TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SHƯD NGUYỄN TRƯỜNG AN PHÂN LẬP VI KHUẨN STAPHYLOCOCCUS AUREUS VÀ VI KHUẨN E. COLI GÂY BỆNH VIÊM KHỚP TRÊN GÀ Ở TỈNH ĐỒNG NAI LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP NGÀNH THÚ Y 2013 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SHƯD NGUYỄN TRƯỜNG AN PHÂN LẬP VI KHUẨN STAPHYLOCOCCUS AUREUS VÀ VI KHUẨN E. COLI GÂY BỆNH VIÊM KHỚP TRÊN GÀ Ở TỈNH ĐỒNG NAI LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP NGÀNH THÚ Y CÁN BỘ HƯỚNG DẪN PGs. Ts. HỒ THỊ VIỆT THU 2013 LỜI CẢM TẠ Được giúp đỡ quý thầy cô trường Đại học Cần Thơ, Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng, hoàn thành luận văn. Tôi xin gửi lời cảm tạ đến: Ban Giám hiệu, Quý Thầy, Cô Bộ môn Thú y, khoa Nông nghiệp sinh học ứng dụng, trường Đại học Cần Thơ tạo điều kiện truyền đạt kiến thức cho thời gian học tập trường. Cô Hồ Thị Việt Thu tận tình hướng dẫn trình thực luận văn. Chị Nguyễn Thị Thùy Dung lớp cao học Thú y khóa 17 trường Đại học Cần Thơ hỗ trợ chia sẻ kiến thức quý báu trình học tập. Các bạn học lớp Thú y khóa 35 gắn bó giúp đỡ trình học tập. Những người thân gia đình động viên nguồn động lực để hoàn thành khoá học này. i TÓM TẮT Đề tài “Phân lập vi khuẩn Staphylococcus aureus vi khuẩn E. coli gây bệnh viêm khớp gà tỉnh Đồng Nai” tiến hành từ tháng 11/2012 đến tháng 08/2013 phương pháp nuôi cấy phân lập vi khuẩn từ 163 mẫu dịch khớp gối dịch gan bàn chân 13 đàn gà thuộc huyện Thống Nhất, Xuân Lộc, Trảng Bom, Long Khánh tỉnh Đồng Nai; đồng thời tiến hành kiểm tra tính nhạy cảm với kháng sinh chủng vi khuẩn phân lập được. Kết cho thấy 163 mẫu gà bệnh viêm khớp có 59 trường hợp viêm khớp nhiễm khuẩn, chiếm tỷ lệ 36,19%. Trong 46/163 (28,22%) nhiễm Staphylococcus aureus 13/163 (7,97%) mẫu nhiễm E. coli. Kết kiểm tra tính nhạy cảm vi khuẩn với loại kháng sinh ampicillin, cephalor, gentamycin, neomycin, erythromycin, norfloxacin, doxycillin, trimethoprimsulfamethoxazol cho thấy, loại vi khuẩn S. aureus E. coli nhạy cảm cao kháng sinh norfloxacin (84,78% 84,62%) kháng với kháng sinh ampicillin (73,91% 53,85%). ii LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam kết luận văn hoàn thành dựa kết nghiên cứu kết nghiên cứu chưa dùng cho luận văn cấp khác. Ngày tháng năm 2013 Nguyễn Trường An iii MỤC LỤC LỜI CẢM TẠ i TÓM TẮT ii LỜI CAM ĐOAN . iii MỤC LỤC . iv DANH SÁCH BẢNG . vi DANH SÁCH HÌNH vii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT . viii Chương 1. Đặt vấn đề Chương 2. Lược khảo tài liệu . 2.1 Tình hình nghiên cứu nước nước . 2.1.1 Tình hình nghiên cứu nước 2.1.2 Tình hình nghiên cứu nước 2.2 Bệnh viêm khớp S. aureus . 2.2.1 Nguyên nhân gây bệnh 2.2.2 Truyền nhiễm học 2.2.3 Triệu chứng 10 2.2.4 Bệnh tích 11 2.2.5 Chẩn đoán 13 2.2.6 Phòng bệnh 13 2.2.7 Điều trị . 14 2.3 Bệnh viêm khớp Escherichia coli (E. coli) . 