Ứng dụng vi sinh vật sản xuất vaccine Nhóm Chuyên đề: Ứng dụng vi sinh vật sản xuất vaccine Ứng dụng vi sinh vật sản xuất vaccine Nhóm MỤC LỤC Ứng dụng vi sinh vật sản xuất vaccine I. Nhóm Đặt vấn đề Thủy sản ngành có nhiều mạnh nước ta, ba ngành có đóng góp lớn cho kim ngạch xuất Việt Nam. Với phát triển hình thức nuôi nuôi với mật độ cao nuôi thâm canh vấn đề dịch bệnh trở thành trở ngại cho phát triển bền vững Nuôi trồng Thủy sản (NTTS) Việt Nam. Hiện việc phòng trị bệnh động vật thủy sản nước ta chủ yếu dựa vào việc sử dụng thuốc kháng sinh hóa chất. Hiện chưa có loại vaccine phòng bệnh cho cá đưa vào sử dụng Việt Nam, giới có 36 loại vaccine phòng bệnh cho vi khuẩn hai loại vaccine phòng bệnh cho virut sử dụng rộng rãi 12 đối tượng nuôi khác thuộc 41 quốc gia giới. Vì việc nghiên cứu, phát triển phương pháp phòng trị bệnh có hiệu sử dụng loại thảo dược, chất tách chiết từ thảo dược vaccine cho cá cần thiết nhằm đảm bảo cho phát triển bền vững NTTS. Việc phòng trị bệnh chủ yếu phụ thuộc vào loại thuốc kháng sinh hóa chất gần khiến cho việc xuất thủy sản Việt Nam gặp nhiều khó khăn danh mục loại thuốc hóa chất cấm sử dụng nuôi trồng thủy sản ngày tăng. Ví dụ cụ thể việc cấm sử dụng Chloramphenicol, Flomequine Xanh malachite ảnh hưởng lớn cho nghề xuất khuẩu. 1. Tổng quan sử dụng vaccine NTTS giới: Vaccine phòng bệnh nuôi thủy sản bắt đầu nghiên cứu phát triển từ năm 1973 đến cuối năm 1987 đưa vào sử dụng (Newman, S, 1993). Cho đến tháng năm 2005, có 35 loại vaccine phòng bệnh vi khuẩn loại vaccine phòng bệnh virut đăng ký quyền sử dụng cho đối tượng nuôi phổ biến 41 quốc gia giới bao gồm cá hồi, cá chẽm châu âu, cá chẽm châu á, cá rô phi, cá Turbot, cá bơn đuôi vàng. Bảng 1. Một số loại vaccine phòng bệnh vi khuẩn sử dụng giới ST Loại vaccine Loại bệnh Loài cá T Aeromonas sp bacterin Lở loét, xuất Cá hồi Ứng dụng vi sinh vật sản xuất vaccine Nhóm huyết Aeromonas salmonicida bacterin Lở loét, huyết Aeromonas salmonicida immersion Lở loét, vaccine huyết Aeromonas salmonicida Vibrio Lở loét, anguillarum huyết bacterin (Biojec 1900J) Penaeid multivalent bacterin Đỏ thân Streptococcus sp bacterin Xuất huyết, mắt Aeromonas salmonicida Salmonicida Autogenous bacterin xuất Cá hồi xuất Cá hồi xuất Cá hồi mù subsp. Khối u, lở loét Lở loét, xuất huyết Autogenous bacterin J Lở loét, xuất huyết Photobacterium damsela subsp. Damsela Lở loét Edwardsiella ictaluri bacterin (Escogen Hoại tử gan tụy J) Streptococcus iniae Xuất huyết, hoại tử Lactococcus garviae Bệnh lở loét Tôm sú Cá Chẽm cá Rô phi Cá hồi Cá hồi Cá hồi Cá chẽm Cá nheo Mỹ Cá rô phi Cá chẽm 2. Tình hình sử dụng vaccine NTTS Việt Nam Thừa Thiên Huế: Để đạt mục tiêu đề cho ngành NTTS việc phát triển cần có qui họach cụ thể, quản lý dịch bệnh cho đối tượng nuôi thủy sản đặt lên hàng đầu. Nhiều giải pháp để quản lý dịch bệnh áp dụng cải tạo ao kỹ, chọn giống tốt bệnh, quản lý tốt môi trường, quan tâm đến dinh dưỡng, thuốc hóa chất hiệu chưa cao. Vì vậy, việc sản xuất sử dụng vaccine nuôi trồng thủy sản Việt Nam để quản lý dịch bệnh có ý nghĩa lớn. Hiện có số công trình nghiên cứu, phát triển ứng dụng vaccine vào nuôi trồng thủy sản Việt Nam, đề tài sản xuất vaccine cuả Bộ Thủy Sản, đề tài sản xuất vaccine vô hoạt phòng bệnh xuất huyết cá trắm cỏ, đề tài nghiên cứu tạo vaccine phòng bệnh đốm trắng cá tra Viện nghiên cứu nuôi trồng Thủy sản II, đề tài sản xuất vaccine phòng bệnh hoại tử thần kinh (VNN) cho cá mú nuôi,… kết nghiên cứu bước đầu phòng thí nghiệm khả quan, đặc Ứng dụng vi sinh vật sản xuất vaccine Nhóm biệt vaccine phòng bệnh vi khuẩn Edwardsiella ictaluri cá tra (Pangasianodon hypothalmus) cho thấy khả đáp ứng miễn dịch cá tra vi khuẩn E. ictaluri qua kháng thể có máu cá đạt cao nhất. Nồng độ kháng nguyên kết hợp sử dụng chất bổ trợ Aluminum xác định (3.109 tế bào/cá) với phương pháp tiêm vaccine lần vào ngày ngày 14. Thời gian bảo hộ tốt cho đàn cá kéo dài đến tháng. Ngoài ra, số công ty nước