MUC LUC DAT VAN DE PHANI : TễNG QUAN 1.1 Dõc diờm thuc võt 1.2 Thnh phn hoõ hoc 1.3 Tac dung diroc l v tợnh hùnh sur dung chố dõng nirorc ta .3 1.4 Mot sụ ket quõ nghiờn cỹu vờ cõy chố dõng Viờt Nam PHAN II : NGUYấN LIEU V PHlTONG PHP NGHIấN CLTU 2.1 Nguyờn lieu 2.2 Phirong phõp nghiờn cỹu .6 PHAN III : THl/C NGHIấM V KET QU 3.1 Nghiờn cỹu vờ thnh phõn hoõ hoc lõ chố dõng 3.1.1 Dinh tmh cõc nhom chat hợcu cortrong lõ chố dõng 3.1.2 Nghiờn cỷu saponin lõ chố dõng 14 3.1.2.1 Xõc dinh chợ s6 bot 14 3.1.2.2 Xõc dinh chợ sụ' phõ huyột 15 3.1.2.3 Dinh tmh saponin bang SKLM 17 3.1.2.4 Dinh tmh sapogenin bang SKLM 18 3.1.2.5 Dinh luỗmg saponin ton phn diroc liờu 20 3.1.3 Nghiờn cỹu flavonoid duffc liờu 21 3.1.3.1 Chiột xuõt flavonoid diroc liờu 21 3.1.3.2 Dinh tmh flavonoid ton phn bng SKLM 21 3.1.3.3 Dinh luong flavonoid ton phn diùoc liờu .23 3.1.3.4 Phõn lõp flavonoid bang sac k cụt 24 3.1.3.5 Nhõn dang chõit V^CD) v V2(CD2) 27 3.2 Nghiờn cỷu mot so tac dung sinh hoc cỹa flavonoid ton phn 28 3.2.1 Thỹ tõc dung chong oxyhoõ bõo vờ tebo gan v nõo chuụt 28 3.2.2 Xõc õinh hoat tinh don gụ'c tu anion superoxide ỹ 32 PHAN IV : KẫT LUN V DE XUAT 4.1 Ket luõn 35 4.2 De xuõt 36 TI LIEU THAM KHO PHU LUC HTCO : EtOAc MeOH ptP stP MDA SOD NXB SKLM YHCT CSB CSPH : NBT : BNG CHĩ'VIấT TT Hoat tmh chong oxyhoõ Ethyl acetat Methanol Flavonoid ton phn Saponin ton phn Malonyl dialdehyd Superoxide dismustase Nh xuat bn Sac k \ụp mụng Y hoc co truyờn Chợ s6 bot Chợ s6 phõ huyột Nitro Blue Tộtrazolium DT VAN DE Ngy nay, ngiùdi cụ xu hirdng ira dung cõc thuục cụ nguụn gục thõo mục Bờn canh thuoc, nhỷng cõy cụ vira cụ tac dung phụng chtfa bờnh vira lm thuc pham hoc nuục uụ'ng hng ngy cỹng dirac quan tõm nghiờn cuu sir dung Chố dõng (cụn goi l chố kh6 dinh, chố khụm) l loai chố luụng dung vựa lm nuục uụ'ng vira dộ phụng chỷa bờnh rat tụt Nuục chố cụ mu xanh, vi dõng ngot, duac sỷ dung theo kinh nghiờm dõn gian lm thuục chOa viờm hong, sut cõn, an thn, giõi nhiờt, kfch thfch tiờu hoõ, huyờt õp, thuục tng lue v kộo di tuoi tho La chố dõng cụ nhiờu dc diởm Uu viờt, cụ triởn vong trụ thnh vi thuục mụi Vi võy, viờc nghiờn ciợu thnh phn hoõ hoc v tac dung sinh hoc cõy chố dõng l cn thiột dộ sỷ dung cõy chố dõng lm thuục chỷa bờnh v tõng cucmg strc khoờ, gụp phõn tao cõc dang sõn phỹim mụi tir cõy chố dõng Trong khuụn kho dờ ti tụt nghiờp, chỹng tụi tiộn hnh nghiờn cuti nhợợng nụi dung chfnh sau: - Dinh trnh, dinh luỗmg nhụm chat chrnh la chố dõng - Chiột xuõt, phõn lõp, nhõn dang mụt sụ chat la chố dõng - Thir tac dung chụng oxy hoõ cỹa flavonoid ton phn PHAN I: TễNG QUAN 1.1 Dõc diởm thirc võt: 1.1.1 Vi tri phõn loai: Thộo hờ thụng phõn loai cỹa Takhtaijan nm 1997, Chi Ilex thuục ho Aquifoliaceae thuục bụ Celetrales phõn lụp Rosidae ( Phõn lụp hoa hễng ) ngnh Ngoc Lan 1.1.2 Dõc õiộm thuc võt: Cõy chố dõng tai Viờt Nam duoc giõo su tien s