Bộ giáo dục đào tạo Trờng đại học nông nghiệp I Lê hồng Vinh kiểm tra tính mẫn cảm, tính kháng thuốc E.coli salmonella spp PHân lập từ chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy vi khuẩn Luận văn thạc sĩ nông nghiệp Chuyên ngành: Thú y Mã số: 60.62.50 Ngời hớng dẫn khoa học: TS Bùi thị Tho Hà nội - 2006 lời cam đoan Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng Các số liệu kết trình bày luận văn trung thực cha đợc công bố công trình khác Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn đợc cám ơn thông tin trích dẫn luận văn đợc rõ nguồn gốc Tác giả Lê Hồng Vinh Deleted: ả ả Lời cảm ơn Với lòng biết ơn sâu sắc nhất, xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo, thầy cô giáo Trờng Đại học nông nghiệp I tạo điều kiện cho học tập trau dồi kiến thức quý báu năm học vừa qua Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới cô giáo TS.Bùi Thị Tho hết lòng hớng dẫn giúp đỡ trình nghiên cứu hoàn thiện tốt đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo Bộ môn Nội - Chẩn Dợc - Độc chất khoa Chăn nuôi - Thú y, toàn thể cán bộ, nhân viên Trung tâm nghiên cứu chó nghiệp vụ Trờng Đại học Nông nghiệp I Nhân dịp này, cho phép đợc gửi lời cảm ơn sâu sắc tới toàn thể gia đình, quan, bạn bè tạo điều kiện động viên giúp đỡ suốt trình học tập, thực đề tài hoàn thành tốt đề tài Tác giả Lê Hồng Vinh Mục lục Mở đầu i 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích Tổng quan tài liệu 11 2.1 Bệnh tiêu chảy chó 11 2.2 Đặc điểm viêm ruột tiêu chảy vi khuẩn 16 2.3 Các vi khuẩn hiếu khí thờng gặp đờng ruột 17 2.4 Những hiểu biết thuốc kháng sinh 29 2.5 Hiện tợng kháng thuốc vi khuẩn 33 2.6 Hiện tợng kháng thuốc vi khuẩn Salmonella 37 2.7 Hiện tợng kháng thuốc vi khuẩn E.coli 39 Đối tợng, nguyên liệu, nội dung phơng pháp nghiên cứu 40 3.1 Đối tợng nghiên cứu 40 3.2 Nguyên liệu 40 3.3 Nội dung nghiên cứu 41 3.4 Phơng pháp nghiên cứu 42 3.4.3 Phơng pháp phân lập giám định loại vi khuẩn 44 3.4.4 Kiểm tra tính mẫn cảm, tính kháng thuốc Salmonella Sp, E.coli phân lập từ phân chó viêm ruột tiêu chảy vi khuẩn với số thuốc kháng sinh thuốc hoá học trị liệu phơng pháp làm kháng sinh đồ 44 3.5 Xử lí số liệu 47 Kết thảo luận 48 4.1 Xác định biến động số lợng, số loại vi khuẩn hiếu khí phân chó bị viêm ruột tiêu chảy 48 4.1.1 Số lợng, tỉ lệ vi khuẩn hiếu khí gram phân chó bình thờng 49 4.1.2 Số lợng, tỉ lệ vi khuẩn hiếu khí gam phân chó bị viêm ruột tiêu 52 chảy cấp tính 4.1.3 Số lợng, tỉ lệ vi khuẩn hiếu khí gram phân chó viêm ruột tiêu chảy mạn tính 56 4.2 Kiểm tra tính mẫn cảm Salmonella Sp, E.coli phân lập từ phân chó bị bệnh viêm ruột tiêu chảy cấp, mạn tính với thuốc kháng sinh hoá học trị liệu thờng dùng điều trị 59 4.2.1 Kiểm tra tính mẫn cảm Salmonella Sp phân lập từ phân chó bị bệnh viêm ruột tiêu chảy cấp với thuốc kháng sinh hoá học trị liệu thờng dùng điều trị 60 4.2.2 Kiểm tra tính mẫn cảm E.coli phân lập từ phân chó bị bệnh viêm ruột tiêu chảy cấp mạn tính với thuốc kháng sinh hoá học trị liệu thờng dùng điều trị 67 4.3 Kiểm tra tính kháng thuốc Salmonella Sp, E.coli phân lập từ phân chó viêm ruột tiêu chảy cấp mạn tính với số thuốc kháng sinh thuốc hoá học trị liệu 72 4.3.1 Kiểm tra tính kháng thuốc Salmonella Sp phân lập từ phân chó viêm ruột tiêu chảy cấp mạn tính với số thuốc kháng sinh thuốc hoá học trị liệu 72 4.3.1 Kiểm tra tính kháng thuốc E.coli phân lập từ phân chó viêm ruột tiêu chảy cấp tính, mạn tính với số thuốc kháng sinh thuốc hoá học trị liệu 78 Kết luận đề nghị 87 5.1 Kết luận 87 5.2 Tồn đề nghị 89 Danh mục từ viết tắt báo cáo AMC: amoxicillin/clavulanic acid BGA: Brilliant Green Agar CFU: Colony Forming Unit cs: cộng DRF: Delayed Permeability Factor - Độc tố thẩm xuất chậm ETEC: Enterotoxigenic ETEC: Verotoxigenic HSPs: Heat - Shock protein H: High - mẫn cảm cao I: Intermediate - mẫn cảm trung bình LPS: Lipopolysaccaride LT: Heat Labiletoxin - Độc tố chịu nhiệt RPF: Rapid Permeability Factor - Độc tố thẩm xuất nhanh ST: Heat Stabiletoxin - Độc tố không chịu nhiệt S: Smooth - dạng khuẩn lạc tròn, trơn, bóng láng SXT: sulfamethoxazol - trimethoprim R: Resistant - kháng Vvk: vòng vô khuẩn Danh mục bảng biểu Bảng 4.1 Số lợng, tỉ lệ vi khuẩn hiếu khí phân lập từ phân chó bình thờng 50 Bảng 4.2 Số lợng, tỉ lệ vi khuẩn hiếu khí phân lập từ phân chó viêm ruột tiêu chảy cấp tính 53 Bảng 4.3 Số lợng, tỉ lệ vi khuẩn hiếu khí phân lập đợc từ phân chó bị viêm ruột tiêu chảy mạn tính 57 Bảng 4.4 Kết kiểm tra tính mẫn cảm Salmonella Sp phân lập từ phân chó viêm ruột tiêu chảy cấp tính (n=9) 61 Bảng 4.5 Kết kiểm tra tính mẫn cảm Salmonella Sp phân lập từ phân chó viêm ruột tiêu chảy mạn tính (n=9) 63 Bảng 4.6 So sánh tỉ lệ mẫn cảm Salmonella Sp phân lập từ phân chó viêm ruột tiêu chảy cấp tính mạn tính ( n= 18) 65 Bảng 4.7 Kết kiểm tra tính mẫn cảm E.coli phân lập từ phân chó bị viêm ruột tiêu chảy cấp tính (n=11) 68 Bảng 4.8 Kết kiểm tra tính mẫn cảm E.coli phân lập từ phân chó viêm ruột tiêu chảy mạn tính (n= 15) 69 Bảng 4.9 So sánh tỉ lệ mẫn cảm E.coli phân lập từ phân chó viêm ruột tiêu chảy cấp tính mạn tính ( n= 26) 71 Bảng 4.10 Kết kiểm tra tính đơn kháng Salmonella Sp phân lập từ phân chó viêm ruột tiêu chảy cấp tính mạn tính 73 Bảng 4.11 Tính đa kháng Salmonella Sp phân lập từ phân chó viêm ruột tiêu chảy cấp tính, mạn tính với loại thuốc kháng sinh 76 Bảng 4.12 Kết kiểm tra tính đơn kháng E.coli phân lập từ phân chó viêm ruột tiêu chảy cấp tính mạn tính 79 Bảng 4.13 Tính đa kháng E.coli phân lập từ phân chó viêm ruột tiêu chảy cấp tính, mạn tính với loại thuốc kháng sinh 83 Danh mục biểu đồ Biểu đồ 4.1 So sánh tính mẫn cảm chủng Salmonella phân lập đợc từ hai thể cấp mạn tính với thuốc kháng sinh 66 Biểu đồ 4.2 So sánh tỉ lệ mẫn cảm E.coli phân lập từ phân chó viêm ruột tiêu chảy cấp tính mạn tính 72 Biểu đồ 4.3 So sánh tính đơn kháng Salmonella Sp phân lập từ phân chó viêm ruột tiêu chảy cấp tính mạn tính 74 Biểu đồ 4.4 So sánh tính đơn kháng E.coli phân lập từ phân chó viêm ruột tiêu chảy cấp tính mạn tính 80 Mở đầu 1.1 Đặt vấn đề Nớc ta thời kì phát triển theo xu hớng hội nhập với kinh tế giới khu vực, kéo theo phát triển ngành chăn nuôi nói chung chăn nuôi chó nói riêng Theo xu hớng mở cửa hội nhập toàn cầu, nhiều giống vật nuôi quý đợc nhập vào nớc ta làm phong phú đa dạng sinh học giống vật nuôi nớc Chó vật nuôi thân thiện gần gũi với ngời Chó có nhiều đặc tính quý, giống chó đợc nhập vào nớc ta ngày nhiều nhằm thoả mãn nhu cầu thị hiếu ngời, đặc biệt giống chó nghiệp vụ Chó nghiệp vụ chứng tỏ vai trò đời sống xã hội (giữ nhà, bảo vệ ), an ninh quốc phòng (đánh truy tìm tội phạm, phát ma túy ) Hiện nay, đa phần chó nghiệp vụ nớc ta giống chó ngoại lai Khả thích nghi chúng cha thật tốt với điều kiện khí hậu nh phơng thức chăn nuôi nớc ta Do mà tình hình bệnh tật chúng mối quan tâm lo lắng nhà chăn nuôi thú y Một số bệnh virus, kí sinh trùng chó có đợc biện pháp phòng hữu hiệu vaccine, thuốc tẩy kí sinh trùng Nhng bệnh gây vi khuẩn thờng xuyên xẩy Một số bệnh phổ biến gây nhiều thiệt hại cho chăn nuôi chó viêm ruột tiêu chảy vi khuẩn Bệnh xảy lứa tuổi, tỉ lệ mắc tỉ lệ chết cao đàn chó Trong số vi khuẩn đợc coi nguyên nhân gây viêm ruột tiêu chảy chó hai loại vi khuẩn Eschrichia coli Salmonella Sp đợc coi nhân tố quan trọng phổ biến Với lựa chọn sử dụng thuốc kháng sinh phù