nghiên cứu sản xuất thử nghiệm vaccine phòng bệnh cho cá tra, cá điêu hồng cá giò… Với kết đạt trên, hy vọng tương lai việc ứng dụng vaccine phòng hộ đàn cá nuôi triển khai rộng rãi công cụ quản lý sức khỏe hữu hiệu cho đối tượng nuôi thủy sản (theo UV Việt Nam). Bên cạnh đó, việc phát triển vaccine cho bệnh có ảnh hưởng lớn đối tượng nuôi Việt Nam bệnh xuất huyết đốm đỏ cá trắm cỏ, bệnh xuất huyết, mù mắt cá rô phi, bệnh hoại tử gan tụy cá tra cá Ba Sa, bệnh vi rút cá chép, số loài thủy đặc sản nước cá lăng, chiên, salmon, số đối tượng quan trọng khác cần thiết. Tại Thừa Thiên Huế, có số nghiên cứu sử dụng vaccine NTTS điển nghiên cứu thử nghiệm vaccine phòng bệnh hoại tử thần kinh cá tác giả: TS. Phạm Thị Tâm, PGS.TS. Phạm Công Hoạt, PGS.TS. Nguyễn Quang Linh, ThS. Trần Thế Mưu thuộc Viện Đại học mở Hà Nội Trung tâm Ươm tạo Chuyển giao công nghệ - Đại Học Huế phối hợp thực với mục tiêu vô hoạt keo phèn phòng bệnh hoại tử thần kinh cá mú có tỷ lệ bảo hộ cá điều kiện thí nghiệm đạt 75%. Bảng 2. Một số vaccine cần phát triển ứng dụng NTTS Việt Nam STT Loại vaccine Phòng bệnh Đối tượng nuôi Streptococcus iniae Xuất huyết, mù mắt Rô phi Streptococcus sp Xuất huyết, tuột vẩy Cá chẽm Aeromonas hydrophyla Lở loét Trắm cỏ Edwarsiella ictalury Bệnh hoại tử gan tụy Cá Tra, cá Ba Sa Edwardsiella tarda Bệnh hoại tử gan tụy Cá Tra, cá Ba Sa Vibrio sp Lở loét, hoại tử Cá Hồi nước Ứng dụng vi sinh vật sản xuất vaccine II. 1. Nhóm Hình 1: Vaccine phòng bệnh hoại tử thần kinh cá Nội dung Giới thiệu chung vaccine 1.1. Khái niệm sơ lược lịch sử hình thành vaccine. *Khái niệm: Vaccine sản phẩm tạo nên từ tác nhân gây bệnh, hay độc tố tác nhân gây bệnh tiết ra, nhằm tác động vào hệ thống miễn dịch đặc hiệu động vật có xương sống, có cá để tạo phản ứng miễn dịch. Vaccine điều chế từ chủng vi sinh vật phòng bệnh chủng vi sinh vật gây nên không phòng bệnh khác. Ứng dụng vi sinh vật sản xuất vaccine Nhóm Vaccine chế phẩm sinh học chứa vật chất mầm bệnh gọi "kháng nguyên". Khi đưa vào thể người động vật kích thích thể tạo trạng thái miễn dịch, giúp thể chống lại mầm gây bệnh. Tiêu chuẩn bản: - Không gây phản ứng toàn thân.Có thể có phản ứng cục bộ, biểu lâm sàng phải biến 24 sau tiêm phòng. - Hiệu lực phòng bệnh cao kéo dài. - Tiêm nhẹ tay, liều tiêm thấp bảo quản dễ dàng. - Giá thành hạ. *Lịch sử hình thành: Vaccine gắn với tên tuổi Edward Jenner, bác sĩ người Anh. Năm 1796, châu Âu xảy dịch đậu mùa, Jenner thực thành công thử nghiệm vaccine ngừa bệnh này. Kinh nghiệm dân gian cho thấy nông dân vắt sữa bò bị lây bệnh đậu bò, sau khỏi bệnh, họ trở nên miễn nhiễm bệnh đậu mùa. Thuật ngữ vaccine xuất phát từ vaccineia, loại virus gây bệnh đậu bò đem tiêm chủng cho người lại giúp ngừa bệnh đậu mùa (tiếng Latinh vacca nghĩa "con bò cái"). Ứng dụng vi sinh vật sản xuất vaccine Nhóm Hình 2: Edward Jenner Vào thời Jenner, virus chưa khám phá, vi khuẩn tìm vai trò gây bệnh chúng chưa biết. Thời điểm 1798, Jenner công bố kết thí nghiệm mình, người ta hình dung có "mầm bệnh" gây nên truyền nhiễm. Tám mươi năm sau, Louis Pasteur nghiên cứu bệnh tả dịch tả tàn sát đàn gà. Qua đó, Pasteur xác nhận giả thuyết Jenner. Điều mở đường cho ngành miễn dịch học đại. Ứng dụng vi sinh vật sản xuất vaccine 1.2. Nhóm Hình 3: Louis Pasteur Thành phần vaccine. Có hai thành phần chủ yếu vaccine là: Kháng nguyên chất bổ trợ vaccine. - Kháng nguyên: Kháng nguyên hiểu chất đưa vào thể kích thích thể vật chủ sản sinh kháng thể tạo lớp tế bào mẫn cảm đặc hiệu chống lại xâm nhập gây bệnh mầm bệnh. - Chất bổ trợ vaccine: Là chất bổ sung vào vaccine, có khả kích thích sinh miễn dịch không đặc hiệu nhằm nâng cao hiệu lực độ dài miễn dịch vaccine. Bổ trợ kết hợp với kháng nguyên làm tăng tính lạ kháng nguyên vào thể, nên đáp ứng miễn dịch mạnh hơn, trình tổng hợp protein cao hơn.Vaccine có bổ sung chất bổ trợ tạo miển dịch mạnh hơn, thời gian miễn dịch kéo dài hơn. Ứng dụng vi sinh vật sản xuất vaccine 1.3. Nhóm Đặc tính