Nguyờn Tien Bõn xõc dinh tờn khoa hoc l: Ilex kaushue S.Y.Hu ho Aquifoliaceae (Ho nhua Ruụi) [2] Dõc diởm thuc võt dõ duoc mụ tõ [8] nhu sau: - Cõy gụ, cao trờn 20 m , duụng krnh cỹa cõy lcm co thộ dờn m - Lõ don moc cõnh, mộp co rang cua nhụ, lõ dy v dai, hùnh elfp rụng Lõ non cụ mu nõu thõm - Lõ di khoõng dờn 22 cm, rụng 3,5 dờn cm, mõt khụng cụ lụng, mõt trờn mu thõm, lõng bụng, nhan, mõt duoti co mu nhat hon, cuụng lõ to di khoõng 1,5 dờn cm, gõn lõ hợnh lụng chim 1.1.3 Dõc õiộm sinh thõi v phõn bụ: Thộo ket quõ nghiờn cỹu cỹa Trung tõm nghiờn cỹu giụng cõy trụng rựng thuục Viờn khoa hoc lõm nghiờp Viờt Nam, cõy chố dõng co thộ trụng bang hat hoõc chụi, thfch hop trụng ụ nhỹng noi dõt sõu tụt thuục vựng nỹi phia Bac Cõy chố dõng cụ nhiờu huyờn H Lang v Thach An tợnh Cao Bang 1.2 Thnh phõn hoõ hoc: Thộo tap chi Phytochemistry thõng nm 1996[16] mụt sụ triterpen v triterpenoid glycosid duoc chiột tỹ lõ cõy Ilex kaushue S.Y.Hu dụ cụ 2 triterpen moi l a, P kudinlactone v triterpenoid glycosid mụi l kudinosid D, G, I , J dõ duoc phõn lõp Cõc cõu truc duỗc lm sang tụ bang phuong phõp phõn tfch quang v hoõ hoc Thộo tap chf Phytochemistry thõng nõm 1996 [17] saponin l kudinosid A, B, C duoc chiờ't tự la cõy Ilex kaushue S.Y.Hu dõ duoc xõc dinh cụ cõu truc - O - p - D - glucopyranosyl (l-ằ3) - a - L rhamnopyranosyl- (l-ằ2) a -L-arabinopyranosyl - [3 kudinlactone - O - p - D - glucopyranosyl (l-ằ2) - p - D - glucopyranosyl (l-ằ3) a- L - arabinopyranosyl - P kudinlactone - O - P - D - glucopyranosyl (l-ằ2) - P - D - glucopyranosyl (1>3)a- L - rhamnopyranosyl - (l-ằ2)- a - L - arabinopyranosyl - P kudinlactone 1.3Tac dung dirac l v tợnh hợnh sur dung chố dõng nuục Trung Quụ'c, bỹp v lõ chố dang duoc hõi v thnh chố Nuục chố cụ mu xanh trong, vi dõng ngot Chố dõng cụ tac dung giõm dau, kùm khuõn, chua dụng kinh, cụ tõc dung huyột õp [13] * Thộo kột quõ nghiờn crùu cỹa Trung Quụ'c v Viờn duoc lieu [19]: + Saponin lõ chố dõng cụ tõc dung tõng lue, tõng cucmg miờn dich co thộ, kfch thich thn kinh, õp, loi tiởu + Flavonoid lõ chố dang cụ tõc dung tõng dụ bờn vtrng mach mõu, giõm nguy co tai bien mach mõu + Carotenoid dựng dộ diờu tri u lnh v u õc tmh * Thộo kinh nghiờm dõn gian, chố dõng co tac dung nhiờt giõi dục, an thn, kfch thfch tiờu hụa, lm tợnh ruou, loi tiởu, tror tim, chỷa di tõ Lõ dựng de chỷa ly, sot nụng, dau du, dau rang, dau mõt, an khụng ngon v nộu dựng thuụng xuyờn thù tri oc minh mõn, loi tiởu, tiờu hoõ tụt v kộo di tu6i tho.Trong thụi phong kiộn Trung Quục, chố dõng l mot loai qu cung tien vua chỷa Chố dõng duoc chộ bien duụi dang chố tỹi lỗc 5g/tỹi hiờu Van Thựa, dụng thnh hụp 20 gụi Tai Viờt Nam, chố dõng dang duoc sir dung rụng rõi duụi dang chố tỹi loc 5g/tỹi hoc dựng lõ tuoi hõm uụng thay nuục chố xanh Viờc chờ' bien chố dõng dang l moi quan tõm dc biờt cỹa tợnh Cao Bang Tợnh dang cụ du kiờn dua vo sõn