BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHẢO SÁT MỘT SỐ YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN QUÁ TRÌNH THỦY PHÂN PROTEIN BÃ ĐẬU NÀNH BẰNG BROMELAIN VỎ KHÓM CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Ths. VÕ VĂN SONG TOÀN SINH VIÊN THỰC HIỆN TRẦN THANH LIỀN MSSV: 3102823 LỚP: CNSH K36 Cần Thơ, Tháng 11/2013 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHẢO SÁT MỘT SỐ YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN QUÁ TRÌNH THỦY PHÂN PROTEIN BÃ ĐẬU NÀNH BẰNG BROMELAIN VỎ KHÓM CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Ths. VÕ VĂN SONG TOÀN SINH VIÊN THỰC HIỆN TRẦN THANH LIỀN MSSV: 3102823 LỚP: CNSH K36 Cần Thơ, Tháng 11/2013 PHẦN KÝ DUYỆT CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN (ký tên) (ký tên) Võ Văn Song Toàn Trần Thanh Liền DUYỆT CỦA HỘI ĐỒNG BẢO VỆ LUẬN VĂN ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………… Cần Thơ, ngày tháng năm 2013 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG (ký tên) LỜI CẢM TẠ Lời nói xin chân thành gửi lời biết ơn sâu sắc đến cha mẹ gia đình, người sinh thành, nuôi dưỡng, động viên hỗ trợ mặt suốt trình học tập, thực hoàn thành luận văn này. Ngoài ra, nhận giúp đỡ từ nhiều phía. Tôi xin chân thành gửi lời cảm tạ biết ơn sâu sắc đến: Ban Giám hiệu trường Đại Học Cần Thơ, lãnh đạo Viện Nghiên cứu Phát triển Công Nghệ Sinh Học, tất quý thầy cô truyền đạt kiến thức cho suốt trình học tập trường. Thầy Võ Văn Song Toàn, người tận tình hướng dẫn, truyền đạt kinh nghiệm quý báu, giải đáp thắc mắc suốt trình thực đề tài. Xin gửi lời cảm ơn đến quý thầy, cô phòng thí nghiệm Công nghệ Enzyme nhiệt tình hướng dẫn để hoàn tất đề tài. Cảm ơn cô cố vấn Bùi Thị Minh Diệu tập thể lớp CNSH K36 động viên, giúp đỡ lúc khó khăn chia sẻ vui buồn suốt thời gian học tập. Cuối xin chúc quý Thầy, Cô bạn có nhiều sức khỏe thành đạt nhiều lĩnh vực khác nhau. Xin trân trọng cám ơn! Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐHCT TÓM LƯỢC Với mục đích tận dụng hai nguồn phế phẩm bã đậu nành bromelain ly trích từ vỏ khóm để tạo chế phẩm dịch thủy phân giàu đạm amin. Đề tài "Khảo sát số yếu tố ảnh hưởng đến trình thủy phân protein bã đậu nành bromelain vỏ khóm" tiến hành nhằm khảo sát điều kiện (nồng độ enzyme, nhiệt độ, thời gian, pH) thích hợp cho trình thủy phân. Kết thí nghiệm cho thấy bromelain vỏ khóm có hoạt tính đặc hiệu 6,096U.mg-1. Qua khảo sát cho thấy với 6U.mg-1 bromelain cho gram chất nồng độ thích hợp để thủy phân protein bã đậu nành. Ở điều kiện nhiệt độ 50oC enzyme thủy phân tốt đạt hàm lượng đạm amin 0,322 g/l. Ở pH 8,0 bromelain cho hoạt tính cao đạt hàm lượng đạm amin 0,397 g/l sau 20 enzyme cho hàm lượng đạm amin 0,420 g/l. Quá trình thủy phân phạm vi phòng thí nghiệm cho thấy 50oC môi trường pH 8,0, thời gian 20 bromelain vỏ thủy phân bã đậu nành cho hàm lượng đạm amin 0,413 g/l. Kết điện di cho thấy băng xuất gel tương ứng với trọng lượng phân tử protein bã đậu nành khoảng từ 14,4 - 66,2 kDa. Sau 20 hầu hết băng protein chủ đạo có trọng lượng phân tử 23,8; 33,6; 43,9; 58,4 62,9 kDa bị thủy phân tạo thành acid amin đoạn peptid ngắn có trọng lượng phân tử từ 14,4 - 18,4 kDa. Từ khóa: bã đậu nành, bromelain vỏ khóm, dịch thủy phân, đạm amin. Chuyên ngành Công nghệ Sinh học i Viện NC&PT Công Nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐHCT