BÔ Y TÉ TRÜÔNG DAI HOC DÜOC HÀ NÔI Dl/ONG THIHUONG GƠP PHAN NGHIÊN CtJtJ HỴNH THÂI THl/C VÂT VÀ THÀNH PHAN HOÂ HOC CÂY CRINUM SP5 AMARYLLIDACEAE , (KHOÂ LN TƠT NGHIÊP DUDC SI KHÔ 1998 - 2003) Ngirơi hirông dân : TSKH Trân Vân Thanh Noi thufc hiên : Bô mon Dirac lieu Thôi gian thirc hiên : Tùf thâng den thâng 5, 2003 r()ô i font/ Utn tl tio n tj où h ièt du situ sù e, tơ i ỉUt b in j to ld i eu tu du eh itti t/ tilt tô i : ÇJSOCêfù: ÇJrÂtt r()ün ÇJfaanh Q lgxièi th a ï^ ttù tt'tie tie fi liu d u tf d â n f d it hùo tâ ti fitt/i v it lu ô tt tut) tTieu liiè tt tin ta it lo i tilt fit ttv tô i eé thé Itditn tliù u li U ltoti liiit t i tô t nt/tiiêp tu u j ÇJơi eitn tj x irt h ùtj to ld i eu n i du tô t cê- Q (tftufên Jite li ÇJlw- ^Oiètt ^Dtnic lie u ó fótt th ê eau th u tj t/iuo, eue eùtt Ut/ tin tâ t o iêu Jiô titô ti r()itd e lie u ttù tfit'tp itd U til fin it ó tuo ifỵè tt Uiêu eJto tô i Ito ùit tliù n / i Ittitu o in t n g , Q lkâtt dtp nùtf tơ i eitutf asUt Ihuj tơ ! d i ón i dit itô i Odi ban bè o it ut/ttdi th il u (fit ln (Tout/ oiêu ó q iu ft ïtd ftOutf il tôt t/tnt t l'u til tin te /tien Uhó lu itu ttù if 'êfơà Q lơi n ffin j th ù u tf ttù n i 0 (Sitih o iêu r/)ttduti Ç Jlti ^ûttdtttf MUC LUC DAT VAN DE PHANI : TÔNG QUAN TÀI LIEU 1.1 Vê thuc vât ho Thüy tien (Amaryllidaceae) 1.1.1 Dàc diëm thirc vât ho Thüy tiên 1.1.2 Dàc diém thuc vât chi Crinum 1.1.3 Mot so lồi thc chi Crinum cô Viêt Nam 1.2 Nhûrng nghiên cufu vê thành phàn hoâ hoc cüa chi Crinum 1.3 Tac dung sinh hoc cơng dung cüa mot so lồi thc chi Crinum PHAN II : NGUYÊN LIEU VÀ PHI/ONG PHÂP NGHIÊN CÜU 13 2.1 Nguyên lieu 13 2.2 Phtrong phâp nghiên cuti 13 2.2.1 Phuong phâp nguyên cüu dàc diëm hinh thâi thuc vât 13 2.2.2 Phuong phâp nghiên ciru vê hoâ hoc .13 PHAN IH : THUC NGHIÊM VÀ KÊT QUÂ 14 3.1 Nghiên cüfu vê dâc diëm hinh thâi thuc vât 14 3.2 Nghiên cüfu vê thành phân hoâ h o c .15 3.2.1 Dinh tỵnh mot sô nhôm hop chat hûu cü 15 3.2.2 Dinh luỗmg alcaloid ton phn .22 3.2.3 Dinh tmh alcaloid bang sac kÿ lôp mông 23 3.2.4 Chiét xuât phân lâp alcaloid 25 3.2.5 Mot so hàng sơ" hô lÿ cüa chat chiét duoc 30 PHÀN IV : KÊT LUÀN VÀ DE NGHI 33 TÀI LIEU THAM KHÀO 34 DAT VAN DE • Hiên bênh ung thu dơi vơi suc khôe vain de duoc quan tâm rât nhiêu câc nuôc, bôi bênh cô tï le tuf vong cao xu huông mâc bênh ung thu thé giôi cüng nhu Viêt Nam ngày gia tâng Cùng vôi su phât triên cûa khoa hoc công nghê thi nhu câu vè châm soc suc khôe cüng cao hon Viêc dàu tu cho nghiên cüu tïm thuôc môi cüng rât lôn, song hiêu quâ dat duoc lai thâp, chua tim duoc thuôc dieu tri dat két quâ mot câch triêt de Vi vây nhu câu vè mot loai thuôc dieu tri hô tro cho bênh nhân ung thu mot viêc câp bâch de dem lai su sông tirng giô cho bênh nhân làm giâm su dau dôn cho bênh nhân ung thu Trong sô câc thuôc diêu tri bênh ung thu, không thé không kë dén câc thuôc cô nguôn gôc thuc vât Nuôc ta lai cô thuc vât phong phü, nên Y hoc dân toc cô tù lâu dôi, nhiêu loai thuc vât dâ duoc su dung chüa tri nhiêu cân bênh hiëm nghèo, dô cô ung thu