xuõt v chờ bien chố dõng vụi sụ lucmg lụn nhm phuc vu nhu cu nuục v huụng tụi trụ thnh mot mõt hng xuõt khõu cụ giõ tri 1.4 Nam Mot sụ ket quõ nghiờn cufu vờ cõy chố dõng Viờt Viờc sỹ dung lõ chố dõng lm nuục uụng v lm thuục nuục ta chu yeu l theo kinh nghiờm dõn gian Vi nm gn dõy chố dang mụi duoc dua vo nghiờn cỹu - Luõn tụt nghiờp duoc s dai hoc cỹa Trn Thi Lan Huong nm 1999 [8] dõ mụ ta dc diởm thuc võt cõy chố dõng, xõc dinh dc diởm vi phõu lõ v dc diởm bụt duoc liờu lõ chố dõng v dõ xõc dinh lõ chố dõng cụ flavonoid, saponin, coumarin, tanin, acid amin, acid hiợu co dụ hm luong saponin l lụn nhõt - Sụ khoa hoc cụng nghờ v mụi truụng tợnh Cao Bng cựng Viờn Duoc liờu dõ dinh tmh v dinh luong mụt sụ nhụm chõ't lõ chố dõng [9], [14] - Nụng Thanh Son, Phan Võn Cõc, Dụ Minh Thanh dõ nghiờn ciợu dục trnh, khõ nõng phụng chụ'ng tõc hai cỹa thuục diờt cụ (2,4D) v tõc dung huyờt õp cỹa dich chiờt lõ chố dang trờn dụng võt thi nghiờm [18] PHAN II NGUYấN LIấU V PHUONG PHP NGHIấN CĩU 2.1 Nguyờn liờu nghiờn curu Duoc liờu l lõ cõy chố dõng, duoc thu hõi tai Cao Bang Mõu cõy duoc xõc dinh tờn khoa hoc l Ilex kaushue S.Y.Hu ho nhua ruụi (Aquifoliaceae) La cõy duoc thu hõi vờ, chon lõ xanh tụ't, khụng sõu bờnh, phcri khụ, sõy o nhiờt dụ 45-50 C tỹ sõy cụ thụng giụ, sau dụ tan nhụ thnh bụt dộ nghiờn curu 2.2 Phurong phõp nghiờn curu: 2.2.1 Cõc phuong phõp nghiờn cỷu vờ' thnh phõn hoõ hoc - Dinh tmh cõc nhom chõt hoõ hoc lõ chố dõng bang cõc phõn ung hoõ hoc theo ti liờu: Bi giõng duoc liờu v Thuc tõp duoc liờu[3] - Dinh luong saponin, flavonoid ton phõn lõ chố dõng bng phuong phõp cõn [3] - Phõn lõp cõc chõt bng phuong phõp sc k cụt - SKLM dựng bõn mụng Silicagel GF254 (Merck) - Do dụ õm duoc liờu bang mõy Sartorius tai bụ mụn Duoc liờu- Trung DH Duoc H Nụi - Do tỷ ngoai trờn mõy UV- VIS Spectrophotometer carry E- varian tai phụng thf nghiờm trung tõm- Trucrng DH Duoc H Nụi - Do hụng ngoai trờn mõy 1650 Perkin Elmer tai phụng thi nghiờm trung tõm- Trucrng DH Duoc H Nụi - Ghi phộ khụl trờn mõy 5989-B-MS tai phụng cõu truc- Viờn hoõ hocTrung tõm khoa hoc tu nhiờn v cụng nghờ quục gia 2.2.2 Phuang phõp thỹ tõc dung chong oxy hoõ - Xõc dinh hoat tmh don goc tir anion superoxide dirỗc xõc dinh theo phiùofng phõp cỷa Imanari v cụng su bng cõch xõc dinh phỷc tao thnh giựa anion superoxide 2' hờ Xanthin/ Xanthin oxydase v NBT Phrùc ny cụ mu xanh tfm cụ dụ hõp thu eue dai buục sụng 570 nm - Thõm dụ tõc dung chụng peroxy hoõ lipid mng tở bo gan v nõo chuụt nhat trang, theo phuorng phõp cỹa Janiga Robak (Balan 1974) & Misno Tanaka Nguyờn l cỹa phuang phõp ny l xõc dinh MDA, mụt cõc sõn phn cỹa su peroxy hoõ lipid Chõt ny phõn ulig vụi acid thiobarbituric tao su phiic hop Trimethine cụ mu hụng v cụ dụ hõp thu eue dai 532nm Phõn ỷng cỹa MDA vụi acid thiobarbituric: Malonyl dialdehyd acid thiobarbituric Phirc Trimethine ( Thuc hiờn