Đang tải... (xem toàn văn)
... Phòng đề xuất biện pháp phòng trị nghiên cứu 1.1 Mục tiêu đề tài - Xác định chủng vi khuẩn gây bệnh cho cá chẽm nuôi ao đất Hải Phòng - Tìm loại thuốc kháng sinh phù hợp để trị bệnh vi khuẩn cá chẽm. .. Kết nghiên cứu đề tài làm sở để phòng trị bệnh cá chẽm, góp phần phát triển nghề nuôi cá chẽm nước ta 2 1.3 Nội dung nghiên cứu - Nghiên cứu vi khuẩn gây bệnh cá chẽm: phân lập vi khuẩn gây bệnh, ... hình dịch bệnh cá chẽm nuôi ao đất Hải Phòng từ tháng 01/2012 đến tháng 30/12/2013 Hình 1.2: Bản đồ dịch tễ bệnh vi khuẩn cá chẽm Hải Phòng 15 Nhìn vào đồ dịch tễ bệnh vi khuẩn cá chẽm Hải Phòng
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG ĐỖ THỊ PHƯƠNG NGHIÊN CỨU BỆNH DO VI KHUẨN TRÊN CÁ CHẼM (Lates calcarifer Bloch, 1970) NUÔI TRONG AO ĐẤT TẠI HẢI PHÒNG VÀ ĐỀ XUẤT BIỆN PHÁP PHÒNG TRỊ LUẬN VĂN THẠC SĨ Ngành: Nuôi trồng thủy sản Mã số: 60620301 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS. LÊ MINH HOÀNG Năm 2014 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn này tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành nhất tới: Ban giám hiệu Trường Đại học Nha Trang, Khoa đào tạo sau đại học, Phòng Đào tạo Sau đại học, Bộ môn Nuôi trồng thủy sản đã tạo mọi điều kiện tốt nhất để tôi hoàn thành khóa học và luận văn tốt nghiệp của mình. Quý Thầy Cô trong Viện nghiên cứu Nuôi trồng thủy sản đã tận tình giảng dạy, trang bị cho tôi những kiến thức quý báu trong những năm học vừa qua. Thầy Lê Minh Hoàng là giảng viên hướng dẫn đã luôn ân cần chỉ dạy và tận tình giúp đỡ để tôi có thể hoàn thành luận văn. Trung tâm Quốc gia giống hải sản miền Bắc - Viện nghiên cứu Nuôi trồng thủy sản 1 đã tạo điều kiện và thời gian để tôi có thể tham gia và hoàn thành khóa học. Các anh chị và các bạn đồng nghiệp ở Trung tâm Quốc gia giống hải sản miền Bắc - Viện nghiên cứu Nuôi trồng thủy sản 1 đã tận tình giúp đỡ tôi trong suốt quá trình làm luận văn. Một lần nữa tôi xin trân trọng cảm ơn những sự giúp đỡ quý báu đó! Đỗ Thị Phương MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT .................................... i DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU ....................................................................... ii DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ VÀ HÌNH ẢNH................................................ iii MỞ ĐẦU .............................................................................................................. 1 1.1. Mục tiêu của đề tài ................................................................................... 1 1.3. Nội dung nghiên cứu ................................................................................ 2 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU............................................................ 3 1.1. Tổng quan về cá chẽm.............................................................................. 3 1.1.1. Tên gọi và hệ thống phân loại .......................................................... 3 1.1.2. Hình thái, đặc điểm nhận dạng và cỡ .............................................. 3 1.1.4. Đặc điểm môi trường sống ............................................................... 4 1.1.5. Vòng đời và sinh sản ......................................................................... 4 1.1.6. Tính ăn: .............................................................................................. 4 1.2. Tổng quan về tình hình nuôi cá chẽm ở Việt Nam và trên thế giới .... 5 1.2.1. Tình hình nuôi cá chẽm trên thế giới .............................................. 5 1.2.2. Tình hình nuôi cá biển ở Việt Nam ................................................. 6 1.3. Một số nghiên cứu bệnh ở cá chẽm (Lates calcarifer) trên thế giới.6 1.3.2. Bệnh do ký sinh trùng ....................................................................... 9 1.3.3. Bệnh do nấm .................................................................................... 11 1.4. Các nghiên cứu về bệnh cá biển ở Việt Nam ....................................... 12 1.5. Tình hình dịch bệnh trên cá chẽm nuôi trong ao đất tại Hải Phòng từ tháng 01/2012 đến tháng 30/12/2013............................................................ 14 2.2. Phương pháp nghiên cứu....................................................................... 17 2.2.1. Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu .................................................... 17 2.2.2. Thu mẫu ........................................................................................... 17 2.2.3. Xử lý mẫu trong phòng thí nghiệm. .............................................. 18 2.2.4. Nuôi cấy và phân lập vi khuẩn ....................................................... 18 2.2.5. Cảm nhiễm nhân tạo ....................................................................... 22 2.2.6. Thử kháng sinh đồ .......................................................................... 24 2.2.7 Phương pháp xử lý số liệu ............................................................... 24 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU........................................................ 25 3.1. Kết quả phân tích tác nhân gây bệnh ................................................... 25 3.1.1. Dấu hiệu bệnh lý vi khuẩn gây bệnh trên cá chẽm nuôi trong ao đất tại Hải Phòng ....................................................................................... 25 3.1.2. Kết quả phân lập và định danh vi khuẩn gây bệnh trên cá chẽm nuôi trong ao đất tại Hải Phòng. .............................................................. 26 3.2. Kết quả cảm nhiễm chủng vi khuẩn Vibrio alginolyticus phân lập từ cá chẽm bệnh lên cá chẽm khỏe ................................................................... 32 3.3. Kết quả thử nghiệm kháng sinh đồ chủng vi khuẩn Vibrio alginolyticus phân lập từ cá chẽm bị bệnh .................................................. 36 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ................................................... 39 4.1. Kết luận ................................................................................................... 