Amaryllidaceae ho thuc vât rât duoc quan tâm vï cô nhiêu chüa câc nhôm chat cô tac dung sinh hoc dâng chü y cô khâ nâng hô tro chüa bênh ung thu nhu Trinh nü Hoàng cung, Loa kèn dô, Thüy tiên, düa Mÿ, Hoa qc khânh, Lan thôt bào, Hue Chi Crinum thuôc ho cüng cô nhiêu chüa alcaloid cô tâc dung dôi vôi bênh ung thu nhu Lycorin, Crinafolin, Crinafolidin, Ambellin, Undulatin, nhung chua duoc nghiên cüu nhiêu Viêt Nam Xuât phât tù thuc té trên, nhâm dông gôp môt phàn vào viêc nghiên cüu tỵm câc thc chüa bênh ung thu khai thâc nhüng thuôc chi Crinum, cô nhiêu tiêm nâng diêu tri bênh ung thu, chüng tiên hành dê tài: “Gôp phân nghiên cüu hinh thâi thuc vât thành phàn hoâ hoc cûa Crinum sp5 ho Amaryllidaceae” vơi nơi dung sau: Nghiên cüu vê hỵnh thâi thuc vât Nghiên cüu vê thành phàn hoâ hoc cüa Crinum sp5 PHANI TÔNG QUAN TÀI LIEU 1.1 Vè thirc vât cüa ho Thüy tiên (Amaryllidaceae) 1.1.1 Dâc diêm thuc vât ho Thüy tiên (Amaryllidaceae) Ho Thüy tiên thuôc Bô Hành toi (Lilliales), Phân lop hành (Lilidae), nam lôp Mot la màm (Monocotyledones) cüa ngành Thuc vât Hat km (Angiospermae) Théo tài lieu [15] Câc ho Thüy tiên thào cô thân rê hồc thân hành La moc tù gơc rê hinh dâi Hoa dêu luông tmh moc don dôc hay tâp hop thành tan nàm ô dâu mot cân hoa tràn, duôi tan cô tong bao Bao hoa dêu hay không dêu, cô ong hay không cô ong Cô thuÿ dang cânh xép hai hàng, dmh nhiêu hay ỵt, côn cô thêm mot tràng hoa phu hong Nhi dmh ô gôc cüa la dài cânh hoa Chỵ nhi roi hồc dmh Bàu thuong hay ơ, nồn nhiêu dmh giâ nôn trung tru Q nang hồc q nac khơng mơ Théo tài lieu [10] Ho Thüy tiên 70 chi 950 lồi, phân bô câc vùng nhiêt dôi, cân nhiêt dôi nhu Châu Phi, Châu Â, Châu Mÿ Tuy nhiên Châu Âu cüng thây mot vài lồi thc ho Théo GS Vü Vàn Chuyên GS Dô Tât Loi [15] ho Thüy tiên 90 chi vơi 1200 lồi moc khàp thé giôi 1.1.2 Dâc diëm thuc vât chi Crinum Théo tài lieu [10] Nhïïng thuôc chi Crinum thân rê hồc thân hành, la moc tù gơc, hinh dâi bàng Truc phât hoa dang ong, tân bàng mot tan cô la bac bao lai Hoa to, dang ong cng hồc khơng Bao hoa chua phân tân thành dài tràng, gôm hai vông màu, kich thuôc dang ngon giâo, hïnh phêu hay hinh chén Câc phién dmh thành ong thang hay cong nhi dinh bao hoa, thâng dung hay chüc xuông Chi nhi dài, bao phân thâng, dmh limg Bàu ơ, la nôn Vơi nhuy dang chỵ, dâu nhuy hep Q hïnh câu, màng bao ngồi, ma bât thuông Hat ft, to, trôn cô bao dày Phôi nhü nhiêu Théo tài lieu [16] Trên thê' giôi, chi Crinum không 120 lồi phân bơ câc vùng nhiêt dơi Trong dơ 31 lồi dâ duoc câc nhà khoa hoc nghiên cüu cơng bơ Ơ Viêt Nam, lồi thc chi Crinum (kë câ lồi dâ duoc nhâp nơi) Tât câ câc lồi dâ cơng trỵnh nghiên ciïu câc gơc dơ khâc 1.1.3 Mot sơ lồi thc chi Crinum ô Viêt Nam Théo tài lieu [16] ô Viêt Nam lồi sau: Crinum asiaticum L : Nâng, Nâng hoa trâng, Toi loi, Chuôi nuôc Crinum defixum Ker-gawl : Nâng, Nâng hoa dô, Nâng lâ guom (Crinum ensifolium Roxb.) Crinum amabile Donn : Toi loi tia, Nâng hoa dô Crinum giganteum Andr : Nâng to (gôc Trung Phi) : Crinum moorei Hook.f Crinum latifolium L : Nâng Mu-re (gôc Nam Phi) Toi loi lâ rơng, Trinh nür Hồng cung Théo tài lieu [9] ngồi lồi thêm lồi: Crinum zeylanicum (L.) L : Chi nc, Tfch lan (gơc Phi châu) Hiên mot sơ lồi dang duoc nghiên cuu nhu: Crinum spl., Amaryllidaceae Crinum sp2., Amaryllidaceae Crinum sp3., Amaryllidaceae Théo tài lieu [7] côn cô thêm lồi chua tên X I, X2, X3, X4 Câc mâu chua duoc tâp hop dày du, vây chua so sânh duoc giông nhau, khâc 1.1.4 Dâc diëm mot so lồi thc chi Crinum Viêt Nam • Crinum asiaticum L [9], [15]: Cây thân hành hỵnh càu duông kmh 5-10 cm, be hop thành thân giâ cao 20-60 cm, rông 10-20 cm La hinh dâi müi mâc, nhiêu, dài hon m, rông 5-10 cm cô gân song song Truc phât hoa tù nâch la, cao dén 0,7 cm, mang 10-50 hoa màu tràng rat thüm Phién hoa hep dài Tiëu nhi 6, chỵ dơ, bao phàn vàng, bàu nhuy bng nôn Nang to, dang cû toi, dng kfnh 3-5 cm, hơt • Crinum ensifolium Roxb [9], [15] : Cây cô thân hành to ducmg kmh 5-6 cm, thân giâ cao, cô vây màu nâu Là hinh dâi dài 30-60 cm, rông 2-3 cm, chôp nhon Truc phât hoa mânh, tân hoa gôm 5-6 hoa màu trang, mât ngồi màu dơ hơng La dài cânh hoa hinh dâi màu lue nhat, dài mât ngồi màu dơ, ong hoa màu dơ Chỵ nhi màu dô Bàu hinh trùng nguoc cô vôi nhuy mõnh, di hon chợ nhi ã Crinum latifolium L [8] : Cây Trinh nu Hồng cung thc loai thâo, thân hành cô âo, hinh càu ducmg kûih 10-16 cm, be la üp vào thành thân giâ dài 2-15 cm Lâ mông hinh dâi, mép lâ nguyên hoi uôn luon dài 80-110 cm, rông cô thë dén 7-8 cm gân lâ song song Khâc vôd lâ Nâng hoa tràng mat duôi, giüa song cô mot gà sàc nhô chay doc theo lâ Truc phât hoa dài 50-55 cm dàu mang 10-20 hoa hop thành tân Cô be hinh tam giâc màu xanh ve dài 5-7 cm, cuông hoa ngân Hoa dài 10-20 cm, lâ dài cânh hoa nhu màu trang giüa cô vêt phôt hông tao thành ong dài 7-10 cm, cong Nhi ngâ, dài 5-7 cm, bao phân hinh soi dài 20-25 mm, dmh lung Bàu hinh ong chỵ, vơi nhuy mânh, vuot lên nhi 1.2 Nhûng nghiên cuti vê thành phàn hoâ hoc cüa chi Crinum 1.2.1 Câc kiéu alcaloid cüa ho Amaryllidaceae • Théo tài liêu [10] alcaloid cüa ho Amaryllidaceae cô thé chia thành phân nhôm cô câu truc chmh: 1-kiëu Lycorin, 2-kiëu Crinin, 3-kiëu Galanthamin, 4-kiëu Tazettin, 5-kiëu Lycorenin, 6-kiëu Montanin, 7-kiëu Narciclansin; mot so kiëu câu trüc phu khâc • Théo tài lieu [24] alcaloid cüa ho Amaryllidaceae chia làm kiëu sau: Lycorin - 5,10b- Ethanophenanthridine alkaloids : Crinin and Buphanisin; Haemanthamin and Crinamin; Haemanthidin and 6-Hydroxy crinamin Galanthamin [4,2] Benzopyrano [3,4c] indole alkaloids : Tazettin and Criwellin; Pretazettin, Precriwellin and Macronin Lycorenin and Homolycorin Montanin, Coccinin and Manthin Belladin and Ismin 1.2.2 Câc alcaloid cüa chi Crinum Théo mot so tài lieu [10], [16], [23] thi alcaloid cüa chi Crinum chu yéu thuôc kiëu 1,2, kiëu 3,4,5 Ngồi mot sô alcaloid cûa chi Crinum thuôc kiëu 7, nhu Ismin duoc phân lâp tù Crinum powellii [24] Théo tài lieu [11] cho dộn nay, hcfn 20 alcaloid dõ duỗfc phân lâp tù chi Crinum • Cơng thïrc hô hoc cüa mot so alcaloid thuôc mot sô kiëu cüa