chế hoạt động vaccine. *Đặc tính:  AN TOÀN: Một vaccine lý tưởng sử dụng không gây bệnh, không gây độc không gây phản ứng. Sau sản xuất vaccine phải quan kiểm định nhà nước kiểm tra chặt chẽ mặt vô trùng, khiết không độc. -Vô trùng: Vaccine không nhiễm vi sinh vật khác, vi sinh vật gây bệnh. -Thuần khiết: Ngoài kháng nguyên đưa vào để kích thích thể đáp ứng miễn dịch chống vi sinh vật gây bệnh, không lẫn thành phần kháng nguyên khác gây phản ứng phụ bất lợi. -Không độc: Liều sử dụng phải thấp nhiều so với liều gây độc. Tuy nhiên, vaccine đạt độ an toàn tuyệt đối. Về nguyên tắc, vaccine phải đảm bảo đủ độ an toàn. Song thực tế đạt mức độ an toàn tuyệt đối. Tất vaccine gây phản ứng phụ số người. -Phản ứng chỗ: Những phản ứng nhẹ thường gặp sau tiêm chủng nơi tiêm đau, mẩn đỏ, sưng cục nhỏ. Những phản ứng nhanh chóng sau vài ngày, không cần phải can thiệp gì. Nếu tiêm chủng không đảm bảo vô trùng, nơi tiêm chủng bị viêm nhiễm, làm mủ. -Phản ứng toàn thân: Trong phản ứng toàn thân, sốt hay gặp cả, khoảng từ 10 đến 20 %. Sốt thường hết nhanh sau vài ngày. Co giật gặp với tỷ lệ thấp, khoảng phần vạn, hầu hết khỏi không để lại di chứng gì. Một số vaccine gây phản ứng nguy hiểm hơn, có sốc phản vệ, nhiên gặp. Khi bàn phản ứng vaccine, cần phải nhấn mạnh mức độ nguy hiểm vaccine nhỏ nhiều so với mức độ nguy hiểm bệnh nhiễm trùng tương ứng gây ra. Thí dụ, tỷ lệ biến chứng nguy hiểm bệnh ho gà gấp hàng trăm đến hàng nghìn lần phản ứng nguy hiểm vaccine bạch hầu - ho gà - uốn ván gây ra. Khi cân nhắc để định xem vaccine có đưa vào sử dụng hay không, cần phải so sánh mức độ phản ứng vaccine tính nguy hiểm bệnh nhiễm trùng tương ứng. 10 Ứng dụng vi sinh vật sản xuất vaccine  Nhóm HIỆU LỰC: Vaccine có hiệu lực lớn vaccine gây miễn dịch mức độ cao tồn thời gian dài. Hiệu lực gây miễn dịch vaccine trước hết đánh giá động vật thí nghiệm, sau thực địa. -Trên động vật thí nghiệm: Cách thứ nhất, đánh giá mức độ đáp ứng miễn dịch thông qua việc xác định hiệu giá kháng thể xác định mức độ dương tính phản ứng da. Cách đánh giá chưa cho biết hiệu lực bảo vệ, cho biết mức độ đáp ứng miễn dịch thể động vật loại vaccine thử nghiệm. Cách thứ hai, xác định tỷ lệ động vật tiêm chủng sống sót sau thử thách vi sinh vật gây bệnh. -Trên thực địa: Dù quan kiểm định nhà nước kiểm tra đánh giá động vật, trước đưa tiêm chủng rộng rãi, vaccine phải thử nghiệm thực địa (field test): Vaccine tiêm chủng cho cộng đồng, theo dõi thống kê tất phản ứng phụ đánh giá khả bảo vệ mùa dịch tới. Ngoài tiêu chuẩn trên, để chọn vaccine tiêm chủng, người ta quan tâm đến giá thành tính thuận lợi việc tiến hành tiêm chủng.  TÍNH KHÁNG NGUYÊN: Người ta gọi khả kích thích thể tạo thành kháng thể tính kháng nguyên. Tính kháng nguyên mạnh hay yếu. Kháng nguyên mạnh kháng nguyên đưa vào thể lần sinh nhiều kháng thể, kháng nguyên yếu chất phải đưa vào nhiều phải kèm theo tá dược sinh kháng thể.  TÍNH MIỄN DỊCH: Vaccine gây miễn dịch vi khuẩn virus giảm độc lực, với protein đặc hiệu có tính kháng nguyên để gây đáp ứng miễn dịch, tạo trí nhớ miễn dịch đặc hiệu, tạo hiệu đề kháng cho thể sau tác nhân gây bệnh xâm nhập với đầy đủ độc tính *Cơ chế hoạt động: 11 Ứng dụng vi sinh vật sản xuất vaccine Nhóm Hệ miễn dịch nhận diện vaccine vật lạ nên hủy diệt chúng "ghi nhớ" chúng. Về sau, tác nhân gây bệnh thực thụ xâm nhập thể, hệ miễn dịch tư sẵn sàng để công tác nhân gây bệnh nhanh chóng hữu hiệu (bằng cách huy động nhiều thành phần hệ miễn dịch, đặc biệt đánh thức tế bào lympho nhớ). Đây ưu điểm đáp ứng miễn dịch đặc hiệu. 1.4. Nguyên lý sử dụng bảo quản vaccine NTTS. *Nguyên lý sử dụng vaccine: Sử dụng vaccine đưa vào thể kháng nguyên có nguồn gốc từ vi sinh vật gây bệnh vi sinh vật có cấu trúc kháng nguyên giống vi sinh vật gây bệnh, bào chế đảm bảo độ an toàn cần thiết, làm cho thể tự tạo tình trạng miễn dịch chống lại tác nhân gây bệnh. Khi dùng vaccine cần phải thực theo nguyên tắc sau: - Đối tượng cần phòng bệnh + Thực