39 4.2. Kiến nghị ................................................................................................. 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO ................................................................................ 40 PHỤ LỤC ........................................................................................................... 48 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT NTTS: Nuôi trồng thủy sản TCBS: Thiosulfat Citrat Bile salts Sucrose agar. NA: Nutrient Agar NT: Nghiệm thức LD50: Lethal Dose, 50% (Liều gây chết 50%). Ctv: Cộng tác viên DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Bảng 3.1. Kết quả phân lập vi khuẩn Bảng 3.2. Các đặc điểm sinh hóa của các chủng vi khuẩn phân lập từ cá chẽm bị bệnh nuôi trong ao đất tại Hải Phòng Bảng 3.3. Kết quả cảm nhiễm vi khuẩn gây bệnh trên cá chẽm của 2 lần cảm nhiễm chủng vi khuẩn V.alginolyticus đã phân lập Bảng 3.4. Tính nhạy cảm của V.alginolyticus đối với các loại kháng sinh DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ VÀ HÌNH ẢNH Hình 1.1. Bản đồ dịch tễ bệnh vi khuẩn trên cá chẽm tại Hải Phòng Hình 2.1. Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu Hình 2.2. Sơ đồ nghiên cứu phân lập vi khuẩn Hình 2.3. Qui trình thử kít API 20E Hình 2.4. Sơ đồ thực hiện thí nghiệm cảm nhiễm vi khuẩn gây bệnh lên cá khỏe Hình 3.1. Cá bị bệnh trong điều kiện tự nhiên Hình 3.2. Tỷ lệ nhiễm các loài vi khuẩn Hình 3.3. Hình ảnh vi khuẩn V.alginolyticus khi nhuôm gram Hình 3.4. Khuẩn lạc V.alginolyticus trên môi trường TCBS màu vàng Hình 3.5. Kết quả phản ứng sinh hóa của V. alginolyticus trên kít API 20E (A); Trên môi trường O/F (B) Hình 3.6. Tần suất bắt gặp của các loài vi khuẩn trên cá chẽm bị bệnh lở loét Hình 3.7. Tỷ lệ chết của cá chẽm cảm nhiễm chủng vi khuẩn V.alginolyticus lần 1 Hình 3.8. Tỷ lệ chết của cá chẽm cảm nhiễm chủng vi khuẩn V.alginolyticus lần 2 Hình 3.9. Cá chẽm bị bệnh trong điều kiện thí nghiệm Hình 3.10. Kết quả thử nghiệm kháng sinh đồ chủng V.alginolyticus 1 MỞ ĐẦU Cá chẽm (Lates calcarifer Bloch, 1790) là loài cá có giá trị kinh tế cao, thịt ngon và là mặt hàng xuất khẩu quan trọng. Cá chẽm có thể nuôi ở cả môi trường nước ngọt, nước mặn và nước lợ. Cá chẽm là loài phân bố rộng tại các vùng biển nhiệt đới và cận nhiệt đới. Tại Việt Nam, cá có ở vịnh Bắc Bộ, vùng biển miền Trung và Nam bộ. Nghề nuôi cá chẽm thương phẩm phát triển từ sự nhạy cảm của người nuôi thủy sản, vì vậy nuôi cá chẽm trong ao hoặc trong lồng ở vùng nước lợ là một lợi thế. Hiện nay, cá chẽm đã trở thành đối tượng nuôi khá phổ biến trong ao đất của nhiều tỉnh miền Bắc và Tây Nam bộ. Tại Hải Phòng, cá chẽm đã được nuôi với nhiều hình thức nuôi như nuôi lồng tại Cát Bà, nuôi bán thâm canh trong các ao đất, nuôi quảng canh cải tiến... ở các quận, huyện ven biển. Tuy nhiên, trong vài năm gần đây tình hình dịch bệnh trên cá chẽm nuôi trong ao đất liên tục xảy ra, gây thiệt hại lớn về kinh tế cho hộ nuôi. Vì vậy, việc nghiên cứu bệnh do vi khuẩn gây ra trên cá chẽm nuôi trong ao đất là cần thiết, từ đó có biện pháp phòng và trị bệnh thích hợp sẽ có ý nghĩa quan trọng trong NTTS tại địa phương Xuất phát từ quan điểm trên, đề tài: “Nghiên cứu bệnh do vi khuẩn trên cá chẽm (Lates calcarifer Bloch, 1790) nuôi trong ao đất tại Hải Phòng và đề xuất biện pháp phòng trị” được nghiên cứu 1.1. Mục tiêu của đề tài - Xác định được chủng vi khuẩn gây bệnh cho cá chẽm nuôi trong ao đất tại Hải Phòng. - Tìm được loại thuốc kháng sinh phù hợp để trị bệnh do vi khuẩn trên cá chẽm nuôi trong ao đất tại Hải Phòng. 1.2. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài Ý nghĩa khoa học: Kết quả nghiên cứu của đề tài sẽ bổ sung vào nguồn tư liệu nghiên cứu dịch bệnh trên cá chẽm nuôi ở nước ta. Ý nghĩa thực tiễn: Kết quả nghiên cứu của đề tài sẽ làm cơ sở để phòng và trị bệnh trên cá chẽm, góp phần phát triển nghề nuôi cá chẽm ở nước ta. 2 1.3. Nội dung nghiên cứu - Nghiên cứu vi khuẩn gây bệnh trên cá chẽm: phân lập vi khuẩn gây bệnh, dấu hiệu bệnh lý trên cá chẽm nuôi trong ao đất. - Cảm nhiễm vi khuẩn xác định tác nhân gây bệnh - Thử kháng sinh đồ các chủng vi khuẩn gây bệnh để lựa chọn kháng sinh phù hợp, đề xuất biện pháp phòng, trị bệnh 3 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1. Tổng quan về cá chẽm 1.1.1. Tên gọi và hệ thống phân loại Tên khoa học: Lates calcarifer (Bloch, 1790) Tên tiếng Anh: Sea bass, barramundi. Tên tiếng Việt: Cá chẽm, cá vược Hệ thống phân loại[22]: Giới: Động vật (Animalia) Ngành: Có dây sống (Chordata) Ngành phụ: Có xương sống (Vertebrata) Lớp: Cá (Pisces) Lớp phụ: Cá xương (Teleostomi) Bộ: Cá vược (Perciformes) Họ: Cá vây tia (Centropomidae) Chi: Cá chẽm (Lates) Loài: Cá chẽm (Lates calcarifer Bloch, 1790) 1.1.2. Hình thái, đặc điểm nhận dạng và cỡ Cá chẽm có thân dài, vây đuôi khuyết sâu, đầu nhọn, nhìn bên lõm phía lưng (hình dạng lưng lõm) và lồi ở phía trước vây lưng. Miệng rộng, hơi so le, hàm trên kéo 4 dài tới tận mắt, răng dạng lông nhung, không có răng nanh. Vây lưng có 7 - 9 gai và 10 -11 tia mềm. Vây hậu môn tròn, có 3 gai, 7 - 8 tia mềm, vây đuôi tròn, vảy dạng lược rộng (xù xì hay nhẵn)[22]. Chiều dài của cá thể lớn nhất được xác định cho đến hiện nay là 200cm và khối lượng tương ứng là 60kg[1]. Màu sắc: Giai đoạn cá giống có màu nâu ô-liu ở phía trên và màu bạc hoặc nâu vàng ở phần bên và phần bụng, giai đoạn trưởng thành cá có màu xanh lục hay vàng nhạt ở phần trên và màu trắng bạc ở phần bụng[22]. 1.1.3. Vùng phân bố Cá chẽm phân bố rộng ở các vùng Nhiệt đới và Cận nhiệt đới thuộc Tây Thái Bình Dương và Ấn Độ Dương, giữa kinh tuyến 500 Đông - 1600 Tây; vĩ tuyến 260 Bắc - 250 Nam. Cá còn tìm thấy ở khắp phần Bắc châu Á, phía Nam kéo dài đến Queensland (Australia), phía Tây đến Đông châu Phi. Ở nước ta, cá chẽm phân bố ở dọc bờ biển từ bắc đến nam[1],[22]. 1.1.4. Đặc điểm môi trường sống Cá chẽm sinh trưởng và phát triển tốt ở điều kiện môi trường nhiệt độ: 15 280C, độ mặn: 2 - 35 ‰ , độ sâu: 5 - 20m. Chúng thường sống tập trung ở vùng nước ven bờ, cửa sông, rừng ngập mặn và phân bố cho tới độ sâu 40m[1]. 