Đang tải... (xem toàn văn)
Bệnh sởi là một bệnh nhiễm trùng cấp tính do virut sởi gây nên, lây nhiễm theo đường hô hấp và dễ lây thành dịch, đặc biệt là ở trẻ em
Mục lục Trang MỞ ĐẦU .1 Chương - TỔNG QUAN 1.1 Virut sởi 1.1.1 Phân loại .3 1.1.2 Hình thái học .4 1.1.3 Cấu trúc kháng nguyên .4 1.2 Bệnh sởi 1.2.1 Chu kỳ phát triển virut sởi thể bệnh nhân 1.2.2 Đáp ứng miễn dịch tự nhiên với virut sởi 1.2.3 Biến chứng bệnh sởi 1.2.4 Tình hình mắc bệnh sởi 1.2.4.1 Tình hình mắc bệnh sởi Thế giới .9 1.2.4.2 Tình hình mắc bệnh sởi Việt Nam .11 1.3 Phòng điều trị bệnh sởi 14 1.3.1 Vacxin phòng bệnh sởi 14 1.3.1.1 Vacxin bất hoạt 15 1.3.1.2 Vacxin sống giảm độc lực .15 1.3.1.3 Vacxin sởi kết hợp với vacxin quai bị rubella (MMR) 16 1.3.2 Điều trị bệnh sởi 17 1.4 Tình hình tiêm chủng vacxin sởi phịng bệnh Việt nam 17 1.5 Sản xuất vacxin sởi Việt nam 18 1.6 Kiểm định vacxin sởi sản xuất Việt nam 19 1.7 Thử nghiệm lâm sàng .19 Chương - VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 Phương pháp chuẩn độ hiệu giá tạo đám hoại tử 21 2.1.1 Nguyên vật liệu .21 2.1.1.1 Mẫu chuẩn 21 2.1.1.2 Hố chất, mơi trường .21 2.1.1.3 Dụng cụ 21 2.1.1.4 Tế bào sử dụng 22 2.1.1.5 Môi trường sử dụng 22 2.1.2 Quy trình thực 24 2.1.2.1 Chuẩn bị mẫu mẫu chuẩn 24 2.1.2.2 Pha lỗng, gây nhiễm, ni 24 2.1.2.3 Phương pháp tính kết 26 2.2 Phương pháp khảo sát hiệu giá vacxin sởi dùng cho thử nghiệm lâm sàng 28 2.2.1 Phương pháp lấy mẫu .28 2.2.2 Quy trình chuẩn độ hiệu giá 29 2.2.3 Phương pháp khảo sát 29 Chương - KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 30 3.1 Kết xác định hiệu giá vacxin sởi mẫu M-0107 .30 3.2 Kết xác định hiệu giá vacxin sởi mẫu M-0207 .32 3.3 Kết xác định hiệu giá vacxin sởi mẫu M-0307 34 3.4 Kết xác định hiệu giá vacxin sởi đối chứng (R) 36 KẾT LUẬN .39 TÀI LIỆU THAM KHẢO 40 MỞ ĐẦU Bệnh sởi bệnh nhiễm trùng cấp tính virut sởi gây nên, lây nhiễm theo đường hô hấp dễ lây thành dịch, đặc biệt trẻ em Bệnh sởi nhận biết từ 2000 năm trước đây, đến năm 860 Zanes phân biệt bệnh sởi khác với bệnh đậu mùa [7] Vài thập kỷ gần đây, Y học đại có nhiều thành tựu việc phòng trừ bệnh dịch Mặc dù vậy, bệnh sởi vấn đề dịch tễ nghiêm trọng Ước tính hàng năm Thế giới có khoảng 50 triệu trường hợp nhiễm bệnh triệu trường hợp tử vong liên quan đến sởi [8,9] Năm 1954, thành công Enders Peebles việc phân lập virut sởi đánh dấu bước tiến nghiên cứu bệnh sởi Việc nghiên cứu dịch tễ học bệnh sởi thực nhiều nước kết cho thấy vacxin sởi có vai trị then chốt việc phòng bệnh sởi Các chiến dịch tiêm chủng diện rộng phác đồ tiêm vacxin làm giảm đáng kể tỉ lệ mắc bệnh sởi Tuy nhiên năm gần dịch sởi lại bùng nổ nhiều nước Mỹ, Anh, Canada, nước phát triển, đặc biệt vùng nhiệt đới châu Phi châu Á Việc phòng chống bệnh sởi cịn gặp nhiều khó khăn, dịch bệnh cịn hồnh hành đáng kể Ở Việt Nam, bệnh sởi bệnh nguy hiểm trẻ em năm 2000 có 16.200 trẻ em mắc bệnh sởi [2] Vì từ năm 1982 vacxin sởi vacxin đưa vào chương trình tiêm chủng mở rộng để gây miễn dịch chủ động cho trẻ em Mục tiêu cuối chương trình tốn bệnh sởi tồn Thế giới Ḿ n thực hiê ̣n có hiê ̣u quả chương trình tiêm chủng thì viê ̣c đảm bảo chấ t lươ ̣ng vacxin, đó có hiê ̣u lực của vacxin là hế t sức quan tro ̣ng Hiê ̣u lực của vacxin sởi đươ ̣c thể hiê ̣n bằ ng hiê ̣u giá virut và đươ ̣c xác đinh bằ ng ̣ khả gây hủy hoa ̣i tế bào cảm thu ̣ Vero của virut vacxin Hiê ̣u giá là chỉ tiêu quan tro ̣ng quyế t đinh tính sinh miễn dich và hiê ̣u quả bảo vê ̣ của vacxin Vì là vacxin số ng ̣ ̣ giảm đô ̣c lực, rấ t nha ̣y cảm với ánh sáng và nhiê ̣t đô ̣ nên hiê ̣u giá của vacxin sởi dễ bi ̣ ảnh hưởng quá trình bảo quản và vâ ̣n chuyể n đế n người sử du ̣ng nhấ t là điề u kiê ̣n khí hâ ̣u nhiê ̣t đới của nước ta, đó ngoài viê ̣c kiể m tra hiê ̣u giá của vacxin mới sản xuấ t còn phải giám sát kiể m tra chấ t lươ ̣ng, hiê ̣u giá của vacxin thực đia ̣ Để góp phầ n vào viê ̣c đánh giá chấ t lươ ̣ng vacxin dùng chương trình tiêm chủng mở rô ̣ng ta ̣i Viê ̣t Nam, chúng thực hiê ̣n đề tài nghiên cứu: “Khảo sát hiê ̣u giá của vacxin sởi sản xuất Polyvac dùng cho thử nghiệm lâm sàng” Nhằm giải mục tiêu: Hiệu giá vacxin Sởi sản xuất Polyvac đạt tiêu chuẩn WHO Hiệu giá vacxin bàn tiêm thử nghiệm lâm sàng đạt tiêu chuẩn WHO Biến động hiệu giá vacxin trình vận chuyển vacxin tới địa điểm tiêm Chương - TỔNG QUAN 1.1 Virut sởi 1.1.1 Phân loại Virut sởi thành viên chi Morbillivirut thuộc họ Paramyxoviridae Ho ̣ này gồ m nhóm - Các Paramyxovidae: + Para - influenza 1, 2, 3, + Virut quai bi ̣ + Virut gây bê ̣nh Newcastle + Virut Sendai - Các virut Pneumo: Virut hơ ̣p bào đường hô hấ p - Các virut Morbilli: + Virut sởi + Virut gây bệnh Carre chó + Virut dịch hạch bị Ba virut thuộc chi Morbilli có mối liên quan chặt chẽ với ở những điể m sau: - Giống hình thái, kích thước - Chúng có đặc điểm chung bật gây hiệu lực hủy hoại nuôi cấy tế bào tạo hợp bào đa nhân, tiểu thể bào tương nhân - Ba virut týp đơn gây bệnh giống vật chủ mẫn cảm [20] 1.1.2 Hình thái học Những kết nghiên cứu dùng siêu ly tâm kính hiển vi cho thấy virion sởi hạt có vỏ bọc, hình cầu, với lõi nucleocapsid xoắn cuộn hình sợi Đường kính có nhiều kích cỡ, thay đổi từ 120-150 nm, tính trung bình 150 nm bao gồm protein Bên vỏ capsid chuỗi ARN gen di truyền cấu tạo hình xoắn ốc với protein Vỏ virut sởi chất glycoprotein với chất ngưng kết hồng cầu (H) hình nón kháng nguyên lây nhiễm quan trọng virut sởi protein F [1] 1.1.3 Cấu trúc kháng nguyên Norrby Gollman miêu tả cấu trúc kháng nguyên khác virut sởi: - Kháng nguyên kết hợp bổ thể - Kháng nguyên ngưng kết hồng cầu - Kháng nguyên tan máu - Kháng nguyên trung hịa Trong đó, hai kháng ngun để nhận biết virut sởi kháng nguyên ngưng kết hồng cầu kháng nguyên tan máu [11] Các nghiên cứu cho thấy kháng nguyên gây