hợp, thu đợc hiệu điều trị bệnh cao Nhng lạm dụng thuốc ngày gia tăng, sử dụng thuốc kháng sinh cách bừa bãi không theo nguyên tắc dẫn tới tăng nhanh tính kháng thuốc vi khuẩn Do mà việc dùng kháng sinh để chữa bệnh nói chung bệnh viêm ruột tiêu chảy vi khuẩn nói riêng gặp khó khăn Nghiên cứu tính mẫn cảm tính kháng thuốc Eschrichia coli, Salmonella spp gây viêm ruột tiêu chảy số kháng sinh thuốc hoá học trị liệu Trên sở khoa học lựa chọn đợc loại thuốc kháng sinh có tác dụng tốt vi khuẩn, đồng thời xác định phát triển tính kháng thuốc Eschrichia coli, Salmonella spp phân lập đợc Chúng tiến hành nghiên cứu đề tài: "Kiểm tra tính mẫn cảm, tính kháng thuốc E coli Salmonella spp phân lập từ chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy vi khuẩn" 1.2 mục đích Đề tài thực nhằm mục đích sau: Xác định biến động khu hệ vi sinh vật phân chó bình thờng bị viêm ruột tiêu chảy vi khuẩn 1.1 Xác định tổng số loại vi khuẩn hiếu khí có gram phân chó bình thờng so với bị bệnh viêm ruột tiêu chảy cấp mạn tính 1.2 Đếm số lợng loại vi khuẩn có 1gram phân chó bình thờng , so sánh với bị bệnh viêm ruột tiêu chảy cấp tính mạn tính Kiểm tra tính mẫn cảm Salmonella spp, E.coli phân lập từ phân chó bị bệnh viêm ruột tiêu chảy cấp mạn tính với thuốc kháng sinh hoá học trị liệu thờng dùng điều trị 2.1 Kiểm tra tính mẫn cảm Salmonella spp phân lập từ phân chó bị bệnh Deleted: ả kết luận đề nghị 5.1 kết luận Từ kết thí nghiệm thu đợc trình bầy đa kết luận sau: 1.1 Kết xác định biến động khu hệ vi sinh vật phân chó bình thờng bị viêm ruột tiêu chảy vi khuẩn cho thấy phân chó bình thờng chó bị viêm ruột tiêu chảy xuất loại vi khuẩn: Salmonella Sp, E.coli, Streptococcus Staphylococcus Nhng chó bị viêm ruột tiêu chảy hai thể cấp mạn tính có biến động mạnh số lợng loại vi khuẩn, đặc biệt vi khuẩn Salmonella spp, E.coli Sự thay đổi tỉ lệ xuất nh số lợng Salmonella điều đáng ý chó bị viêm ruột cấp Số lợng Salmonella tăng lên gấp 70 - 80 lần so với bình thờng Đặc biệt nhóm I tỉ lệ xuất cao 100% có số lợng 8,451 tỉ/1gram phân Nhóm II tỉ lệ xuất 90,91% với số lợng 8,167 tỉ/1gram phân; nhóm III tỉ lệ xuất thấp 88,89% đồng thời số lợng thấp 7,862 tỉ/1gram phân Điều có nghĩa chó dới năm tuổi mẫn cảm với Salmonella, kết phù hợp với tài liệu Craig E Green ( 1984) [41] Khi chó bị bệnh viêm ruột tiêu chảy mạn tính: Tỉ lệ xuất Salmonella mẫu tăng so với bình thờng, nhng giảm so với cấp tính Cụ thể tỉ lệ xuất nhóm II 90,91%; nhóm III giảm xuống 80% Số lợng vi khuẩn Salmonella tăng so với bình thờng nhng lại giảm so với cấp tính, số lợng Salmonella nhóm II 2,963 tỉ/1gram phân; nhóm III 1,344 tỉ/1gram phân Nếu nh tiêu chảy cấp tính số lợng Salmonella nhiều E.coli mạn tính số lợng E.coli lại cao so với số lợng Salmonella 87 1.2 Kết kiểm tra tính mẫn cảm Salmonella spp, E.coli phân lập từ phân chó bị bệnh viêm ruột tiêu chảy cấp mạn tính với thuốc kháng sinh hoá học trị liệu thờng dùng điều trị: Độ mẫn cảm chủng Salmonella Sp, E.coli với thuốc kiểm tra thể mạn tính bị giảm so với thể cấp tính Cả hai loại vi khuẩn mẫn cảm với thuốc: Ciprofloxacin, Norfloxacin Ofloxacin, thuốc sử dụng điều trị bệnh viêm ruột tiêu chảy vi khuẩn cho hiệu cao 1.3 Kết kiểm tra tính kháng thuốc Salmonella spp, E.coli phân lập từ phân chó bị viêm ruột tiêu chảy cấp mạn tính với thuốc kháng sinh hoá học trị liệu thờng dùng điều trị: Các chủng Salmonella Sp phân lập từ bệnh thể cấp, mạn tính có tỉ lệ đơn kháng cao, cụ thể: 100% số chủng Salmonella Sp từ thể mạn tính kháng lại STX; Ampicillin; Gentamycin; Erythromycin Các chủng Salmonella spp phân lập từ bệnh thể cấp, mạn tính có tỉ lệ đa kháng cao với thuốc kháng sinh thí nghiệm: chủng