phòng bệnh hàng năm vùng có ổ dịch cũ, vùng có nhiều bệnh truyền nhiễm phát sinh theo mùa. + Những nơi chưa có dịch nên dùng vaccine chết. + Nên phòng bệnh cho vật nuôi 15 – 20 ngày trước vận chuyển xa sau 20 – 30 ngày trường hợp nhập vật nuôi từ nơi khác về. + Vaccine phòng bệnh phòng loại bệnh đó, không phòng bệnh khác. - Hiệu lực vaccine : Tình trạng sức khỏe vật nuôi, điều kiện ngoại cảnh ảnh hưởng tới hiệu lực vaccine. Chỉ sử dụng vaccine vật nuôi khỏe mạnh. - Thời gian có tác dụng vaccine : Tùy loại vaccine, thời gian thể tạo miễn dịch sau dùng vaccine khác nhau. Trong thời gian đầu, vật nuôi chưa có miễn dịch đầy đủ nên mắc bệnh phát bệnh. - Liều sử dụng : Cần sử dụng liều lượng vaccine theo định nhà sản xuất. 12 Ứng dụng vi sinh vật sản xuất vaccine Nhóm - Số lần dung : Tuỳ loại vaccine, động vật cảm nhiễm tình hình dịch tễ mà số lần sử dụng khác nhau, có loại dùng lần đủ miễn dịch cho vật, số vaccine cần dùng nhắc lại hai nhiều lần (theo hướng dẫn sử dụng). - Kiểm tra lọ vaccine trước sử dụng : + Thông tin nhãn: tên vaccine, số lô, số liều sử dụng, ngày sản xuất, số kiểm nghiệm xuất xưởng, thời hạn sử dụng, quy cách bảo quản. + Những hư hỏng lọ vaccine: nút chặt hay lỏng, nguyên vẹn hay bị rách, tình trạng lớp sáp phủ bên ngoài, lọ thủy tinh có bị rạn nứt không. + Tình trạng vaccine lọ: màu sắc, kết cấu, có bị vón không, có vật lạ không, độ đồng (nếu lắc lọ vaccine chia thành lớp bị hư hỏng). - Thao tác sử dụng vaccine + Khử trùng dụng cụ dùng để đựng, pha chế vaccine cách hấp luộc, sau rửa nước (nước sôi để nguội). Không rửa thuốc sát trùng. + Sát trùng cồn 70o: tay người thực hiện, vùng da tiêm, nút cao su lọ chứa vaccine. + Trong lúc tiêm phòng cần tránh ánh nắng mặt trời. Những vấn đề cần lưu ý sử dụng vaccine: a. Đường đưa vaccine - Tiêm da: vaccine Newcatle, vaccine dịch tả vịt, vaccine tụ huyết trùng keo phèn . - Tiêm bắp thịt: vaccine tiêm vào thường hấp thu vào máu nhanh so với tiêm da. Để tránh trào thuốc từ vị trí tiêm, nên kéo da qua bên trước đâm kim. Gia súc thường tiêm bắp thịt đùi, gia cầm sau gáy, vị trí 1/3 giáp thân; cánh, ức. - Phun sương, nhỏ mắt, mũi, miệng: vaccine Laxota, Gumboro, IB,… - Chủng màng da: vaccine đậu. 13 Ứng dụng vi sinh vật sản xuất vaccine Nhóm b. Phản ứng sau dùng vaccine - Sau dùng vaccine, vật nuôi bị phản ứng do: chất phụ trợ vaccine, thể ủ bệnh . Phản ứng cục chỗ tiêm sưng, nóng, đau… sau thời gian phản ứng mất. Khi có phản ứng cục cần xử lý cách chườm nước nóng vị trí tiêm. Trường hợp nơi tiêm bị nhiễm trùng gây apxe mủ phải điều trị kháng sinh. - Tiêm vaccine gây phản ứng dị ứng, vật nuôi có biểu hiện: sốt, run rẩy, nôn mửa, thở gấp, mẩn mặt da (thường gặp lợn). Nếu phản ứng nhẹ sau thời gian hết, phản ứng mức độ nặng vật nuôi bị chết. Khi có tượng dị ứng nên sử dụng loại thuốc chống Histamin như: Dimadron, Epharin, Phenergan, Adrenalin. c. Xử lý vaccine thừa Sau dùng vaccine nhược độc cho vật nuôi, tất vaccine thừa cần tập trung lại tiêu hủy (dùng nhiệt hóa chất), dụng cụ tiêm nhỏ vaccine phải rửa sát trùng ngay. d. Sổ ghi chép Phải có sổ theo dõi: ghi chép đầy đủ ngày dùng, tên, số lô, trạng thái hạn sử dụng vaccine; tình trạng sức khoẻ vật nuôi trước sau sử dụng vaccine. Phương pháp sử dụng vaccine: Tùy theo loại vaccine nhu cầu áp dụng cho đối tượng mà phương pháp sử dụng khác nhau. Hiện nay, phổ biến phương pháp: Tiêm vaccine, ngâm vaccine cho ăn vaccine. Việc sử dụng vaccine NTTS có nhiều phương pháp khác nhau. Tùy loại vaccine khác mà phương pháp sử dụng khác nhau. Vì tùy loại vaccine khả áp dụng mà sử dụng phương pháp đây. • Phương pháp ngâm vaccine 14 Ứng dụng vi sinh vật sản xuất vaccine Nhóm Sử dụng vaccine theo phương pháp cách ngâm cá trực tiếp vaccine. Nồng độ thời gian xử lý phụ thuộc vào loại vaccine dùng theo dẫn nhà sản xuất. Tuy nhiên để tăng hiệu sử dụng vaccine tùy đối tượng nuôi kích thước cá mà ta thay đổi áp suất nhằm gia tăng hiệu vaccine. Đây phương pháp đễ áp dụng có chi