Trường Đại học sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Lời cảm ơn Bản khoá luận tốt nghiệp với đề tài: “Nghiên cứu thành phần hợp chất steroid từ na rừng” thực hoàn thành trường Đại học sư phạm Hà Nội 2, Viện Hoá học hợp chất thiên nhiên- Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam Trước tiên, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Văn Bằng, người hướng dẫn đề tài tận tình bảo em trình hoàn thành khoá luận tốt nghiệp Em xin bày tỏ lòng biết ơn tới TS Phan Văn Kiệm thầy cô, cán phòng xúc tác hữu cơ, Viện Hoá học hợp chất thiên nhiên- Viện Khoa học công nghệ Việt Nam Nhân dịp này, em xin gửi lời cảm ơn tới thầy cô giáo bạn bè khoa Hoá học trường Đại học sư phạm Hà Nội đóng góp ý kiến tạo điều kiện giúp đỡ em suốt trình làm khoá luận Trong trình nghiên cứu, thân em cố gắng, khoá luận thiếu sót Em kính mong nhận góp ý, bảo thầy cô bạn sinh viên để đề tài em ngày hoàn thiện Hà Nội, ngày 10 tháng 05 năm 2009 Sinh viên: Lê Thị Hương Lê Thị Hương K31A- Khoa Hoá học Trường Đại học sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Lời cam đoan Tôi xin cam đoan kết khoá luận: “Nghiên cứu thành phần hợp chất steroid từ na rừng(Kadsura Coccinea)” nghiên cứu không chép Nếu có vấn đề không đúng, xin hoàn toàn chịu trách nhiệm Lê Thị Hương K31A- Khoa Hoá học Trường Đại học sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Mục lục Danh mục chữ viết tắt Danh mục hình vẽ bảng biểu Trang Mở đầu ……………………………………………………………………….1 Chương 1: Tổng quan …………………………………………………… 1.1 Tổng quan na rừng ………………… … ….………………… 1.1.1 Phân bố, sinh thái……………………….………………………… 1.1.2 Đặc điểm…………………………………………… …………… 1.1.3 Những nghiên cứu ban đầu na rừng …………….………… 1.1.4 Bộ phận dùng ……………………….…………………………… 1.1.5 Tính vị, tác dụng …………………….…………………………… 1.1.6 Công dụng ……………………………….……………………… 1.2 Tổng quan phương pháp chiết mẫu thực vật………… ……… 1.2.1 Chọn dung môi chiết ………………….………………………… 1.2.2 Quá trình chiết……………………………… …………………… 1.3 Tổng quan phương pháp sắc kí…………………………………8 1.3.1 Sắc kí cột……………………………………….………… ………8 1.3.2 Sắc kí lớp mỏng…………………….……………………………10 1.4 Tổng quan chung phương pháp xác định cấu trúc hóa học hợp chất hữu cơ…………………… ……………………………………………11 1.4.1 Phổ hồng ngoại ( Infrared Spectroscopy)………… ……………11 1.4.2 Phổ khối lượng ( Mass Spectroscopy)…………….…… …… 12 1.4.3 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy, NMR) …………………………… ………………………13 1.5 Giới thiệu lớp chất Steroid, thành phần hóa học có Na rừng…………………………… ……… ……………………16 1.5.1 Giới thiệu chung ………………………….……….… ……………16 1.5.2 Sườn Steroid ……………………………….… …… 17 1.5.3 Một số đại diện Steroid thiên nhiên ………………………… ……19 Lê Thị Hương K31A- Khoa Hoá học Trường Đại học sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Chương 2: Đối tượng phương pháp nghiên cứu ………… ……20 2.1 Đối tượng nghiên cứu……………………….…………………….……20 2.2 Phương pháp phân lập hợp chất……………… …………………20 2.2.1 Sắc kí lớp mỏng ( TLC)………….…………………………….…20 2.2.2 Sắc kí lớp mỏng điều chế ……………… ………………………20 2.2.3 Sắc kí cột (CC) …………………………….…………………….20 2.3 Phương pháp xác định cấu trúc hóa học hợp chất………… …20 2.3.1 Điểm nóng chảy (Mp)…………………………………………… 21 2.3.2 Độ quay cực [a]D………………………………………………… 21 2.3.3 Phổ khối lượng (FAB - MS ESI)……………………………….21 2.3.4 Phổ hồng ngoại (IR) ………………….…………………….