tai phụng Dụng Y thuc nghiờm - Viờn YHCT Viờt Nam) Trờn gan Trờn nõo Mõu chiợng BMõu thir DMõu thỹ DMõu thir ôMõu thir QMu thỹ Biởu 1: Lirỗmg MDA tao thnh Trờn gan Trờn nõo Mu chiợng BMõu thự DMõu thir Mu thir BMõu thir4 Mõu thir5 Biởu dụ 2: Hoat tmh chụng oxyhoõ 31 Nhõn xột: Qua bõng 8,9 v biởu dụ 1,2 cho thõy dich thu* flavonoid thở hiờn khõ rụ tõc dung ỷc chờ' quõ trinh peroxy hụa lipid dich dụng thở tộ bo gan v nõo, hoat tmh chụng oxy hoõ tng t lờ thuõn vụi nụng dụ cỹa flavonoid ễ nụng dụ thõp, dụ ỷc chộ dat trờn 50% dụi vụi cõ tộ bo gan v nõo 3.2.2 Xõc dinh hoat tinh don goc tu anion superoxid { - Chuõn bi: + Dung dich mõu thu": Can flavonoid duoc ho tan dờm phosphate, cõn chon liờu thich hop dở thir hoat tmh don gục tu 2' Kột qu thỷ so bụ cho thõy dung dich cõc mõu thỷ dua vo hụn hop phõn ỷng dờu cụ mu dõc trung (dõm nhõt cụ mu xanh tim) v dõm dụ thay dụi theo nụng dụ tự 5|ig/ml dộn 40 Jig/ml VI võy mõu duoc chu an bi bng cõch pha loõng dở cụ dung dich thỷ l lmg/ml + Cõc dung dich hoõ chõt thi nghiờm: Dung dich Na2C030,05M Dung dich Xanthin 3mM Dung dich EDTA 3mM Dung dich Xanthin oxydase(XC)D)0,14mg prot/ml Dung dich CuCl26mM Dung dich Nitro blue Tetrazolium(NBT) Dung dich dờm phosphate(PBS) - Tiộn hnh thi nghiờm : Hụn hop phõn ỷng gễm : 700jil dung dich Na2C030,05M 50|ul dung dich Xanthin 3mM 50pl dung dich EDTA 3mM 32 50|ul dung dich thu cõc nụng dụ khõc Hụn hỗfp duoc trụn k 10 phỹt nhiờt dụ phụng Sau dụ thờm 50|li1 dung dich XOD 0,14 mg Prot/ml, lac k v giỹ 20 phỹt nhiờt dụ phụng Ngimg phõn ỹng bang cõch cho thờm 50 |ul dung dich CuCl2 6mM dung dich sở cụ mu xanh tim phõn ỹng giỹa NBT v anion superoxide 2' Do quang buộe sụng 570nm Tac dung don gễc tu duoc tmh bang cõch so sõnh dụ hõp thu quang hoc cỹa dung dich thir so vụi dụ hõp thu quang hoc cỹa dung dich khụng chỷa mõu thỹ - Kờ't quõ duoc trinh by bang 10 v biởu dụ Bng 10: nh hirong cỹa flavonoid ton phn dụi voi su tao thnh anion superoxide hờ Xanthin/Xanthin oxydase Dung dich flavonoid Nụng dụ Mõt dụ quang Thộ tfch mõu hụn Mõu HTCO(%) dua vo p/u ( ESD) hop p/u (Hl) (ixg/ml) Mõu chỹng 0 0,420,000 Mõu thỹ 5 13,33 0,364+0,004 Mõu thỹ 10 10 22,62 0,3250,001 Mõu thỹ 20 20 30,71 0,291 0,001 Mõu thir 30 30 32,14 0,2850,003 Mõu thỹ 40 40 42,38 0,24210,001 33 D ụ ufc chộ % 50 Mõu chiợng 40 | Mõu thỹ 30 Mõu thỹ 20 Mõu thỹ 10 | Mõu thỹ Mõu thỹ Biởu dụ 3: Hoat tmh don gục tu anion superoxide Nhõn xột: Dung dich flavonoid co tõc dung ỷc chộ su hùnh thnh gục tu hờ Xanthin/Xanthin oxydase Khõ nõng ỷc chộ su tao thnh gục ( khõ nõng don gục tu do) cỹa dung dich thỹ tõng t lờ thuõn vụi nễng dụ cỹa flavonoid v dat dụ ỷc chộ 42,38 % nụng dụ l 40(iig/ml 34 PHAN 3: KET LUAN VA Dấ XUT 4.1 Kờt luõn Sau thụfi gian nghiờn cỹu vờ cõy chố dang, chung tụi dõ thu duoc mot sụ kột qu sau: 4.1.1 Vờ thnh phn hoõ hoc: > Qua dinh tmh bang phõn irng hoõ hoc cho thõy lõ chố dang