1.1.5. Vòng đời và sinh sản Cá chẽm trải qua phần lớn thời gian sinh trưởng (2 - 3 năm) trong các thủy vực nước ngọt như sông, hồ. Cá có tốc độ tăng trưởng nhanh, thường đạt cỡ 3 - 5kg sau 2 3 năm. Cá trưởng thành (3 - 4 tuổi) di cư từ vùng nước ngọt về vùng cửa sông và ra biển, nơi có độ muối từ 30 - 32 ‰ để phát triển tuyến sinh dục và đẻ trứng sau đó. Cá đẻ đồng thời với thủy triều lên và theo chu kỳ trăng[22]. Cá đẻ quanh năm, mùa đẻ rộ từ tháng 3 - 5 và 7 - 8[1]. 1.1.6. Tính ăn: Cá chẽm trưởng thành là loài cá dữ, phàm ăn, thức ăn ưa thích của chúng là các loài cá tạp, tôm, chúng không ăn thực vật và các loài giáp xác khác như cua, cáy... Cá sinh trưởng nhanh, sau 1 năm, từ cỡ cá giống 4 - 5cm có thể đạt trọng lượng từ 1,5 3kg[1],[22]. 5 1.2. Tổng quan về tình hình nuôi cá chẽm ở Việt Nam và trên thế giới 1.2.1. Tình hình nuôi cá chẽm trên thế giới Do giá trị dinh dưỡng cao, nhu cầu thị trường ngày càng mở rộng và là loài phân bố rộng, dễ nuôi đã làm cho cá chẽm trở thành một trong những đối tượng được lựa chọn để phát triển nuôi chính cho ngành nuôi trồng thủy sản. Kỹ thuật nuôi cá chẽm được phát triển lần đầu tiên ở phòng thí nghiệm Songkhla Marine (Thái Lan) từ những năm đầu của thập niên 1970 và sau đó phát triển rộng ra các nước trong khu vực như Trung Quốc, Ấn Độ, Indonesia, Malaysia, Phillipines, Singapore, Đài Loan, Việt Nam và Australia, và gần đây ở một số quốc gia như Mỹ, Hà Lan, Anh và Israel[38]. Từ năm 1997 đến năm 2006, sản lượng cá chẽm hàng năm ở khu vực châu Á - Thái Bình Dương luôn ở trong khoảng từ 20.000 - 27.000 tấn, phần lớn cá chẽm được nuôi hồ hoặc lồng ở vùng nước lợ cửa sông hoặc bờ biển[39]. Năm 2004, sản lượng cá chẽm khoảng 25.399 tấn, năm 2005 khoảng 26.584 tấn[50] và năm 2006 tăng lên 27.522 tấn[51]. Thái Lan: Là nước dẫn đầu về sản lượng nuôi cá chẽm trong khu vực Châu Á Thái Bình Dương. Năm 2004, giá trị sản lượng cá chẽm của Thái Lan là 65,08 triệu USD, năm 2005 là 68,52 triệu USD với giá bán khá ổn định, trung bình mỗi kg cá thương phẩm dao động trong khoảng 2,50 - 2,60 USD[51]. Theo FAO (2006) (trích dẫn bởi Halwart, 2007), sản lượng cá chẽm nước mặn và lợ của Thái Lan tăng hằng năm, từ 3.884 tấn (năm 1995) và tăng lên 14.550 tấn (năm 2004)[39]. Malaysia: Cá chẽm là loài được nuôi truyền thống, đến năm 2007 vẫn là loài nuôi dẫn đầu trong nghề nuôi cá lồng ở Malaysia. Theo thống kê của FAO (2006) (trích dẫn bởi Halwart, 2007), sản lượng cá chẽm của Malaysia là 4.003,73 tấn (năm 2002), 4.210,93 tấn (năm 2003), và 4.000,54 tấn (năm 2004)[39]. Indonesia: Là quốc gia có sản lượng cá có vảy (finfish) biển lớn nhất trong khu vực Đông Nam Á. Trong đó cá chẽm cũng là một trong những loài nuôi chính của nước này với sản lượng năm 2004 vào khoảng 2.900 tấn[39]. Singapore: Dự tính đến năm 2012 sản lượng cá chẽm là 3.000 tấn và đến năm 2020 sản lượng sẽ tăng lên 20.000 tấn[74]. 6 Hàn Quốc: Tổng sản lượng cá nuôi của Hàn Quốc năm 2003 khoảng 72.393 tấn, trong đó cá chẽm khoảng 2.778 tấn[39]. Australia: Cá chẽm được nuôi ở hầu hết các bang của Australia (ngoại trừ bang Tasmania)[39],[73], nhưng sản lượng cá chẽm tập trung chủ yếu ở Queensland (phần lớn là nuôi nước ngọt), Northern Territory (nuôi lồng biển và nuôi ao nước lợ) và Nam Australia (nuôi nước ngọt)[35]. Cá chẽm được nuôi công nghiệp bắt đầu từ những năm 1980, hiện nay có khoảng 100 trang trại được cấp phép nuôi[73]. Theo dữ liệu của FAO năm 2004 (trích dẫn bởi Halwart M., 2007), sản lượng cá chẽm khoảng 1.600 tấn, giá trị đạt 9,9 triệu USD. Theo báo cáo của O’Sullivan và ctv (2005) (trích dẫn bởi Halwart M., 2007), niên vụ 2003/2004 sản lượng cá chẽm khoảng 2.800 tấn, đạt giá trị 17,6 triệu USD[39]. Niên vụ 2008/2009 sản lượng cá chẽm cả nước ước khoảng 6.000 tấn và sẽ tăng lên 7.000 tấn trong niên vụ 2009/2010[73] . 1.2.2. Tình hình nuôi cá biển ở Việt Nam Ở nước ta, cá biển được nuôi chủ yếu ở 3 vùng là vùng biển phía Bắc, vùng Nam Trung Bộ và vùng phía Nam. Năm 2001, sản lượng cá nuôi biển cả nước khoảng 2.600 tấn, năm 2002 sản lượng tăng lên 5.000 tấn, ước tính năm 2010 sẽ đạt 20.000 tấn. Các loài nuôi chính là các loài cá mú (Epinephelus), cá giò (Rachycentron canadum), cá chẽm (Lates calcarifer), cá vược mõm nhọn (Psammoperca waigensis), cá hồng đỏ (Lutjanus erythropterus), cá tráp đen (Rhabdosargus sarba) và cá đù đỏ (Sciaenops ocellatus)[39]. Cá chẽm được xem như là vật nuôi xóa đói giảm nghèo và là đối tượng nuôi thay thế cho diện tích nuôi tôm không hiệu quả ở một số địa phương ven biển ở nước ta. Hiện nay chưa có số liệu thống kê cụ thể về sản lượng cũng như diện tích nuôi cá chẽm ở nước ta, nhưng qua tìm hiểu thông tin từ các báo cho thấy cá chẽm đã nuôi thành công ở một số nơi như ở Cam Ranh, Vạn Ninh (Khánh Hòa)[77],[78],[79], Hương Trà (Thừa Thiên Huế)[80], Hà Tĩnh[81], Đồng Nai, Bình Định[82], Cà Mau[76]... 1.3. Một số nghiên cứu bệnh ở cá chẽm (Lates calcarifer) trên thế giới. Cá biển được nuôi lồng thành công đầu tiên ở Nhật Bản từ những năm 1950 và ở Đông Nam Á từ những năm 1970. Hiện nay đã có rất nhiều loài cá đã được nuôi thành công. Tuy nhiên, bệnh dịch đã làm ảnh hưởng nghiêm trọng tới nghề nuôi cá chẽm. Cá nuôi lồng sẽ trở nên dễ mắc bệnh khi mà các thông số môi trường như nhiệt 7 độ, độ mặn, nồng độ oxy hòa tan và các chất lơ lửng... thay đổi nhiều hoặc đột ngột. Việc xác định sớm sự thay đổi hoạt động và dấu hiệu của bệnh ở cá nuôi là rất quan trọng để chẩn đoán bệnh[69]. 