……21 2.3.5 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân ( NMR) ………………… …….21 2.4 Dụng cụ thiết bị………………………………… ………………….21 2.4.1 Dụng cụ thiết bị tách chiết …………………………………….21 2.4.2 Dụng cụ thiết bị xác định cấu trúc ……… ……………….…22 2.5 Hóa chất ………………………………………………………………22 2.6 Phân lập hợp chất………………………………………………….23 2.7 Hằng số vật lí kiện phổ hợp chất ………… ……….26 2.7.1 Hợp chất 1: 20(R),24(E)-3-oxo-9õ-lanosta-7,24-dien-26-oic acid 26 2.7.2 Hợp chất 2: b- Sitosterol …………… ………………………… 26 Chương 3: Kết thảo luận ……………………… ……………….28 3.1 Xác định cấu trúc hóa học hợp chất………… ……………….28 3.1.1 Hợp chất 1: 20(R),24(E)-3-oxo-9õ-lanosta-7,24-dien-26-oic acid 28 3.1.2 Hợp chất 2: b- Sitosterol ………………………………………… 33 3.2 Tổng hợp hợp chất Steroid phân lập từ Na rừng………37 Kết luận …………………… …………………………………38 Tài liệu tham khảo ………………………….…………………….………38 Lê Thị Hương K31A- Khoa Hoá học Trường Đại học sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Danh mục chữ viết tắt [ỏ]D 13 Độ quay cực Specific Optical Rotation Phổ cộng hưởng từ hạt nhân cacbon 13 C- NMR Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton H- NMR Proton Magnetic Resonance Spectroscopy H-1H COSY H-1H Chemical Shift Correlation Spectroscopy Phổ cộng hưởng từ hạt nhân hai chiều 2D-NMR Two-Dimensional NMR CC Sắc ký cột Column Chromatography DEPT Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer EI-MS Phổ khối lượng va chạm electron Electron Impact Mass Spectrometry Phổ khối lượng bắn phá nguyên tử nhanh FAB-MS Fast Atom Bombardment Mass Spectrometry HMBC Heteronuclear Multiple Bond Connectivity HMQC Heteronuclear Multiple Quantum Coherence HR-FAB-MS Phổ khối lượng bắn phá nguyên tử nhanh phân giải cao High Resolution Fast Atom Bombardment Mass Spectrometry IR Phổ hồng ngoại (Infrared Spectroscopy) Me Nhóm metyl MS Phổ khối lượng (Mass Spectroscopy) NOESY Nuclear Overhauser Effect Spectroscopy TLC Lê Thị Hương Sắc ký lớp mỏng (Thin Layer Chromatography) K31A- Khoa Hoá học Trường Đại học sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp DANH MỤC CÁC HÌNH VÀ BẢNG BIỂU Tên hình bảng biểu Trang Hình 1.1 Na rừng (Kadsura Coccinea) Hình 2.6a Sơ đồ chiết xuất phân lớp hoạt chất 23 Hình 2.6b Sơ đồ tách phân đoạn cặn KC1 tinh hợp chất 24 Hình 2.6c Sơ đồ tinh chế hợp chất từ phân đoạn KC1E 25 Hình 3.1a Phổ 1H- NMR hợp chất 28 Hình 3.1b Cấu trúc hoá học hợp chất 29 Hình 3.1c Phổ 13C- NMR hợp chất 29 Hình 3.1d Các phổ DEPT hợp chất 30 Hình 3.1e Phổ HSQC hợp chất 30 Hình 3.1f Phổ HMBC hợp chất 32 Hình 3.1g Phổ khối lượng ESI - MS hợp chất 33 Hình 3.2a Cấu trúc hoá học hợp chất 34 Hình 3.2b Phổ 1H- NMR hợp chất 34 Hình 3.2c Phổ 13C- NMR hợp chất 35 Hình 3.2d Phổ 13C- NMR dãn rộng hợp chất 35 Bảng :Số liệu phổ NMR hợp chất 31 Bảng :Kết phổ NMR hợp chất 36 Bảng :Tổng hợp hợp chất Steroid phân lập từ na 37 rừng Lê Thị Hương K31A- Khoa Hoá học Trường Đại học sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Mở đầu Từ xa xưa, người biết khai thác tự nhiên để phục vụ cho sống mình, từ nhu cầu thiết yếu ăn, mặc, việc tìm thảo dược để điều trị bệnh, tăng cường vẻ đẹp, kéo dài tuổi thọ…Trong tiến trình ấy, thực vật đóng vai trò vô quan trọng Như biết, Việt Nam nằm khu vực nhiệt đới, khí hậu nóng ẩm có nhiều điều kiện thuận lợi cho thực vật phát triển Do vậy, hệ thực