BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI =======oO o====== NGUYỄN QUỐC HOÀN G Ó P PH ẦN N G H IÊN cứu ĐỊNH LƯỢNG A R TESU N A TE TR O N G V IÊN NÉN BANG PH Ư Ơ N G PH Á P ĐO QUANG PH Ổ H Â P TH Ụ TỬ N G O Ạ I - KH Ả K IÊ N (KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược SỸ KHOÁ 1998-2003) Người hướng dẫn: PGS. TS. Trần Đức Hậu Nơi thực hiện: Bộ môn Hoá Dược Thời gian thực hiện: 03/2003 - 05/2003 Lời cảm ơn Sau trình nghiên cứu học tập trường nhận đề tài “ Góp phần nghiên cứu định lượng ffrtesunate viên nén phương pháp đo quang phổ hấp íhụ íử ngoại - hhả hiến” PGS. TS. Trần Đức Hậu trực tiếp hướng dẫn. Trước xỉn cho tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS. TS. Trần Đức Hậu - Người tận tình giúp đỡ suốt trình thực khoá luận này. Tôi xin chân thành cám ơn thầy cô giáo, cán kỹ thuật viên môn Hoá Dược quan tâm giúp đỡ tạo điêu kiện đ ể hoàn thành tốt khoá luận mình. Nhân dịp xin bày tỏ lồng biết ơn tới thầy cô dìu dắt, giảng dạy năm học tập trường. Cuối vô cám ơn gia đình, bạn bè người thân động viên hết lòng giúp đỡ đ ể hoàn thành luận văn này. Hà Nội, tháng năm 2003 Sinh viên: Nguyễn Quốc Hoàn MỤC LỤC Đặt vấn đ ề . Phần - Tổng quan .3 1.1 - Vài nét bệnh sốt rét, công tác phòng điều trị sốt rét năm qua 1.2 - Cây hao hoa vàng hoạt chất . 1.2.1 - Đặc điểm thực vật 1.2.2 - Phân b ố 1.2.3 - Tác dụng công dụng 1.2.4 - Thành phần hoá h ọ c 1.3 - Tổng quan Artesunate . 1.3.1 - Bán tổng hợp Artesunate 1.3.2 - Đại cương Artesunate .10 1.3.3 - Điểm qua số phương pháp định lượng 14 1.4 - Nhận xét lựa chọn 19 Phần - Thực nghiệm kết .20 2.1 - Nguyên liệu trang thiết b ị 20 2.1.1 - Dụng cụ thiết b ị 20 2.1.2 - Hoá chất . 20 2.2 - Phương pháp nghiên cứu 20 2.3 - Kết nghiên cứu 21 2.3.1 Khảo sát sở .21 2.3.3 khảo sát điều kiện định lượng . 22 2.3.2 Xây dựng phương pháp 28 2.3.4 Áp dụng 29 2.3.5 Đánh giá phương pháp .30 Phần - Kết luận đề xuất . 34 Phụ lục Tài liệu tham khảo ĐẶT VÂN ĐỂ Sốt rét bệnh xã hội gây ký sinh trùng sốt rét thuộc chi Plasmodium. Những loài gây bệnh cho người thường gặp là: Plasmodium falciparum: loài chủ yếu, tỷ lệ mắc bệnh 70%. Plasmodium malariae: tỷ lệ mắc bệnh 20 - 30%. Plasmodium vivax: tỷ lệ mắc bệnh - 2%. Plasmodium ovale: tỷ lệ mắc bệnh thấp khoảng 0,5%. Bệnh sốt rét phát triển nhiều nước Thế giới, đặc biệt nơi có khí hậu ẩm thấp (nóng, ẩm, mưa nhiều) nước ta. Tác nhân truyền bệnh muỗi. Bệnh sốt rét bệnh gây nguy hại lớn đến sức khoẻ người, thể ác tính dẫn tới tử vong. Dịch tễ bệnh phức tạp, bệnh lan thành dịch không phát ngăn chặn kịp thời. Cho đến nay, có nhiều đầu tư nghiên cứu việc kiểm soát bệnh khó khăn, vai trò thuốc điều trị dự phòng sốt rét quan trọng. Nhưng số loại thuốc trước coi đặc hiệu đãbị kháng, đặc biệt Chloroquin bị kháng 60 quốc gia có Việt Nam [11]. Vì việc tìm kiếm đưa vào sử dụng thuốc điều trị sốt rét vấn đề lớn đặt với nhà nghiến cứu [16]. Artesunate dẫn chất Artemisinin thuộc nhóm thuốc