MỤC LỤC Trang PHẦN KÝ DUYỆT LỜI CẢM TẠ . TÓM LƯỢC i MỤC LỤC ii CÁC TỪ VIẾT TẮT vii CHƯƠNG 1. GIỚI THIỆU .1 1.1. Đặt vấn đề 1.2. Mục tiêu đề tài .2 CHƯƠNG 2. LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU .3 2.1. Giới thiệu nguyên liệu bã đậu nành .3 2.1.1. Đậu nành 2.1.2. Bã đậu nành .3 2.1.3. Tình hình nghiên cứu nước .5 2.1.3.1. Trong nước 2.3.1.2. Ngoài nước 2.2. Giới thiệu enzyme khóm .8 2.2.1. Hệ enzyme khóm 2.2.2. Sơ lược bromelain .9 2.2.3. Bromelain vỏ khóm .10 2.2.4. Hoạt tính bromelain .10 2.2.5. Cơ chế tác động .11 2.2.6. Các yếu tố ảnh hưởng đến hoạt tính bromelain .12 2.3. Một số phương pháp phân tích 15 2.3.1. Phương pháp xác định ẩm độ (Wolf et al., 1997) .15 2.3.2. Phương pháp Kjeldahl (Kjeldahl, 1883) .15 2.3.3. Phương pháp chuẩn độ đạm formol (Horwitz, 2000) 16 2.3.4. Phương pháp chuẩn độ amoniac (Peters, 2003) 16 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học ii Viện NC&PT Công Nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐHCT 2.3.5. Phương pháp Bradford (Bradford, 1976) 16 2.3.6. Phương pháp Kunitz cải tiến (Kunitz, 1947) 17 2.3.7. Phương pháp điện di SDS-PAGE (Laemmli, 1970) 17 CHƯƠNG 3. PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .18 3.1. Phương tiện nghiên cứu 18 3.1.1. Thời gian, địa điểm 18 3.1.2. Dụng cụ, thiết bị 18 3.1.3. Nguyên vật liệu 18 3.1.4. Hóa chất .18 3.2. Phương pháp nghiên cứu 19 3.2.1. Chuẩn bị nguyên liệu .19 3.2.2. Khảo sát nguyên liệu 19 3.2.3. Khảo sát số yếu tố ảnh hưởng đến trình thủy phân 19 Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng nồng độ enzyme đến trình thủy phân .19 Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng nhiệt độ đến trình thủy phân .20 Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng pH đến trình thủy phân .20 Thí nghiệm 4: Ảnh hưởng thời gian đến trình thủy phân 21 Thí nghiệm 5: Khảo sát phương pháp trích ly bromelain vỏ để thủy phân bã đậu nành phạm vi phòng thí nghiệm .22 3.2.4. Phương pháp xử lý số liệu 22 CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .23 4.1. Thành phần nguyên liệu .23 4.1.1. Hàm lượng nitơ, protein tổng số, hàm lượng amin độ ẩm bã đậu nành .23 4.1.2. Hoạt tính hàm lượng protein dịch chiết vỏ khóm 23 4.2. Ảnh hưởng số yếu tố đến trình thủy phân protein từ bã đậu nành 24 4.2.1. Ảnh hưởng nồng độ enzyme 24 4.2.2. Ảnh hưởng nhiệt độ .26 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học iii Viện NC&PT Công Nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐHCT 4.2.3. Ảnh hưởng pH .28 4.2.4. Ảnh hưởng thời gian 30 4.2.5. Ảnh hưởng pháp trích ly bromelain vỏ để thủy phân bã đậu nành phạm vi phòng thí nghiệm .35 CHƯƠNG 5. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .39 5.1. Kết luận .39 5.2. Đề nghị .39 TÀI LIỆU THAM KHẢO .40 PHỤ LỤC . Phụ lục 1: Các phương pháp phân tích Phụ lục 2: Các số liệu thí nghiệm Phụ lục 3: Kết phân tích thống kê Chuyên ngành Công nghệ Sinh học iv Viện NC&PT Công Nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐHCT DANH SÁCH BẢNG Trang Bảng 1: Hoạt tính thủy phân casein bromelain .11 Bảng 2: Hoạt tính thủy phân (BAA) bromelain .11 Bảng 3: Bố trí thí nghiệm 19 Bảng 4: Bố trí thí nghiệm 20 Bảng 5: Bố trí thí nghiệm 21 Bảng 6: Bố trí thí nghiệm 21 Bảng 7: Bố trí thí nghiệm 22 Bảng 8: Số liệu đo hàm lượng nitơ tổng, protein