cụ chỷa: saponin, flavonoid, coumarin, tanin, acid amin, acid hỷu co > Hm luong saponin lõ l: 5,54 0,23% > Hm luong flavonoid lõ l: 2,83 0,23% > Bang SKLM vụi cõc hờ dung mụi thich hop dõ xõc dinh dich chiột lõ chố dang cụ 11vờt hiờn mu voi thuục thir NH3 cụ thở l flavonoid, vờt hiờn mu vụi thuục thỷ H2S0410%/ cụn cụ thở l saponin Dõ thu phõn saponin duoc sapogenin v dinh tmh bng SKLM thõy cụ vột hiờn mu vụi thuục thir H2S0410%/ cụn cụ thở l sapogenin y Dõ xõc dinh chợ sụ phõ huyột cỹa saponin l: 133,33 v chợ sụ bot cỹa saponin l: 666,67 > Phõn lõp duoc chõt lõ chố dang, cõn cỹ vo tỹ ngoai, hụng ngoai, phụ khụi so vụi thu viờn khụi nhõn dang V! (CD)l esculetin v V2(CD2) du kiộn l mụt hop chõt cụ cõii trỹc flavanon 4.1.2 Vờ tac dung sinh hoc: Thir tõc dung chụng oxyhoõ bõo vờ tộ bo gan v nõo chuụt cho thõy flavonoid ton phn cụ tõc dung ỹc chộ quõ trợnh POL rat rụ Hoat tmh ny tõng t lờ thuõn vụi nụng dụ flavonoid 35 ! + Vod dich dụng thộ l gan chuụt, nụng dụ 0,25 mg/ml dụ ỷc chộ quõ trợnh POL dat 57,03% + Vod dich dụng thộ l nõo chuụt, nụng dụ 0,25mg/ml dụ tic chộ quõ trợnh POL dat 66,91% - Xõc dinh hoat tfnh dỗn gục tu anion superoide hờ Xanthin/Xanthin oxydase cỹa flavonoid ton phn Khõ nõng ỷc chộ su tao gục tu cỹa dung dich thỹ tõng t le thuõn vod nụng dụ flavonoid ton phõn v dat duoc dụ ỷc chộ42,38% nụng dụ flavonoid l 40|ig/ml 4.2 De xuõt Duoc liờu ny cn duoc nghiờn cỷu sõu hon vờ thnh phn hoõ hoc cỹng nhu tõc dung sinh hoc dộ tao co sụ khoa hỗc viờc minh chỷng tõc dung cỹa chung nhm nõng cao giõ tri sỹ dung vi thuục ny 36 TI LIấU THAM KHO TI LIấU TIẫNG VIấT : Dm Trung Bõo- Cõc goc tu do.Tap chi duoc hoc T6/94, tr.29-30; Tl/95,tr.252 Nguyờn Tien Bõn, Nguyờn Khc Khụi, 1999 Tờn khoa hoc cõy chố dang Viờt Nam Tap chi sinh hoc, sụ 1, tr 1-3 Bụ mụn duoc liờu - Trucrng dai hoc duoc H Nụi - Bi ging duoc liờu, tõp I, II, 1998 - Thuc tõp duoc liờu phn hoõ hoc,1997 Bụ mụn thuc võt - Trucrng dai hoc Duoc H Nụi Thuc võt duoc Bụ y tờ' - Duoc diờn Viờt Nam H, tõp 3, 1994 Vỹ Vn Chuyờn - Bi giõng thuc võt hoc NXB y hoc H Nụi, 1991, tr.260 Nguyờn Vn Dn, Nguyờn Viờt Tuu - Phuong phõp nghiờn cỹu hoõ hoc cõy thuoc NXB y hoc H Nụi, 1985 Trn Thi Lan Huong - Bucrc du nghiờn curu cõy chố dõng Khoa luõn tụt nghiờp duoc s dai hoc 1999 Nụng Vn Hai, Hong Thi Lờ, Nguyờn Thuong Dong - Kột quõ phn tich dinh tợnh v dinh luỗmg mot sụ nhụm chõt cõy chố dõng Tap chi duoc liờu, sụ 1/2001, tõp 6, tr.3-6 10 Pham Thanh K - Chuyờn dộ duoc liờu I ,Tl/2002 11 Ngụ Vn Thu - Hoõ hoc saponin Dai hoc y duoc thnh phụ' Hụ Chi Minh, Khoa duoc 1990 12 Bờ' Thi Thuõn - Flavonoid v mot sụ tac dung sinh hoc cỹa chỹng Dai hoc Duoc H Nụi 13 Sụ khoa hoc cụng nghờ v mụi tnrcmg tinh Cao Bng - Tap chf khoa hoc cụng nghờ v mụi trucmg, 1997, tr 44-45 14 Viờn duoc liờu - Cụng trợnh nghiờn cỹru khoa hoc (1997-2000), tr 111-115 TI LIấU TIẫNG ANH : 15 Imari T, Hitora M