Salmonella Sp phân lập đợc từ thể cấp tính đa kháng chủ yếu với 2- loại thuốc chiếm 55,55%, chủng Salmonella Sp phân lập từ thể mạn tính đa kháng chủ yếu với 5- loại thuốc chiếm 77,77% 1.3.2 Kết kiểm tra tính kháng thuốc E.coli phân lập từ phân chó bị viêm ruột tiêu chảy cấp mạn tính với thuốc kháng sinh hoá học trị liệu thờng dùng điều trị: + E.coli phân lập từ thể cấp tính: có 5/11chủng E.coli đa kháng chiếm (45,45%) Trong có 1/11 kháng với loại thuốc (9,09%), 1/11 chủng kháng lại loại thuốc (9,09%), 3/11 chủng kháng lại loại thuốc (27,27%) + E.coli phân lập từ thể mạn tính: Tổng số chủng E.coli đa kháng 10/15 chủng (66,66%) Trong có 1/15 kháng với loại thuốc (6,67%), 1/15 chủng kháng lại loại thuốc (6,67%), 2/15 chủng kháng lại loại thuốc 88 (13,33%), 3/15 chủng kháng lại loại thuốc (20%), 3/15 chủng kháng lại loại thuốc (20%) Tỉ lệ Salmonella spp, E.coli đơn kháng đa kháng tăng lên nhiều trờng hợp chó bị viêm ruột tiêu chảy mạn Điều nguyên nhân sau: chọn sai thuốc, đặc biệt sử dụng sai liều Khi chó bị tiêu chảy cho uống nên lợng thuốc đờng tiêu hóa bị theo phân nhanh không trì đợc nồng độ tác dụng thuốc thể dẫn đến vi khuẩn kháng thuốc Cũng chó bị viêm ruột tiêu chảy kế phát từ bệnh khác 5.2 Tồn đề nghị 2.1 Tồn Do điều kiện kinh phí có hạn chế, nên cha xác định đợc typ, độc lực chủng vi khuẩn Salmonella Sp, E.coli phân lập đợc 2.1 Đề nghị Đề nghị tiếp tục nghiên cứu sâu bệnh viêm ruột tiêu chảy vi khuẩn để có đánh giá đầy đủ bệnh Mở rộng nghiên cứu vai trò gây bệnh vi khuẩn Salmonella Sp, E.coli , xác định yếu tố độc lực, định typ loại vi khuẩn để có đánh giá cụ thể vai trò gây viêm ruột tiêu chảy loại vi khuẩn Tiếp tục nghiên cứu tính mẫn cảm không vi khuẩn Salmonella mà tập đoàn vi khuẩn, loại vi khuẩn với nhiều loại thuốc để có đánh giá sâu sắc toàn diện tính mẫn cảm vi khuẩn gây viêm ruột tiêu chảy loại thuốc kháng sinh thuốc hoá học trị liệu 89 Tài liệu tham khảo Tiếng việt Vũ Triệu An (1978), Giáo trình sinh lý bệnh học, Nxb y học, Hà Nội Đỗ Trung Cứ (2003), Phân lập xác định yếu tố gây bệnh Salmonella lợn số tỉnh miền núi phía bắc biện pháp điều trị, Luận án tiến sĩ Nông nghiệp, Viện Thú y, Hà Nội Lê Minh Chí (1999), Bệnh tiêu chảy gia súc, Báo cáo hội thảo khoa học thú y Cục Thú y, Hà Nội Phạm Văn Chức (1997), Cơ chế kháng khuẩn việc sử dụng phối hợp kháng sinh thú y, Khoa học kỹ thuật thú y, tập 4, tr 85 Đào Trọng Đạt (1997), Bệnh thờng thấy chó biện pháp phòng trị, NXb Nông nghiệp, Hà Nội Đào Trọng Đạt, Phan Thanh Phợng, Lê Ngọc Mỹ, Huỳnh Văn Kháng (1996) Bệnh lợn nái lợn con, NXB Nông nghiệp, Hà Nội, tr 44-81 Nguyễn Bá Hiên (2001), Một số vi khuẩn đờng ruột thờng gặp biến động chúng gia súc khoẻ mạnh bị tiêu chảy nuôi vùng ngoại thành Hà Nội, điều trị thử nghiêm, Luận án tiến sĩ nông nghiệp Trờng ĐH Nông nghiệp I, Hà Nội Phạm Khắc Hiếu, Bùi Thị Tho (1995), Kết kiểm tra tính kháng thuốc E.coli 20 năm qua (1975 1995), NXB Nông nghiệp, Hà Nội, tr 195 196 Phạm Khắc Hiếu, Lê Thị Ngọc Diệp, Trần Thị Lộc (1998), Stress 90 Deleted: ả ả ả ả ả ả ả ả ả ả Mục lụcả Phần thứ nhất: Mở đầu 1ả 1.1 Đặt vấn đề 1ả 1.2 Mục đích 2ả Phần thứ hai: Tổng quan tài liệu 4ả 2.2 Hội chứng tiêu chảy chó 4ả 2.2.1 Khái niệm Error! Bookmark not defined.