tổng bã đâu nành . phụ lục Bảng 9: Số liệu đo hàm lượng ẩm bã đậu nành . phụ lục Bảng 10: Số liệu xây dựng đường chuẩn Tyrosin phụ lục Bảng 11: Số liệu đo hoạt tính bromelain . phụ lục Bảng 12: Số liệu xây dựng đường chuẩn BSA phụ lục Bảng 13: Số liệu đo hàm lượng protein bromelain vỏ . phụ lục Bảng 14: Số liệu thí nghiệm . phụ lục Bảng 15: Số liệu thí nghiệm . phụ lục Bảng 16: Số liệu thí nghiệm . phụ lục Bảng 17: Số liệu thí nghiệm . phụ lục Bảng 18: Mối tương quan tuyến tính trọng lượng protein chuẩn khoảng cách di chuyển tương đối băng protein (TN4) . phụ lục Bảng 19: Trọng lượng phân tử mẫu thủy phân theo thời gian . phụ lục Bảng 20: Số liệu thí nghiệm . phụ lục Bảng 21: Mối tương quan tuyến tính trọng lượng protein chuẩn khoảng cách di chuyển tương đối băng protein (TN5) . phụ lục Bảng 22: Trọng lượng phân tử mẫu thủy phân theo thời gian . phụ lục Chuyên ngành Công nghệ Sinh học v Viện NC&PT Công Nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐHCT DANH SÁCH HÌNH Trang Hình 1: Bã đậu nành Hình 2: Quy trình sản xuất đậu phụ theo công nghệ xay ướt Hình 3: Ảnh hưởng nồng độ chất đến tốc độ phản ứng .14 Hình 4: Biểu đồ ảnh hưởng nồng độ enzyme đến hàm lượng đạm .24 Hình 5: Biểu đồ ảnh hưởng nhiệt độ đến hàm lượng đạm 26 Hình 6: Biểu đồ ảnh hưởng pH đến hàm lượng đạm 28 Hình 7: Biểu đồ ảnh hưởng thời gian đến hàm lượng đạm .30 Hình 8: Điện di đồ protein bã đậu nành thủy phân theo thời gian 33 Hình 9: Ảnh hưởng phương pháp trích bromelain đến trình thủy phân bã đậu nành 35 Hình 10: Điện di đồ thể trình thủy phân protein bã đậu nành theo hai phương pháp trích bromelain vỏ khác 37 Hình 11: Đồ thị đường chuẩn Tyrosin . phụ lục Hình 12: Đồ thị đường chuẩn BSA . phụ lục Hình 13: Đồ thị đường logM protein chuẩn (TN4) . phụ lục Hình 14: Đồ thị đường logM protein chuẩn (TN5) . phụ lục Chuyên ngành Công nghệ Sinh học vi Viện NC&PT Công Nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Summary Statistics for Ham luong dam amin Nhiet Count Average Standard deviation 30 0.233333 0.0080829 35 0.242667 0.0080829 40 0.247333 0.0080829 45 0.298667 0.0080829 50 0.322 0.014 55 0.308 0.014 60 0.233333 0.0080829 65 0.228667 0.0080829 Total 24 0.26425 0.037682 Trường ĐHCT Coeff. of variation 3.4641% 3.33087% 3.26802% 2.70633% 4.34783% 4.54545% 3.4641% 3.5348% 14.26% ANOVA Table for Ham luong dam amin by Nhiet Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 0.0310905 0.0044415 Within groups 0.001568 16 0.000098 Total (Corr.) 0.0326585 23 F-Ratio 45.32 Minimum 0.224 0.238 0.238 0.294 0.308 0.294 0.224 0.224 0.224 Maximum 0.238 0.252 0.252 0.308 0.336 0.322 0.238 0.238 0.336 Range 0.014 0.014 0.014 0.014 0.028 0.028 0.014 0.014 0.112 P-Value 0.0000 Multiple Range Tests for Ham luong dam amin by Nhiet Method: 95.0 percent LSD Nhiet Count Mean 65 0.228667 60 0.233333 30 0.233333 35 0.242667 40 0.247333 45 0.298667 55 0.308 50 0.322 Homogeneous Groups X XX XX XX X X XX X Contrast Sig. Difference +/- Limits 30 - 35 -0.00933333 0.017135 30 - 40 -0.014 0.017135 30 - 45 * -0.0653333 0.017135 30 - 50 * -0.0886667 0.017135 30 - 55 * -0.0746667 0.017135 30 - 60 0.0 0.017135 30 - 65 0.00466667 0.017135 35 - 40 -0.00466667 0.017135 35 - 45 * -0.056 0.017135 35 - 50 * -0.0793333 0.017135 35 - 55 * -0.0653333 0.017135 35 - 60 0.00933333 0.017135 35 - 65 0.014 0.017135 40 - 45 * -0.0513333 0.017135 40 - 50 * -0.0746667 0.017135 40 - 55 * -0.0606667 0.017135 40 - 60 0.014 0.017135 40 - 65 * 0.0186667 0.017135 45 - 50 * -0.0233333 0.017135 45 - 55 -0.00933333 0.017135 45 - 60 * 0.0653333 0.017135 45 - 65 * 0.07 0.017135 50 - 55 0.014 0.017135 50 - 60 * 0.0886667 0.017135 50 - 65 * 0.0933333 0.017135 55 - 60 * 0.0746667 0.017135 55 - 65 * 0.0793333 0.017135 60 - 65 0.00466667 0.017135 * denotes a statistically significant difference. Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC&PT Công Nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐHCT 3. Kết thống kê ảnh hưởng pH đến trình thủy phân protein bã đậu nành Summary Statistics for Ham luong dam formol pH Count Average Standard deviation 10 0.191333 0.0161658 3 0.056 0.0 0.144667 0.0080829 0.158667 0.0080829 0.256667 0.0161658 0.308 0.014 7.5 0.345333 0.0161658 0.438667 0.0080829 8.5 0.368667 0.0161658 0.270667 0.0213854 Total 30 0.253867 0.113364 Coeff. of variation 8.44903% 0.0% 5.58726% 5.09427% 6.29837% 4.54545% 4.68122% 1.84261% 4.38494% 7.90099% 44.6548% ANOVA Table for Ham luong dam formol by pH Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 0.368898 0.0409887 Within groups 0.00378933 20 0.000189467 Total (Corr.) 0.372687 29 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học F-Ratio 216.34 Minimum 0.182 0.056 0.14 0.154 0.238 0.294 0.336 0.434 0.35 0.252 0.056 Maximum 0.21 0.056 0.154 0.168 0.266 0.322 0.364 0.448 0.378 0.294 0.448 Range 0.028 0.0 0.014 0.014 0.028 0.028 0.028 0.014 0.028 0.042 0.392 P-Value 0.0000 Viện NC&PT Công Nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐHCT Multiple Range Tests for Ham luong dam formol by pH Method: 95.0 percent LSD pH Count Mean 3 0.056 0.144667 0.158667 10 0.191333 0.256667 0.270667 0.308 7.5 0.345333 8.5 0.368667 0.438667 Homogeneous Groups X X X X X X X X X X Contrast Sig. Difference +/- Limits 10 - * 0.135333 0.0234438 10 - * 0.0466667 0.0234438 10 - * 0.0326667 0.0234438 10 - * -0.0653333 0.0234438 10 - * -0.116667 0.0234438 10 - 7.5 * -0.154 0.0234438 10 - * -0.247333 0.0234438 10 - 8.5 * -0.177333 0.0234438 10 - * -0.0793333 0.0234438 3-4 * -0.0886667 0.0234438 3-5 * -0.102667 0.0234438 3-6 * -0.200667 0.0234438 3-7 * -0.252 0.0234438 - 7.5 * -0.289333 0.0234438 3-8 * -0.382667 0.0234438 - 8.5 * -0.312667 0.0234438 3-9 * -0.214667 0.0234438 4-5 -0.014 0.0234438 4-6 * -0.112 0.0234438 4-7 * -0.163333 0.0234438 - 7.5 * -0.200667 0.0234438 4-8 * -0.294 0.0234438 - 8.5 * -0.224 0.0234438 4-9 * -0.126 0.0234438 5-6 * -0.098 0.0234438 5-7 * -0.149333 0.0234438 - 7.5 * -0.186667 0.0234438 5-8 * -0.28 0.0234438 - 8.5 * -0.21 0.0234438 5-9 * -0.112 0.0234438 6-7 * -0.0513333 0.0234438 - 7.5 * -0.0886667 0.0234438 6-8 * -0.182 0.0234438 - 8.5 * -0.112 0.0234438 6-9 -0.014 0.0234438 - 7.5 * -0.0373333 0.0234438 7-8 * -0.130667 0.0234438 - 8.5 * -0.0606667 0.0234438 7-9 * 0.0373333 0.0234438 7.5 - * -0.0933333 0.0234438 7.5 - 8.5 -0.0233333 0.0234438 7.5 - * 0.0746667 0.0234438 - 8.5 * 0.07 0.0234438 8-9 * 0.168 0.0234438 8.5 - * 0.098 0.0234438 * denotes a statistically significant difference. Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC&PT Công Nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Summary Statistics for Ham luong dam amoniac pH Count Average Standard deviation 10 0.0 0.0 3 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 7.5 0.014 0.0 0.042 0.0 8.5 0.056 0.0 0.028 0.0 Trường ĐHCT Coeff. of variation % % % % % % 0.0% 0.0% 0.0% 0.0% ANOVA Table for Ham luong dam amoniac by pH Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 0.01176 0.00130667 Within groups 0.0 20 0.0 Total (Corr.) 0.01176 29 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học F-Ratio Minimum 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.014 0.042 0.056 0.028 Maximum 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.014 0.042 0.056 0.028 Range 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 P-Value Viện NC&PT Công Nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐHCT Multiple Range Tests for Ham luong dam amoniac by pH Method: 95.0 percent LSD pH Count Mean Homogeneous Groups X 0.0 X 3 0.0 X 10 0.0 X 0.0 X 0.0 X 0.0 X 7.5 0.014 X 0.028 X 0.042 X 8.5 0.056 Contrast Sig. Difference +/- Limits 10 - 0.0 0.0 10 - 0.0 0.0 10 - 0.0 0.0 10 - 0.0 0.0 10 - 0.0 0.0 10 - 7.5 * -0.014 0.0 10 - * -0.042 0.0 10 - 8.5 * -0.056 0.0 10 - * -0.028 0.0 3-4 0.0 0.0 3-5 0.0 0.0 3-6 0.0 0.0 3-7 0.0 0.0 - 7.5 * -0.014 0.0 3-8 * -0.042 0.0 - 8.5 * -0.056 0.0 3-9 * -0.028 0.0 4-5 0.0 0.0 4-6 0.0 0.0 4-7 0.0 0.0 - 7.5 * -0.014 0.0 4-8 * -0.042 0.0 - 8.5 * -0.056 0.0 4-9 * -0.028 0.0 5-6 0.0 0.0 5-7 0.0 0.0 - 7.5 * -0.014 0.0 5-8 * -0.042 0.0 - 8.5 * -0.056 0.0 5-9 * -0.028 0.0 6-7 0.0 0.0 - 7.5 * -0.014 0.0 6-8 * -0.042 0.0 - 8.5 * -0.056 0.0 6-9 * -0.028 0.0 - 7.5 * -0.014 0.0 7-8 * -0.042 0.0 - 8.5 * -0.056 0.0 7-9 * -0.028 0.0 7.5 - * -0.028 0.0 7.5 - 8.5 * -0.042 0.0 7.5 - * -0.014 0.0 - 8.5 * -0.014 0.0 8-9 * 0.014 0.0 8.5 - * 0.028 0.0 * denotes a statistically significant difference. Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC&PT Công Nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Summary Statistics for Ham luong dam amin pH Count Average Standard deviation 10 0.191333 0.0161658 3 0.056 0.0 0.144667 0.0080829 0.158667 0.0080829 0.256667 0.0161658 0.308 0.014 7.5 0.331333 0.0161658 0.396667 0.0080829 8.5 0.312667 0.0161658 0.270667 0.0213854 Trường ĐHCT Coeff. of variation 8.44903% 0.0% 5.58726% 5.09427% 6.29837% 4.54545% 4.87902% 2.03771% 5.1703% 7.90099% ANOVA Table for Ham luong dam amin by pH Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 0.287597 0.0319553 Within groups 0.00378933 20 0.000189467 Total (Corr.) 0.291387 29 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học F-Ratio 168.66 Minimum 0.182 0.056 0.14 0.154 0.238 0.294 0.322 0.392 0.294 0.252 Maximum 0.21 0.056 0.154 0.168 0.266 0.322 0.35 0.406 0.322 0.294 Range 0.028 0.0 0.014 0.014 0.028 0.028 0.028 0.014 0.028 0.042 P-Value 0.0000 Viện NC&PT Công Nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐHCT Multiple Range Tests for Ham luong dam amin by pH Method: 95.0 percent LSD pH Count Mean 3 0.056 0.144667 0.158667 10 0.191333 0.256667 0.270667 0.308 8.5 0.312667 7.5 0.331333 0.396667 Homogeneous Groups X X X X X X X X X X Contrast Sig. Difference +/- Limits 10 - * 0.135333 0.0234438 10 - * 0.0466667 0.0234438 10 - * 0.0326667 0.0234438 10 - * -0.0653333 0.0234438 10 - * -0.116667 0.0234438 10 - 7.5 * -0.14 0.0234438 10 - * -0.205333 0.0234438 10 - 8.5 * -0.121333 0.0234438 10 - * -0.0793333 0.0234438 3-4 * -0.0886667 0.0234438 