điều trị sốt rét (Artemisinin chiết xuất từ hao hoa vàng). Nhiều nghiên cứu Việt Nam giới công nhận ưu điểm nhóm thuốc này: cắt sốt nhanh, độc cho thể, có khả qua hàng rào máu não để điều trị sốt rét thể não. Ở Việt Nam Artesunate sản xuất sản xuất với quy mô ngày lớn, đồng thời Bộ Y tế công nhận thuốc điều trị sốt rét chủ yếu chương trình chống sốt rét quốc gia hai dạng viên nén dạng tiêm. Chính việc kiểm tra đánh giá chất lượng sản phẩm bào chế quan trọng. Để góp phần vào công tác triển khai thực nghiên cứu phương pháp để định lượng Artesunate viên nén. Với mong muốn tham gia xây dựng tiêu chuẩn chất lượng cho thuốc PHẦN - TỔNG QUAN 1.1 - Vài nét bệnh sốt rét, công tác phòng điều trị sốt rét năm qua Sốt rét bệnh truyền nhiễm, có tính chất dịch tễ quan trọng lan thành dịch không phát ngăn chặn kịp thời. Bệnh phát triển nhiều nước giới, đặc biệt nước thuộc vùng khí hậu nhiệt đới châu Á, châu Phi, châu Mỹ Latinh. Theo thống kê tổ chức Y tế Thế giới (WHO), hàng năm giới có khoảng 100 - 200 triệu người bị sốt rét thuộc 95 quốc gia tất châu lục. Bệnh sốt rét gây hậu nghiêm trọng sức khoẻ nhân dân vùng sốt rét lưu hành [3]. Việt Nam nước nằm vùng sốt rét lưu hành mạnh Thế giới. Theo báo cáo Viện sốt rét ký sinh trùng côn trùng TW, hàng năm nước ta có khoảng 500.000 người mắc bệnh sốt rét 200 - 5.000 người chết sốt rét, 30,1 triệu người sống vùng sốt rét lưu hành [12]. Từ năm cuối thập kỷ 90, công tác phòng chống sốt rét Bộ Y tế quan tâm thu nhiều thành tích đáng kể. Tổng kết kết phòng chống sốt rét Việt Nam từ năm 1992 - 1997 cho thấy bệnh nhân sốt rét năm 1997 giảm 59% so với năm 1991, chết sốt rét giảm 97%, đồng thời số vụ dịch sốt rét giảm 92%. Đầu tư hàng năm mua thuốc hoá chất phòng chống sốt rét Chương trình phòng chống sốt rét quốc gia khoảng 35 - 40 tỷ đồng [13]. Với tính chất nguy hiểm bệnh, việc ngăn chặn loại trừ sốt rét nhiệm vụ hàng đầu ngành Y tế. Việc kiểm soát bệnh sốt rét khó khăn, có tới 1,7 tỷ người sinh sống vùng mà trước sốt rét bị đẩy lùi, phát triển mạnh trở lại. Hiện nay, ký sinh trùng sốt rét kháng hầu hết thuốc quen thuộc .dùng để phòng điều trị thời gian qua. Cloroquin bị Plasmodium falciparum kháng khoảng 60%, thuốc Fansida bị kháng khoảng 30 35%. Mefloquin tác dụng tốt giá thành cao bắt đầu bị kháng. Quinin bị ký sinh trùng kháng lại có số tác dụng phụ gây khó khăn cho bệnh nhân. Chính vậy, nhóm thuốc Artemisinin dẫn chất đưa áp dụng điều trị sốt rét gây tiếng vang lớn thu hút quan tâm nhiều nhà khoa học [12,15] Vào đầu thập niên 70, nhà khoa học Trung Quốc chiết từ hao hoa vàng loại hoạt chất có tác dụng điều trị sốt rét có tên gọi Quinghao Su (QHS) Artemisinin chất chứng tỏ hiệu lực chống sốt rét tốt kể với bệnh nhân mắc chứng kháng thuốc. Hơn nữa, Artemisinin dẫn chất vượt qua hàng rào máu não nên có hiệu lực điều trị sốt rét thể não [8]. Tuy nhiên, độ tan Artemisinin nước tỷ lệ tái phát sau dùng cao nên tác dụng điều trị Artemisinin phẩn bị