ngưng kết hồng cầu kháng nguyên gây đáp ứng miễn dịch bảo vệ tiêm kháng nguyên ngưng kết hồng cầu tinh khiết cho người động vật thấy xuất kháng thể sởi với hiệu giá cao, giống gây miễn dịch vacxin sởi bất hoạt formalin [4] Sự tác động kháng nguyên ngưng kết hồng cầu virut sởi với hồng cầu khỉ chủ yếu phản ứng enzyme tốc độ phản ứng ngưng kết hồng cầu tăng nhiệt độ tăng đến 370C [3] Rất ban đầu enzyme virut phá hủy số cấu trúc bề mặt hồng cầu, sau thụ thể bộc lộ, tạo điều kiện để gây ngưng kết hồng cầu Kháng nguyên ngưng kết hồng cầu bền vững với nhiệt độ 60 0C giờ, nhờ đặc điểm vi rút sởi hoạt tính neuraminidaza [5] Các nghiên cứu cho thấy thụ thể hoạt tính ngưng kết hồng cầu vi rút sởi không bị phá hủy enzyme phá hủy thụ thể Các kháng nguyên ngưng kết hồng cầu không nhạy cảm với enzyme ARN-aza ADN-aza [7] Kháng nguyên tan máu glycoprotein có bề mặt vỏ ngồi virut với chức dung hợp tế bào để tạo hợp bào Hoạt tính tan máu virut sởi có liên quan chặt chẽ với khả gây hủy hoại tế bào sớm, giúp cho virut sởi dễ dàng xâm nhập vào bên tế bào tương ứng với khả gây nhiễm virut Kháng nguyên tan máu có pH thích hợp 8,0 [14] Kháng ngun trung hịa nằm vỏ virut tham gia vào phản ứng trung hòa [3,6] 1.2 Bệnh sởi 1.2.1 Chu kỳ phát triển virut sởi thể bệnh nhân Bệnh sởi bệnh nhiễm trùng đường hơ hấp có khả lây nhiễm cao Bệnh hay lây 90% người tiếp xúc với bệnh nhân bị lây sởi chưa tiêm phịng Virut sởi có mũi cổ họng bệnh nhân Họ thường lây bệnh cho người khác ngày trước vết đỏ xuất Khi bệnh nhân ho, hắt xì, hay nói chuyện, giọt nước nhỏ có chứa virut bắn khơng khí người khác hít vào họ bị lây bệnh Một virut sởi vào thể bệnh nhân, chúng thường nhân lên tế bào đường hơ hấp Sau bệnh lan khắp thể kể hệ hô hấp da * Triệu chứng bệnh: Khoảng 10 tới 12 ngày sau tiếp xúc với virut sởi, triệu chứng sau xảy ra: - Sốt, Ho khan, Chảy nước mũi, Mắt đỏ, - Những nốt nhỏ với trung tâm mầu xanh trắng xuất bên miêm mạc má Những nốt có tên đốm Koplik - Người mọc đốm đỏ lớn, phẳng, chụm vào * Diễn biến bệnh Giai đoạn ủ bệnh Thời kỳ ủ bệnh thường kéo dài từ 10 đến 12 ngày thời gian từ virut gây bệnh sởi xâm nhập vào thể đến xuất dấu hiệu giai đoạn tiền triệu Trong giai đoạn khơng biểu triệu chứng bệnh Giai đoạn tiền triệu chứng Giai đoạn tiền triệu thường kéo dài đến ngày đặc trưng sốt mức độ nhẹ đến vừa, ho khan, chảy mũi nước, viêm kết mạc mắt Những triệu chứng luôn xảy trước nội ban xuất Nội ban hay hạt Koplik dấu hiệu điểm bệnh Hạt Koplik hạt nhỏ hạt cát, màu trắng ngà, xung quanh có viền đỏ Hạt thường xuất biến nhanh vịng 12 đến 24 Kết mạc mắt bị viêm đỏ có dấu hiệu sợ ánh sáng Giai đoạn phát ban Đây giai đoạn điển hình bệnh với triệu chứng phát ban da Ban thường xuất vùng chân tóc phía sau tai, sau xuất mặt lan dần xuống phía vịng 24 đến 48 Ban sởi ban dạng dát-sẩn lên bề mặt da, sờ mịn nhung khơng đau, khơng ngứa, khơng sinh mủ Trong