3-5 * -0.102667 0.0234438 3-6 * -0.200667 0.0234438 3-7 * -0.252 0.0234438 - 7.5 * -0.275333 0.0234438 3-8 * -0.340667 0.0234438 - 8.5 * -0.256667 0.0234438 3-9 * -0.214667 0.0234438 4-5 -0.014 0.0234438 4-6 * -0.112 0.0234438 4-7 * -0.163333 0.0234438 - 7.5 * -0.186667 0.0234438 4-8 * -0.252 0.0234438 - 8.5 * -0.168 0.0234438 4-9 * -0.126 0.0234438 5-6 * -0.098 0.0234438 5-7 * -0.149333 0.0234438 - 7.5 * -0.172667 0.0234438 5-8 * -0.238 0.0234438 - 8.5 * -0.154 0.0234438 5-9 * -0.112 0.0234438 6-7 * -0.0513333 0.0234438 - 7.5 * -0.0746667 0.0234438 6-8 * -0.14 0.0234438 - 8.5 * -0.056 0.0234438 6-9 -0.014 0.0234438 - 7.5 -0.0233333 0.0234438 7-8 * -0.0886667 0.0234438 - 8.5 -0.00466667 0.0234438 7-9 * 0.0373333 0.0234438 7.5 - * -0.0653333 0.0234438 7.5 - 8.5 0.0186667 0.0234438 7.5 - * 0.0606667 0.0234438 - 8.5 * 0.084 0.0234438 8-9 * 0.126 0.0234438 8.5 - * 0.042 0.0234438 * denotes a statistically significant difference. Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC&PT Công Nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐHCT 4. Kết thống kê ảnh hưởng thời gian đến trình thủy phân protein bã đậu nành Summary Statistics for Ham luong dam formol Thoi gian Count Average Standard deviation 0.177333 0.0080829 0.242667 0.0213854 12 0.289333 0.0080829 16 0.387333 0.0161658 20 0.462 0.014 24 0.471333 0.0080829 32 0.471333 0.0080829 40 0.471333 0.0080829 48 0.471333 0.0080829 Coeff. of variation 4.55803% 8.81265% 2.79363% 4.17362% 3.0303% 1.7149% 1.7149% 1.7149% 1.7149% ANOVA Table for Ham luong dam formol by Thoi gian Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 0.324707 0.0405883 Within groups 0.00261333 18 0.000145185 Total (Corr.) 0.32732 26 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học F-Ratio 279.56 Minimum 0.168 0.224 0.28 0.378 0.448 0.462 0.462 0.462 0.462 Maximum 0.182 0.266 0.294 0.406 0.476 0.476 0.476 0.476 0.476 Range 0.014 0.042 0.014 0.028 0.028 0.014 0.014 0.014 0.014 P-Value 0.0000 Viện NC&PT Công Nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐHCT Multiple Range Tests for Ham luong dam formol by Thoi gian Method: 95.0 percent LSD Thoi gian Count Mean 0.177333 0.242667 12 0.289333 16 0.387333 20 0.462 32 0.471333 24 0.471333 48 0.471333 40 0.471333 Homogeneous Groups X X X X X X X X X Contrast Sig. Difference +/- Limits 4-8 * -0.0653333 0.0206693 - 12 * -0.112 0.0206693 - 16 * -0.21 0.0206693 - 20 * -0.284667 0.0206693 - 24 * -0.294 0.0206693 - 32 * -0.294 0.0206693 - 40 * -0.294 0.0206693 - 48 * -0.294 0.0206693 - 12 * -0.0466667 0.0206693 - 16 * -0.144667 0.0206693 - 20 * -0.219333 0.0206693 - 24 * -0.228667 0.0206693 - 32 * -0.228667 0.0206693 - 40 * -0.228667 0.0206693 - 48 * -0.228667 0.0206693 12 - 16 * -0.098 0.0206693 12 - 20 * -0.172667 0.0206693 12 - 24 * -0.182 0.0206693 12 - 32 * -0.182 0.0206693 12 - 40 * -0.182 0.0206693 12 - 48 * -0.182 0.0206693 16 - 20 * -0.0746667 0.0206693 16 - 24 * -0.084 0.0206693 16 - 32 * -0.084 0.0206693 16 - 40 * -0.084 0.0206693 16 - 48 * -0.084 0.0206693 20 - 24 -0.00933333 0.0206693 20 - 32 -0.00933333 0.0206693 20 - 40 -0.00933333 0.0206693 20 - 48 -0.00933333 0.0206693 24 - 32 0.0 0.0206693 24 - 40 0.0 0.0206693 24 - 48 0.0 0.0206693 32 - 40 0.0 0.0206693 32 - 48 0.0 0.0206693 40 - 48 0.0 0.0206693 * denotes a statistically significant difference. Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC&PT Công Nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Summary Statistics for Ham luong dam amoniac Thoi gian Count Average Standard deviation 0.0 0.0 0.0 0.0 12 0.0 0.0 16 0.014 0.0 20 0.042 0.0 24 0.0653333 0.00404145 32 0.084 0.0 40 0.0933333 0.00404145 48 0.109667 0.00404145 Trường ĐHCT Coeff. of variation % % % 0.0% 0.0% 6.1859% 0.0% 4.33013% 3.68521% ANOVA Table for Ham luong dam amoniac by Thoi gian Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 0.0464883 0.00581104 Within groups 0.000098 18 0.00000544444 Total (Corr.) 0.0465863 26 F-Ratio 1067.33 Minimum 0.0 0.0 0.0 0.014 0.042 0.063 0.084 0.091 0.105 Maximum 0.0 0.0 0.0 0.014 0.042 0.07 0.084 0.098 0.112 Range 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.007 0.0 0.007 0.007 P-Value 0.0000 Multiple Range Tests for Ham luong dam amoniac by Thoi gian Method: 95.0 percent LSD Thoi gian Count Mean Homogeneous Groups X 0.0 X 12 0.0 X 0.0 X 16 0.014 X 20 0.042 X 24 0.0653333 X 32 0.084 40 0.0933333 X X 48 0.109667 Contrast Sig. Difference +/- Limits 4-8 0.0 0.0040026 - 12 0.0 0.0040026 - 16 * -0.014 0.0040026 - 20 * -0.042 0.0040026 - 24 * -0.0653333 0.0040026 - 32 * -0.084 0.0040026 - 40 * -0.0933333 0.0040026 - 48 * -0.109667 0.0040026 - 12 0.0 0.0040026 - 16 * -0.014 0.0040026 - 20 * -0.042 0.0040026 - 24 * -0.0653333 0.0040026 - 32 * -0.084 0.0040026 - 40 * -0.0933333 0.0040026 - 48 * -0.109667 0.0040026 12 - 16 * -0.014 0.0040026 12 - 20 * -0.042 0.0040026 12 - 24 * -0.0653333 0.0040026 12 - 32 * -0.084 0.0040026 12 - 40 * -0.0933333 0.0040026 12 - 48 * -0.109667 0.0040026 16 - 20 * -0.028 0.0040026 16 - 24 * -0.0513333 0.0040026 16 - 32 * -0.07 0.0040026 16 - 40 * -0.0793333 0.0040026 16 - 48 * -0.0956667 0.0040026 20 - 24 * -0.0233333 0.0040026 20 - 32 * -0.042 0.0040026 20 - 40 * -0.0513333 0.0040026 20 - 48 * -0.0676667 0.0040026 24 - 32 * -0.0186667 0.0040026 24 - 40 * -0.028 0.0040026 24 - 48 * -0.0443333 0.0040026 32 - 40 * -0.00933333 0.0040026 32 - 48 * -0.0256667 0.0040026 40 - 48 * -0.0163333 0.0040026 * denotes a statistically significant difference. Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC&PT Công Nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Summary Statistics for Ham luong dam amin Thoi gian Count Average Standard deviation 0.177333 0.0080829 0.242667 0.0213854 12 0.289333 0.0080829 16 0.373333 0.0161658 20 0.42 0.014 24 0.406 0.007 32 0.387333 0.0080829 40 0.378 0.0121244 48 0.361667 0.0106927 Total 27 0.337296 0.0799547 Trường ĐHCT Coeff. of variation 4.55803% 8.81265% 2.79363% 4.33013% 3.33333% 1.72414% 2.08681% 3.2075% 2.9565% 23.7046% ANOVA Table for Ham luong dam amin by Thoi gian Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 0.16337 0.0204212 Within groups 0.002842 18 0.000157889 Total (Corr.) 0.166212 26 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học F-Ratio 129.34 Minimum 0.168 0.224 0.28 0.364 0.406 0.399 0.378 0.364 0.35 0.168 Maximum 0.182 0.266 0.294 0.392 0.434 0.413 0.392 0.385 0.371 0.434 Range 0.014 0.042 0.014 0.028 0.028 0.014 0.014 0.021 0.021 0.266 P-Value 0.0000 Viện NC&PT Công Nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐHCT Multiple Range Tests for Ham luong dam amin by Thoi gian Method: 95.0 percent LSD Thoi gian Count Mean 