hạn chế. Để hoàn thiện khả Artemisinin, năm đầu thập kỷ 80, nhà khoa học tiếp tục nghiên cứu bán tổng hợp số dẫn chất từ Artemisinin như: Artesunate, Artemether, Arteether, acid Artelinic . có tác dụng điều trị cao chất gốc, đồng thời sử dụng cho đường tiêm. Trong số Artesunate chất dùng phổ biến nhất. Hiện nay, Việt Nam có nhiều sở sản xuất Artemisinin dạng viên để uống Artesunate dạng uống dạng tiêm để đáp ứng nhu cầu nhân dân. Vì vậy, vấn đề cần quan tâm nhà sản xuất quản lý đảm bảo công tác kiểm tra chất lượng thuốc. Đã có nhiều công trình nghiên cứu nước mặt khác nhóm thuốc tác dụng dược lý, độc tính, dạng bào chế, v.v . v ề kiểm nghiệm, có nhiều công trình nghiên cứu định tính, định lượng Artemisinin Artesunate; Dược điển Việt Nam III có chuyên luận hai thuốc này. 1.2 - Cây hao hoa vàng hoạt chất 1.2.1 - Đặc điểm thực vật Tên khoa học: Artemisia annua L. Asteraceae. Tên dân gian: ngải si, ngải dại, ngải đắng, ngải hôi, ngải hoa vàng . Cây thảo, mọc hàng năm, thân cao tới lm, có rãnh, gần không lông. Lá sẻ lông chim lần thành dải hẹp, phủ lông mềm, có mùi thơm. Chuỳ cao mang chùm dài, hẹp, hoa đầu cao 1,8 - 2,0mm, bắc hẹp có lông xanh, bắc bắc xoan rộng. Hoa hoàn toàn hình ống, khoảng 15 cái, hoa lưỡng tính. Quả bế nhấn, cao 0,5mm mào lông, hoa tháng - 11, có tháng -3 . thường lụi vào tháng [2]. Theo thông báo WHO, Trung Quốc, Mỹ, khoảng 40 loài thực vật thuộc chi Artemisia, qua chọn lọc có loài Artemisia annua L. có chứa hoạt chất chữa sốt rét. Theo T.D.HOOKER, M.H.LECOM 1992 số tài liệu khác Thế giới có khoảng 250 loài thuộc chi Artemisia, Việt Nam biết khoảng 15 loài, có loài dễ nhầm lẫn với nhau, là: Artemisia apiceaehance, Artemisia capilaris, Artemisia canpestric Artemisia annua [2,9]. 1.2.2 - Phân bô Thanh hao hoa vàng phân bố nhiều nơi Thế giới chủ yếu tập trung nơi có khí hậu nhiệt đới ôn đới Bắc Mỹ, Đông Âu, Nga, Trung Quốc, Triều Tiên, Nhật Bản, Ấn Độ, Tại Việt Nam, mọc hoang dại thành cụm dọc ven sông, ven suối, chân đồi nơi ẩm thấp ánh sáng nhiều. Ta gặp tỉnh như: Quảng Ninh, Lạng Sơn, Cao Bằng, Bắc Cạn, Thái Nguyên, Vĩnh Phú, Tuyên Quang, Hoà Bình, Thanh Hoá Nghệ A n Do vừa dược liệu quý, có giá trị kinh tế cao vừa dễ trồng, dễ thích nghi với điều kiện khí hậu nên hao hoa vàng trồng với diện tích rộng, cho suất hàm lượng hoạt chất cao mọc hoang dại. Thời gian thu hái vào tháng - lúc chuẩn bị hoa [2] 1.2.3 - Tác dụng công dụng Theo YHCT Việt Nam, hao hoa vàng có vị đắng (khổ), tính lạnh (hàn) quy vào hai kinh can, đởm. Có tác dụng thư tịnh uế, trừ phục nhiệt âm phận dùng chữa trường hợp cốt chưng lao nhiệt (đau xương, nóng), đạo hãn (ra mồ hôi trộm), ngược tật (sốt rét), lở ngứa. Còn dùng chữa mạo cảm, nhiệt, giúp tiêu hoá, lợi gan mật. Có thể dùng riêng phối hợp với thuốc khác [9]. Theo khoa học đại, dùng làm nguyên liệu chiết Artemisinin để chữa bệnh sốt rét. 1.2.4 - Thành phần hoá học Tất phận hao hoa vàng chứa tinh dầu hàm lượng tinh dầu khác nhau, phụ thuộc vào giống nơi trồng, dao động từ 0,5 - 0,6%. Tinh dầu có màu vàng nhạt có mùi long não với thành phần chủ yếu Camphor, Artemisia ceton, P-myrcen .