and Miyazaki - improved assay method for superoxide dismustase Igakuno Ayumi ,1977, p 496,497 16 Ming -An Quang et al, 1996 Phytochemistry 43(2), 443-445 17 Ming -An Quang et al, 1996 Phytochemistry 41(2), 871-877 TI LIấU TRấN MANG INTERNET: 18.http://www.ctu.edu.vn/workshop/hnkh-v 11 thainguyen/thang.html 19 http://www.CB.gov.vn/tiemnang/nonglam.html Phu lue I: PHU LUC Pho tir ngoai cỹa V^CD) Pho hụng ngoai cỹa V,(CD) Pho khụl cỹa V,(CD) Phu lue II Pho tỹ ngoai cỹa V2(CD2) Pho h6ng ngoai cỹa V2(CD2) Pho khụl cỹa V2(CD2) PHU LUC I ABS ABS ABS ABS 26 0.3 9 83 78 34 715 -0.0007 ABS 3.0000 NM NM NM NM 0 0 29 7 2 3 3 8 S a m p C D N Huy/DL Gain 101 Basel ine OFF SBU Page 27 May 2003 2.0 450.00 _ MM DISPLAY DATA 2.0000 0000 - 0.0000 200.00 300.00 400.00 r_ ABS 0.0000 -> 3.0000 Baseline Erase Uieu Re-scale Zoom Use the graphies cursor track slope NM ursor Label 200.00 -> More 450.00 PERKIN ELMER 19.69- XI \ 4000 3500 3000 2500 03/05/27 08:30 Phong TNTT-DH Duoc X: scan, 4.0cm-l, f iat, smooth Samp.CD-M.Huy/DL 2000 F ile O perator A cqu ired Instrument Sample Name M ise I n f o V i a l Number C : \HPCHEM\l\DATA\M-DIP341 D Phong Cau t r u c , V i e n Hoa ho c 19 May 103 : pm u s i n g A c q M e t h o d N - D I P 5989B MS CD S o l v e n t : CH30H S c a n 149 bundance (4.963 m i n ) : M-DI P34 TẽD 200000 40000 20000 19921 !m/z > 40 60 80 100 140 160 180 200 220 234 240 256 260 275 280 313 300 320 340 354 368 382 396 418 340 420 360 380 400 L ib r a r y Searched Q u ality ID : C:\DATABASE\WILEY2 L : 91 : A escu letin Aburùclance Scan 149 ( T 63 m i n ) : 178 M - D IP D C*T 150 8000 6000 4000 2000 m / z - -> Abun dan ce 51 69 94 50 213234256 293313 368 396418 "i i ir i.i -t-tr i i rp- l ' | i r-1 i; i i r 100 150 200 250 300 350 400 "ff6"l978: A e s c u l e t i n ( * ) 150 178 8000 : 6000 4000 J 2000 51 69 Scan 149 | (4.963 t m i n ) : M -DIP341.D CD m/z abund 50.10 9980 51.10 11617 52.10 5683 53.10 8578 54.10 1325 55.10 3046 56.10 697 57.10 1950 58.10 214 59.10 145 60.10 1207 Scan 149 ( m i n ) : CD m/z abund 61.10 2673 62 10 2779 63 10 3590 64 10 1483 65.10 6594 9826 66 10 67.10 1651 68 10 1295 69.10 13473 70 10 2631 71.10 2425 M - D I P D m/ z 72 20 73 10 74 10 75 10 76.10 77 00 78 10 79.10 80 10 81.10 82 10 abund 233 1870 3496 8555 13078 3860 1317 9205 5599 3695 894 m/z 83 10 84 10 85 10 86 10 87 10 88 00 89 00 90 00 91 00 92 00 93 10 abund 1158 926 1755 673 737 321 1528 302 624 1282 2471 m/z abund 94.10 15535 95.00 2438 96.10 759 97.10 1328 98.10 854 99.10 412 100.00 117 101.10 470 102.00 233 103.00 957 0 10801 Scan 149 ( m i n ) : CD m/z abund 2140 105.00 106.00 359 107.00 1246 108.00 2630 109.00 1642 110.00 505 111.10 728 358 112.10 113.10 320 114.10 131 115.00 523 M - D I P ,D m/ z 1 0 1 0 1 0 1 0 120 05 120.95 21 122.95 124.05 25 26 abund 198 143 220 583 906 13568 7505 1038 399 358 526 m/ z 127.05 128.05 128.95 