ả 2.2.2 Nguyên nhân gây tiêu chảy 4ả 2.2.3 Viêm ruột tiêu chảy vi khuẩn 5ả 2.3 Các vi khuẩn hiếu khí thờng gặp đờng ruột 10ả 2.3.1 Escherichia coli 10ả 2.3.2 Salmonella 15ả 2.3.3 Staphylococcus 19ả 2.3.4 Streptococcus 21ả 2.4 Những hiểu biết thuốc kháng sinh 22ả 2.4.1 Khái niệm 22ả 2.4.2 Phân loại kháng sinh 22ả 2.4.3 Cơ chế tác dụng thuốc kháng sinh 24ả 2.4.4 Phơng pháp xác định độ mẫn cảm vi khuẩn gây bệnh số thuốc kháng sinh thuốc hoá học trị liệu 25ả 2.5 Hiện tợng kháng thuốc vi khuẩn 26ả 2.5.1 Khái niệm 27ả 2.5.2 Phân loại tợng kháng thuốc 27ả 2.5.3 Cơ chế kháng thuốc vi khuẩn 28ả 2.6 Hiện tợng kháng thuốc vi khuẩn E.coli, Salmonella 30ả Section Break (Next Page) Phần thứ ba Đối tợng, nguyên liệu, nội dung phơng pháp nghiên cứu 33ả 3.1 Đối tợng nghiên cứu 33ả 3.2 Nguyên liệu 33ả 3.3 Nội dung nghiên cứu 34ả 3.2.1 Phân lập giám định vi khuẩn có phân chó bình thờng, chó bị viêm ruột tiêu chảy thể cấp mạn tính Error! Bookmark not defined.ả 3.2.2 Xác định độ mẫn cảm E.coli, Salmonella sp phân lập từ phân chó viêm ruột tiêu chảy thể cấp mạn tính với thuốc thí nghiệm Error! Bookmark not defined.ả 3.2.3 Xác định kháng thuốc E.coli, Salmonella phân lập từ phân chó viêm ruột tiêu chảy cấp tính mạn tính với thuốc thí nghiệm Error! Bookmark not defined.ả 3.3 Phơng pháp nghiên cứu 35ả 3.3.1 Phơng pháp lấy mẫu phân lập, [1] đời sống ngời vật nuôi, NXB Nông nghiệp, Hà Nội 10 Phạm Khắc Hiếu (1998), ứng dụng chế phẩm vi sinh vật hữu hiệu EM phòng trị hội chứng tiêu chảy lợn con, Báo cáo khoa học hội nghị tổng kết năm 1998 chơng trình nghiên cứu đề tài khoa học cấp nhà nớc EM, Hà Nội 11 Vũ Khắc Hùng, Lê Văn Tạo, Ephylipcinec (2005), Xác định loại độc tố thờng gặp vi khuẩn E.coli phân lập từ lợn bị bệnh tiêu chảy phơng pháp PCR, Tạp chí KHKT thú y, XII(2) 12 Trần Bá Hoành (1979), Học thuyết tiến hoá, Nxb Giáo dục, Hà nội 13 Hoàng Tích Huyền (1993), Giáo trình dợc lý học, tập II, Nxb y học, Hà Nội 14 Phạm Khuê, Phan Lục (1996) , Giáo trình kí sinh trùng bệnh kí sinh trùng thú y, NXB Nông nghiệp, Hà Nội 15 Hồ Văn Nam, Nguyễn Thị Đào Nguyên, Trơng Quang, Phùng Quốc Chớng, Chu Đức Thắng, Phạm Ngọc Thạch (1997), Bệnh viêm ruột ỉa chảy lợn, KHKT thú y, IV(2), tr.39-45 16 Hồ Văn Nam, Nguyễn Thị Đào Nguyên, Phạm Ngọc Thạch (1997), Giáo trình bệnh nội khoa gia súc, Nxb Đại học nông nghiệp I, Hà Nội 17 Nguyễn Thị Nội, Nguyễn Ngọc Nhiên, Cù Hữu Phú, Nguyễn Thị Sở, Trần Thị Thu Hà (1989), Kết điều tra tình hình nhiễm vi khuẩn đờng ruột số sở chăn nuôi, Kết nghiên cứu khoa học kỹ thuật thú y, Viện Thú y (1985 1989) NXB Nông nghiệp, Hà Nội, tr 50-53 18 Vũ Văn Ngữ cộng (1979) Loạn khuẩn đờng ruột tác dụng điều trị Colisuptil, NXB Y học, Hà Nội 91 19 Sử An Ninh (1993), Kết bớc đầu tìm hiểu nhiệt độ, độ ẩm thích hợp phòng bệnh lợn phân trắng, Kết nghiên cứu khoa học chăn nuôi thú y, Đại học Nông nghiệp I (1991 1993), NXB Nông nghiệp, Hà Nội, tr48 20 Nguyễn Vĩnh Phớc (1976), Vi sinh vật thú y, tập I, Nxb đại học trung học chuyên nghiệp, Hà Nội 21 Nguyễn Vĩnh Phớc (1970), Vi sinh vật thú y, tập I, NXB Đại học trung học chuyên nghiệp, Hà Nội, tr.136 137 22 Nguyễn Vĩnh Phớc (1978), Giáo trình bệnh truyền nhiễm gia súc, NXB Nông nghiệp, Hà Nội 23 Phan Thanh Phợng (1985), Phòng chống bệnh phó thơng hàn lợn NXB Nông thôn, Hà Nội 24 NiconxkiV.V (1986), Bệnh lợn (Phạm Quân, Nguyễn Đình Trí dịch), NXB Nông nghiệp, Hà Nội 25 Đoàn Băng Tâm (1987), Bệnh động vật nuôi, tập 1, NXB Khoa học kỹ thuật, Hà Nội, tr 119-135 26 Nguyễn Phớc Tơng (2002), Vấn đề vi khuẩn kháng thuốc chiến lợc phòng vệ , Tạp chí KHKT thú y, IX(1) 27 Nguyễn Nh Thanh cộng (2001), Vi sinh vật thú y, NXB Nông nghiệp I Hà Nội 28 Nguyễn Nh Thanh (1974), Giáo trình thực tập vi sinh vật thú y, Nxb nông nghiệp, Hà Nội 29 Nguyễn Nh Thanh, Nguyễn Bá Hiên, Trần Thị Lan Hơng (2001), Vi sinh vật thú y, Nxb nông nghiệp, Hà Nội 30 Nguyễn Nh Thanh (1990), Vi sinh vật học đại cơng, NXB Nông nghiệp, 92 Hà Nội 31 Bùi Thị Tho (1996), Nghiên cứu tác dụng số thuốc hoá học trị liệu phytoncyd E.coli phân lập từ bệnh lợn phân trắng, Luận án PTS nông nghiệp, Trờng ĐH Nông nghiệp I, Hà Nội 32 