chi Crinum [22], [24] : Kiéu I: Lycorin OH Kiéu II: 5,10b-Ethanophenanthridin Alkaloids: 11 OH 10 14 12 Haemanthamin R3 = H Crinamin R3 = OCH3 Crinin R = H, R' = OH Buphanisin R = H, R' = OCH3 L X /R Ambellin R3 - OMe, Ri 1- OH Powellin Rg = OH, R n = H Undulatin R3 = OMe, R 6= H Crinamidin R3 = OH, R6= H 6-Hydroxy crinamidin R, = OH, R6= OH Kiéu III : Galanthamin (R = OH, R' = H) R RL N -C H Kiéu V : Lycorenin and Homolycorii Tazettin R - OCH3, R' - H Criwellin R = H, R' = OCH3 Lycorenin R = OH, R' = H Homolycorin R = R' = O 1.2.3 Alcaloid cüa mot sơ lồi thc chi Crinum • Crinum latifolium L : Tùr dàu nhûng nàm 80, mot so tac giâ, dâc biêt o Nhât An Dô dâ nghiên ciru khâ kÿ thành phàn alcaloid cüa Crinum latifolium L Câc tac giâ dâ chiét tâch xâc dinh duoc câu tao phân tu cüa 13 loai alcaloid [8] Théo tac giâ Vô Thi Bach Hue [13]: Dâ khào sât alcaloid chiét tù la Trinh nü Hoàng cung (Crinum latifolium L.) bàng kÿ thuât sàc kÿ ghép voi khoi (GC-MS), tâch duoc 18vêt dô dâ xâc dinh duoc công thu'c cüa vêt: Ambellin, Crinamidin, 6-Hydroxy crinamidin Théo tài lieu [23] Crinum latifolium L cô 16 alcaloid, thi alcaloid dâ duoc tỵm thây dàu tien này, chüng hàu hét thuôc kiéu Crinan 16 alcaloid dô là: Haemanthamin, Crinan-3a-ol, Epoxy-3,7- dimethoxy crinan, Buphanidrin, Powellin, Ambellin, 1,2- fi Epoxy ambellin, 6- Hydroxy buphanidrin, 6- Hydroxy powellin, Crinamidin, 6-Hydroxy Crinamidin, Undulatin, 6- Hydroxy Undulatin, Augustamin, Oxoassoanin, Octadecenamid Ghi chu: (+) : Phân ûng duong tỵnh (-) : Phân ûng âm tỵnh (++) : Phân ûng rơ (+++) : ♦ Phân ûng rât rô Nhân xét: Qua câc phân ûng dinh tỵnh trên, thé so bơ két ln lâ Crinum sp5 ho Amaryllidaceae cô: Alcaloid, flavonoid, saponin, acid amin, tanin, duông khü tu do, caroten; không cô coumarin, glycosid tim, anthranoid, acid hùu co chat béo 3.2.2 Dinh luỗmg Alcaloid ton phõn Cõn chmh xõc khoõng 30g bôt lâ duoc lieu, dâ xâc dinh dô âm, làm âm bàng dung dich H2S04 2% giô Sau dô cho duoc lieu dâ làm âm vào bïnh ngâm kiêt, ngâm lanh 24 giô bàng dung dich H2S04 2% Rût dich chiét dông bô sung dung môi Rût khoâng 400 ml dich chiét thï kiêt alcaloid duoc lieu (kiëm tra bàng thuôc thû Dragendorff), dé lanh qua dêm, loc loai tap Kiêm hoâ dich chiét bàng NH4OH 25% dê'n pH = 9- 10, loc bô tûa Sau dơ lâc vơi chloroform không lân, mơi 15 ml dé lây hêt alcaloid Gôp dich chiét chloroform cô câch thüy dê'n cân Sây cân ô 80° dén luỗmg khụng doi, cõn roi tợnh hm luỗmg cỹa alcaloid Hm luỗmg alcaloid ton phn duoc lieu duoc tỵnh theo cơng thûc: Htp = — — r A(100- X ) Trong dụ a : Luỗmg cõn khụ alcaloid A : Khụi luỗmg duoc liờu dem dinh luỗmg X : Hàm âm cûa duoc lieu Két quâ dinh luỗmg duoc ghi ụ bõng 22 Bõng 2: Kột quâ dinh luong alcaloid toàn phân lâ Crinum sp5 ho Amaryllidaceae Khôi luong Hàm luong alcaloid (g) alcaloid (%) 15,85 0,10 0,40 30,02 15,16 0,09 0,35 29,96 15,16 0,09 0,35 30,00 15,85 0,09 0,36 30,10 14,32 0,10 0,39 Stt Khôi luang Mâu duoc liêu (g) 30,02 Dơ âm (%) Trung bỵnh ♦> 0,37 Két quâ dinh luang duac tinh theo phuang