1.3.1. Bệnh do vi khuẩn Bệnh vibriosis: Vibriosis là bệnh gây nên bởi các vi khuẩn thuộc giống Vibrio, gây bệnh trên rất nhiều loài cá biển và cửa sông, chúng thường xuất hiện khi môi trường nước xấu, cá bị sốc và thiếu dinh dưỡng[38]. Khi nhiễm Vibrio, thường màu cơ thể cá trở nên tối, lờ đờ, chán ăn, có các vết loét đỏ trên cơ thể, tích dịch ở bụng[36], bơi bất thường, mắt đục, bụng có màu đỏ. Bên trong, có thể thấy các vùng hoại tử và xuất huyết ở thận, gan và lách[38]. Nghiên cứu của Renaul T. và ctv (1994) cho thấy Vibrio damsela là nguyên nhân gây chết hàng loạt ở cá chẽm con nuôi ở Tahiti (nằm ở khu vực Thái Bình Dương, thuộc Pháp), dấu hiệu chính của bệnh là cá lờ đờ, xuất huyết ở gốc đuôi và lở loét lan rộng ra[60]. Bệnh vi khuẩn nhiễm trùng máu xuất huyết: Gây ra bởi Aeromonas hydrophila, Aeromonas sorbia, Aeromonas caviae, Aeromonas spp., pseudomonas sp. Các vi khuẩn này thường nhiễm ở cá chẽm nuôi nước ngọt, làm cho cá bị xuất huyết đỏ ở da, lờ đờ, cá biếng ăn, tích dịch ở bụng, mang nhợt nhạt. Bệnh thường xuất hiện khi môi trường xấu, da bị tổn thương[36]. Theo Kumaran S. (2009), Pseudomonas sp. KUMS3 là tác nhân gây nên bệnh mòn vây ở cá chẽm nuôi ở Ấn Độ, làm cá xuất huyết ở gốc vây, miệng và mất sắc tố da[43]. Bệnh vi khuẩn ở da: Do Aeromonas sorbia, Aeromonas hydorphila, Vibrio harveyi, Vibrio alginolyticus gây nên, làm cá bị lở loét không đều, mất vảy. Bệnh thường xảy ra khi môi trường xấu, da bị tổn thương[36]. Bệnh streptococcusis: Streptococcusis là bệnh rất nghiêm trọng, tác nhân chính là Streptococcus iniae. Bệnh có thể xảy ra ở cả cá chẽm nuôi nước ngọt lẫn nước mặn và kết quả là làm cho cá chết với tỷ lệ cao. Bệnh này được ghi nhận là tác nhân gây bệnh trên cá chẽm nuôi lồng biển ở Northern Territory (Australia) năm 2005. Trong trường hợp cấp tính, cá có thể gần chết hoặc chết với một vài dấu hiệu bên ngoài và trong các nội tạng. Trong trường hợp ít trầm trọng hơn thì cá bị nhiễm bệnh 8 có thể bơi nhấp nhô gần mặt nước, có thể bị mù và không đáp ứng với sự kích thích bên ngoài, xuất huyết có thể thấy ở da và đặc biệt ở chân vây. Cầu mắt bị lồi và xuất huyết bên trong mắt, mang bị xung huyết. Bên trong, sự xuất huyết nhiều có thể thấy ở bề mặt của các nội quan lớn, thường thì cơ xương có màu đỏ hồng[38]. Các báo cáo của Alicia E. và ctv (2005), Bromage E.S. và ctv (1999) cũng cho thấy Streptococcus iniae là tác nhân chính gây bệnh trên cá chẽm ở Australia với liều gây chết LD50 là 2,5 x 105 CFU/g trong 2 ngày và 3,2 x 104 CFU/g trong 10 ngày[25],[32]. Bệnh columnaris: Nguyên nhân gây bệnh là Flavobacterium columnare; Flavobacterium johnsoniae và Flavobacterium sp. ở cá chẽm nước ngọt và Tenacibaculum marinimum ở cá chẽm nước mặn, khi nhiễm bệnh, cá xuất hiện các đám nhợt nhạt trên bề mặt lưng, phần sau vây lưng và cuống đuôi, cá lờ đờ. Phần lớn bệnh xảy ra khi cá mới nở, trong giai đoạn muộn của cá ấu niên có sự ăn mòn da xung quanh miệng[36]. Bệnh vi khuẩn mang: Các vi khuẩn khác nhau gây ra như Flavobacterium spp., Cytophaga spp.. Khi bị bệnh, cá thường bơi nổi trên bề mặt, mang hoạt động đóng mở nhanh và có nhiều dịch nhầy, có các mảng trắng trên mang. Kiểm tra mang đang còn tươi ở dưới kính hiển vi cho thấy một số lượng lớn vi khuẩn có hình que dài ở biểu mô của mang. Bệnh phần lớn xảy ra ở giai đoạn cá nhỏ[36],[38]. Bệnh vi khuẩn viêm màng bụng: Các vi khuẩn gây bệnh là các vi khuẩn Gram (-) và Gram (+) khác nhau trong đó có Vibrio harveyi, Aeromonas hydrophila. Các dấu hiệu bệnh chính là cơ thể cá có màu đen, cá lờ đờ, bụng sưng phồng, có dịch keo và mùi khó chịu ở bụng, bệnh hay gặp trên cá nuôi ở hệ thống tuần hoàn[36]. Bệnh hoại tử viêm ruột và mưng mủ: Hội chứng hoại tử viêm ruột mưng mủ, thường gọi là “sưng”, xuất hiện một cách định kỳ ở các trại nuôi cá chẽm. Hội chứng này ảnh hưởng đến cá cỡ nhỏ tới các cá thể thành thục, gặp cả ở cá chẽm nuôi nước ngọt và nước mặn. Người ta đã phân lập được Vibrio harveyi và Photobacterium damselae subspecies damselae trên cá bị bệnh này. Cá bị bệnh thường bụng phình, hôn mê và chết. Điểm đặc trưng của bệnh là mùi của cá sắp chết hoặc mới chết giống với mùi cá đã chết 1 ngày, khoang bụng bị sưng phồng bởi một lượng lớn dịch phân hủy[38]. 9 Bệnh epitheliocystis: Là bệnh gây ra bởi sự xâm nhiễm vào mang của Chlamydial, cá ấu niên bị nhiễm nặng ở mang có thể chết với tỷ lệ cao. Cá bị nhiễm bệnh có thể không thấy dấu hiệu rõ ràng, mang có thể trở nên đỏ và cá bơi gần với mặt nước, tỷ lệ chết có thể cao. Ở dưới kính hiển vi có thể thấy một số lượng lớn các nang nằm trong biểu mô[38]. 1.3.2. Bệnh do ký sinh trùng Theo báo cáo của FAO và Glenn Schipp (2007), trên cá chẽm có các bệnh ký sinh trùng sau[36],[38]: Bệnh cryptocaryonosis: Nguyên nhân gây bệnh là Cryptocaryon irritans. Đây là động vật đơn bào, có lông, sống ký sinh và không có vật chủ chuyên biệt. Là nguyên nhân gây ra rất nhiều bệnh trên cá nuôi biển, đặc biệt ở vùng Nhiệt đới[38]. Cá bị nhiễm bệnh thường cọ vào đáy hoặc thành của lồng nuôi, cá biếng ăn và trở nên lờ đờ. Nếu sau đó không chữa trị kịp thời thì mắt cá trở nên đục và có các đốm trắng cũng như những chỗ lở loét nhỏ có thể xuất hiện trên vảy. Sự tiến triển của bệnh sẽ nhanh, cá có thể chết trong vòng 2 đến 3 ngày[38]. Bệnh trypanosomosis: Là bệnh gây ra bởi Trypanosoma sp.. Dấu hiệu bệnh là cá bị hôn mê, mất tập trung, mù mắt và chết. Mắt cũng có thể bị lồi và bị xuất huyết bên trong, đồng thời xuất hiện vùng lở loét xuất huyết và vùng ăn mòn trên da. Bên trong, thận căng to và tình trạng thiếu máu xảy ra, kết quả làm cho cá chết với tỷ lệ cao. Khi kiểm tra bằng kính hiển vi thấy rất nhiều Trypanosoma sp. Trong máu và mô[38]. Bệnh oodiniosis: Gây ra bởi Oodinium sp., ký sinh trùng này nhiễm vào mang và da ở cá nước mặn làm cho cá chết ở mức thấp. Khi bị nhiễm Oodinium sp., cá hay cọ vào thành hoặc đáy lồng nuôi. Nếu bị nhiễm nhiều, cá chết với sự sung huyết và dịch nhầy ở mang[36]. Bệnh trichodiniasis: Do nhóm Trichodina spp. gây nên. Cá bị bệnh này có các dấu hiệu bệnh như cá bơi ở bề mặt, nắp mang đóng mở nhanh, dịch nhầy ở mang tiết ra nhiều. Bệnh thường xảy ra khi nhiệt độ môi trường nước thấp, chất hữu cơ lơ lửng nhiều và nuôi cá với mật độ dày[36]. 