Bùi Thị Tho (2003), Thuốc kháng sinh nguyên tắc sử dụng chăn nuôi thú y, Nxb Hà Nội, Hà Nội 33 Trịnh Văn Thịnh (1964), Giáo trình bệnh nội khoa bệnh ký sinh trùng thú y, NXB Nông thôn, Hà Nội 34 Đinh Bích Thúy, Nguyễn Thị Thạo (1995), Nguyên cứu tình hình sử dụng kháng sinh tính nhạy cảm kháng sinh vi khuẩn gây bệnh chăn nuôi thú y, Khoa học kĩ thuật thú y, III (3), tr 36-38 35 Đinh Bích Thuý, Nguyễn Thị Thạo (1995), Nghiên cứu độ nhạy cảm với kháng sinh vi khuẩn gây bệnh tiêu chảy lợn, Tạp chí KHKT thú y, II(3) 36 Hoàng Văn Tuấn, Lê Văn Tạo, Trần Thị Hạnh (1998), Kết điều tra tình hình bệnh tiêu chảy lợn trại giống lợn hớng nạc, Tạp chí khoa học kĩ thuật Thú y, V (4) 37 Tạ Thị Vịnh (1990), Giáo trình sinh lí bệnh gia súc, Trờng ĐHNN I , Hà Nội 38 Alaine Douart (2004), Điều trị kháng sinh bệnh tiêu hoá, (Thanh Thuận dịch), Tạp chí KHKT thú y, XII (2) Tiếng anh 39 Bochna A B R., H Huang., S.L Schieven., S.N Ames (1980), Positive Selection of loss of tetracylineresistanec, J.Bacterial 143,pp 926 933 93 40 Brown.V (1981), Escherichia coli cells certaning The cal.r.plomid produce the iron ionopare are robaction, FEMS Microbiel Lett, pp 225-228 41 Craig E Green (1984), Infectious diseases in dogs, W.B Sauder company 42 CJ Teale, S Cobb, PK Martin, Dr G Watkin (2002), VLA Antimicrobial sensitivity report 2002, St Clements House, pp 52 - 62 43 David McClugage, D.V.A, C.V.A (2005), Treating acute diarrhea and chronic diarrhea in dogs, http:// www.wellvet.com/ diarrheadog html Accesed 20/12/2005 44 Dean J.M., M.I Luster., G.A Boorman (1982), Immunoxicology, Immunopharcology, P Sirois and M Rolapteszyky, Elsevier Biomedi Cal Press, pp 144 200 45.Erhard Tietze T., R Walfgang., R Heinz (1983), Palasmid patternof Salmonella typhimurium Strain of N.C phagentype from G.D.R.Instr, Eperi Epidemial, Wernigerode CRDR, pp 69 77 46 Fairbrathe J.M (1992), Enterie Coli bacillosis Discases of Swine, IOWA State university press amess IOWA USA 7th edition pp 489-497 47 Fairbrother J.M, Best chinge H.U, Nielsen O, N, Pohlenz J.F (1992), Escherichia coli infection Diseases of swine seventh edition walfe publissheng ltd Australian, pp 489 497 48 Gibb A.P, C.S Lewin and O.J Garden (1991), Development of quinolone resistence and multiple antibiotie resistance in Salmonella bovis morbificans in a panereatie abscess, J Antimierobiological chemotherapy 28, pp.318-321 49 Griggs, D.J, M.C Mal, Y.F.Jin and I.J.V.Piddock (1994), Quinolon resistance in veterinary isolates of salmonella, J.Anti,ocrobiological chemotherapy JJ, pp 1173-1189 50 Heisig.P, Y Graser E Halle.E.Krataz.I Klare, W.Presber and B.Wiederman 94 (1993), Fluroquinolone resistance in Salmonella typhi murium abrsta 42A, Inprocecding of the 18th International Congress of Chemotherapy, Stockhom 51 Jones G.W., Richardson A.L (1981), The atatchement to invasion of hela cell by salmonellatyphimurium the contribution of monose Senstive and monose Senstive heamaghitinate activities, J.Gen Microbiol, pp 361-370 52 Luca Guardabassi, Stefan Schwarz and David H Lloyd (2004), Journal of Antimcrobial Chemotherapy: Pet animals as reservoirs of antimicrobial reistant bacteria, Oxford university press, pp 321 - 332 53 Oxoid (1982) The oxoid manuall of culture media, ingredients and other labortory services, Oxford university press 95 Phụ lục Đặc tính nuôi cấy vi khuẩn môi trờng phân lập Hình thái Staphylococcus Chapman Agar Hình thái Streptococcus Edwards Medium Hình thái E.coli MacConkey Agar Hình thái Salmonella BGA Hình thái E.coli Brilliant Green Agar Hình thái Salmonella MacConkey Agar 96 số hình ảnh kháng sinh đồ với salmonella spp, E.coli phân lập