phâp thong kê vôi mire y nghïa a=0,05 cho hàm luang alcaloid lâ Crinum sp5 ho Amaryllidaceae 0,37 ± 0,03 % 3.2.3 Dinh tmh alcaloid bâng sac kÿ lôp mơng • Chn bi ban mơng: Ban mơng trâng sân Silicagen cüa hâng Merck, cô xlO cm duoc hoat hô 110° C lgiơ • Chuan bi dich châm sàc kÿ: Cân không 4g bơt lâ duoc liêu cho vào bỵnh non dung tich 100 ml, thêm 50 ml dung dich H2S04 2%, ngâm lanh giô, thỵnh thông làc Loc dich chiét vào bỵnh gan dung tich 100 ml Kiêm hoâ dich loc bàng dung dich amoniac dâm dâc dén pH=9 Chiét alcaloid base bàng cloroform (chiét làn) Gôp dich chiét chloroform dem cô thu duoc cân Hồ tan cân mot ỵt chloroform dé châm sâc kÿ • Dung mơi triën khai: Hê Chloroform : Methanol : Amoniac [12 : : 0,05] Hê Chloroform : Methanol : Amoniac [13:1: 0,05] Hê Chloroform : Methanol : Amoniac [12 : : 0,05] 23 Hê Buthanol : Acid acetic : Nuôc [4 : : 5] • Hiên màu: bàng thuoc thu: Dragendorff • Kêt q: Hê dung mơi khâ nâng tâch tôt nhât, cho sô vêt nhiêu nhât vêt Hê 1,3, chi cô khâ nâng tâch duoc dên vêt Két quâ dinh tfnh alcaloid bàng sâc kÿ lôp mông duoc trinh bày ô hïnh bâng Hïnh 2: Ânh sàc kÿ Icrp mông khai trién voi dung môi Bàng 3: Két quâ dinh tinh bàng sac kÿ lôp mông lâ Crinum sp5 Amaryllidaceae Chu thfch ♦ Vét Rf 0,75 + 0,54 +++ 0,51 +++ 0,41 +++ 0,30 ++ 0,26 ++ 0,21 ++++ 0,12 ++ 0,05 ++ ++++ : vét rat dâm +++ : vét dâm ++ : vét rô + : vét mô Nhân xét: Két quâ khâo sât sa bô sac kÿ lôp mông chiêu cho thây dich chiét chloroform cüa lâ Crinum sp5 ho Amaryllidaceae cô ft nhat vét chât 3.2.4 Chiét xuât alcaloid toàn phàn phân lâp alcaloid 3.2.4.I Chiét xt alcaloid tồn phàn Cân không 200g bot lâ duoc lieu, làm âm bàng dung dich H2S04 2% giô Sau dô cho duoc liêu dâ làm âm vào bỵnh ngâm kiêt, ngâm lanh 24 giơ bàng dung dich H2S04 2% Rut dich chiét dông bo sung dung môi Rut dich chiét dén kiêt alcaloid duoc lieu (kiëm tra bàng thuôc thü Dragendorff), de lanh qua dêm, loc loai tap Kiêm hoâ dich chiét bàng NH4OH dâm dâc dén pH=9-10, loc bô tua Sau dô làc vơi chloroform không 25 làn, mơi 20 ml de lây hét alcaloid Gôp dich chiét chloroform cô câch thüy thu duoc cân Quy trinh chiét xuât alcaloid toàn phàn duoc mô tâ o so dô 1: Sof dô 1: Sa dơ chiét xt alcaloid tồn phàn lâ Crinum sp5., Amaryllidaceae 26 3.2.4.2 Phân lâp alcaloid bâng sac kÿ cơt • Chn bi cơt theo phuang phâp nhôi côt uôt: Côt sàc kÿ cô kich thuôc 2x50 cm, duoc lâp cô dinh giâ, dây côt cô lot mot lôp mông Chât hâp phu Silicagen hat 0,063- 0,02 mm, dâ duoc hoat hô 110° C giô, duac trôn dèu vôi chloroform thành mot hôn dich Rôt hôn dich vào côt, sau dơ mơ khô cơt cho dung mơi chây dé chât hâp phu lang tu nhiên xuông dây côt Tiép tue dùng dungmôi h ûng duoc rôt lên côt cho chây liên tue mot gian dén côtchâthâp phu hồn tồn on dinh (trong st q trinh thuc hiên không duoc dé dung môi khô côt) Tÿ le Silicagen chât hâp phu không (40:1) • Chn bi hop chât cân tâch: Hồ tan cân alcaloid toàn phân ml chloroform, thêm mot luang nhô bôt Silicagen vào khuây dêu Làm bay hai chloroform, thu duac bơt khơ tai • Dua chât lên