10 Bệnh chilodonelliasis: Gây ra bởi Chilodonella spp. và Chilodonella hexasticha. Khi nhiễm ký sinh trùng này, cá thường bơi trên bề mặt, nắp mang đóng mở nhanh và mở rộng. Môi trường nước xấu và cá bị ốm yếu là điều kiện thuận lợi để ký sinh trùng này xâm nhập và gây bệnh[36]. Bệnh Ichthyobodosis (costiasis): Ichthyobodo necator là nguyên nhân chính gây bệnh. Cá bị bệnh thường cọ lên thành lồng, xuất hiện các vết sẫm màu trên da, tróc vảy, bơi trên bề mặt, nắp mang mở to và hoạt động đóng mở nhanh[36]. Bệnh piscinoodiniasis: Nguyên nhân gây bệnh là Piscinoodiniasis sp., bệnh thường gặp ở cá chẽm nuôi nước ngọt. Bệnh xảy ra ở cá nhỏ thì có các vết mờ hoặc màu xanh bạc trên da, ở cá lớn hơn thì có các mảng nổi lên trên bề mặt da và có các vết lở loét, nắp mang hoạt động mạnh, mang tiết nhiều dịch và có màu xanh đen[36]. Bệnh Amyloodiniasis: Nguyên nhân chính là do Amyloodinium ocellatum. Thường gặp ở cá chẽm nuôi biển, xuất hiện các vết mờ hoặc mất màu trên da ở cá nhỏ. Cá lớn hơn thường có các vết lở loét, nắp mang đóng mở nhanh, dịch tiết từ mang nhiều, mang có màu xanh đen. Bệnh thường xuất hiện khi nhiệt độ thấp và nhiệt độ giảm đột ngột[36]. Bệnh mụn đỏ: Gây ra bởi Epistylis sp. Bệnh này xảy ra ở cá chẽm nước ngọt, gây nên lở loét trên da và làm cho vi khuẩn xâm nhập vào cơ thể cá gây bệnh[36]. Bệnh sán lá mang: Tác nhân chính gây bệnh là Diplectanum sp, Dactylogyrus sp. Cá bị bệnh thường đóng mở nắp mang nhanh, biếng ăn, có các vùng trắng trên mang[36]. Bệnh sán lá da: Gây ra bởi Neobenedinia melleni, Gyrodactylus spp.. Dấu hiệu chính của bệnh là mắt mờ, xuất hiện các mảng trắng trên da, lở loét trên da. Bệnh thường xảy ra ở điều kiện độ mặn cao và nhiệt độ nước thấp[36]. Bệnh myxosporidiosis: Nguyên nhân gây bệnh là Henneguya sp., Kudoa sp., bệnh này không thường xuyên xảy ra. Kiểm tra mô học thấy có bào tử của chúng ở tơ mang (Henneguya sp.) và trong não (Kudoa sp.)[36]. Bệnh microspridiosis: Nguyên nhân là do Peistophora sp. Khi nhiễm bệnh, thường có các khối u nổi lên trên da, có các u mềm màu trắng ở cơ[36]. 11 Theo báo cáo của Rückert S và ctv (2008), khi nghiên cứu ký sinh trùng ký sinh trên cá chẽm nuôi tại vịnh Lampung, Indonesia đã ghi nhận được 19 loài ký sinh trùng trên cá chẽm nuôi lồng và tất cả cá đều nhiễm từ 2 đến 10 loài ký sinh trùng. Trong đó, nhóm protozoan (1 loài), myxozoans (1 loài), digeneans (3 loài), monogenean (5 loài), cestodes (3 loài), nematodes (5 loài) và acanthocephalans (1loài)[62]. Theo Rajkumar M. và ctv (2005), khi nuôi cá chẽm trong phòng thí nghiệm được 14 ngày, nhóm nghiên cứu đã phát hiện thấy Cymothoa indica xuất hiện ở vùng mang và trước lưng, tạo thành các vết tổn thương có màu đỏ, xuất huyết mà không có hiện tượng tiết nhớt nhiều. Tỷ lệ cá chết sau 3 tuần nuôi là 16,54%.[59]. Báo cáo của Saugata Basu và Durga P. Haldar (2003) cho thấy, cá chẽm nuôi ở 13 vùng Đông Bengal, Ấn Độ phát hiện thấy có nhiễm loài ký sinh trùng Myxobolus calcariferum sp. n. ở mang cá, gây bệnh và làm chết cá[63]. 1.3.3. Bệnh do nấm Bệnh chấm đỏ: Bệnh chấm đỏ hay hội chứng lở loét (EUS) đã được báo cáo trên rất nhiều loài cá, trong đó có cá chẽm. Tuy nhiên bệnh chỉ xảy ra ở cá nuôi nước ngọt, chưa thấy có báo cáo trên cá nuôi biển. Nguyên nhân gây bệnh là nấm Aphanomyces invadens. Dấu hiệu của bệnh là có các vết lở loét sâu màu đỏ hoặc xuất huyết trên da, hiện tượng lở loét có thể lan đến mắt. Khi bị bệnh, cá trở nên hôn mê và dễ trở thành con mồi cho những loài khác[38]. Bệnh nấm da: Do nấm Saprolegnia spp., Achlya spp. gây ra. Bệnh thường làm cho cá nổi cục và phát triển thành dạng như múi bông trên da và vây. Bệnh thường xảy ra khi nhiệt độ thấp và cá bị tổn thương ở da[36]. Bệnh branchiomycosis: Do nấm Branchiomyces sp. và Achlya spp. gây ra. Biểu hiện của bệnh là cá bơi nổi trên mặt nước, nắp mang đóng mở liên tục, có các vết đỏ và trắng (xuất hiện lốm đốm) ở mang. Bệnh thường xuất hiện khi nhiệt độ nước thấp, chất hữu cơ tập trung trong nước nuôi nhiều[36]. 1.3.4. Bệnh do virus Bệnh virus ở cá biển nuôi lồng đã được báo cáo ở Đông Á từ những năm 1980 và các nước Đông Nam Á từ những năm 1990[69]. Ở cá chẽm, đã phát hiện được 2 virus gây bệnh chính là: 12 Bệnh virus gây hoại tử thần kinh VNN (Viral Nervous Necrosis): Tác nhân gây bệnh là nhóm Nodavirus cá. Bệnh VNN trên cá chẽm lần đầu tiên được báo cáo từ những năm 1980 ở Australia khi gây bệnh trên cá chẽm ấu niên. Ngày nay, VNN là nguyên nhân gây chết ở cá hương và cá ấu niên ở các trại giống cá chẽm[38]. Đặc điểm của bệnh là virus làm thoái hóa các nơron thần kinh và sinh không bào trong hệ thần kinh trung ương và võng mạc. Vì vậy, khi bị nhiễm virus, cá ở trạng thái mất cân bằng, cơ không kiểm soát được và loạn chức năng thị giác[36]. Hiện nay, bệnh này đã được báo cáo ở hơn 30 loài cá biển trên thế giới. Bệnh thường xảy ra ở giai đoạn cá hương từ 15 đến 24 ngày tuổi, còn có thể xuất hiện cho tới khi cá được 7 tuần tuổi[38]. Theo báo cáo của Azad IS và ctv (2005), ở Ấn Độ, VNN gây bệnh ở các trại giống cá chẽm ở giai đoạn cá hương làm cá chết từ 60 - 90%. Khi bị bệnh, cá hương có màu đen, khi kiểm tra không thấy có dấu hiệu bị nhiễm vi khuẩn hay ký sinh trùng. Dựa vào các lát cắt mô ở não và tủy sống người ta đã thấy rất rõ các vùng bị hoại tử, qua kiểm tra bằng kỹ thuật RT-PCR, người ta đã phát hiện được Nodavirus[28]. Bệnh lymphocytis: Do Iridovirus gây nên. Bệnh làm cho cá xuất hiện các mụn cóc trên da, vây, thông thường chỉ gây chết nếu xâm nhiễm nhiều và kết hợp với điều kiện môi trường xấu[36], giai đoạn cá ấu niên thường dễ mắc bệnh hơn cá trưởng thành[69]. 1.4. Các nghiên cứu về bệnh cá biển ở Việt Nam Ở nước ta hiện nay vẫn chưa có nghiên cứu nào cụ thể về bệnh lở loét trên cá chẽm. Tuy nhiên, trên cá biển nói chung thì cũng đã có khá nhiều các công trình nghiên cứu như: Theo Đỗ Thị Hòa và ctv (2008), cá biển nuôi tại Khánh Hòa có 10 bệnh thường gặp trên cá biển nuôi là[5]: + Bệnh vibriosis: Gây bệnh xuất huyết lở loét trên cá mú, cá hồng, cá chẽm. Thời gian xuất hiện bệnh chính là mùa khô. + Bệnh mòn vây và đuôi: Nguyên nhân gây bệnh có thể là vi khuẩn Gram (-), có đặc điểm gần giống với Flexibacter maritimus, bệnh xuất hiện quanh năm và gây chết rải rác tới hàng loạt cá nuôi lồng, đặc biệt là giai đoạn cá con. Các loài cá hay gặp là cá mú, cá hồng, cá chẽm. 13 + Bệnh sán lá da (bệnh mè cá): Nguyên nhân gây bệnh thường là sán lá đơn chủ (monogenea) dạng hạt mè trên bề mặt cơ thể. Bệnh làm cho cá có thể đục mắt, ngứa ngáy, giai đoạn cuối nổi lờ đờ trên mặt nước, nếu bị nhiễm nặng, cá có thể bị chết. Các loài cá thường bị bệnh là cá mú, cá hồng, cá chẽm, cá giò. + Bệnh sán lá mang (bệnh sưng mang, hay bệnh mủ mang): Làm cá hoạt động yếu, bỏ ăn, khi bơi nắp mang thường phồng lên, mang tiết nhiều dịch nhầy (mủ mang). Trường hợp bị bệnh nặng có thể gây chết cá từ rải rác đến hàng loạt. Nguyên nhân gây bệnh là các loài sán lá đơn chủ ký sinh khác nhau như loài Pseudorhabdosynochus spp., Diplectanum spp. và Haliotrema spp. Các loài cá thường gặp là cá mú, cá hồng, cá chẽm. + Bệnh rận cá: Làm cá kém ăn, chậm lớn, khi