[2,9,14]. Trong thành phần tinh dầu hoạt chất có tác dụng điều trị sốt rét Artemisinin nhà khoa học Trung Quốc chiết tách xác định cấu trúc từ năm 1972, Artemisinin Secquiterpen lacton có cầu nối peroxyd nội phân tử, nhóm định tác dụng diệt ký sinh trùng sốt rét. Bên cạnh Artemisinin, người ta xác định loạt hợp chất Secquiterpen khác sau [14] Artemisin Arteannuin D eoxy artemisinin c Arteannuin B Acid Artemisinic Artemisitin Epideoxyarteannuin B Arteannuin A Quinghao Su IV (Quinghao Su I) CH3 I Arteannuin E Deox y artem isin in (Quinghao Su in) Hình 1•1: Hợp chất Serquiterpen Arteannuin F dùng thuốc thử Diazoni nên tiến hành khảo sát viên nén sau: Nghiền viên Artesunate thành bột. Cân lượng bột viên tương ứng với khoảng 0,090 gam Artesunate (theo hàm lượng ghi nhãn) cốc có mỏ. Hoà tan 40ml Ethanol tuyết đối, chuyển vào bình định mức 50ml, thêm Ethanol cho vừa đủ tới vạch, lắc đều. Lọc qua giấy lọc. Bỏ 10ml dịch lọc đầu. Hút xác 5ml dịch lọc cho vào bình định mức 50ml. Thêm 15ml NaOH 0,2 N đem đun cách thuỷ 50 ± l°c 45 phút. Lấy làm nguội nhanh nước máy. Thêm vào 5ml dung dịch acid Acetic 1,1M, lắc đều. Thêm 5ml dung dịch Z n 0,5%, lắc đều. Thêm tiếp 15,0ml thuốc thử Diazoni vừa pha trước 15 phút (theo cách pha thay đổi mục 2.3.1), lắc đều. Thêm nước cất tới vạch cho đủ 50ml. Để yên 20 phút (nếu thấy đục lọc trước đo) đem đo độ hấp thụ bước sóng 343nm. Lần lượt tiến hành với mẫu tích acid Acetic 1,1M là: 3,0; 3,5; 4,0; 4,5; 5,0; 5,5; 6,0; 6,5 kết bảng sau: Bảng 3: Thể tích acid Acetic 3,0 3,5 4,0 4,5 5,0 0,446 0,447 0,446 5,5 6,0 6,5 1,1M (ml) Độ hấp thụ 0,442 0,444 0,446 0,443 0.441 (P 343 ) Từ kết bảng ta thấy thể tích acid Acetic 1,1M 5,0ml độ hấp thụ tối ưu, lúc pH dung dịch đem đo vào khoảng 4,5(đo pH mét). 24 3.3.2.4 - Khảo sát lượng thuốc thử Trong qui trình định lượng nguyên liệu [11] lượng thuốc thử (pha giống 2.3.1) dùng 10,0ml nên lúc đầu tiến hành ^ .3 với lượng thuốc thử ,0 ; ,0 ; , ; 0 , ; 11 12,0 kếpqtía bảng sau: Bảng 4: Thể tích thuốc thử 8,0 9,0 10,0 11,0 12,0 0,408 0,417 0,425 0,431 0,437 (ml) Độ hấp thụ D343 Như lượng thuốc thử tăng mật độ quang tăng nên định tăng lượng thuốc thử lên là: 13,0; 14,0; 15,0; 16,0; 17,0; 18,0 kết bảng sau: Bảng 5: Thể tích thuốc thử 13,0 14,0 15,0 16,0 17,0 18,0 0,442 0,445 0,446 0,446 0,444 0,441 (ml) Độ hấp thụ D 343 Vì chọn lượng thuốc thử xác 15,0ml. 23.2.5 - Khảo sát lượng Kẽm clorid 0,5% độ ổn định sản phẩm cuối ZnCl2 0,5% có vai trò giữ ổn định cho sản phẩm cuối đồng thời ảnh hưởng tới thời gian phản ứng Q289 với thuốc thử Diazoni [11] 25 ảnh hưởng tới thời gian cần thiết để sản phẩm cuối ổn định có độ hấp thụ tối đa. Để khảo sát ảnh hưởng lượng Z n 0,5% xem xét thời gian ổn định tiến hành 2.3.1.3 với lượng NaOH 15ml thời gian cách thuỷ 45 phút lượng