vật Việt Nam vô phong phú, đa dạng với khoảng 12000 loài, có 4000 loài nhân dân ta dùng làm thảo dược [10] Trong điều kiện phát triển xã hội nay, đời sống người ngày nâng cao Tuy nhiên, với phát triển đó, người phải đối mặt với nhiều bệnh nan y, hiểm nghèo Việc nghiên cứu, tìm kiếm hợp chất có nguồn gốc từ thiên nhiên để ứng dụng y học nhiều nhà khoa học Việt Nam giới quan tâm Hiện nay, với phát triển khoa học kĩ thuật, phương pháp Hiện nay, với phát triển khoa học kĩ thuật, phương pháp đại, người ta tách, chiết thu nhiều hợp chất có hoạt tính sinh học cao, phục vụ cho mục đích nghiên cứu khác Về lâu dài, khởi đầu quan trọng cho việc tổng hợp nên loại thuốc có tác dụng tốt Cây na rừng biết đến loại có mặt nhiều thuốc để chữa bệnh như: viêm ruột mãn tính, viêm loét dày…Theo nghiên cứu ban đầu, có chứa lớp chất steroid, nhóm hormone giới thực vật, chúng điều hoà nhiều khía cạnh tăng trưởng phát triển Việc nghiên cứu, khảo sát hợp chất có na rừng Lê Thị Hương K31A- Khoa Hoá học Trường Đại học sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp nhằm đặt sở khoa học cho phát triển y học Việt Nam đại, dựa phương thuốc cổ truyền Xuất phát từ ý nghĩa thực tiễn nên em chọn đề tài cho khóa luận tốt nghiệp là: " Nghiên cứu thành phần hợp chất steroid từ na rừng (Kadsura Coccinea)", với mục đích phân lập số hợp chất steroid có na rừng xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập phương pháp phổ.Các kết góp phần tạo sở cho nghiên cứu lĩnh vực tìm kiếm phương thuốc giải thích tác dụng chữa bệnh thuốc cổ truyền Việt Nam Lê Thị Hương K31A- Khoa Hoá học Trường Đại học sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Chương I: tổng quan 1.1 Tổng quan na rừng [8,9] 1.1.1 Phân bố, sinh thái Na rừng có nhiều tên gọi khác như: Dây xưn xe, Nắm cơm, Ngũ vị nam Tên khoa học Kadsura Coccinea (Lem) A C Smi (K Chinensis Hance), thuộc họ ngũ vị - Schisandraceae Nơi sống thu hái: Cây có nhiều Sa Pa (Lào Cai), Ba Vì (Hà Tây), Di Linh (Bảo Lộc - Lâm Đồng) Ngoài ra, có nhiều Trung Quốc, Lào 1.1.2 Đặc điểm Dây leo to, có nhánh mọc trườn, mảnh, phủ lớp lông tuyến màu sậm, sau lại có lỗ bì hình dải Lá bầu dục hay thuôn, dạng góc gốc, thon hẹp, tù, dài - 10 cm, rộng 3- cm, nhạt màu dưới, nhẵn Lê Thị Hương K31A- Khoa Hoá học Trường Đại học sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Hình 1.1 Na rừng (Kadsura Coccinea ) Hoa đơn tính, nách dài 15mm, rộng 10mm, màu tía, thường có vào tháng 5, tháng Quả giống na to, thường có vào tháng 8, tháng 1.1.3 Những nghiên cứu ban đầu na rừng Hiện thông tin na rừng Tuy nhiên , nghiên cứu ban đầu cho thấy có chất nhầy thân Ngoài ra, có glucoza, tinh dầu, axit hữu cơ, protit chất béo 1.1.4 Bộ phận dùng Chủ yếu dùng rễ - Radix Kadsurae Coccinea, người ta dùng Rễ thu hái quanh năm, rửa sạch, thái phiến, phơi khô dùng dần 1.1.5 Tính vị, tác dụng Rễ có vị cay ấm, đắng, có hương thơm; có tác dụng hành khí thống, hoạt huyết, tán ứ, khư phong tiêu thũng 1.1.6 Công dụng - Quả ăn Quả rang lên làm thuốc an thần gây ngủ - Rễ dùng trị bệnh: + Viêm ruột mãn tính, viêm dày ruột cấp tính, viêm loét dày hành tá tràng + Phong thấp đau xương đòn, ngã ứ đau + Đau bụng trước hành kinh, sản hậu ứ đau sưng vú Liều dùng: 15 - 30g rễ khô sắc nước uống Dân gian thường dùng vỏ thân, vỏ rễ làm thuốc bổ, kích thích