cảm nhiễm với mức độ cao gây chết cá rải rác. Nguyên nhân gây bệnh là một số loài giáp xác bậc thấp thuộc giống Caligus spp., Parapetalus sp. và Lepeophtheirus sp.. Cá nuôi hay gặp là cá mú, cá giò, cá chẽm. + Bệnh hoại tử thần kinh (bệnh bơi xoắn): Khi nhiễm bệnh này, cá thường có các dấu hiệu như: màu sắc cá đen sậm, bơi lội không định hướng, bơi xoắn ốc, đuôi cong và liệt cứng, bụng chướng to do bong bóng cá căng phồng, ruột không có thức ăn nhưng thấy có chứa chất dịch màu xanh lá cây. Nguyên nhân gây bệnh là virus gây hoại tử thần kinh VNN. Các loài cá hay nhiễm bệnh là cá mú, cá chẽm, cá giò. + Bệnh đỉa cá: Làm cá gầy yếu, suy kiệt sức khỏe, chết rải rác do mất máu hoặc do nhiễm khuẩn cơ hội. Nguyên nhân gây bệnh là ký sinh trùng thuộc họ đỉa Hirunidae. Các loài cá thường bị bệnh là cá mú, cá chẽm và cá hồng. + Bệnh đốm trắng ở thận: Thường gặp ở cá giò nuôi lồng ở Vạn Ninh, Khánh Hòa. Với các biểu hiện bệnh như cá kém ăn, chậm lớn. Ở thận, gan, tụy xuất hiện các đốm trắng dạng hạt. Trên cá bị bệnh này, người ta đã phân lập được vi khuẩn Photobacterium damselae. + Bệnh lymphocystic (bệnh u sần): Cá bị bệnh này thường xuất hiện các u nhỏ có màu trắng hay hồng trên vây, lưng, đầu. Bệnh này chỉ gây chết rải rác nhưng ảnh hưởng tới sinh trưởng và giá trị thương phẩm của cá nuôi. Các loài cá thường gặp là cá giò và cá chẽm. 14 + Hội chứng dị dạng ở cá biển: Cá có hình dạng không bình thường, cột sống bị ưỡn cong và bụng cá hóp lại như bị đói lâu ngày và không lâu sau thì cá sẽ chết. Bệnh này hay gặp trên cá mú. Nguyễn Thị Thanh Thùy và ctv (2008), khi nghiên cứu về bệnh lở loét trên cá mú cho thấy hai loài vi khuẩn là Vibrio alginolyticus và Vibrio parahaemolyticus là tác nhân chính gây nên bệnh lở loét ở cá mú nuôi tại Khánh Hòa. Trên các mẫu bệnh còn phân lập được 7 loài ký sinh trùng là Pseudorhabdosynochus epinepheli, Benedenia sp., Caligus sp., Trichodina sp., Apiosoma sp., Ampiphrya sp., Zeylanicobdella sp., và nấm thuộc giống Aspergillus. Tuy nhiên theo tác giả thì các loài ký sinh trùng và nấm chỉ là tác nhân cơ hội hoặc là tác nhân mở đường cho vi khuẩn xâm nhập và gây bệnh cho cá[20]. Võ Thế Dũng và ctv (2005) nghiên cứu về thành phần loài ký sinh trùng trên cá mú (Epinephelus spp.) tự nhiên, nuôi ao, nuôi lồng tại Khánh Hòa, đã phát hiện thấy có 22 loài ký sinh trùng thuộc 7 giống, 12 họ, 11 bộ, 9 lớp, 8 ngành[67]. Nghiên cứu của Đỗ Thị Hòa và ctv (2007) về sán lá đơn chủ (monogenean) trên cá mú (Epinephelus sp.) và cá chỉ vàng (Lutjanus argentimaculatus) nuôi tại Khánh Hòa cho thấy, cá bị nhiễm monogenea thường bơi lờ đờ, ăn kém, tiết nhiều dịch nhờn từ chỗ da và mang bị tổn thương[34]. 1.5. Tình hình dịch bệnh trên cá chẽm nuôi trong ao đất tại Hải Phòng từ tháng 01/2012 đến tháng 30/12/2013 Hình 1.2: Bản đồ dịch tễ bệnh vi khuẩn trên cá chẽm tại Hải Phòng 15 Nhìn vào bản đồ dịch tễ bệnh vi khuẩn trên cá chẽm tại Hải Phòng từ 01/01/2012 - 30/12/2013 ta thấy bệnh vi khuẩn trên chẽm xảy ra tai 04 xã, phường gồm: Tân Thành, Thị trấn Cát Hải, Cao Minh, Lập Lễ của 04 quận, huyện: Dương Kinh, Cát Hải, Vĩnh Bảo, Thủy Nguyên với tổng diện tích bị bệnh là 55,6 ha. Bệnh do vi khuẩn trên cá chẽm xảy ra cả ở nước ngọt, mặn, lợ và tất cả giai đoạn phát triển của cá chẽm. Trong hai năm 2012 và 2013 diện tích nuôi cá chẽm bị bệnh ngày càng tăng cao. Năm 2013 tổng diện tích nuôi cá chẽm bị nhiễm bệnh (33,7 ha) cao gấp 1,5 lần so năm 2012. Bệnh vi khuẩn trên cá chẽm xảy ra cao nhất tại xã Lập Lễ huyện Thủy Nguyên (24,2 ha) - đây cũng là huyện có diện tích nuôi cá chẽm trong ao đất lớn nhất trên địa bàn thành phố, thấp nhất tại xã Cao Minh huyện Vĩnh Bảo (5,7 ha) - đây là xã nuôi cá chẽm trong nước ngọt trên địa bàn thành phố. Bệnh vi khuẩn trên cá chẽm nuôi trong ao đất tại Hải Phòng ở môi trường mặn, lợ tập trung chủ yếu vào nhóm vi khuẩn Vibrio sp, môi trường nước ngọt tập trung chủ yếu vào nhóm Aeromonas sp. Vi khuẩn Vibrio sp phân bố rất phổ biến trong môi trường nước biển và vùng nước lợ ven biển; có thể tìm thấy chúng trong các tầng nước, vùi trong trầm tích đáy hoặc bám trên bề mặt của các sinh vật sống trong vùng nước đó. Vibrio là vi khuẩn đặc trưng cho vùng nước biển ấm, phát triển mạnh ở nhiệt độ 20-300C [5]. Theo một số nghiên cưu vi khuẩn Vibrio gây xuất huyết cơ thể, xuất hiện các vết lở loét ở thân, cuống đuôi và vây thối rữa ở cá mú giống và cá mú thịt là do vi khuẩn Vibrio parahaemolyticus, V. alginolyticus(Leong tak Seng,1994; Somkiat Kanchanakhan, 1996; Nguyễn Thị Thanh Thùy et al., 2009);gây hội chứng đường ruột ở cá mú là do vi khuẩn Vibrio alginolyticus và V. carchariae (Lee và cs, 1995; Yii và cs, 1997); gây triệu chứng mắt lồi và mù mắt ở cá mú là do nhóm vi khuẩn Vibrio gây ra, chúng phá hủy cấu trúc đặc trưng của mắt, làm khả năng bắt mồi của cá kém đi, từ đó làm cá yếu dần và chết (Sindermann, 1970; Richardol, 1972; Lom, 1970). Dịch bệnh trên cá chẽm nuôi diễn biến phức tạp, dịch bệnh liên tiếp xảy ra gây thiệt hại lớn cho người nuôi. Nguyên nhân dịch bệnh bùng phát do chất lượng con giống còn thấp, không có nguồn gốc, xuất xứ rõ ràng; ao, đầm nuôi không chuẩn bị kỹ, không xử lý nguồn nước sau mỗi vụ nuôi; ngoài ra cơ sở hạ tầng vùng nuôi còn yếu, hệ thống thủy lợi vùng nuôi chưa đảm bảo, các hộ nuôi tận dụng hết đất để làm ao nuôi nên không có ao lắng xử lý nước mà bơm trực tiếp nước từ mương đã mang vi 16 sinh vật gây hại vào ao nuôi. Một số hộ nuôi chưa tuân thủ mùa vụ nuôi, thả giống sớm. Công tác phòng chống dịch bệnh trong nuôi trồng thủy sản đã có nhiều cố gắng, nhưng còn thiếu nguồn lực nên hiệu quả chưa cao. Từ kết quả phân tích tình hình dịch bệnh vi khuẩn trên cá chẽm từ 01/01/2012 – 30/12/2013, đề tài đã xác định được vùng trọng điểm hay xảy ra bệnh vi khuẩn trên cá chẽm, từ đó có kế hoạch thu mẫu để xác định được tác vi khuẩn gây bệnh trên cá chẽm nuôi trong ao đất tại Hải Phòng. Chúng tôi đã khoanh vùng, tập trung thu mẫu tại các vùng hay xảy ra dịch bệnh trên cá chẽm đó là Lập Lễ - Thủy Nguyên, Tân Thành Dương Kinh, Thị trấn Cát Hải - Cát Hải, Cao Minh - Vĩnh Bảo. 17 CHƯƠNG 2: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1. Thời gian, địa điểm, đối tượng nghiên cứu. 2.1.1. Thời gian nghiên cứu - Từ tháng 06/2013 tới tháng 06/2014. 