14 2.3.1 Nguyên nhân gây bệnh 14 2.3.2 Truyền nhiễm học 16 2.3.3 Triệu chứng bệnh tích . 17 2.3.4 Chẩn đoán 17 2.3.5 Điều trị . 18 2.3.6 Phòng bệnh 18 Chương 3. Phương pháp nghiên cứu 20 3.1 Nội dung đối tượng nghiên cứu . 20 3.1.1 Nội dung 20 3.1.2 Đối tượng nghiên cứu 20 3.2 Vật liệu nghiên cứu . 20 3.2.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu . 20 3.2.2 Mẫu vật sinh phẩm 20 3.2.3 Dụng cụ hóa chất 20 3.2.4 Thiết bị máy móc . 21 iv 3.3 Phương pháp nghiên cứu . 21 3.3.1 Chẩn đoán bệnh viêm khớp qua dấu hiệu lâm sàng 21 3.3.2 Xác định số vi khuẩn phổ biến diện gây viêm khớp gà phương pháp nuôi cấy phân lập vi khuẩn . 21 3.3.3 Khảo sát tính nhạy cảm với kháng sinh vi khuẩn phân lập phương pháp làm kháng sinh đồ 22 3.3.4 Chỉ tiêu theo dõi 22 3.3.5 Phương pháp xử lý số liệu . 22 3.4 Kỹ thuật phòng thí nghiệm 23 3.4.1 Phương pháp phân lập vi khuẩn 23 3.4.2 Phương pháp làm kháng sinh đồ 27 Chương 4. Kết thảo luận . 28 4.1 Kết chẩn đoán bệnh viêm khớp qua dấu hiệu lâm sàng 29 4.1.1 Tỷ lệ gà mắc bệnh viêm khớp 31 4.1.2 Những biểu lâm sàng bệnh tích đại thể . 31 4.2 Kết phân lập số vi khuẩn phổ biến gây viêm khớp gà 34 4.2.1 Kết phân lập vi khuẩn từ gà bị viêm khớp 34 4.2.2 Sự diện vi khuẩn khớp gà bị viêm . 35 Chương 5. Kết luận đề nghị 38 5.1 Kết luận 38 5.2 Đề nghị . 38 Tài liệu tham khảo 39 v DANH SÁCH BẢNG Bảng 2.1 Tính gây bệnh tụ cầu khuẩn gia cầm Bảng 3.1 Tiêu chuẩn đánh giá mức độ nhạy vi khuẩn số kháng sinh dựa đường kính vòng vô khuẩn 28 Bảng 4.1 Tình trạng vệ sinh trại chăn nuôi tỉnh Đồng Nai 30 Bảng 4.2 Tỷ lệ gà mắc bệnh viêm khớp bốn huyện tỉnh Đồng Nai . 31 Bảng 4.3 Tỷ lệ biểu lâm sàng ghi nhận gà viêm khớp 32 Bảng 4.4 Tỷ lệ bệnh tích ghi nhận gà bệnh viêm khớp 33 Bảng 4.5 Tỷ lệ gà bệnh nhiễm vi khuẩn huyện tỉnh Đồng Nai . 34 Bảng 4.6 Sự diện vi khuẩn khớp gà bị viêm nhiễm khuẩn . . 35 Bảng 4.7 Kết xác định tính mẫn cảm với kháng sinh chủng vi khuẩn Staphylococcus aureus . 36 Bảng 4.8 Kết xác định tính mẫn cảm với kháng sinh chủng vi khuẩn E. coli 37 vi DANH SÁCH HÌNH Hình 2.1 Hình thái vi khuẩn Staphylococcus aureus . Hình 2.2 Staphylococcus aureus môi trường thạch máu Hình 2.3 Staphylococcus aureus môi trường BPA . Hình 2.4 Viêm tủy xương phần đầu xương đùi 11 Hình 2.5 Gan bị hoại tử 11 Hình 2.6 Khớp gối sưng có chứa dịch viêm 12 Hình 2.7 Hình gan xanh bạc màu . 12 Hình 2.8 Gà bị sưng khớp gối . 12 Hình 2.9 Gân bị đứt . 12 Hình 2.10 Dịch khớp đục có màu vàng nhạt . 12 Hình 2.11 Áp xe lòng bàn chân 12 Hình 2.12 Hình thái vi khuẩn E. coli kính hiển vi điện tử . 15 Hình 2.13 Khuẩn lạc E. coli môi trường EMB . 15 Hình 3.1 Quy trình định tính Staphylococcus aureus 23 Hình 3.2 Quy trình định tính Escherichia coli . 24 Hình 3.3 Khuẩn lạc S. aureus môi trường BPA . 25 Hình 3.4 Cấy S. aureus BPA 25 Hình 3.5 Khuẩn lạc E. coli EMB 26 Hình 3.6 Phản ứng Catalase . 