tiêu hóa, giảm đau Ngày dùng - 16g sắc ngâm rượu uống 1.2 Tổng quan phương pháp chiết mẫu thực vật [4,7] Lê Thị Hương 10 K31A- Khoa Hoá học Trường Đại học sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp đoạn nhỏ kí hiệu KC1E1-KC1E5 Hợp chất tinh chế từ phân đoạn KC1E4 (0,5 g) sắc ký cột silica gel pha thường với hệ dung môi rửa giải clorofooc/MeOH 15/1 2.7 Hằng số vật lý kiện phổ hợp chất Các chất phân lập tiến hành phân tích cấu trúc phương pháp vật lí như: đo điểm nóng chảy, độ quay cực, kết hợp với phương pháp phổ đại phổ cộng hưởng từ hạt nhân chiều ( 1H-NMR, 13CNMR, DEPT 135, DEPT 90), hai chiều ( HSQC, HMBC NOESY), phổ khối lượng phun mù điện tử ( ESI ) 2.7.1 Hợp chất 1: 20(R),24(E)-3-oxo-9õ-lanosta-7,24-dien-26-oic acid Tinh thể màu trắng, nhiệt độ nóng chảy mp 217-219 oC, phổ khối lượng ESI-MS m/z 477,2 [M+Na]+, công thức phân tử C30H46O3 (M = 454) Phổ cộng hưởng từ hạt nhân: 1H NMR (CDCl3, 500 MHz)  1,55-1,65 (2H, H-1), 2,50 (2H, t, J = 8,0 Hz, H-2), 2,23 (1H, H-5), 2,13 (1H, Ha-6), 1,83 (1H, Hb-6), 5,65 (1H, d, J = 7,0 Hz, H-7), 1,55 (1H, H-9), 1,62 (2H, H-11), 1,58 (1H, Ha-12), 1,43 (1H, Hb-12), 1,65 (1H, Ha-15), 1,55 (1H, Hb-15), 1,98 (1H, Ha-16), 1,32 (1H, Hb-16), 1,43 (1H, H-17), 0,78 (3H, s, H-18), 1,00 (3H, s, H-19), 1,43 (1H, H-20), 0,91 (3H, s, H-21), 1,55-1,65 (2H, H-22), 2,102,28 (2H, H-23), 6,82 (1H, br s, H-24), 1,82 (3H, s, H-27), 1,09 (3H, s, H-28), 1,09 (3H, s, H-29) 1,03 (3H, s, H-30); 13C NMR (CDCl3, 125 MHz)  34,3 (CH2, C-1), 34,4 (CH2, C-2), 219,1 (C, C-3), 47,0 (C, C-4), 45,5 (CH, C-5), 23,0 (CH2, C-6), 121,5 (CH, C-7), 148,7 (C, C-8), 52,9 (CH, C-9), 35,8 (C, C10), 20,8 (CH2, C-11), 33,1 (CH2, C-12), 44,0 (C, C-13), 51,9 (C, C-14), 34,1 (CH2, C-15), 28,3 (CH2, C-16), 52,4 (CH, C-17), 22,4 (CH3, C-18), 23,1 (CH3, C-19), 36,1 (CH, C-20), 18,2 (CH3, C-21), 34,6 (CH2, C-22), 25,9 (CH2, C-23), 146,0 (CH, C-24), 126,5 (C, C-25), 173,5 (C, C-26), 12,0 (CH3, C-27), 28,0 (CH3, C-28), 21,2 (CH3, C-29) 27,4 (CH3, C-30) Lê Thị Hương K31A- Khoa Hoá học 30 Trường Đại học sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp 2.7.2 Hợp chất 2: -Sitosterol Chất kết tinh màu trắng, điểm chảy 136-137 oC, công thức phân tử C29H50O Phổ cộng hưởng từ hạt nhân: 1H-NMR (500 MHz, CDCl3), H (ppm): 5.37 (br d, J = 5.1 Hz, H-6),3.54 (tt, J = 5.1, 11.7 Hz, H-3), 0.68 (3H, s, H-18), 1.01 (3H, s, H-19), 0.92 (3H, d, J = 6.5 Hz), 0.83 (3H, d, J = 7.3 Hz, H-26), 0.81 (3H, d, J = 6.8 Hz, H-27) 0.84 (3H, t, J =7.5 Hz, H-29); 13C-NMR (125 MHz, CDCl3), H (ppm): 37.67 (t, C-1), 32.05 (t, C-2), 72.19 (d, C-3), 42.70 (t, C-4), 141.17 (s, C-5), 122.50 (d, C-6), 32.32 (t, C-7), 32.32 (d, C-8), 50.55 (d, C-9), 36.91 (s, C-10), 21.49 (t, C-11), 40.19 (t, C-12), 42.73 (s, C13), 57.18 (d, C-14), 24.71 (t, C-15), 28.65 (t, C-16), 56.48 (d, C-17), 12.26 (q, C-18), 19.79 (q, C-19), 36.55 (d, C-20), 19.18 (q, C-21), 34.36 (t, C-22), 26.51 (t, C-23), 46.25 (d, C-24), 29.57 (d, C-25), 20.24 (q, C-26), 19.44 (q, C27), 23.48 (t, C-28) 12.39 (q, C-29) Lê Thị Hương 31 K31A- Khoa Hoá học Trường Đại học sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Chương IIi: Kết thảo luận 3.1 Xác định cấu trúc hóa học hợp chất 3.1.1 Hợp chất 1: 20(R),24(E)-3-oxo-9õ-lanosta-7,24-dien-26-oic acid Hợp chất phân lập dạng chất kết tinh màu