2.1.2. Địa điểm thu mẫu - Địa điểm thu mẫu: Thủy Nguyên, Vĩnh Bảo, Cát Hải, Dương Kinh. 3.1.3. Đối tượng nghiên cứu Cá chẽm (Lates calcarifer) nuôi trong ao đất. 2.2. Phương pháp nghiên cứu. 2.2.1. Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu Thu mẫu Nuôi cấy phân lập vi khuẩn Cảm nhiễm nhân tạo Thử kháng sinh đồ Hình 2.1: Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu 2.2.2. Thu mẫu Số mẫu thu: 5con/1 lần thu, định kỳ 15 ngày thu mẫu một lần. Thu mẫu những con bị nhiễm bệnh do vi khuẩn. Mẫu cá bị bệnh được đưa nhanh về phòng thí nghiệm để kiểm tra, mổ và nuôi cấy vi khuẩn. Mẫu phải được thu khi cá còn sống và mẫu bệnh phẩm được xử lý trong điều kiện vô trùng. 18 Phân lập theo phương pháp nghiên cứu vi khuẩn ở cá và động vật thủy sản của Millar và Frerichs. (1993) 2.2.3. Xử lý mẫu trong phòng thí nghiệm. Sau khi mẫu cá bệnh được đưa về phòng tiến hành xử lý ngay: - Quan sát những biểu hiện bệnh lý bên ngoài rồi ghi chép những biểu hiện không bình thường trên cá mẫu và chụp ảnh - Đo chiều dài, trọng lượng mẫu - Dùng cồn 700 để sát trùng những chỗ cần mổ - Dùng các dụng cụ vô trùng để giải phẫu cá - Lấy que cấy hơ đỏ trên ngọn lửa đèn cồn để lấy mẫu bệnh phẩm trên gan, thận cá bị bệnh cấy vào môi trường nước tăng sinh Nutrient Borth (NB) + 1,5% NaCl hoặc trên môi trường cơ bản Nutrient Agar (NA) + 1,5% NaCl 2.2.4. Nuôi cấy và phân lập vi khuẩn Dựa vào phương pháp nghiên cứu vi khuẩn ở cá và động vật thủy sản của Millar và Frerichs. (1993) Mẫu cá bệnh Thu mẫu bệnh phẩm Nuôi cấy, phân lập Nhuộm Gram Thử các phản ứng sinh hóa Hình thái khuẩn lạc Phân loại vi khuẩn Hình 2.2: Sơ đồ nghiên cứu phân lập vi khuẩn 19 * Cấy vi khuẩn Cấy chọn khuẩn lạc : Phương pháp thường dùng là cấy ria, mục đích là làm cho khuẩn lạc đứng riêng rẽ.Ta tiến hành đốt nóng đỏ que cấy sau mỗi vùng cấy để làm cho mật độ vi khuẩn giảm dần, mỗi tế bào vi khuẩn đứng riêng rẽ sẽ phát triển thành một khuẩn lạc sau thời gian nuôi cấy. Nuôi vi khuẩn : Mẫu bệnh phẩm thu được nuôi cấy trong tủ ấm ở nhiệt độ 29oC sau 24 – 48 giờ kiểm tra hình thái khuẩn lạc, chọn khuẩn lạc để cấy tiếp lên môi trường tăng sinh. Sau 24 giờ nuôi cấy nhuộm gram, nếu được vi khuẩn thuần tiến hành thử các phản ứng sinh hóa theo bộ kít API 20E hoặc API 20STREP và một số phản ứng sinh hóa truyền thống cần thiết cho việc định danh vi khuẩn. * Nghiên cứu hình thái vi khuẩn : Sử dụng phương pháp nhuộm Gram - Sau khi được giống vi khuẩn thuần, lấy mẫu phết lên lam, cho 01 giọt nước muối sinh lý vô trùng, dùng que cấy dàn mỏng trên lam kính. - Hơ cao lam kính có mẫu trên ngọn lửa đèn cồn, để cố định và diệt vi khuẩn. - Nhỏ tiếp dung dịch 1 (tím tinh thể) lên tiêu bản, để yên 30-60 giây. - Rửa nước nhanh, vẩy khô. - Nhỏ dung dịch 2 (Lugol) để cố định trong 1 phút (tiêu bản có màu đen). - Rửa nước nhanh, vẩy khô. - Nhỏ dung dịch 3 (Cồn Aceton) để nghiêng đầu một bên lam để cồn chảy qua chỗ phết vi khuẩn, nhằm tẩy màu. - Rửa nước nhanh, vẩy khô. - Nhỏ dung dịch 4 (Safranin) để cố định 1 đến 2 phút. - Rửa nước, để khô hoặc dùng giấy thấm khô, không được để xước mẫu. - Soi dưới kính hiển vi bằng vật kính dầu (độ phóng đại x1000). 20 Dưới kính hiển vi ta có thể xác định được vi khuẩn gram âm bắt màu hồng và gram dương bắt màu xanh tím. Khi được vi khuẩn thuần tiến hành nuôi vi khuẩn trong môi trường lỏng trypton, để có dung dịch ở dạng huyền phù thử phản ứng sinh hóa. * Thử phản ứng sinh hóa bằng bộ kít API 20E - Nguyên lý Phương pháp này dùng 21 tiêu chuẩn thử sinh hóa cho phép định tên một số loài vi khuẩn hình que, gram âm và thuộc họ Enterobacteriaceae. Kít thử API 20E gồm có các ống nghiệm nhỏ trong có chứa các chất nền đã khử nước. Trong quá trình ủ, hoạt động của vi khuẩn sẽ làm chuyển màu hoặc làm đục môi trường. Sau 24h đọc các phản ứng đối chiếu theo bảng kết quả để định tên. - Các bước phân lập vi khuẩn theo kit API 20E 2 1 4 ONPG ADH 3 LDC OCD CIT H2S URE TDA IND VP GEL GLU MAN INO SOR RHA SAC MEL AMY ARA OF-F OF-O Qui trình thử kít API 20E Hình 2.3: Qui trình thử kít API 20E - Chuẩn bị kit + Chuẩn bị hộp ủ và đổ 5ml nước cất (hoặc nước khử khoáng) vào chỗ lõm để tạo hơi ẩm - Chuẩn bị mẫu 21 + Kít thử API 20E không dùng trực tiếp các mẫu bệnh phẩm + Thu mẫu bệnh phẩm, cấy lên môi trường chọn lọc. Sau đó tiến hành chọn khuẩn lạc để nuôi thuần; sau 24h hay 48h nuôi cấy, lấy vi khuẩn thuần để pha loãng thành dịch huyền phù bằng 5ml NaCl 1,5%. Chuẩn bị ủ + Dùng một pipet lấy dịch huyền phù vi khuẩn cho đầy vào các ống. + Đổ 1 lớp dầu vào các ống thử có ngạch chân ở dưới( ADH, LDC, ODC, H2S, URE) để tạo môi trường yếm khí. + Đổ đầy dịch huyền phù vi khuẩn vào cả ống và cốc (CIT, VP, GEL) + Thử thêm ngoài trên 2 ống O/F Ủ mẫu + Ủ các mẫu phản ứng đó ở nhiệt độ 27 - 290C thời gian 24 - 48h. Đọc kết quả Đọc kết quả theo bảng đọc và dùng các thuốc thử hiển thị kết quả: + Thử TDA: Cho 1 giọt thuốc thử TDA chuyển màu nâu đỏ là dương tính. + Thử IND: Cho 1 giọt thuốc thử JAMES phát triển màu hồng trong ống thử là dương tính. + Thử VP: Cho 1 giọt thuốc thử VP 1 và 1 giọt thuốc thử VP 2, đợi ít nhất 10 phút chuyển màu hồng hoặc đỏ là dương tính. Nếu chuyển màu hồng nhẹ sau 10 phút là âm tính. + Thử NO2: Cho 1 giọt NIT 1 và 1 giọt NIT 2 vào ống GLU. Đợi sau 2 - 5 phút chuyển màu đỏ là dương tính. Chuyển màu vàng có thể chúng khử đến N2 (1 số trường hợp sinh hơi ở đáy) cho thêm 2-3mg Zn vào ống GLU. Sau 5 phút nếu ống chuyển lại màu vàng là phản ứng sinh khí N2 là dương tính; nếu ống chuyển màu da cam đến đỏ là âm tính. + Đối với môi trường OF: Dùng que cấy đã được hơ nóng và để nguội, lấy vi khuẩn và chọc thẳng vào ống nghiệm chứa môi trường OF, nuôi trong tủ ấm 24 giờ và đọc kết quả. 22 * Thử phản ứng sinh hóa bằng kit thử API 20 STREP Các bước tiến hành tương tự bộ kít thử API 20E nhưng dùng để định danh các loại vi khuẩn. * Phân loại vi khuẩn: - Theo tiêu chuẩn chung: đi từ họ, giống đến tiêu chuẩn đặc trưng cho loài. - Dựa vào những đặc điểm và kết quả thử phản ứng sinh hoá, phân loại vi khuẩn dựa vào bảng phân loại vi khuẩn, cẩm nang phân loại vi khuẩn của Frerichs (1984) và Nicky B. Buller (2004). * Tần số bắt gặp các loài vi khuẩn Tần số bắt gặp các loài vi