phí thấp • Sử dụng vaccine phương pháp tiêm Tiêm vaccine tiêm xoang bụng tiêm cơ. Kích thước cá liều sử dụng theo dẫn nhà sản xuất. Đây phương pháp sử dụng cho hiệu vaccine cao nhất. Tuy nhiên chi chí sử dụng thời gian sử dụng tốn nhất. Hình 4: Tiêm vaccine cho cá 15 Ứng dụng vi sinh vật sản xuất vaccine Nhóm Hình 5: Tiêm vaccine cho cá trung tâm CNSH- TP. Hồ Chí Minh • Bơm cao áp Đây phương pháp sử dụng vaccine giống với phương pháp tiêm, nhiên không sử dụng mũi kim thông thường mà sử dụng xy lanh có áp suất cao để đưa vaccine vào vật chủ mà không gây vết thương bên ngoài. Chi phí sử dụng vaccine theo phương pháp cao đòi hỏi có trang thiết bị chuyên dụng. • Nhúng Đây phương pháp sử dụng vaccine với nồng độ cao ngâm trực tiếp cá vào vaccine. Đây phương pháp sử dụng đơn giản thời gian sử lý ngắn hiệu hạn chế tốn nhiều vaccine. • Cho ăn Đây phương pháp sử dụng vaccine đơn giản có chi phí sử dụng thấp nhất. Tuy nhiên có vaccine tiểu phần áp dụng theo phương pháp loại vaccine khác sử dụng theo phương pháp có hiệu thấp. 16 Ứng dụng vi sinh vật sản xuất vaccine Nhóm • Bơm vào đường ruột Tương tự với việc sử dụng vaccine phương pháp tiêm thay vi tiêm tiêm xoang bụng, phương pháp sử dụng cách tiêm vào đường ruột thông qua lỗ hậu môn. Mặc dù việc sử dụng vaccine theo phương pháp có hiệu tốt không gây tổn thương cho cá nhiên chi phí sử dụng cao tốn nhiều công lao động. *Bảo quản vaccine Vaccine phải bảo quản tốt từ lúc sản xuất tiêm chủng vào thể. Thường quy bảo quản vaccine không giống nhau, nói chung cần bảo quản điều kiện khô, tối lạnh. Nhiệt ánh sáng phá huỷ tất loại vaccine, vaccine sống. Ngược lại, đông lạnh phá huỷ nhanh vaccine giải độc tố. Trong trình sử dụng cộng đồng, vaccine phải bảo quản nhiệt độ thích hợp: < độ C (đối với vaccine sống), từ - độ C (đối với vaccine chết); nên sử dụng riêng tủ bảo quản vaccine, vệ sinh sát trùng định kỳ tủ nhằm đảm bảo vô trùng. Các hóa chất sát trùng phá huỷ vaccine. Nếu dụng cụ tiêm chủng khử trùng hóa chất cần lượng nhỏ dính lại làm hỏng vaccine. 2. Quy trình sản xuất vaccine phòng bệnh vi khuẩn NTTS từ VSV. 2.1. Xác định tác nhân gây bệnh Đây khâu quan trọng chuẩn bị cho việc xác định đối tượng có nên sản xuất vaccine hay không. Một số điều cần quan tâm lựa chọn chủng vi sinh vật gây bệnh để sản xuất vaccine chủng vi khuẩn phải có độc lực cao, ảnh hưởng lớn đến hiệu xuất sản lượng nuôi. Chủng vi khuẩn phải nuôi cấy điều kiện nhân tạo giữ nguyên độc lực chúng trình nuôi cấy. Xác định độc lực vi khuẩn gây bệnh vật chủ liều gây chết khác từ LC 50, 70, 100. 17 Ứng dụng vi sinh vật sản xuất vaccine Nhóm 2.2. Quy trình sản xuất vaccine nhược độc Sau xác định chủng vi khuẩn gây bệnh có độc lực cao, tiến hành sản xuất vaccine theo bước lựa chọn môi trường, điều kiện nuôi cấy thích hợp. Tiến hành nuôi sinh khối vi khuẩn sản xuất vaccine. 2.3. Đánh giá hiệu vaccine phòng thí nghiệm Cá trước đưa vào thí nghiệm cần hóa với điều kiện thí nghiệm để chứng minh cá không bị ảnh hưởng yếu tố môi trường đến thí nghiệm. Thí nghiệm xác định hiệu vaccine tiến hành phương pháp tiêm vaccine sau tiêm vi khuẩn gây bệnh với liều gây chết LC70. Tùy theo khả đáp ứng miễn dịch loài mà từ thời gian sử dụng vaccine đến thời gian tiêm công cường độc khác nhau. Trung bình thời gian dao động từ 2-5 tuần. Đánh giá hiệu vaccine dựa vào tỷ lệ sống tương quan tích theo công thức theo thiết kế Amend 1970s. Đánh giá hiệu vaccine với quy mô phòng thí nghiệm dựa theo tiêu chuẩn FDA hay EURO. Lô thí nghiệm đối chứng có tỷ lệ chết cao 70% lô thí nghiệm sử dụng vaccine có tỷ lệ chết thấp 30% thời gian theo dõi thí nghiệm 14 ngày sau cá ngừng chết hoàn toàn. Nếu vaccine có tỷ lệ bảo hộ thấp 70% vaccine nên cải thiện trước tiến hành thí nghiệm tiếp theo. Cách chẩn hóa vaccine sử dụng phương pháp thay đổi phương pháp sử dụng, thêm chất lâng đỡ, thay đổi tỷ lệ. 2.4. Đánh giá hiệu vaccine thực địa Sau tiến hành thử nghiệm vaccine phòng thí nghiệm cho kết tốt độ an