129.95 131.95 132.95 133.95 134.95 135.95 136.95 137.95 abund 1604 257 1268 239 8393 1123 343 513 363 642 409 m/z abund 138.95 335 139.95 160 245 141.95 123 143.05 510 144.05 165 144.95 159 191 626 148.95 16456 149.95 177216 Scan 149 ( m i n ) : CD m/ z abund 16464 150.95 151.95 2076 52 368 156 153.95 198 155 05 557 156.95 161 124 108 205 268 161.95 M - D I P ,.D m/ z 162.95 63 64 65 16 16 69 69 71 72 75 abund 701 1133 337 328 1332 336 175 101 663 206 174 m/ z 177.95 178.95 179.95 180.95 181.95 182.95 185.05 185.95 186.95 189.05 190.05 abund 211968 27272 3425 507 136 113 908 213 142 135 174 m/z abund 9 496 9 277 19 160 298 140 145 9 157 9 471 200.05 135 203.05 147 203.95 137 Scan 149 (4 963 min) : CD abund m/ z 121 204.95 431 205.95 213 206.95 180 208 05 210.05 108 211.05 161 213 05 803 214.05 181 218.05 127 219 05 111 220 15 115 M-DIP341 D m/ z 221.05 2 2 225.15 2 2 2 3 5 237 05 abund 122 161 107 125 382 252 119 405 141 332 140 m/ z 239.15 241.15 242.15 247.15 248.15 253.15 255.15 256.15 257 15 264.15 265.05 abund 350 387 199 100 117 167 231 1495 416 313 137 [...]... 20, dộ y n sau 24 gi, doc kờt quõ CxX CSPH = 2x100 Trong dụ: C : Nụng dụ dung dich duoc liờu X : S ml dung dich duoc liờu Kờt quõ : ễng nghiờm s 12 g y hiờn tuong phõ huyột du tiờn v hon ton CSPH = 2,5 2x100 = 133,33 x 0,6 V y CSPH cỹa saponin l 133,33 2.1.2.3 Dinh tmh saponin bng SKLM Dich chõm sac k: ho tan mot ft cõn saponin ton phn trong MeOH Bõn mụng: Silicagel GF254(Merck) dõ trõng san Hờ... theo chiờu doc trong 15 gi y, de y n, sau 15 phỹt do chiờu cao cụt bot Ket quõ: ụng thỹ 6 cụ cụt bot cao 1 cm CSB = k N10xxaF Trong dụ: k : hờ s pha loõng v : Thộ tfch dung dich chiột dem xõc dinh chợ s bot a : Khụi luong duoc liờu dem xõc dinh chợ s bot N: S ụng nghiờm cụ cụt bot cao 1 cm CSB = 4 10 6Xx 1 = 666,67 V y CSB cỹa Saponin l 666,67 3.1.2.2 Xõc dinh chợ sophõ huyởt: - Pha dung dich duoc... nitroprussiat 0,5% v vi giot NaOH 1% khụng th y xuõt hiờn mu dụ Kột luõn: Duoc lieu khụng cụ glycosid tim Dinh tmh saponin: - Hiờn ttfOng tao bot: Cho vo ụng nghiờm to 1 g bụt duoc lieu, thờm 5m 1 H20, dun soi nhe, loc nụng Dich loc cho vo mot ụng nghiờm to, thờm 10 ml H20 lõc ụng nghiờm trong 2 phỹt theo chiờu doc Dộ y n quan s t hiờn tuong tao bot Th y cụt bot ben sau 15 phỹt - Hiờn tuong phõ huyột:... Ket quõ SKLM mot chiờu cho th y cụ ft nhõt 6 vờt hiờn mu vụi thuục thự H 2S0 4 trong cụn 3.1.2.4 Dinh ỹnh sapogenin bang SKLM: L y 0,5 g cn saponin ton phn ho trong MeOH dem thu phõn vụi 30ml dung dich HC1 5% trong bùnh cu, dun hụi luu 8h Dich thu phõn dộ nguụi, sau dụ cho vo bùnh gan lc vụi ether Gan l y lụp ether, cụ cõch thu dờn khụ thu duoc cõn sapogenin Dich chõm s c k: ho tan mot ft cn sapogenin... 