acid Acetic 5,0ml lượng ZnCl2 0,5% 4,0; 4,5; 5,0; 5,5; 6,0 mẫu đo độ hấp thụ sau thực phản ứng tạo mầu là: 5,10, 12, 15, 18, 21, 24, 27, 30 kết bảng sau: Bảng Thể tích ZnCL2 0,5% (m l) 4,0 4,5 0,5 5,5 6,0 Thời gian(phút) 0,442 0,439 0,438 0,438 0,437 10 0,444 0,441 0,439 0,439 0,439 12 0,442 0,443 0,443 0,443 0,442 15 0,445 0,444 0,445 0,444 0,444 18 0,445 0,445 0,446 0,446 0,444 21 0,443 0,446 0,446 0,445 0,445 24 0,444 0,445 0,445 0,446 0,445 27 0,443 0,445 0,445 0,445 0,444 30 0,442 0,444 0,445 0,445 0,445 35 0,440 0,443 0,444 0,444 0,443 Qua kết bảng thấy lượng ZnCL2 0,5% tăng lên thời gian đạt độ hấp thụ tối đa chậm lại thời gian ổn định tăng lên. Với lượng ZnCl2 0,5% từ 4,5ml trở lên thời gian ổn định đạt sau 15 phút kéo dài tới tận phút thứ 30. Như chọn thể tích ZnCl2 0,5% 5ml đo độ hấp thụ sau thực phản ứng tạo màu 20 phút. 26 2.3.3 - Xây dựng phương pháp Qua trình khảo sát lựa chọn điều kiện định lượng, xây dựng cách tiến hành định lượng Artesunate viên nén sau: Lấy 20 viên đen cân. Tính khối lượng trung bình viên. Nghiền 20 viên thành bột mịn cối sứ, trộn đều. Cân xác lượng bột viên tương ứng với khoảng 0,090g Artesunate (theo hàm lượng ghi nhãn) hoà bột 40ml Ethanol tuyệt đối, chuyển vào bình định mức 50ml, thêm Ethanol tới vạch, lắc đều. Lọc qua giấy lọc, bỏ khoảng 10ml dịch lọc đầu. Hút xác 5,0ml dịch lọc cho vào bình định mức 50ml. Thêm 15ml dung dịch NaOH 0,2N, lắc đều. Đun cách thuỷ 50 ± ° 45 phút. Sau làm nguội nhanh nước máy. Thêm 5ml acid Acetic 1,1M, lắc đều. Thêm tiếp 5ml Kẽm clorid 0,5%, lắc đều. Sau thêm 15,0ml dung dịch thuốc thử Diazoni (đã pha trước 15 phút, theo cách pha sửa nói trên), thêm nước cất vừa đủ 50ml, lắc đều, để yên 15 phút. Đem đo mật độ quang bước sóng 343 ± lnm vòng 15 đến 30 phút (kể từ cho thuốc thử vào), thấy đục lọc trước đo. Song song tiến hành với mẫu trắng (thay 5,0ml dịch lọc 5,0ml Ethanol tuyệt đối) mẫu chuẩn điều kiện. Hàm lượng % Artesunate mẫu thử tính theo công thức: ™ D ,.m r * % Artesunate = - - -- Dcm t X X theo công thức rư D ,.m r . M * % Artesunate = - ——- XX D c .171' .A Trong đó: Dt, Dc độ hấp thụ dung dịch thử dung dịch chuẩn. mt, mc khối lượng cân(g) Artesunate mẫu thử mẫu chuẩn. X hàm lượng % mẫu chuẩn. 27 A hàm lượng Artesunate viên ghi nhãn M khối lượng trung bình viên 2.3.5 - Áp dụng Từ phương pháp vừa xây dựng áp dụng định lượng Artesunate viên nén hai sở A B đựơc kết sau: *Viên nén sở A : Bảng 7: STT Khối lượng bột viên (g) Khối lượng hoạt chất tính theo hàm lượng D 343 C(%) ghi nhãn (g) 0,5499 0,0898 0,444 99,14 0,5457 0,0896 0,447 99,72 0,5529 0,0902 0,442 97,91 0,5554 0,0907 0,446 98,40 0,5542 0,0905 0,448 98,85 0,0903 0,445 98,60 Chuẩn Các đại lượng thống kê với độ tin cậy: 95% Giá trị trung bình là: X = 98.80%. Độ lệch chuẩn: 0,59. Khoảng tin cậy giá trị trung bình: AX = 0,73. x% = 98,80 ± 0,73% Độ lệch chuẩn tương đối: 0,60% 28 I W ien nén sở B: Bảng : STT Khối lượng hoạt Khối lượng chất tính