cơt: Côt sau dâ duac on dinh, dua bôt dâ duacchuân bi vàocôt, dàn dêu thành mot lôp mơng Trên phu nhe motlơpSilicagen cao không 0,5 • Khai triën côt rira giâi côt: Dùng dung môi Chloroform : Methanol cô dô phân eue tàng dân tù [12 : 2]; [12 : 3]; [12 : 4] dén [12 : 6] de thuc hiên quâ trinh triën khai rufa giâi Mơi dung mơi dùng không 100 ml, toc dô rüa giâi 30 giot/phüt Htrng không ml dich rua giâi vào ơng nghiêm Kiëm tra tùng ông nghiêm bàng sâc kÿ lôp mông trâng sàn Silicagen cüa hâng Merck vôi dung môi Chloroform : Methanol [12 : 2] hiên màu bàng thuôc thü Dragendorff Sau dô gôp câc ông cô sô vét vôi Rf tuang tu nhau, thu duac phân doan: Phân doan (tù ông dén ông 13) : cô vét Phân doan (tù ông 14 dén ông 42): cô vét 27 Phân doan (tù ong 43 dén ong 54): cô vét Phân doan (tù ong 55 dén ong 60): cô vét Phân doan (tù ong 61 dén ong 80) : vét • Kiëm tra phân doan bàng dung môi Buthanol: Acid acetic: Nuôc [4: 1: 5] thây xuât hiên vêt: lvét dâm , vét mô Phân doan duoc tién hành sâc kÿ côt duông kmh côt 1,2 cm, chièu dài côt 35 cm Tiên hành nap côt tuong tu nhu trên, triën khai côt rua giâi côt vôi dung mơi Chloroform : Methanol: Amoniac [12: 6: 0,05] Hûng không l-2ml tùng dich rua giâi vào ong nghiêm Kiëm tra tùng ong nghiêm bàng sâc kÿ lôp mông trâng san Silicagen (Merck) hiên màu bàng thuôc thü Dragendorff Sau dô tâp trung tâ't câ câc dich rira giâi ô câc ong nghiêm cô Rf giông nhau, thu duoc phân doan: Phân doan I (tù ong dén ong 20) : cô vêt Phân doan II (tù ong 21 dén ong 34) : cô vét Phân doan III (tù ong 35 dén ong 56) : cô vét Phân doan III cho bay hoi tu nhiên thu duoc câc tinh thë Két tinh lai thu duoc alcaloid tinh khiét goi A l • Kiëm tra dô tinh khiét cua alcaloid Al phân lâp duoc bàng sâc kÿ lơp mơng: Hồ tan mơt ỵt alcaloid A l methanol, châm lên bân mông chièu, khai triën vôi dung môi sau: Hê Chloroform : Methanol : Amoniac [5 : : 0,05] Hê Buthanol : Acid acetic : Nuôc Hiên màu bàng thuôc thü Dragendorff Két quâ thu duoc ghi ô hinh 28 [4 :1 :5 ] Hïnh 3: Ânh sac kÿ lôp mông kiëm tra dô tinh khiet cüa A l • Alcaloid A l phân lâp duoc alcaloid ô vêt thu: (cô Rf=0,21) alcaloid toàn phàn (xem hïnh 4) Hïnh 4: Ânh sac kÿ cûa chat A l alcaloid toàn phân 29 3.2.5 Mot sơ hâng sơ hô lÿ cüa alcaloid A l phân lâp diïac • Alcaloid A l chat két tinh không màu, hinh kim tan chloroform, methanol, nhiêt dơ nơng chây 210°C • Phé tü ngoai cüa chât alcaloid Al (Hinh 5) câc dỵnh hâp thu ô bàng I 210"m, bàng II 290-280'"” • Phô hông ngoai cüa chat alcaloid Al (Hinh 6) câc dỵnh dàc trung sau: Dỵnh hâp thu eue dai ô 2946, 2842, 1541, 1219 cm'1dâc trung cho nhôm câu truc cô phân tü cüa mot sô crinum alcaloid ❖ Két luân : Vi chua cô két quâ phô khôi (MS), vây chua két luân duoc chât alcaloid A l phân lâp tù lâ Crinum sp5 ho Amaryllidaceae chat gi Chüng së xâc dinh câu truc cüa chat A l sau 30 12 M a y 0 Crinum aie Gain 90 SBU B a s e ine Q F F Page ABS T a ç m e d F i l e CURRENTtt DISPLAV DATA - 0.0002 500.00 NM 210 C l.2572) 0 ' u> A 8000' 'i 234 ( ) 0.4000“ V 0 0 - l 0 