phối hợp với đại hoàng [1,5,11,15,20,21] Mẫu đơn bì đen cháy dùng để chữa bệnh chảy máu như: chảy máu cam, nôn máu, trĩ huyết [1,5,10,11,15] 1.1.6 M ột số phương thuốc YHCT có chứa vị Mầu Đơn Bì 1.1.6.1 Thận kh í hoàn (Bát vị quế phụ) Thục địa 32g Trạch tả 12g Sơn thù 16g Mẫu đơn bì 12g Bạch linh 16g Phụ tử chế 2g Hoài sơn 16g Nhục quế 4g Công năng: ấm thận, hành thuỷ, bổ thận dương Bảng 4: Tác động thuốc lên thời gian đông máu thỏ: Lô TG đông (phút) máu trung so với lô bình chứng p %GTTB Thời gian đông máu thỏ Lô trắng 6,67 6,33 7,00 7,17 6,67 6,77 ± 0,67 100% Sau uống MĐBĐ 5,90 5,28 6,33 5,22 5,58 5,66 ± 0,95 [...]... với các tài liệu [6,10,18,19]và mẫu chuẩn lưu tại Viện Dược liệu Xác định đây là vị thuốc Mẫu đơn bì nghiên cứu 2.3.2 C hế biến: + Mẫu đơn bì trích rượu: - Lấy Mẫu đơn bì đã bỏ lõi, loại bỏ tạp chất, rửa sạch đất cát, để thật ráo nước Tẩm rượu 35-40° (20ml rượu tẩm cho 200g Mẫu đơn bì đã 14 bỏ lõi), ủ trong 4giờ, rồi tiến hành vi sao ở nhiệt độ 70°C-80°C (so sánh với mẫu sấy ở nhiệt độ hằng định 80°c... nhiều nghiên cứu khoa học về hoạt chất chống oxy hoá thiên nhiên người ta thấy rằng những hợp chất thiên nhiên có nhóm chức OH phenol và hệ liên kết đôi liên hợp thường có hoạt tính chống oxy hoá [13] 8 PHẦN I I : THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 2.1.N2u\ên liêu vhươns tiên và phươns vháv nehiên cứu: 2.1.1.Nguyên liệu: + Mẫu Đơn Bì sống: Do XNDFTW 3 cung cấp + Mẫu Đơn Bì sao vàng + Mẫu Đơn Bì sao đen + Mẫu Đơn Bì. .. Paeonol 22 Đối với mỗi loại Mẫu đơn bì chế và chưa chế đều làm nhiều lần, lấy kết quả trung bình Song song với việc định lượng,tiến hành đo độ ẩm nhiều lần, lấy kết quả trung bình Kết quả định lượng được ghi ở bảng 3: Bảng 3: Hàm lượng Paeonol trong Mẫu đơn bì (sống và chế) ST T Mẫu thử 1 MDBS Hàm lương Paeonola (%) Ghi chú ' 1,36 2 MĐBR 1,78 3 MĐBV 1,47 4 MĐBĐ 0,56 Các mẫu đều song song làm độ ẩm;... già).[1,5] 1.1.6.2 Lục vị địa hoàng thang Trạch tả 12g Hoài sơn 16g Thục địa hoàng 16g Mẫu đơn bì 12g Sơn thù du 16g Phục linh 12g Công năng: Bổ thận âm, bổ âm Chủ trị: Cơ thể suy nhược, tai ù, mắt kém, đầu váng, di, mộng tinh, tiểu tiện ra máu (do tinh huyết hư).[1,5] 1.1.6.3 Mẫu Đơn Bì thang: Bài thuốc chữa bệnh phụ nữ: Mẫu đơn bì 3g Đương quy 5g Bạch thược 3g Sinh địa 6g Trần bì 4g Bạch truật 4g Hương... phút), (ảnh 1) - Nếu Mẫu đơn bì còn lõi thi sau khi rửa, ủ mềm rồi cho qua máy cán để bỏ l õ i Tẩm rượu 35°- 40° (20 ml rượu tẩm cho 200g Mẫu đơn bì đã bỏ lõi), ủ trong 4giờ, rồi tiến hành vi sao ở nhiệt độ 70°C-80°C (so sánh với mẫu sấy ờ nhiệt độ hằng định 80°c trong 10 phút) ( ảnh 1) + Mẫu đơn bì sao vàng: Lấy 200g dược liệu sao trên chảo với nhiệt độ 140 - 150°c (có