toàn vaccine cao, khả bảo hộ lớn 70% tính ổn định 18 Ứng dụng vi sinh vật sản xuất vaccine Nhóm vaccine tiến hành thử nghiệm vaccine thực địa. Tùy khả ứng dụng vaccine, vùng địa lý khác mà quy mô khảo nghiệm vaccine thực địa khác nhằm đưa quy trình sử dụng vaccine phù hợp đánh giá hiệu kinh tế việc sử dụng vaccine tiêu chuẩn an toàn vệ sinh thực phẩm. 3. Các loại vaccine dùng NTTS. • Vaccine vô hoạt (inactivated): Là vaccine sản xuất trực tiếp từ chủng vi khuẩn gây bệnh, sau nuôi cấy tăng sinh diệt vi khuẩn nhiệt hóa chất (formalin, glutaraldehyde). Loại vaccine rẻ, công nghệ sản xuất đơn giản sản xuất với quy mô lớn, phù hợp với điều kiện Việt Nam. Tuy nhiên số trường hợp hiệu vaccine vô hoạt thấp nên loại vaccine khác cần phát triển ứng dụng vào sản xuất. • Vaccine hỗn hợp: Là loại vaccine có chứa nhiều chủng vi khuẩn gây bệnh bất hoạt nhằm gia tăng khả phòng cho nhiều loại bệnh khác nhau. • Vaccine sống (live attenuated): Là loại vaccine sản xuất dựa vào biến đổi gene chủng vi khuẩn gây bênh. Công việc quan trọng việc sản xuất vaccine loại xác định gene độc lực loại bỏ gene độc lực trước sử dụng vi khuẩn sống. Một loại vaccine sống khác lực chọn chủng vi khuẩn không gây độc có cấu trúc tế bào gần giống với chủng vi khuẩn gây bệnh điều quan trọng chủng vi khuẩn phải kích thích hệ miễn dịch chống lại tác nhân gây bệnh. Đây loại vaccine đòi hỏi công nghệ cao để sản xuất nguy vi khuẩn không độc lực trở thành chủng gây bệnh môi trường biến đổi gene thu nhập gene độc lực từ chủng vi khuẩn gây bệnh. • Vaccine tiểu phần (recombinant): Là loại vaccine sản xuất từ tiểu phẩn kháng nguyên tác nhân gây bệnh. Thông thường tiểu phần kháng nguyên vi khuẩn chiếm tỷ lệ nhỏ cấu trúc tế bào thành tế bào vi khuẩn phần vỏ, protein, nội ngoại 19 Ứng dụng vi sinh vật sản xuất vaccine Nhóm bào vi khuẩn virus. Vaccine tiểu phần sản xuất theo ba phương pháp khác đây. - Sản xuất vaccine tiểu phần cách tách triết trực tiếp tiểu phẩn kháng nguyên từ vi khuẩn sau nuôi cấy tăng sinh làm vỡ tế bào, tách lọc protein nội ngoại bào tùy vào thành phần kháng nguyên. - Vaccine tiểu phần sản xuất cách xác định gene độc lực vi khuẩn sau đưa gene độc lực vào plasmid bacteriophase, trước đưa vào vi khuẩn E.coli nuôi cấy vi khuẩn điều kiện đặc biệt nhằm sản xuất tiểu phần kháng nguyên cần thiết. Sau tách lọc kháng nguyên sử dụng vaccine tiểu phần. - Sau xác định gene độc lực tổng hợp protein nhân tạo phương pháp phòng thí nghiệm. Việc nghiên cứu sản xuất loại vaccine tốn kém, giá thành cao nên loại vaccine tiểu phần sử dụng NTTS. • DNA vaccine: Vaccine DNA loại vaccine có thành phần gene độc lực chủng vi khuẩn gây bệnh tổng hợp đưa trực tiếp vào thể cá nhân lên vi sinh vật mang trước đưa vào thể cần bảo vệ. Đây công nghệ sản xuất vaccine thường áp dụng việc sản xuất vaccine phòng bệnh virut gây ra. Một nhược điểm lớn loại vaccine chi phí sản xuất cao áp dụng NTTS. 4.  Vai trò sử dụng vaccine NTTS. Phòng bệnh, tăng tỉ lệ sống cho đối tượng nuôi, tăng suất nuôi Theo kết thống kê FAO,2006 năm 2005 có đến 95% tổng số cá tiêm vaccine trước đưa vào nuôi thương phẩm tỉ lệ sống cá nuôi thương phẩm đạt 90%  Giảm thiểu việc sử dụng thuốc kháng sinh - Dựa vào kết thống kê FAO, 2006 ví dụ điển hình ảnh hưởng sử dụng vaccine hai đối tượng nuôi châu Âu Mỹ cá hồi cá hồi vân. Nghề nuôi cá hồi phát triển từ năm 1980 đến năm 2003 sản 20 Ứng dụng vi sinh vật sản xuất vaccine Nhóm lượng cá hồi giới đạt khoảng 700000 nghìn tấn. Tuy nhiên bệnh vi khuẩn trở ngại cho ngành công nghiệp này. Lượng sử dụng thuốc kháng sinh nhề nuôi cá hồi tăng dần từ 0.3kg/1tấn đến 0.9kg/1tấn sản phẩm năm 1987, sau lượng kháng sinh sử dụng giảm dần từ xuất loại vaccine có hiệu phòng bệnh vi khuẩn gây đối tượng từ năm 90 kỉ trước, năm 1890 0.25kg/1tấn xuống 0.5kg/1tấn năm 1993 giảm dần không sử dụng kháng sinh nuôi cá hồi thương phẩm. - Với thực tế nay, đa số người nuôi thủy sản sử dụng đến thuốc, hóa chất hầu hết khâu liên quan, với mục