khuẩn được tính theo công thức: TSBG = Số cá có xuất hiện loài vi khuẩn cần x 100 Tổng số mẫu cá 2.2.5. Cảm nhiễm nhân tạo Chủng vi khuẩn thử nghiệm Cá thí nghiệm Nuôi cấy tăng sinh Đo chiều dài và cân khối lượng Xác định mật độ vi khuẩn Chia cá ngẫu nhiên vào các lô Tiêm dịch VK vào xoang bụng cá NT1 106 CFU/g NT2 105 CFU/g NT3 104 CFU/g NT4 103 CFU/g NT5 NaCl 0,85% (Đ/C) - Theo dõi các biểu hiện bên ngoài và trong, ghi nhận các thay đổi và dấu hiệu bệnh của cá. - Ghi nhận số cá chết trong 10 ngày thí nghiệm, tính LD50 Hình 2.4: Sơ đồ thực hiện thí nghiệm cảm nhiễm vi khuẩn gây bệnh lên cá khỏe 23 - Cá thí nghiệm: Chọn cá chẽm khỏe, ăn tốt, có chiều dài và khối lượng than trung bình lần lượt là 18,5 (±1,34)cm và 76,7 (±22,9)g (thí nghiệm lần 1); 20,6 (±1,52)cm và 106,8 (±20,2)g (thí nghiệm lần 2), cá mua từ các ao nuôi thương phẩm và được nuôi thuần dưỡng trong bể composit 2000 lít, có hệ thống nước chảy ra vào liên tục trong 2 tuần trước khi bố trí ngẫu nhiên vào trong các lô thí nghiệm. - Thí nghiệm cảm nhiễm: Mỗi con cá ở các lô thí nghiệm được tiêm dưới da 0,2 ml dung dịch chứa vi khuẩn (lô đối chứng được tiêm 0,2 ml dung dịch nước muối sinh lý (0,85% NaCl) vô trùng). - Vi khuẩn thí nghiệm: Là chủng có tần số bắt gặp cao nhất - Số lô bố trí thí nghiệm: 05 nghiệm thức - Số cá mỗi nghiệm thức: 06 con - Nồng độ vi khuẩn tiêm mỗi nghiệm thức: + Nghiệm thức 1: 1x106 CFU/g trọng lượng cơ thể cá + Nghiệm thức 2: 1x105 CFU/g trọng lượng cơ thể cá + Nghiệm thức 3: 1x104 CFU/g trọng lượng cơ thể cá + Nghiệm thức: 1x103 CFU/g trọng lượng cơ thể cá + Nghiệm thức 5: lô đối chứng, tiêm bằng nước muối sinh lý (0,85% Nacl) - Theo dõi cá thí nghiệm: Cá thí nghiệm được cho ăn và chăm sóc bình thường như trước khi thí nghiệm, đồng thời theo dõi các biểu hiện của cá sau khi tiêm. Khi cá bị bệnh, quan sát các biểu hiện bệnh bên ngoài, giải phẫu để kiểm tra sự biến đổi các nội quan bên trong và thu mẫu bệnh phẩm để nghiên cứu vi khuẩn. - Tính LD50 (Liều gây chết 50% cá thể sau khi thí nghiệm): LD50 được xác định theo công thức của Reed và Muench (1938) LD50 = Nồng độ gây chết lớn hơn 50% thấp nhất trừ cho số nội suy (p.d) L% - 50% pd = L% - H% (L là tỷ lệ chết trên 50% thấp nhất, H là tỷ lệ chết dưới 50% cao nhất) 24 2.2.6. Thử kháng sinh đồ - Chuẩn bị đĩa giấy kháng sinh cho các loại kháng sinh cần thử nghiệm (Hàm lượng kháng sinh trên mỗi đĩa giấy kháng sinh được chuẩn bị theo đĩa giấy kháng sinh đã thương mại hóa). + Tiến hành thử riêng kháng sinh đồ đối với vi khuẩn thu được trên cá bệnh + Môi trường MHA 1,5% NaCl được đổ trên đĩa petri, trang vi khuẩn lên các đĩa petri đã chuẩn bị. + Đặt các khoanh giấy kháng sinh lên, đưa vào tủ ấm 27-29oC + Đọc kết quả đo đường kính vô khuẩn sau 24h. - Xác định tính mẫn cảm của vi khuẩn với các chất kháng sinh + Sử dụng phương pháp khuyếch tán trong thạch thịt của vi khuẩn với các đĩa giấy kháng sinh tiêu chuẩn (CODE 1334E-OXOID) + Dựa vào đường kính vòng vô khuẩn, xác định tính mẫn cảm của vi khuẩn với chất kháng sinh ° Đường kính vòng vô khuẩn > 20mm: Vi khuẩn có tính mẫn cảm cao ° Đường kính vòng vô khuẩn 11- 20mm: Vi khuẩn có tính mẫn cảm trung bình ° Đường kính vòng vô khuẩn [...]... bệnh vi khuẩn trên cá chẽm tại Hải Phòng từ 01/01/2012 - 30/12/2013 ta thấy bệnh vi khuẩn trên chẽm xảy ra tai 04 xã, phường gồm: Tân Thành, Thị trấn Cát Hải, Cao Minh, Lập Lễ của 04 quận, huyện: Dương Kinh, Cát Hải, Vĩnh Bảo, Thủy Nguyên với tổng diện tích bị bệnh là 55,6 ha Bệnh do vi khuẩn trên cá chẽm xảy ra cả ở nước ngọt, mặn, lợ và tất cả giai đoạn phát triển của cá chẽm Trong hai năm 2012 và. .. tích nuôi cá chẽm bị bệnh ngày càng tăng cao Năm 2013 tổng diện tích nuôi cá chẽm bị nhiễm bệnh (33,7 ha) cao gấp 1,5 lần so năm 2012 Bệnh vi khuẩn trên cá chẽm xảy ra cao nhất tại xã Lập Lễ huyện Thủy Nguyên (24,2 ha) - đây cũng là huyện có diện tích nuôi cá chẽm trong ao đất lớn nhất trên địa bàn thành phố, thấp nhất tại xã Cao Minh huyện Vĩnh Bảo (5,7 ha) - đây là xã nuôi cá chẽm trong nước ngọt trên. .. để xác định được tác vi khuẩn gây bệnh trên cá chẽm nuôi trong ao đất tại Hải Phòng Chúng tôi đã khoanh vùng, tập trung thu mẫu tại các vùng hay xảy ra dịch bệnh trên cá chẽm đó là Lập Lễ - Thủy Nguyên, Tân Thành Dương Kinh, Thị trấn Cát Hải - Cát Hải, Cao Minh - Vĩnh Bảo 17 CHƯƠNG 2: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Thời gian, địa điểm, đối tượng nghiên cứu 2.1.1 Thời gian nghiên cứu - Từ tháng 06/2013... (monogenean) trên cá mú (Epinephelus sp.) và cá chỉ vàng (Lutjanus argentimaculatus) nuôi tại Khánh Hòa cho thấy, cá bị nhiễm monogenea thường bơi lờ đờ, ăn kém, tiết nhiều dịch nhờn từ chỗ da và mang bị tổn thương[34] 1.5 Tình hình dịch bệnh trên cá chẽm nuôi trong ao đất tại Hải Phòng từ tháng 01/2012 đến tháng 30/12/2013 Hình 1.2: Bản đồ dịch tễ bệnh vi khuẩn trên cá chẽm tại Hải Phòng 15 Nhìn vào bản... thành phố Bệnh vi khuẩn trên cá chẽm nuôi trong ao đất tại Hải Phòng ở môi trường mặn, lợ tập trung chủ yếu vào nhóm vi khuẩn Vibrio sp, môi trường nước ngọt tập trung chủ yếu vào nhóm Aeromonas sp Vi khuẩn Vibrio sp phân bố rất phổ biến trong môi trường nước biển và vùng nước lợ ven biển; có thể tìm thấy chúng trong các tầng nước, vùi trong trầm tích đáy hoặc bám trên bề mặt của các sinh vật sống trong. .. cá chẽm Tuy nhiên, trên cá biển nói chung thì cũng đã có khá nhiều các công trình nghiên cứu như: Theo Đỗ Thị Hòa và ctv (2008), cá biển nuôi tại Khánh Hòa có 10 bệnh thường gặp trên cá biển nuôi là[5]: + Bệnh vibriosis: Gây bệnh xuất huyết lở loét trên cá mú, cá hồng, cá chẽm Thời gian xuất hiện bệnh chính là mùa khô + Bệnh mòn vây và đuôi: Nguyên nhân gây bệnh có thể là vi khuẩn Gram (-), có đặc điểm... Bảo, Cát Hải, Dương Kinh 3.1.3 Đối tượng nghiên cứu Cá chẽm (Lates calcarifer) nuôi trong ao đất 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu Thu mẫu Nuôi cấy phân lập vi khuẩn Cảm nhiễm nhân tạo Thử kháng sinh đồ Hình 2.1: Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu 2.2.2 Thu mẫu Số mẫu thu: 5con/1 lần thu, định kỳ 15 ngày thu mẫu một lần Thu mẫu những con bị nhiễm bệnh do vi khuẩn Mẫu cá bị bệnh. .. vô khuẩn 11- 20mm: Vi khuẩn có tính mẫn cảm trung bình ° Đường kính vòng vô khuẩn