0,59 10 0,57 0,64 11 0,62 0,69 0,43 Vng 0,56 Vng Vng Vng Vng 0,63 Nõu Vng 22 Vng Vng sang Vng s ng Vng Vng s ng Nõu dõm Vng s ng Vng Vng Vng s ng Vng Vng s ng Nõu dõm Vng s ng Vng Vng dõm Vng Vng s ng Vng Vng tuai Vng II m Ftp Hờ I Hờ II Sac k dụ 3: Dinh tmh flavonoid bõng SKLM Nhõn xột: qua kột quõ SKLM 1 chiờu cho th y cụ 11 vờt chõt hiờn mu vụi thuục thỷ dõc trung cho flavonoid 3.1.3.3 Dinh luong... dờu.L y 1ml dich chiột cho vo ụng nghiờm, thờm 1 ml dich mõu 2% dõ loai fibrin, bit dõ'u ụng nghiờm bng ngụn tay v doc nguoc nhe nhng ụng nghiờm Dộ y n sau 3 giụ th y hiờn tuong phõ huyột x y ra hon ton, dung dich trong ụng trụ nờn dụ dờu khụng cụ cõn lõng dong d y ụng nghiờm - Phõn ỹng phõn biờt 2 loai saponin: Cho 1 g bụt duoc lieu vo ụng nghiờm, thờm 10ml cụn 90 dun cõch thu dộn soi, loc nụng, l y. .. fù' 41 Hờ I Hờ II Sac ky dụ 1 Hờ III Sac ky do 2 19 I Nhõn xột: qua kờt quõ SKLM lchiờu cho th y cụ ft nhõt 6 vột chõt hiờn mu vụi thuục thir H 2S0 4 trong cụn 3.1.2.5 Dinh luong saponin ton phn trong duoc liờu: Cõn chmh xõc khoõng 10g bụt la dõ xõc dinh dụ õm, cho vo bợnh soxhlet chiột vụi chloroform dộn khi dich chiột trờn bợnh hột mu xanh L y gụi duoc liờu ra de nhiờt dụ phụng cho bay hoi hột dung... 100 ml thờm nirục dờn vach, l y 25 ml dich chiờt ny pha loõng thnh 100 ml de xõc dinh chợ s bot L y 10 ụng nghiờm cụ kich thiùục bng nhau, cao 16 cm, durong krnh 16mm Dõnh s tự 1 dờn 10 Ln lirot cho vo nhir sau: 14 S ụng Dichchiột Saponin(ml) Nuục cõt (ml) Tong s (ml) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 L y tay bit du ụng nghiờm rụi lac manh... dich s cụ mu xanh tim do phõn ỹng giỹa NBT v anion superoxide 0 2' Do quang buộe s ng 570nm Tac dung don gễc tu do duoc tmh bang cõch so s nh dụ hõp thu quang hoc cỹa dung dich thir so vụi dụ hõp thu quang hoc cỹa dung dich khụng chỷa mõu thỹ - Kờ't quõ duoc trinh by bang 10 v biởu dụ 3 Bng 10: nh hirong cỹa flavonoid ton phn dụi voi su tao thnh anion superoxide trong hờ Xanthin/Xanthin oxydase Dung... chuõn bi nhu sau: 28 Cõn chrnh xõc khoõng 3,0g gan hoc nõo chuụt cho vo coi thu tinh, thờm 5ml KC1, nghiốn trờn dõ sau dụ chuyởn vo m y dõnh tiộp cho dụng nhõt, thcri gian nghiờn l 3 phỹt/mõu Khi duoc mụt hụn dich dụng dờu chuyởn hụn dich vo cục thu tinh sach, thờm dung dich KC1 sao cho nụng dụ hụn dich l 41,7mg/ml + Cõc dung dich hoõ chõt thi nghiờm: Dung dich Morh 0,0165g/l Dung dich acid ascorbic 0,4352 ... ptP stP MDA SOD NXB SKLM YHCT CSB CSPH : NBT : BNG CHĩ'VIấT TT Hoat tmh chong oxyhoõ Ethyl acetat Methanol Flavonoid ton phn Saponin ton phn Malonyl dialdehyd Superoxide dismustase Nh xuat bn Sac... Phytochemistry thõng nõm 1996 [17] saponin l kudinosid A, B, C duoc chiờ't tự la c y Ilex kaushue S. Y. Hu dõ duoc xõc dinh cụ cõu truc - O - p - D - glucopyranosyl (l-ằ3) - a - L rhamnopyranosyl-... -L-arabinopyranosyl - [3 kudinlactone - O - p - D - glucopyranosyl (l-ằ2) - p - D - glucopyranosyl (l-ằ3) a- L - arabinopyranosyl - P kudinlactone - O - P - D - glucopyranosyl (l-ằ2) - P - D - glucopyranosyl