đích xử lý môi trường, phòng trừ dịch bệnh nhằm nâng cao suất, mang lại hiệu kinh tế. Tuy nhiên việc lạm dụng thuốc, hóa chất trình sản xuất dẫn đến tượng kháng thuốc, nhờn thuốc cho đối tượng nuôi; dư lượng hóa chất có sản phẩm thuỷ sản gây bất lợi đến sức khoẻ người tiêu dùng; sản phẩm làm không đảm bảo chất lượng an toàn vệ sinh thực phẩm, ảnh hưởng nghiêm trọng đến thị trường xuất lợi nhuận thu không cao. Người ta sử dụng vaccine thay cho loại thuốc kháng sinh tác dụng giống thuốc kháng sinh an toàn chế phẩm sinh học. 21 Ứng dụng vi sinh vật sản xuất vaccine Nhóm Hình 6: Ảnh hưởng vaccine đến việc sử dụng kháng sinh nuôi cá hồi giới (FAO, 2006)  Đảm bảo an toàn vệ sinh thực phẩm Vaccine loại chế phẩm sinh học nên chúng khác với loại thuốc, hóa chất, vacine không tồn dư thể động vật nuôi nên chúng không gây ảnh hưởng tới sức khỏe người tiêu dùng.  Giảm giá thành sản phẩm Theo số liệu thống kê FAO,2006, chi phí sản xuất 1kg cá hồi từ năm 1987 gần euro đến năm 2003 giảm xuống euro/kg. có nhiều nguyên nhân giúp cho chi phí sản xuất cá hồi giảm 300% từ năm 1987 đến 2003 cải thiện công nghệ nuôi, hoàn thiện thức ăn công nghiệp đặc biệt tăng tỉ lệ sống cá nhờ vào việc sử dụng loại vaccine phòng bệnh vi khuẩn đối tượng này. Chi phí sản xuất giảm nên giá thành sản phẩm giảm. Hình 7: Ảnh hưởng sử dụng vaccine đến chi phí sản xuất 1kg cá hồi giới (FAO, 2006) 22 Ứng dụng vi sinh vật sản xuất vaccine III. Nhóm Kết luận Sự đời hàng loại mô hình nuôi thâm canh dẩn đến cân đối môi trường, sinh thái, điều thể rõ qua hàng lọat dịch bệnh xảy ra. Sự gia tăng ảnh hưởng tác nhân gây bệnh nghề nuôi thủy sản làm tổn thất không nhỏ đến nghề nuôi cá công nghiệp. Việc sử dụng kháng sinh chữa bệnh cá ngày nhiều dẩn đến tượng kháng thuốc vi khuẩn, tồn lưu kháng sinh không mong muốn… Với trạng thế, sử dụng vaccine để phòng bệnh cho cá giải pháp tối ưu cho phát triển bền vững nghề nuôi thủy sản. Tính ưu việt loại vaccine ngày khẳng định: tinh khiết, phản ứng phụ, hiệu lực tạo miễn dịch cao, sản xuất nhanh giá thành thấp. Có thể nói, thành tựu từ khoa học kỹ thuật, đặc biệt ứng dụng công nghệ vi sinh sản xuất vaccine mở nhiều hướng nghiên cứu hiệu công tác điều trị bệnh cho đối tượng nuôi thủy sản. Từ đó, khẳng định vai trò quan trọng vi sinh vật NTTS nói riêng tự nhiên nói chung. Chính thế, cần quan tâm triệt để đến công tác nghiên cứu vi sinh vật để sản xuất vaccine sử dụng NTTS nhằm mang lại hiệu kinh tế cao nhất. 23 Ứng dụng vi sinh vật sản xuất vaccine Nhóm Tài liệu tham khảo: 1. 2. 3. 4. 5. 6. http://123doc.org/document/1192828-su-dung-vaccine-trong-nuoi-trongthuy-san-ppt.htm http://khuyennongpy.org.vn/news/Khuyen-ngu/SU-DUNG-THUOC-HOACHAT-AN-TOAN-TRONG-NUOI-TRONG-THUY-SAN-220.htm https://www.google.com/search?q=VACCINE+TRONG+TH%E1%BB %A6Y+S%E1%BA%A2N+T%E1%BA%A0I+Hu%E1%BA %BF&biw=1366&bih=622&tbm=isch&tbo=u&source=univ&sa=X&ei=ido IVamgEMLQmAWrroJ4&ved=0CE0QsAQ http://infonet.vn/tiem-vaccine-cho-ca-tra-post96986.info http://vi.wikipedia.org/wiki/V%E1%BA%AFcxin#C.C6.A1_ch.E1.BA.BF_ho.E1.BA.A1t_.C4.91.E1.BB.99ng_c.E1.BB.A 7a_v.E1.BA.AFc-xin http://luanvan.net.vn/luan-van/de-tai-ung-dung-cong-nghe-vi-sinh-trongsan-xuat-vaccine-45140/ 24 [...]... vaccine Chỉ sử dụng vaccine khi vật nuôi khỏe mạnh - Thời gian có tác dụng của vaccine : Tùy loại vaccine, thời gian cơ thể sẽ tạo được miễn dịch sau khi dùng vaccine là khác nhau Trong thời gian đầu, vật nuôi chưa có miễn dịch đầy đủ nên vẫn có thể mắc bệnh và phát bệnh - Liều sử dụng : Cần sử dụng liều lượng vaccine đúng theo chỉ định của nhà sản xuất 12 Ứng dụng vi sinh vật trong sản xuất vaccine Nhóm... khác nhau từ LC 50, 70, 100 17 Ứng dụng vi sinh vật trong sản xuất vaccine Nhóm 2 2.2 Quy trình sản xuất vaccine nhược độc Sau khi xác định được chủng vi khuẩn gây bệnh có độc lực cao, chúng ta tiến hành sản xuất vaccine theo các bước như lựa chọn môi trường, điều kiện nuôi cấy thích hợp Tiến hành nuôi sinh khối vi khuẩn và sản xuất vaccine 