trắng, điểm chảy 217-219 oC, độ quay cực []25D: +60 (c 0.25, MeOH) Phổ 1H-NMR đặc trưng cho hợp chất tecpenoit Trong đó, 06 nhóm metyl bậc 01 nhóm metyl bậc khẳng định tín hiệu cộng hưởng  0,78 (3H, s, H-18), 1,00 (3H, s, H-19), 1,82 (3H, s, H-27), 1,09 (3H, s, H-28), 1,03 (3H, s, H-29), 0,91 (3H, d, J = 6,5 Hz, H-21) Các tín hiệu  5,65 (1H, d, J = 7,0 Hz, H-7) 6,82 (1H, m, H-24) khẳng định cho có mặt 02 proton olefin Hình 3.1a Phổ 1H-NMR hợp chất Lê Thị Hương 32 K31A- Khoa Hoá học Trường Đại học sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp 21 H 22 18 20 23 24 25 12 11 19 17 13 16 14 H 30 O 26 10 HOOC 15 27 H 28 29 Hình 3.1b Cấu trúc hóa học hợp chất Hình3.1c Phổ 13C-NMR hợp chất Lê Thị Hương 33 K31A- Khoa Hoá học Trường Đại học sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Hình 3.1d Các phổ DEPT hợp chất Hình 3.1e Phổ HSQC hợp chất Lê Thị Hương 34 K31A- Khoa Hoá học Trường Đại học sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Bảng Số liệu phổ NMR hợp chất C 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 C# 34.2 34.3 218.9 46.9 45.4 22.9 121.4 148.6 52.9 35.7 20.7 33.0 43.9 51.8 34.0 28.2 52.3 22.3 23.0 36.0 18.1 34.5 25.9 145.9 126.6 173.3 11.8 27.9 21.2 27.3 Ca,b 34.30 34.39 219.09 47.01 45.49 23.01 121.47 148.71 52.96 35.81 20.84 33.11 44.03 51.89 34.15 28.30 52.40 22.41 23.14 36.12 18.21 34.63 25.98 146.00 126.50 173.50 12.00 28.01 21.19 27.38 DEPT CH2 CH2 CH CH2 CH CH CH2 CH2 CH2 CH2 CH CH3 CH3 CH CH3 CH2 CH2 CH CH3 CH3 CH3 CH3 Ha,c (J, Hz) 1.55-1.65* 2.50 t (8.0) 2.23 2.13/1.83 5.65 d (7.0) 1.55* 1.62* 1.58/1.43 1.65/1.55 1.98/1.32 1.43* 0.78 s 1.00 s 1.43* 0.91 d (6.5) 1.55-1.65* 2.28-2.10 6.82 br s 1.82 s 1.09 s 1.09 s 1.03 s HMBC (HC) 1, 3, 4, 10 5, 5, 6, 8, 9, 14 12, 13, 14, 17 1, 5, 9, 10 17, 20, 22 24, 25 24, 25, 26 3, 4, 5, 29 3, 4, 5, 28 8, 13, 14, 15 C 20(R),24(E)-3-oxo-9õ-lanosta-7,24-dien-26-oic acid [1], aĐo CDCl3, b125 MHz, c500 MHz, *tín hiệu bị che khuất # Lê Thị Hương 35 K31A- Khoa Hoá học Trường Đại học sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp HOOC O Hình3.1f Phổ HMBC hợp chất Phổ 13 C-NMR hợp chất xuất tín hiệu 30 cacbon Trong đó, xuất nhóm xeton đặc trưng tín hiệu cộng hưởng  219,09 (C, C-3) Từ phân tích nêu, số liệu phổ NMR hợp chất so sánh trực tiếp với số liệu tương ứng công bố hợp chất 20(R),24(E)-3-oxo-9õ-lanosta-7,24-dien-26-oic acid (bảng 1) [1] Sự phù hợp hoàn toàn số liệu phổ NMR vị trí tương ứng với phân tích chi tiết tương tác xa phổ HMBC (hình 3.1.f.) kết phổ khối lượng m/z 453,0 [M-H]-, tương ứng với công thức phân tử C30H46O3 (M = 454), cho phép xác định xác hợp chất 20(R),24(E)3-oxo-9õ-lanosta-7,24-dien-26-oic acid Đây lần hợp chất phân lập từ loài thuộc chi Kadsura Lê Thị Hương 36 K31A- Khoa Hoá học Trường Đại học sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Hình3.1g Phổ khối lượng ESI-MS hợp chất 3.1.2 Hợp chất 2: -Sitosterol Hợp chất phân lập dạng tinh thể hình kim màu trắng Phổ NMR hợp chất có dạng phổ chung hợp chất sterol có nối đôi nhóm hydroxyl Phổ 1H-NMR xuất tín hiệu nhóm metyl có hai nhóm metyl bậc ba  0,68 (3H, s), 1,01 (3H, s), tín hiệu doublet  0,92 (3H, d, J = 6,5 Hz), 0,83 (3H, d, J = 7,3 Hz), 0,81 (3H, d, J = 6,8 Hz), tín hiệu triplet  0,84 (3H, t, J = 7,5 Hz) Tín hiệu nhóm oximetin  3,54 (tt, J = 5,1, 11,7 