0 CO 1 ) 300.00 400.00 190.00 - > NM 0.0000 - > 1.4000 ABS More B a s e ine Erase U ieu Re-scale Zoom Cursor 0E 33ü U r i t e l a b e l s on t h e g r a p h _ Hïnh 5: Pho tûr ngoai cüa chat A l 500.00 500.00 Thu May 22 11:22:39 2003 90 80 70 m osr m zz li m c !m 80 50 C xrO to 10 4000 2000 3000 1000 Wavenymbers (envi) Use name: Thu Number of sampie scans: 32 Number of bâckground scans: Résolution: 4.000 Sampie gain: 2,0 Mirror velocity: 0.8329 Aperture: 100.00 Crinum aie FT-IR NEXUS 870 M C O lü t Phase: KBr dise Hinh 6: Pho hông ngoai cüa chât A l PHAN IV KÉT LUÂN VÀ DE XUAT 5.1 KÉT LUÂN Qua gian làm thuc nghiêm, chüng dâ thu duoc nhüng két quâ sau: - Dâ mô ta dâc diëm hỵnh thâi thuc vât cûa Crinum sp5 ho ' Amaryllidaceae - Dâ dinh tmh mot sô nhôm hỗfp chõt huu ca lõ cõy Crinum sp5 ho Amaryllidaceae so bô két luân lâ cô chua câc nhôm chât sau: Alcaloid, flavonoid, saponin, acid amin, tanin, duông khù' tu caroten; không thây coumarin, glycosid tim, anthranoid, acid huu co, chât béo - Dâ dinh luỗrng alcaloid ton phn lõ cõy Crinum sp5 ho Amaryllidaceae 0,37 ± 0,03 % - Bàng sâc kÿ lôp mông dâ phât hiên lâ Crinum sp5 ho Amaryllidaceae cô ft nhât vêt chât - Tù lâ Crinum sp5 ho Amaryllidaceae dâ chiét xuât, phân lâp tâch duoc mot alcaloid A l, cô câc dàc trung cüa tü ngoai 210, 234, 290”m, hông ngoai 2946, 2842, 1541, 1219 cm'1 nhung chua xâc dinh duoc câu truc cüa chât A l, chung sê xâc dinh câu truc cûa chât A l sau 5.2 DE XUÂT Vôi nhüng két quâ thu duoc nhu trên, chung nhân thây Crinum sp5 ho Amaryllidaceae cân duoc tiép tue nghiên cûu sâu hon vê thuc vât, hoâ hoc tâc dung sinh hoc 33 TÀI LIEU THAM KHÂO TÀI LIÊU TIÉNG VIÊT Bô mon Duoc lieu, Truông Dai hoc Duoc Hà Nôi (1998), Bài giâng duac lieu tâp I, Ché bân in tai Trung tâm thông tin Dai hoc Duoc Hà Nôi Bô mon Duoc lieu, Truông Dai hoc Duoc Hà Nôi (1998), Bài giâng duac lieu tâp II, Ché bân in tai Trung tâm thông tin Dai hoc Duoc Hà Nôi Bô mon Duoc lieu, Truông Dai hoc Duoc Hà Nôi (1999), Thuc tâp duac lieu, phàn hô hoc, Ché bân in tai Trung tâm thơng tin Dai hoc Duoc Hà Nôi Bô mon Duoc lieu, Truông Dai hoc Duoc Hà Nôi (1999), Thuc tâp Thuc vât, Ché bân in tai Trung tâm thông tin Dai hoc Duoc Hà Nôi Vô Vân Chi (1997), Tic diên thuôc Viêt Nam, NXB Yhoc, trang 804- 805 Nguyên Vân Dàn, Nguyên Viét Tim (1980), Phuang phâp nghiên cûu hô hoc thc, NXB Y hoc Tràn Tién Dat (1996), Tâp hap mot so tài lieu vê thuôc chüa bênh ung thu Buâc dau nghiên cûu tac dung khâng khuan, chong phân bào cüa mot sô thuôc thuàng dùng y hoc nhân dân, Luân vân Tôt nghiêp Duoc sï Dai hoc Truông Dai hoc Duoc Hà Nôi, trang 3-11,36-38 Nguyên Hoàng, Vü Doan Trang, Nguyên Thi Thu Hang (1997), “Buée dau nghiên cufu Trinh nût Hoàng cung (Crinum latifolium 34 L.) Mot thuôc cô khâ nàng chüfa mot so bênh ung thu Tap chi Duoc hoc sô 3, trang 7-9 Pham Hồng Hơ (1999), Cây Viêt Nam , Nhà xuât bân trê, trang 496-500 10 Vô Thi Bach Hue (2000), Gôp phàn nghiên cûu sàng loc huông tâc dung tri ung thu, chuyên khâo Trinh nit hồng cungTơm tàt ln an tien si Duoc