trường hợp nhẹ, ban thường đứng gần riêng rẽ Trong trường hợp nặng, ban có xu hướng hợp với làm thành ban lớn hơn, chí mảng xuất huyết (sởi đen) Trong thể đặc biệt nặng, ban có dấu hiệu xuất huyết Khi ban lan đến chân sốt đột ngột giảm khơng có biến chứng Sau ban nhạt dần theo xuất hiện, nghĩa từ xuống Sau ban đi, da lại dấu màu sậm lốm đốm vằn da báo [10] Sởi khơng điển hình Một số trường hợp bênh sởi biểu không giống miêu tả trường hợp bệnh nhân bị suy giảm miễn dịch, ban khơng điển hình Các trường hợp thường thấy bệnh nhân AIDS, hội chứng thận hư, điều trị thuốc ức chế miễn dịch 1.2.2 Đáp ứng miễn dịch tự nhiên với virut sởi Đáp ứng miễn dịch qua trung gian tế bào biểu quan trọng giai đoạn bệnh lý phục hồi bệnh Ức chế đáp ứng miễn dịch đặc hiệu bắt đầu với biểu lâm sàng bệnh, trước phát ban kéo dài vòng vài tuần sau hồi phục bệnh Các kháng thể đáp ứng miễn dịch tự nhiên ban xuất Khởi đầu IgM tiếp sau IgG IgA huyết dịch tiết Các kháng thể sinh nhằm chống lại kháng nguyên lạ thể chúng đạt đỉnh cao vào ngày thứ đến thứ 10 sau phát ban, sau giảm nhanh biến Các kháng thể sinh để trực tiếp kháng lại protein khác virut phát không giống xét nghiệm huyết học Kháng thể với protein N sản xuất nhanh nhiều, xác định giai đoạn nhiễm trùng tiên phát kỹ thuật kết hợp bổ thể Chính hình thành kháng thể kháng N mức độ nhiều cho phép nhận định kết âm tính khơng phát chúng huyết [7] Sau khỏi bệnh, thể có kháng thể chống bệnh nên ta khơng mắc bệnh sởi lại Nếu bạn sinh trước năm 1957, bạn thường có kháng thể chống bệnh dù chưa chủng ngừa Ðó bạn sống qua nhiều thời kỳ mà bệnh sởi hoành hành nhiều nhiều phần bạn có nhiễm virut dù khơng lộ Do bạn có miễn dịch 1.2.3 Biến chứng bệnh sởi Các biến chứng thường gặp sởi viêm tai giữa, viêm phổi, tiêu chảy, viêm não Chính biến chứng làm kéo dài thời gian bệnh, ảnh hưởng đến dinh dưỡng trẻ Hậu suy dinh dưỡng Viêm phổi biến chứng gây thân virut sởi (viêm phổi tế bào khổng lồ) Viêm phổi sởi bệnh nhân AIDS thường gây tử vong có ban điển hình Thường gặp bội nhiễm vi khuẩn gây nên viêm phổi Các vi khuẩn thường gặp phế cầu khuẩn, liên cầu khuẩn nhóm A, tụ cầu khuẩn Hemophilus Influenzae týp b Viêm tai biến chứng luôn phải nghĩ đến trẻ mắc sởi Nguyên nhân gây bệnh tương tự viêm phổi Nếu không phát kịp thời, viêm tai gây thủng màng nhĩ, ảnh hưởng đến thính lực Đơi viêm tai cấp khơng điều trị đưa đến viêm tai mạn tính với biến chứng nguy hiểm viêm tai xương chủm áp xe não Mẫu vacxin trước tiêm: lấy kho Polyvac trước giao mẫu cho nhóm vận chuyển mẫu đến địa điểm tiêm thử nghiệm lâm sàng Mẫu bảo quản < 80C (thông thường bảo quản -300C Polyvac) kiểm tra hiệu giá Như trước tiêm có mẫu: M-0107(T) ; M-0207(T) ; M-0307(T) R(T) Mẫu thu hồi sau tiêm: thu hồi lọ vacxin bàn tiêm xã (lọ nguyên chưa mở nắp, bảo quản hộp xốp có phiến đá lạnh suốt thời gian tiêm), vận chuyển Polyvac điều kiện bảo quản lạnh (