Hz) nối đôi vị trí  5,37 (br d, J = 5,1 Hz) Lê Thị Hương 37 K31A- Khoa Hoá học Trường Đại học sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp 26 22 18 24 27 29 20 17 28 19 HO Hình3.2a Cấu trúc hoá học hợp chất Hình3.2b Phổ 1H-NMR hợp chất Lê Thị Hương 38 K31A- Khoa Hoá học Trường Đại học sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Hình 3.2c Phổ 13C-NMR hợp chất Hình3.2d Phổ 13C-NMR dãn rộng hợp chất Lê Thị Hương K31A- Khoa Hoá học 39 Trường Đại học sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Bảng Kết phổ NMR hợp chất C 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 Lê Thị Hương C [2] 37,27 31,64 71,77 42,29 140,76 121,69 31,92 31,92 50,15 36,51 21,10 39,80 42,33 56,78 24,31 28,25 56,08 11,89 19,39 36,15 18,80 33,96 26,11 45,85 29,18 19,82 19,05 23,08 11,99 C (125MHz) 37,67 32,05 72,19 42,70 141,17 122,50 32,32 32,32 50,55 36,91 21,49 40,19 42,73 57,18 24,71 28,65 56,48 12,26 19,79 36,55 19,18 34,36 26,51 46,25 29,57 20,24 19,44 23,48 12,39 40 H (500MHz) 3,54 (tt,J = 5,1, 11,7 Hz) 5,37 (br d, J = 5,1 Hz) 0,68 (3H, s) 1,01 (3H, s) 0,92 (3H, d, J = 6,5 Hz) 0,83 (3H, d, J = 7,3 Hz) 0,81 (3H, d, J = 6,8 Hz) 0,84 (3H, t, J = 7,5 Hz) K31A- Khoa Hoá học Trường Đại học sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp a Đo CDCl3, b125MHz, c500MHz Phổ 13C-NMR cho thấy hợp chất có 29 cabon, xuất 01 cacbon oximetin 01 liên kết đôi khẳng định tín hiệu cộng hưởng  72,19 (C-3) 141,17 (C-5)/122,50 (C-6) Như vậy, hợp chất steroid có nối đôi nhóm hydroxyl So sánh kiện phổ NMR hợp chất với hợp chất -sitosterol [2] cho thấy trùng khớp tất vị trí tương ứng Từ kiện nêu trên, hợp chất nhận dạng -sitosterol, hợp chất sterol phổ biến thực vật 3.2 Tổng hợp hợp chất Steroid phân lập từ na rừng Bảng 3: Bảng tổng hợp hợp chất phân lập từ na rừng -Sitosterol 20(R),24(E)-3-oxo-9õ-lanosta7,24-dien-26-oic acid 21 26 H 22 18 20 23 24 25 12 11 19 13 14 16 HOOC 26 29 17 28 19 H 30 H 28 27 O 17 24 20 10 18 15 22 27 29 HO C30H46O3 ( M = 454 ) Lê Thị Hương C29H50O ( M = 414 ) 41 K31A- Khoa Hoá học Trường Đại học sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Kết luận Bằng phương pháp sắc kí kết hợp, bao gồm sắc kí cột nhồi chất hấp phụ Silica gel pha thường, Silica gel pha ngược; sắc kí lớp mỏng pha thường, sắc kí lớp mỏng pha ngược sử dụng hệ dung môi khác nhau, phân lập hai hợp chất Steroid từ rễ na rừng Cấu trúc hợp chất xác định nhờ vào phương pháp phổ đại, bao gồm: phổ cộng hưởng từ hạt nhân chiều (1H-NMR, 13 C-NMR, DEPT 90, DEPT 135), phổ cộng hưởng từ hạt nhân hai chiều ( HSQC, HMBC) với phương pháp phổ khối lượng ( ESI-MS) xác định cấu trúc hóa học hai hợp chất phân lập từ rễ na rừng Đó là: Hợp chất 1: 20(R),24(E)-3-oxo-9õ-lanosta-7,24-dien-26-oic acid Hợp chất 2: -Sitosterol Trong õ- Sitosterol hợp chất có mặt phổ biến hầu hết loài thực vật hợp chất 20(R),24(E)- 3-oxo-9õ-lanosta-7,24-dien-26-oic acid lần phân lập từ loài thuộc chi Kadsura Kết nghiên cứu đóng góp vào việc làm sáng tỏ thành phần hoá học na rừng mà tạo điều kiện cho nghiên cứu có nhiều ứng dụng thực tiễn khoa học sống Lê Thị Hương 42 K31A- Khoa Hoá học Trường Đại học sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp TàI LIỆU THAM KHẢO M Fatima Das G F Da Silva, Regina H P Francisco, Alexander I Gray, Johannes R Lechat, and