theo hàm bột viên (g) D 343 C(%) lượng nhãn (g) 0,5456 0,0891 0,444 99,52 0,5548 0,0906 0,448 98,91 0,5518 0,0901 0,447 99,27 0,5475 0,0894 0,445 99,58 0,5536 0,0904 0,446 98,82 0,0896 0,442 98,60 Chuẩn Khi định lượng Artesunate viên nén sở B thấy cho thêm acid Acetic , M ZnCl2 0,5% bắt đầu có tủa đục, sau thêm thuốc thử độ đục tăng lên trước đo phải tiến hành lọc (bỏ lOml dịch lọc đầu). Các đại lượng thống kê với độ tin cậy: 95%. Giá trị trung bình: X = 99,11 %, độ lệch chuẩn: s = 0,36. Khoảng tin cậy giá trị trung bình: AX = 0,49. x% = 99,1 +0,49%. Độ lệch chuẩn tương đối: 0,49%. 2.3.6 - Đánh giá phương pháp 2.3.6.1 - Tính xác phương pháp Từ kết bảng ta thấy: Giá trị trung bình là: X = 98.80%. Độ lệch chuẩn: 0,59. Khoảng tin cậy giá trị trung bình: AX = 0,73. 29 x% = 98,80 ± 0,73% Độ lệch chuẩn tương đối: 0,60% < 2%. Các đại lượng thống kê với độ tin cậy p = 0,95%. Vậy phương pháp xác. 23.6.2 - Tính phương pháp Để xác định tính phương pháp tiến hành sau: Trộn hỗn hợp tá dược có thành phần số lượng công thức dập viên. Cân xác mẫu tá dược hỗn hợp (khối lượng tương ứng với 0,090g hoạt chất - tính theo công thức viên). Lần lượt thêm vào lượng Artesunate chuẩn (nồng độ 98,60%) viện kiểm nghiệm sản xuất với khối lượng từ 0,072 - 0,108 (khoảng 80 - 120% so với lượng cânchúng xây dựng phương pháp). Tiến hành tương tự 2.3.3được kết ghi bảng sau: Bảng 9. STT Khối lượng Khối lượng hoạt Khối lượng % tìm lại Artesunate cho vào chất có thực tìm lại 0,0720 0,0710 0,0712 100,28 0,0809 0,0798 0,0798 100,00 0,0901 0,0888 0,0888 100,00 0,0990 0,0976 0,0978 100,20 0,1080 0,1065 0,1066 100,09 Chuẩn 0,0901 0,0888 0,0888 100,00 Từ kết bảng ta có: Trung bình % tìm lại là: 100,11 30 Phương trình hồi quy mối tương quan lượng hoạt chất ban đầu lượng hoạt chất tìm lại là: y = l, 0 0 x + , 0 Với hệ số tương quan r = 0,9999 Độ lệch chuẩn y - intercept: Sb = 0,0062 Khoảng tin cậy y - intercept: AB = 0,0197 - 0,0196 < B < 0,0198 Độ lệch chuẩn độ dốc SA= 0,0012 Khoảng tin cậy độ dốc AA = 0,0038 0,9962 < A < 1,0038 Nhận xét: Không có sai số hệ thống định khoảng tin cậy y - intercept chứa . Không có sai số hệ thống tỷ lệ khoảng tin cậy độ dốc chứa . Giá trị trung bình tỷ lệ thu lại 100,11% nghĩa nằm khoảng từ 98 đến 102% hàm lượng Artesunate hai loại viên đạt. Như phương pháp khoảng khảo sát. 2.3.6.3 - Tính tuyến tính phương pháp Từ kết bảng thiết lập phụ thuộc mật độ quang vào nồng độ dung dịch để xác định tính tuyến tính phương pháp. Kết bảng sau: Bảng 10. c (mg/ml) D3 0,1420 0,1596 0,1776 0,1952 0,2130 0,356 0,444 0,489 0,533 0,399 Từ kết bảng 10 cho ta phương trình hồi quy: y = 2,5000x + 0,0005 Với hệ số tương quan: r = 0,9999 Độ lệch chuẩn y - intercept: SB= 0.1454 Khoảng tin cậy y - intercept: AB = 0.0463 => - 0,0458 < B < 0:0468 31 Đồ thị: Đồ thị biểu diễn phụ thuộc mật độ quang nồng độ Artesunate Nhận xét: Kết cho thấy hệ số tương quan đường hồi quy vượt 0,99. Tất giá trị đo nằm đường hồi