hoc, Trng Dai hoc Y Duoc Thành HƠ Chi Minh 11 Vô Thi Bach Hue, Nguyên Khâc Quÿnh Cû, Ngô Thu Vân (1997), “6- Hydroxy crinamidine mot alcaloid moi cüa lâ Trinh nû Hồng cung”, Tap chỵ Duoc hoc sơ 11, trang 9-10 12 Vô Thi Bach Hue, Nguyên Khâc Quÿnh Cû, Ngô Thu Vân (1998), “Thâm dô tâc dung sinh hoc cüa mot sơ lồi thc chi Crinum ho Thüy Tiên (Amaryllidaceae) mơ hỵnh thu nghiêm Artemia Salina”, Tap chi Duoc hoc sô 9, trang 23-25 13 Vô Thi Bach Hue, Nguyên Khâc Quÿnh Cû, Ngô Thu Vân (1999), “Khâo sât alcaloid chiét tùr lâ Trinh nû Hoàng cung (Crinum latifolium L.) bàng kÿ thuât sac kÿ ghép vôi khôi pho”, Tap chi Duoc hoc sô 4, trang 9-11 14 Vô Thi Bach Hue, Dô Kiêu Loan, Truong Thi Dep (1999), “Thàm dô tâc dông ürc ché su phân bào cüa cao chiét tiï mot sô lồi thc chi Crinum rê hành ta (Allium ascalonicum.y\ Tap chi Duoc hoc sô 1, trang 17-19 15 Lê Khâ Ké cơng su (1974), Cây thúng thây ô Viêt NamNXB Khoa hoc kÿ thuât, Tâp 5, trang 19,25-27 16 Tràn Công Khânh (1998), “Nhüng nghiên cüfu dõ duỗrc cụng bụ cõc loi thuục chi Crinum (Amaryllidaceae) Viêt Nam”, Tap chi Duoc hoc sô 7, trang 11-12 35 17 Dô Tât Lai (1999), Nhüng thuôc vi thuôc Viêt Nam, NXB Khoa hoc kÿ thuât, trang 509- 512 18 Phan Tông San công sir (2003), “Khâo sât hoat tinh khâng vi sinh vât gây dôc té bào cüa câc alcaloid tü mot sụ loi Crinum cỹa Viờt Nam, Tap chi Duỗfc hoc sô 4, trang 18-21 19 Nguyên Thi Ngoc Trâm câc cơng su (2000), “Mot u to hoat hô té bào lympho T moi invitro invivo chât chiét bàng niïcrc nơng tù’ lâ Trinh nü Hồng cung (iCrinum latifolium L.)”, Tap chi Duac hoc sô 8, trang 8-9 20 Nguyên Thi Ngoc Trâm câc công su (2001), “Hoat tinh gây dôc té bào cüa câc phân doan alcaloid tir Trinh nfir Hoàng cung (Crinum latifolium L.)”, Tap chi Duoc hoc sô 11, trang 21-23 TÀI LIÊU TIÉNG ANH 21 Lam huong Pham (1998), “CD studies of Amaryllidaceae alkaloids stereo chemical analysis of alkaloids isolated from Hippeastrum equestre and Crinum amabile of Vietnamese origin”, the ninth Asian symposium on Médicinal plants, spices and other natural products (INPC), Asomps IX, 80 22 V.A.Snieckus (1973), the alcaloids, volum 3, ed J E Saxton (Specialist Periodical Reports), The chemical society, London, 169 179 23 Nguyên Thi Ngoc Trama Maya Mitovabb Vassya Bankovab (2001) GC-MS o f Crinum latifolium L alcaloids, phytochemistry 24 William C Wildman (1972), chemitry o f the alcaloids, 151170 36 ... phân lâ Crinum sp5 ho Amaryllidaceae Khôi luong Hàm luong alcaloid (g) alcaloid (%) 1 5,8 5 0,1 0 0,4 0 3 0,0 2 1 5,1 6 0,0 9 0,3 5 2 9,9 6 1 5,1 6 0,0 9 0,3 5 3 0,0 0 1 5,8 5 0,0 9 0,3 6 3 0,1 0 1 4,3 2 0,1 0 0,3 9 Stt... phân thân, rê cüa lồi thc chi Crinum khâo sât (Crinum latifolium L ., Crinum asiaticum L ., Crinum amabile Donn ., Crinum spl ., Crinum sp2 ), cao lâ cüa loài Crinum latifolium L ., Crinum spl ., Crinum. .. sau: - Crinum asiaticum L : cô câc alcaloid Crinin, Crinidin, Crinasiadin, Crinasiatin, Crinamin, Criasbetain, Haemanthamin, Ambellin, Ambellin 1,2 -/? epoxy, Flexinin, Hippadin, Lycorin, Lycorin