từ phân chó viêm ruột tiêu chảy Kháng sinh đồ với Salmonella spp phân lập từ phân chó viêm ruột tiêu chảy cấp tính Kháng sinh đồ với Salmonella spp phân lập từ phân chó viêm ruột mạn tính 97 Kháng sinh đồ với E.coli phân lập từ phân chó viêm ruột mạn tính Kháng sinh đồ với E.coli phân lập từ phân chó viêm ruột cấp 98 Page 90: [1] Deleted Unknown Mục lục Phần thứ nhất: Mở đầu 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích .2 Phần thứ hai: Tổng quan tài liệu 2.2 Hội chứng tiêu chảy chó 2.2.1 Khái niệm Error! Bookmark not defined 2.2.2 Nguyên nhân gây tiêu chảy 2.2.3 Viêm ruột tiêu chảy vi khuẩn 2.3 Các vi khuẩn hiếu khí th-ờng gặp đ-ờng ruột 10 2.3.1 Escherichia coli 10 2.3.2 Salmonella 15 2.3.3 Staphylococcus 19 2.3.4 Streptococcus 21 2.4 Những hiểu biết thuốc kháng sinh 22 2.4.1 Khái niệm 22 2.4.2 Phân loại kháng sinh 22 2.4.3 Cơ chế tác dụng thuốc kháng sinh 24 2.4.4 Ph-ơng pháp xác định độ mẫn cảm vi khuẩn gây bệnh số thuốc kháng sinh thuốc hoá học trị liệu 25 2.5 Hiện t-ợng kháng thuốc vi khuẩn 26 2.5.1 Khái niệm 27 2.5.2 Phân loại t-ợng kháng thuốc 2.5.3 Cơ chế kháng thuốc vi khuẩn 27 28 2.6 Hiện t-ợng kháng thuốc vi khuẩn E.coli, Salmonella .30 Phần thứ ba Đối t-ợng, nguyên liệu, Section nội dung Breakvà (Continuous) ph-ơng pháp nghiên cứu 33 3.1 Đối t-ợng nghiên cứu 33 3.2 Nguyên liệu 33 3.3 Nội dung nghiên cứu 34 3.2.1 Phân lập giám định vi khuẩn có phân chó bình th-ờng, chó bị viêm ruột tiêu chảy thể cấp mạn tính Error! Bookmark not defined 3.2.2 Xác định độ mẫn cảm E.coli, Salmonella sp phân lập từ phân chó viêm ruột tiêu chảy thể cấp mạn tính với thuốc thí nghiệm Error! Bookmark not defined 3.2.3 Xác định kháng thuốc E.coli, Salmonella phân lập từ phân chó viêm ruột tiêu chảy cấp tính mạn tính với thuốc thí nghiệm Error! Bookmark not defined 3.3 Ph-ơng pháp nghiên cứu 35 3.3.1 Ph-ơng pháp lấy mẫu phân lập, giám định vi khuẩn có mặt phân chó viêm ruột tiêu chảy Error! Bookmark not defined 3.4.3 Ph-ơng pháp phân lập giám định loại vi khuẩn 37 3.4.4 Xác định độ mẫn cảm, kháng thuốc E.coli, Salmonella sp phân lập từ phân chó viêm ruột tiêu chảy vi khuẩn với số thuốc kháng sinh thuốc hoá học trị liệu ph-ơng pháp làm kháng sinh đồ 37 3.4 Xử lý số liệu 39 phần thứ t-: Kết thảo luận 42 4.1 Biến động số l-ợng vi khuẩn phân chó tiêu chảy 42 4.1.1 Số l-ợng, tỷ lệ vi khuẩn hiếu khí phân lập từ phân chó bình th-ờng 43 4.1.2 Số l-ợng, tỷ lệ vi khuẩn hiếu khí phân lập từ phân chó viêm ruột tiêu chảy cấp tính 45 4.1.3 Số l-ợng, tỷ lệ vi khuẩn hiếu khí phân lập từ phân chó viêm ruột tiêu chảy mạn tính 48 Section Break (Continuous) [...].. .vi m ruột tiêu chảy cấp, mạn tính với các thuốc kháng sinh và hoá học trị liệu thờng dùng trong điều trị 2.2 Kiểm tra tính mẫn cảm của E.coli phân lập từ phân chó bị bệnh vi m ruột tiêu chảy cấp và mạn tính với các thuốc kháng sinh và hoá học trị liệu thờng dùng trong điều trị 3 Kiểm tra tính kháng thuốc của Salmonella spp, E.coli phân lập từ phân chó bị vi m ruột tiêu chảy cấp và mạn tính với... mạn tính với các thuốc kháng sinh và hoá học trị liệu thờng dùng trong điều trị 3.1 Kiểm tra tính kháng thuốc của Salmonella spp phân lập từ phân chó bị vi m ruột tiêu chảy cấp và mạn tính với các thuốc kháng sinh và hoá học trị liệu thờng dùng trong điều trị 3.2 Kiểm tra tính kháng thuốc của E.coli phân lập từ phân chó bị vi m ruột tiêu chảy cấp và mạn tính với các thuốc kháng sinh và hoá học trị liệu... kháng thuốc của các chủng Salmonella spp, E.coli phân lập từ phân chó bị vi m ruột tiêu chảy ở 2 thể bệnh cấp tính và mạn tính Đề tài đợc thực hiện tại Trung tâm Nghiên cứu Chó nghiệp vụ và phòng thí nghiệm Bộ môn Nội - Chẩn - Dợc - Độc chất, khoa Chăn nuôi - Thú y trờng Đại học Nông nghiệp I 10 2 Tổng quan tài liệu 2.1 bệnh tiêu chảy ở chó Bệnh vi m ruột tiêu chảy phổ biến ở các loài chó cảnh và chó. .. nhỏ hay vi khuẩn mọc sát vào mép khoanh giấy thì vi khuẩn đó không nhạy cảm với loại kháng sinh có tẩm trong khoanh giấy 2.5 Hiện tợng kháng thuốc của vi khuẩn Các nghiên cứu về tính kháng thuốc của vi khuẩn phân lập từ chó, mèo Luca Guardabassi (2004) cho biết: các nghiêm cứu đã chỉ ra nhiều vi khuẩn phân lập từ chó xuất hiện sự đa kháng với nhiều lọai thuốc kháng sinh thờng đợc sử dụng (nh: E.coli, ... truyền từ vi khuẩn này sang vi khuẩn khác 2.5.3 Cơ chế kháng thuốc của vi khuẩn Khả năng kháng thuốc của vi khuẩn có đợc do các biến đổi ở hệ gen của chúng, đó là sự gia tăng về tần số gen kháng thuốc gây ra, do chọn lọc rồi truyền theo chiều dọc (vertical transfer) từ bố mẹ di truyền cho con cái Trong thực tế sự nảy sinh khả năng kháng thuốc của vi khuẩn chủ yếu lại do khả năng truyền các gen kháng thuốc. .. gây bệnh tiêu chảy ở chó 15 2.1.4 Cơ chế gây vi m ruột tiêu chảy do vi khuẩn Các vi sinh vật gây bệnh không giống hệ vi khuẩn c trú thờng xuyên trong đờng ruột thờng do một nguyên nhân nào đó các vi khuẩn phát triển nhanh chóng cả về số lợng và độc lực Một số loại vi khuẩn có khả năng xâm nhập vào lớp tế bào biểu mô, ở đây chúng phát triển nhanh về số lợng, kích thích các tế bào gây vi m, dịch rỉ vi m. .. qua hàng rào biểu mô ruột từ 4872 giờ sau khi sinh Ngay sau đó, các tế bào biểu mô ruột cũng ngừng hấp thu globulin miễn dịch (Staley, 1969) Vi m ruột tiêu chảy ở chó xảy ra ở 2 thể: cấp tính và mạn tính 2.2.2 Vi m ruột cấp tính Vi m ruột thể cấp tính xảy ra đột ngột, kéo dài một vài ngày đến 7 ngày Vi khuẩn sau khi xâm nhập vào đờng tiêu hoá của chó, sẽ đến c trú ở niêm mạc dạ dày, ruột Chúng phát triển... Staphylococcus intermedius, Enterococci, Salmonella typhimurium) Nhóm Flouroquinolon mới đợc sử dụng rộng dãi ở những năm gần đây nhng cũng đã xuất hiện nhiều vi khuẩn có xu hớng kháng với thuốc: Pseudomonas, Staphylococcus intermedius, E.coli, Streptococcus phân lập từ chó bị vi m đờng tiết niệu và bị vi m ruột Nghiên cứu tính kháng thuốc của 752 chủng E.coli đợc phân lập ở ngời và động vật, Carl M Schroeder... cùng kháng nguyên O và tạo hàng rào bảo vệ vi khuẩn chống lại ngoại cảnh và hiện tợng thực bào Kháng nguyên H không có vai trò trong vi c tạo độc lực cho vi khuẩn 23 2.3.2.5 Yếu tố bám dính (Fimbriae) Sự bám dính của vi khuẩn gây bệnh trên nhung mao của niêm mạc ruột (tế bào Epitel) là bớc đầu tiên và cơ bản cho vi c gây bệnh ở phần lớn các loài vi khuẩn gây bệnh, nó giúp cho vi khuẩn xâm nhập vào cơ... 2.5.2 Phân loại hiện tợng kháng thuốc Dựa vào nguồn gốc chia hiện tợng kháng thuốc làm hai loại: 2.5.2.1 Kháng thuốc tự nhiên Là hiện tợng kháng thuốc của bản thân vi khuẩn vốn bình thờng đã có sẵn một chất nào đó có khả năng chống lại tác dụng của chất kháng sinh 34 2.5.2.2 Kháng thuốc thu đợc Là hiện tợng kháng thuốc phát sinh do sự tiếp xúc nhiều lần với chất kháng sinh hoặc lây truyền từ vi khuẩn ... kiểm tra tính mẫn cảm Salmonella Sp phân lập từ phân chó vi m ruột tiêu chảy cấp tính (n=9) 61 Bảng 4.5 Kết kiểm tra tính mẫn cảm Salmonella Sp phân lập từ phân chó vi m ruột tiêu chảy mạn tính. .. Kết kiểm tra tính đơn kháng Salmonella Sp phân lập từ phân chó vi m ruột tiêu chảy cấp tính mạn tính 73 Bảng 4.11 Tính đa kháng Salmonella Sp phân lập từ phân chó vi m ruột tiêu chảy cấp tính, ... Kết kiểm tra tính mẫn cảm E.coli phân lập từ phân chó vi m ruột tiêu chảy mạn tính (n= 15) 69 Bảng 4.9 So sánh tỉ lệ mẫn cảm E.coli phân lập từ phân chó vi m ruột tiêu chảy cấp tính mạn tính