quy phân bố đồng hai phía đừơng hồi quy. Khoảng tin cậy y - intercept chứa 0. Vậy phương pháp tuyến tính khoảng nồng độ từ 80 - 120% - nồng độ làm việc. 23.6.4 - Tính đặc hiệu phương pháp Trong viên nén Artesunate, hoạt chất Artesunate có nhiều chất khác. Trước hết loại tá dược công thức viên, tiếp % tạp chất Artesunate bị phân huỷ trình sản xuất, bảo quản hay có lẫn nguyên liệu ban đầu dùng để bán tổng hợp Artesunate: DHA acid Succinic. 32 Để khảo sát ảnh hưởng tá dược tiến hành sau: Chuẩn bị hai mẫu thử với khối lượng nguyên liệu Artesunate mẫu thứ thêm vào toàn tá dược (tính theo khối lượng Artesunate để dập viên). Tiếp tục tiến hành 2.3.2 kết bảng sau: Bảng 11. Mẫu D 343 0,445 0,446 Như tá dược không ảnh hưởng tới kết định lượng phương pháp. Do điều kiện thời gian chưa có dịp khảo sát ảnh hưởng DHA acid Succinic theo [11] có lẫn % DHA kết định lượng nguyên liệu tăng 1,4%. Như có mặt DHA làm sai kết định lượng cụ thể làm tăng kết định lượng. Tuy nhiên hàm lượng DHA mức thấp hay tương đương với lượng DHA mẫu chuẩn kết định lượng phụ thuộc vào DHA. 33 PHẦN - KẾT LUÂN VÀ Đ Ể XUẤT [...]... phẩm, nên khó có thể áp dụng cho định lượng viên nén Phương pháp chuẩn độ gián tiếp là phương pháp dễ thực hiện song phương pháp này mới chỉ được nghiên cứu áp dụng cho định lượng nguyên liệu Artesunate, muốn áp dụng trong định lượng các dạng bào chế Artesunate thì cần được nghiên cứu thêm *Phương pháp đo quang phổ hấp thụ vùng khả kiêh[ 15]: Dựa vào nhóm chức ester của Artesunate để làm phản ứng tạo... Viên nén Artesunate hàm lượng 50mg /viên của XN Dược phẩm 120 và của Công ty Dược liệu T W I 2.2 - Phương pháp nghiên cứu Dựa vào tài liệu đã được công bố [21] (phụ lục I) và dựa vào kết quả nghiên cứu định lượng Artesunate trong nguyên liệu [11] chúng tôi tiến hành: - Khảo sát các điều kiện định lượng Artesunate trong viên nén theo phương pháp đo độ hấp thụ ở bước sóng 345nm - Xây dựng và đánh giá phương. .. dụng để định lượng Artemisinin và các dẫn chất của nó - Các nhà khoa học Trung Quốc còn miêu tả hai phương pháp khác để định lượng Artemisinin và các dẫn chất trong mẫu thử sinh học - Phương pháp đo độ phóng xạ: sau khi uống thuốc đã được đánh dấu bằng Tritium [11] - Phương pháp đo mật độ quang trên sắc ký lớp mỏng 17 - Định lượng Artesunate dạng nguyên liệu bằng đo quang phổ hấp thụ vùng khả kiến dựa... vào phương pháp tách chiết (phân lập Artesunate khỏi DHA) và phản ứng tạo Hydroxamat sắt có màu, khắc phục được ảnh hưởng của DHA đến kết quả định lượng [15] - Định lượng Artesunate dạng nguyên liệu bằng đo quang phổ hấp thụ vùng tử tử ngoại ở bước sóng 289 nm, song khắc phục được ảnh hưởng của DHA đến kết quả định lượng bằng cách tách chiết, phân lập Artesunate khỏi DHA [17] * Định lượng Artesunate trong. .. kết quả đúng khi trong viên nén Artesunate không chứa acid Succinic Trong luận văn này chúng tôi triển khai nghiên cứu áp dụng phương pháp đo quang phổ hấp thụ ở bước sóng 