Peter G.Waterman Lanost-7-en triterpenes from stem bark of Santiria trimera Phytochemistry, 29(5), 1629-1632, 1990 Goad J L and Akihisa T., Analysis of sterols, Blackie Academic and Professional Pub., First edition, p.378 (1997) Diaz, J G Fraga, B M, Gonzalez, A G, Hernander, M G And Phyto Chemistry, 1986, 25, 1161- 1163 By ung, S- M.et al, plata Med, 1999, 65, 374- 375 P K Agrawal, NMR spectroscopy in the structural elucidation of oligosaccharides and glycosides Phytochemistry, Vol 31, 3307- 3330 (1992) Kanmoto, T Mikami, Y Sashida, Y Nikaido, T 1994, Steroidal constituents from the underground part of Reineckea carnea and their inhibitory activity on CAMP phosphodietherase, Chem Pharm PGS TS Nguyễn Hữu Đĩnh (chủ biên), PGS TS Đỗ Đình Rãng, Hoá học hữu 1, Nhà xuất Giáo dục năm 2008 Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Trung, Bùi Xuân Chương, Nguyễn Thượng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiền, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Thu, Nguyễn Tập Trần Toàn, Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, NXB KHKT Hà Nội, tập I, 2004 Đỗ Tất Lợi, Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB y học Hà Nội,2001 10 Võ Văn Chi (1997) Từ điển thực vật thông dụng ,NXB KHKT Hà Nội 11 T Asano, T Murayama, Y Hirai, and J Shoji, Comparative studies on the constituents of Ophiopogonis tuber and its congeners V(1), studies on the glycosides of the subterancenan part of Ophiopogonis japonius Ker- Ganler cv Nanus (2) Chem Pharm Bulm, Vol 41, 566- 570 12 (1993) Duc Do Khac, Sung Tran Van, Angela Martha Campos, Jean- Yves Lallemand and Marcel Ftizon, Ellagic acid Compounds from Diplopalax Stachyanthus, Phytochemistry, Vol 29(1), 251- 256 (1990) Lê Thị Hương 43 K31A- Khoa Hoá học Trường Đại học sư phạm Hà Nội Lê Thị Hương Khóa luận tốt nghiệp 44 K31A- Khoa Hoá học [...]... cộng hưởng từ hạt nhân (Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy, NMR) Phổ cộng hưởng từ hạt nhân là một phương pháp phổ hiện đại và hữu hiệu nhất hiện nay được dùng để xác định cấu trúc hóa học của các hợp chất hữu cơ nói chung và hợp chất thiên nhiên nói riêng Với việc sử dụng kết hợp các kĩ thuật phổ NMR một chiều và hai chiều, các nhà nghiên cứu có thể xác định chính xác cấu trúc của hợp chất, kể... 1.4 Các phương pháp xác định cấu trúc của hợp chất hữu cơ [7,12] Cấu trúc hóa học của các hợp chất hữu cơ được xác định nhờ vào các phương pháp phổ kết hợp Tùy thuộc vào cấu trúc hóa học của từng chất mà người ta sử dụng những phương pháp cụ thể khác nhau Cấu trúc càng phức tạp thì yêu cầu phối hợp các phương pháp phổ càng cao Trong một số trường hợp, để xác định chính xác cấu trúc hóa học của các hợp. .. dung môi phân cực hơn các hidrocacbon thế clo Người ta cho rằng các dung môi thuộc nhóm rượu sẽ thấm tốt hơn lên màng tế bào nên quá trình chiết với các dung môi này sẽ thu được lượng lớn các thành phần trong tế bào Trái lại, clorofooc khả năng phân cực thấp hơn, có thể rửa giải các chất nằm ngoài tế bào Các ancol hòa tan phần lớn các chất chuyển hóa phân cực cùng với các hợp chất phân cực trung bình... học các hợp chất thiên nhiên, Viện Khoa học và công nghệ Việt Nam 2.2 Phương pháp phân lập các hợp chất Phân lập các hợp chất trong rễ cây na rừng bằng sắc kí cột và sắc kí lớp mỏng điều chế