2.3 Đánh giá hiệu quả của vaccine trong phòng thí nghiệm Cá trước... thuật, đặc biệt là ứng dụng công nghệ vi sinh trong sản xuất vaccine sẽ mở ra nhiều hướng nghiên cứu mới và hiệu quả trong công tác điều trị bệnh cho đối tượng nuôi thủy sản Từ đó, càng khẳng định được vai trò hết sức quan trọng của vi sinh vật trong NTTS nói riêng và trong tự nhiên nói chung Chính vì thế, cần quan tâm triệt để đến công tác nghiên cứu vi sinh vật để sản xuất vaccine sử dụng trong NTTS nhằm... của 18 Ứng dụng vi sinh vật trong sản xuất vaccine Nhóm 2 vaccine chúng ta có thể tiến hành thử nghiệm vaccine ngoài thực địa Tùy khả năng ứng dụng của vaccine, vùng địa lý khác nhau mà quy mô khảo nghiệm vaccine ngoài thực địa cũng khác nhau nhằm đưa ra quy trình sử dụng vaccine phù hợp và đánh giá hiệu quả kinh tế của vi c sử dụng vaccine cũng như tiêu chuẩn an toàn vệ sinh thực phẩm 3 Các loại vaccine. .. bảo chất lượng về an toàn vệ sinh thực phẩm, ảnh hưởng nghiêm trọng đến thị trường xuất khẩu và lợi nhuận thu về không cao Người ta sử dụng vaccine thay cho các loại thuốc kháng sinh vì tác dụng giống thuốc kháng sinh nhưng an toàn hơn vì là chế phẩm sinh học 21 Ứng dụng vi sinh vật trong sản xuất vaccine Nhóm 2 Hình 6: Ảnh hưởng của vaccine đến vi c sử dụng kháng sinh trong nuôi cá hồi trên thế giới... áp dụng nhất và có chi phí thấp nhất • Sử dụng vaccine bằng phương pháp tiêm Tiêm vaccine có thể tiêm xoang bụng hoặc tiêm cơ Kích thước cá và liều sử dụng theo chỉ dẫn của nhà sản xuất Đây là phương pháp sử dụng cho hiệu quả vaccine cao nhất Tuy nhiên chi chí sử dụng và thời gian sử dụng là tốn kém nhất Hình 4: Tiêm vaccine cho cá 15 Ứng dụng vi sinh vật trong sản xuất vaccine Nhóm 2 Hình 5: Tiêm vaccine. .. nhỏ mắt, mũi, miệng: vaccine Laxota, Gumboro, IB,… - Chủng màng da: vaccine đậu 13 Ứng dụng vi sinh vật trong sản xuất vaccine Nhóm 2 b Phản ứng sau khi dùng vaccine - Sau khi dùng vaccine, vật nuôi có thể bị phản ứng do: các chất phụ trợ trong vaccine, cơ thể đang ủ bệnh Phản ứng cục bộ tại chỗ tiêm là sưng, nóng, đau… nhưng sau một thời gian phản ứng này sẽ mất Khi có phản ứng cục bộ cần xử lý bằng... dụng trong NTTS • DNA vaccine: Vaccine DNA là loại vaccine có thành phần chính là gene độc lực của chủng vi khuẩn gây bệnh được tổng hợp và đưa trực tiếp vào cơ thể cá hoặc được nhân lên trong vi sinh vật mang trước khi đưa vào cơ thể cần được bảo vệ Đây là công nghệ sản xuất vaccine mới nhất và thường áp dụng trong vi c sản xuất vaccine phòng bệnh do virut gây ra Một nhược điểm lớn nhất của loại vaccine. .. các chủng vi khuẩn gây bệnh • Vaccine tiểu phần (recombinant): Là loại vaccine được sản xuất từ tiểu phẩn kháng nguyên của tác nhân gây bệnh Thông thường tiểu phần kháng nguyên của vi khuẩn chiếm tỷ lệ rất nhỏ trong cấu trúc tế bào như thành tế bào ở vi khuẩn hoặc một phần vỏ, protein, nội hoặc ngoại 19 Ứng dụng vi sinh vật trong sản xuất vaccine Nhóm 2 bào của vi khuẩn cũng như của virus Vaccine tiểu... pháp ngâm vaccine 14 Ứng dụng vi sinh vật trong sản xuất vaccine Nhóm 2 Sử dụng vaccine theo phương pháp này bằng cách ngâm cá trực tiếp trong vaccine Nồng độ và thời gian xử lý phụ thuộc vào loại vaccine và dùng theo chỉ dẫn của nhà sản xuất Tuy nhiên để tăng hiệu quả sử dụng của vaccine thì tùy từng đối tượng nuôi và kích thước cá mà ta có thể thay đổi áp suất nhằm gia tăng hiệu quả của vaccine Đây . Ứng dụng vi sinh vật trong sản xuất vaccine Nhóm 2 1 Chuyên đề: Ứng dụng vi sinh vật trong sản xuất vaccine Ứng dụng vi sinh vật trong sản xuất vaccine Nhóm 2 MỤC LỤC 2 Ứng dụng vi sinh vật. 17 Ứng dụng vi sinh vật trong sản xuất vaccine Nhóm 2 2.2. Quy trình sản xuất vaccine nhược độc Sau khi xác định được chủng vi khuẩn gây bệnh có độc lực cao, chúng ta tiến hành sản xuất vaccine. mũi, miệng: vaccine Laxota, Gumboro, IB,… - Chủng màng da: vaccine đậu. 13 Ứng dụng vi sinh vật trong sản xuất vaccine Nhóm 2 b. Phản ứng sau khi dùng vaccine - Sau khi dùng vaccine, vật nuôi