345nm để định lượng Artesunate trong viên nén 19 PHẦN 2 - THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 2.1 - Nguyên ỉiệu và trang thiết bị 2.1.1 - Dụng cụ và thiết bị Cân kỹ thuật Sartorius; cân phân tích Sartorius (Thụy Sỹ) Máy quang phổ Trung Quốc u... sinh trùng (đa số trong vòng 24 giờ đầu), cắt cơn sốt nhanh, ngăn chặn được sốt rét nặng Thuốc không ảnh hưởng đến chức năng gan, thận, huyết học, không ảnh hưởng gì đến hệ tim mạch 1.3.3 - Điểm qua một sô phương pháp định lượng hiện nay 1.3.3.1 - Các phương pháp định lượng Artesunate trên nguyên liệu *Phương pháp đo quang phổ hấp thụ vùng tử ngoại Sau khi đun nóng trong môi trường kiềm, Artesunate chuyển... sản phẩm có độ hấp thụ cực đại ở bước sóng 289nm, do đó có thể định lượng Artesunate trong chế phẩm và trong nguyên liệu bằng phương pháp đo độ hấp thụ cuả sản phẩm thuỷ phân này trên máy quang phổ tử ngoại ồ bước sóng 289nm 14 Artesunate sau khi thuỷ phân trong môi trường kiềm tạo thành sản phẩm sau[ll,14,16]: CH3 H : coơ I h 3c KOH 50°c COOH coo H3C c °2 ồ Hình 1.7: Sơ đồ thuỷ phân Artesunate thành... Các phương pháp HPLC với detector 253nm có thể không phải trực tiếp định lượng Artesunate nên sản phẩm phân huỷ có thể ảnh hưởng tới kết quả Phương pháp đo phổ tử ngoại ở bước sóng 289nm thực tế cũng không thể đánh giá được chính xác hàm lượng Artesunate khi nó đã bị thủy phân hoặc lẫn các tạp chất khác, bởi sản phẩm thủy phân của chúng cũng bị hấp thụ vùng tử ngoại, do đó dẫn đến sai số Phương pháp đo. .. là độ hấp thụ của dung dịch thử và dung dịch chuẩn mt, mc lần lượt là khối lượng cân(g) Artesunate của mẫu thử và mẫu chuẩn X là hàm lượng % của mẫu chuẩn 27 A là hàm lượng Artesunate của mỗi viên ghi trên nhãn M là khối lượng trung bình của một viên 2.3.5 - Áp dụng Từ phương pháp vừa xây dựng chúng tôi áp dụng định lượng Artesunate trong viên nén của hai cơ sở A và B đựơc kết quả sau: *Viên nén của... chọn các điều kiện định lượng, chúng tôi đã xây dựng cách tiến hành định lượng Artesunate trong viên nén như sau: Lấy 20 viên đen cân Tính khối lượng trung bình của một viên Nghiền 20 viên thành bột mịn trong cối sứ, trộn đều Cân chính xác một lượng bột viên tương ứng với khoảng 0,090g Artesunate (theo hàm lượng ghi trên nhãn) hoà bột bằng 40ml Ethanol tuyệt đối, chuyển vào bình định mức 50ml, thêm . sô phương pháp định lượng hiện nay 1.3.3.1 - Các phương pháp định lượng Artesunate trên nguyên liệu *Phương pháp đo quang phổ hấp thụ vùng tử ngoại Sau khi đun nóng trong môi trường kiềm, Artesunate. ơn Sau quá trình nghiên cứu học tập tại trường tôi đã nhận được đề tài “ Góp phần nghiên cứu định lượng ffrtesunate trong viên nén bằng phương pháp đo quang phổ hấp íhụ íử ngoại - hhả hiến”. NỘI =======oOo====== NGUYỄN QUỐC HOÀN GÓ P PHẦN NGHIÊN cứu ĐỊNH LƯỢNG ARTESUNATE TRONG VIÊN NÉN BANG PHƯƠNG PHÁP ĐO QUANG PHỔ HÂP THỤ TỬ NGOẠI - KHẢ KIÊN (KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược SỸ KHOÁ