Theo dõi các phân đoạn sắc kí bằng sắc kí lớp mỏng 2.2.1 Sắc kí lớp mỏng ( TLC ) Sắc kí lớp mỏng được thực hiện trên bản mỏng tráng sẵn DC - Alufolien 60G F254 ( Merck, kí hiệu 105715 ), RP18 ( Merck ) Phát hiện chất. .. hệ của dung môi và chất tan của các lớp chất mà ta co thể tách thô một số lớp chất ngay trong quá trình chiết 1.3 Các phương pháp sắc kí [3,12] Phương pháp sắc kí là một phương pháp phổ biến và hữu hiệu nhất hiện nay được sử dụng để phân lập các hợp chất hữu cơ nói chung và các hợp chất thiên nhiên nói riêng Sắc kí là quá trình tách cấu tử của một hỗn hợp dựa vào việc các cấu tử này sẽ phân bố khác... trúc hóa học các hợp chất Xác định cấu trúc các hợp chất phân lập được dựa trên các thông số vật lí và các phương pháp phổ bao gồm: điểm chảy, phổ tử ngoại, phổ hồng ngoại, phổ khối lượng, phổ cộng hưởng từ hạt nhân một chiều và hai chiều 2.3.1 Điểm nóng chảy ( Mp ) Điểm chảy được đo trên máy Kofler micro - hot stage tại Viện hóa học các hợp chất thiên nhiên - Viện khoa học và Công nghệ Việt Nam 2.3.2... HMBC của hợp chất 1 Phổ 13 C-NMR của hợp chất 1 xuất hiện các tín hiệu của 30 cacbon Trong đó, sự xuất hiện của một nhóm xeton được đặc trưng bởi tín hiệu cộng hưởng tại  219,09 (C, C-3) Từ các phân tích đã nêu, số liệu phổ NMR của hợp chất 1 được so sánh trực tiếp với các số liệu tương ứng đã được công bố của hợp chất 20(R),24(E)-3-oxo-9õ-lanosta-7,24-dien-26-oic acid (bảng 1) [1] Sự phù hợp hoàn... điều kiện không phổ biến với các hợp chất hữu cơ Như trên đã đề cập, ngoài việc sử dụng các loại phổ, người ta còn phải sử dụng kết hợp với các chuyển hóa hóa học, cũng như các phương pháp phân tích, so sánh, kết hợp Đặc biệt, đối với các phân tử nhiều mạch nhánh dài, tín hiệu phổ NMR bị chồng lấp nhiều, khó xác định chính xác được chiều dài các mạch Đối với các phân tử có các đơn vị đường thì việc xác... 2.7 Hằng số vật lý và các dữ kiện phổ của các hợp chất Các chất đã phân lập được tiến hành phân tích cấu trúc bằng các phương pháp vật lí như: đo điểm nóng chảy, độ quay cực, kết hợp với các phương pháp phổ hiện đại như phổ cộng hưởng từ hạt nhân một chiều ( 1H-NMR, 13CNMR, DEPT 135, DEPT 90), hai chiều ( HSQC, HMBC và NOESY), phổ khối lượng phun mù điện tử ( ESI ) 2.7.1 Hợp chất 1: 20(R),24(E)-3-oxo-9õ-lanosta-7,24-dien-26-oic... ái lực giữa các chất cần tách với chất hấp phụ Độ phân cực của dung môi tăng dần từ ete, dầu hỏa đến nước Tùy thuộc vào cách tiến hành sắc kí mà người ta chia ra thành các phương pháp sắc kí chủ yếu như sau: 1.3.1 Sắc kí cột Sắc kí cột là một phương pháp hiện đại, tinh vi để tách các cấu tử hóa học ra khỏi hỗn hợp của chúng Nếu lựa chọn đúng các điều kiện, người ta có thể tách hầu hết các chất trong ... tốt nghiệp Lời cam đoan Tôi xin cam đoan kết khoá luận: Nghiên cứu thành phần hợp chất steroid từ na rừng(Kadsura Coccinea)” nghiên cứu không chép Nếu có vấn đề không đúng, xin hoàn toàn chịu... Việt Nam đại, dựa phương thuốc cổ truyền Xuất phát từ ý nghĩa thực tiễn nên em chọn đề tài cho khóa luận tốt nghiệp là: " Nghiên cứu thành phần hợp chất steroid từ na rừng (Kadsura Coccinea)",... NMR hợp chất với hợp chất -sitosterol [2] cho thấy trùng khớp tất vị trí tương ứng Từ kiện nêu trên, hợp chất nhận dạng -sitosterol, hợp chất sterol phổ biến thực vật 3.2 Tổng hợp hợp chất Steroid