26 Hình 3.7 Phản ứng đông huyết tương 26 Hình 3.8 Phản ứng dung huyết . 26 Hình 3.9 Thử nghiệm IMViC để xác định E. coli: 26 Hình 3.10 Cách đặt đĩa giấy kháng sinh 27 Hình 4.1 Gà bệnh bị què đứng dậy 32 Hình 4.2 Khớp gà bị sưng 33 Hình 4.3 Gan bàn chân gà bị sưng . 33 vii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt Nguyên chữ BPA Baird Parker Agar CLSI Clinical and laboratory standards institute EMB Eosin Methylen Blue KIA Kligler Iron Agar MR Methyl Red MR-VP Methyl red–Voges Proskauer NA Nutrient Agar VP Voges- Proskauer EAGGEC Enteroaggregative EHEC Enterohemorrhagic EIEC Enteroinrasire EPEC Enteropathogenic ETEC Enterotoxigenic viii 4.1.1 Tỷ lệ gà mắc bệnh viêm khớp Kết chẩn đoán bệnh viêm khớp đàn gà khảo sát huyện thuộc tỉnh Đồng Nai thể bảng 4.2. Bảng 4.2 Tỷ lệ gà mắc bệnh viêm khớp bốn huyện tỉnh Đồng Nai Địa điểm Thống Nhất Xuân Lộc Trảng Bom Long Khánh Tổng Số gà khảo sát (con) 5.920 38.880 33.720 15.600 94.120 Số gà viêm khớp (con) 59 1.812 441 117 2.429 Tỷ lệ (%) P c 0,99 4,66a 1,31b 0,75c 2,58 0,00 Các giá trị cột với chữ số mũ khác khác có ý nghĩa (P[...]... khuẩn Staphylococcus aureus và vi khuẩn E coli gây bệnh vi m khớp trên gà ở tỉnh Đồng Nai được thực hiện nhằm xác định nguyên nhân gây vi m khớp trên gà, từ đó đề ra biện pháp phòng và trị bệnh vi m khớp trên đàn gà công nghiệp, góp phần nâng cao hiệu quả kinh tế cho nhà chăn nuôi Mục tiêu đề tài - Xác định chủng vi khuẩn Staphylococcus aureus và E coli gây bệnh vi m khớp trên gà ở tỉnh Đồng Nai -... mắc bệnh vi m khớp sẽ được lấy mẫu để tiếp tục xét nghiệm phân lập vi khuẩn Số mẫu thu thập từ 13 đàn gà khảo sát là 163 mẫu 3.3.2 Xác định một số vi khuẩn phổ biến hiện diện và gây vi m khớp trên gà bằng phương pháp nuôi cấy và phân lập vi khuẩn Phân lập Staphylococcus aureus Kiểm tra vi khuẩn S aureus từ mẫu bệnh phẩm (dịch ở khớp gối hoặc ở gan bàn chân gà bệnh) bằng cách nuôi cấy và phân lập vi khuẩn. .. coli trong đường ruột 19 Chương 3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Nội dung và đối tượng nghiên cứu 3.1.1 Nội dung Chẩn đoán bệnh vi m khớp trên gà tại tỉnh Đồng Nai qua dấu hiệu lâm sàng Xác định một số vi khuẩn phổ biến hiện diện trên gà bệnh vi m khớp Khảo sát tính nhạy cảm với kháng sinh của vi khuẩn phân lập được từ gà bệnh vi m khớp 3.1.2 Đối tượng nghiên cứu Đàn gà thuộc các giống gà thương phẩm trên. .. xác định Staphylococcus aureus là nguyên nhân chính gây vi m tủy xương Tỷ lệ nhiễm có thể lên đến 50% trên tổng số gà bị què và có thể chết, chiếm 5% tỷ lệ chết trong đàn Năm 1973, Nairn cũng đã phân lập được vi khuẩn Staphylococcus aureus nhiễm tự nhiên trên gà tây bị bệnh vi m tủy xương và vi m màng hoạt dịch ở Úc Kibenge (1983) và Kleven (2003) nghiên cứu trên các gà bị què do đứt gân và vi m bao... thịt, gây ra các vụ ngộ độc thực