so sánh với mẫu sấy ở nhiệt độ... 1%, xuất hiện tủa bông trắng Phản ứng dương tính Nhận xét: qua các phản ứng định tính, xác định trong Mẫu đơn bì sống và chế đều có tanin Kết quả định tính ghi ở bảng 1: Bảng 1: Kết quả định tính một số nhóm chất có trong MDBS và MĐB chế: s Hợp chất Phản ứng - Thuốc thử tt 1 Phenola Ghi chú Mẫu đơn bì MDBS MĐBV MĐBĐ MĐBR TT FeCl3 5%/cồn +++ +++ ++ +++ Màu tím đen ánh xanh TT Pheling +++ Tủa đỏ Cu20... ức chế vi sinh vật được đánh giá bằng đường kính vòng ức chế các vi sinh vật kiểm định của các dung dịch thử 2.2.5 Phương pháp x ử lý kết quả nghiên cứu: Kết quả nghiên cứu được xử lý theo phương pháp toán thống kê y sinh học, sử dụng test t Student-Fisher [14] 13 + Nếu tXN< t0 ở p < 0,05 thì hai giá trị trung bình khác nhau không có ý nghĩa thống kê + Nếu tTN >t0 ở p < 0,05 thì hai giá trị trung bình... vào lỗ khay sứ, thêm 3 giọt thuốc thử Diazo mới pha và 3 giọt NaOH 10%, khuấy nhẹ, thấy xuất hiện màu đỏ.Phản ứng dương tính Qua các phản ứng trên, sơ bộ kết luận trong nước sắc của bài thuốc có Flavonoid - Định tính phần đường: Lấy lg bột thô Mẫu đơn bì (trước và sau chế) , thêm 10ml nước cất, đun cách thuỷ 10-20 phút, để nguội, lọc lấy dịch lọc Đem làm phản ứng định tính phần đường: + Cho vào ống nghiệm... đổi a: độ ẩm của dược liệu (%), xác định trên máy đo độ ẩm Presica - Thuỵ sỹ 2.2 .Nghiên cứu tác dụng sinh học: 2.2.1.N ghiên cứu tác dụng của vị thuốc lên thời gian đông máu của thỏ: Thử tác dụng của thuốc lên thời gian đông máu trên thỏ theo phương pháp ghi trong tài liệu [3] Dùng 3 lô thỏ, mỗi lô 5 con: - Lô 1-không uống thuốc: cho thỏ uống dung dịch NaCl 0,9% - Lô 2-uống dịch sắc 1:1 MĐBĐ với liều... chiết, thêm 0,5 ml thuốc thử Fehling A và 0,5 ml thuốc thử Fehling B, đun cách thuỷ vài phút, thấy xuất hiện màu đỏ gạch Phản ứng dương tính + Cho vào ống nghiệm 2 ml dịch chiết, thêm vài giọt thuốc thử Tollen (AgN03 5%/NH3), đun cách thuỷ trong 3 phút, thấy xuất hiện kết tủa bạc ở thành ống nghiệm Phản ứng dương tính 17 Nhận xét: qua các phản ứng trên, xác định trong Mẫu đơn bì sống và chế có đường tự ... nghiên cứu khoa học mối liên quan công dụng chế biến biến đổi thành phần hoá học vị thuốc Mẫu đơn bì qua cách chế biến Do tiến hành đề tài "Góp phần nghiên cứu ch ế biến vị thuốc Mẫu đơn bì phần. .. hành chế biến vị thuốc Mẫu đơn bì theo phương pháp trích rượu, vàng, đen - Nghiên cứu thay đổi thành phần hoá học vị thuốc trước sau chế biến - Nghiên cứu vài tác dụng sinh học vị thuốc Mẫu đơn bì. .. TRONG LUẬN VĂN GTTB Giá trị trung bình MDA Malonyl dialdehyde MĐB Mẫu đơn bì MĐBĐ Mẫu đơn bì đen MĐBR Mảu đơn bì trích rượu MDBS Mẫu đơn bì sống MĐBV Mẫu đơn bì vàng POL Peroxy hóa lipit YHCT