phẩm rất quan trọng Tuy nhiên, bệnh vi m khớp do S aureus cũng dễ nhầm lẫn với bệnh vi m khớp do E coli do những biểu hiện lâm sàng tương tự và rất khó chẩn đoán chính xác nguyên nhân nào là nguyên nhân chủ yếu gây bệnh vi m khớp Ở nước ta cho đến nay vẫn còn ít nghiên cứu về bệnh vi m khớp do nhiễm vi khuẩn, đặc biệt là do nhiễm S aureus Do đó, đề tài Phân lập vi khuẩn. .. và ruột non Chúng bám dính trên bề mặt niêm mạc, gây vi m thành ruột sau đó vào hệ bạch huyết gây nhiễm trùng huyết E coli không những chỉ gây bệnh trên đường ruột như tiêu chảy, kiết lỵ mà còn có thể gây ra các bệnh khác như vi m rốn, vi m đường tiết niệu, vi m gan, vi m phế quản, vi m khớp 2.3.2 Truyền nhiễm học 2.3.2.1 Loài vật mắc bệnh Hầu hết các loài gia cầm đều mẫn cảm với vi khuẩn E coli Bệnh. .. ĐỀ Bệnh vi m khớp do vi khuẩn ở gà là một bệnh nhiễm trùng cấp tính hoặc mạn tính do nhiều vi khuẩn gây nên như mycoplasma, salmonella, staphylococcus, E coli Trong đó, nguyên nhân quan trọng gây thiệt hại trên đàn gà thương phẩm là S aureus, đôi khi cũng có liên quan đến vi khuẩn E coli (Chansiripormchai, 2009) S aureus và E coli hiện diện ở khắp nơi trong môi trường trang trại gà như ở trong phân, ... nhiễm vi khuẩn E coli Năm 2011, Rasheed (trường đại học Mosul, Irắc) đã phân lập vi khuẩn trên 60 con gà 30-35 ngày tuổi có triệu chứng vi m khớp Kết quả cho thấy, trong 60 con gà có 51 con gà bị vi m khớp nguyên nhân do vi khuẩn, trong đó 26/51 (50,98%) gà nhiễm Staphylococcus aureus, gà nhiễm Pseudomonas aeruginosa 4/51 (7,8%), 4/51 (7,84%) gà nhiễm Staphylococcus saprophyticus, 2/51 (3,9%) gà nhiễm... mycoplasma và tụ cầu khuẩn là vi khuẩn nhiễm thứ cấp sau khi gà bị nhiễm virus gây vi m bao gân Năm 1993, Thorp et al đã phân lập vi khuẩn trên mẫu bệnh phẩm đầu xương đùi từ đàn gà bị què, với tỷ lệ nhiễm tụ cầu dương tính với phản ứng đông huyết tương (22,2%), E coli và các vi khuẩn khác chiếm 13% Năm 1997, Riddell đã nghiên cứu trên đàn gà thịt ở phía tây Canada và đã nhận rằng Staphylococcus spp là vi khuẩn. .. pháp phân lập vi khuẩn 3.4.1.1 Phương pháp lấy mẫu Mẫu dùng phân lập vi khuẩn là dịch ở khớp gối hoặc dịch ở gan bàn chân Những mẫu này được thu thập khi mổ khám những con gà có biểu hiện vi m khớp để kiểm tra bệnh tích đại thể Dùng tăm bông vô trùng thu lấy dịch ở khớp gối cho vào ống Carry Blair, trữ lạnh ở 4-80C và vận chuyển về phòng xét nghiệm để phân lập vi khuẩn ngay Trên các mẫu này ghi lại ngày, . theo dõi 22 3.3.5 Phương pháp xử lý số liệu 22 3.4 Kỹ thuật phòng thí nghiệm 23 3.4.1 Phương pháp phân lập vi khuẩn 23 3.4.2 Phương pháp làm kháng sinh đồ 27 Chương 4. Kết quả và thảo luận 28. 2.13 Khuẩn lạc E. coli trên môi trường EMB 15 Hình 3.1 Quy trình định tính Staphylococcus aureus 23 Hình 3.2 Quy trình định tính Escherichia coli 24 Hình 3.3 Khuẩn lạc S. aureus trên môi trường