0.177333 0.242667 12 0.289333 48 0.361667 16 0.373333 40 0.378 32 0.387333 24 0.406 20 0.42 Homogeneous Groups X X X X XX XX XX XX X Contrast Sig. Difference +/- Limits 4-8 * -0.0653333 0.0215547 - 12 * -0.112 0.0215547 - 16 * -0.196 0.0215547 - 20 * -0.242667 0.0215547 - 24 * -0.228667 0.0215547 - 32 * -0.21 0.0215547 - 40 * -0.200667 0.0215547 - 48 * -0.184333 0.0215547 - 12 * -0.0466667 0.0215547 - 16 * -0.130667 0.0215547 - 20 * -0.177333 0.0215547 - 24 * -0.163333 0.0215547 - 32 * -0.144667 0.0215547 - 40 * -0.135333 0.0215547 - 48 * -0.119 0.0215547 12 - 16 * -0.084 0.0215547 12 - 20 * -0.130667 0.0215547 12 - 24 * -0.116667 0.0215547 12 - 32 * -0.098 0.0215547 12 - 40 * -0.0886667 0.0215547 12 - 48 * -0.0723333 0.0215547 16 - 20 * -0.0466667 0.0215547 16 - 24 * -0.0326667 0.0215547 16 - 32 -0.014 0.0215547 16 - 40 -0.00466667 0.0215547 16 - 48 0.0116667 0.0215547 20 - 24 0.014 0.0215547 20 - 32 * 0.0326667 0.0215547 20 - 40 * 0.042 0.0215547 20 - 48 * 0.0583333 0.0215547 24 - 32 0.0186667 0.0215547 24 - 40 * 0.028 0.0215547 24 - 48 * 0.0443333 0.0215547 32 - 40 0.00933333 0.0215547 32 - 48 * 0.0256667 0.0215547 40 - 48 0.0163333 0.0215547 * denotes a statistically significant difference. Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC&PT Công Nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐHCT 5. Kết thống kê ảnh hưởng pháp trích ly bromelain vỏ để thủy phân bã đậu nành phạm vi phòng thí nghiệm Summary Statistics for Ham luong dam formol Phuong phap trich bromelain vo Count Average Standard deviation Coeff. of variation Minimum Maximum Dich trich vo khom 0.487667 0.0106927 2.19262% 0.476 0.497 Ba vo khom xay nhuyen 0.588 0.014 2.38095% 0.574 0.602 ANOVA Table for Ham luong dam formol by Phuong phap trich bromelain vo Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 0.0151002 0.0151002 97.32 0.0006 Within groups 0.000620667 0.000155167 Total (Corr.) 0.0157208 Multiple Range Tests for Ham luong dam formol by Phuong phap trich bromelain vo Method: 95.0 percent LSD Level Dich trich vo khom Ba vo khom xay nhuyen Count 3 Mean 0.487667 0.588 Contrast Sig. Dich trich vo khom - Ba vo khom xay nhuyen * * denotes a statistically significant difference. Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Homogeneous Groups X X Difference -0.100333 +/- Limits 0.0282387 Viện NC&PT Công Nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐHCT Summary Statistics for Ham luong dam amoniac Phuong phap trich bromelain vo Count Average Standard deviation Coeff. of variation Minimum Maximum Dich trich vo khom 0.0746667 0.00404145 5.41266% 0.07 0.077 Ba vo khom xay nhuyen 0.203 0.0121244 5.97259% 0.189 0.21 ANOVA Table for Ham luong dam amoniac by Phuong phap trich bromelain vo Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 0.0247042 0.0247042 302.50 0.0001 Within groups 0.000326667 0.0000816667 Total (Corr.) 0.0250308 Multiple Range Tests for Ham luong dam amoniac by Phuong phap trich bromelain vo Method: 95.0 percent LSD Level Dich trich vo khom Ba vo khom xay nhuyen Count 3 Mean 0.0746667 0.203 Contrast Dich trich vo khom - Ba vo khom xay nhuyen * denotes a statistically significant difference. Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Sig. * Homogeneous Groups X X Difference -0.128333 +/- Limits 0.0204865 Viện NC&PT Công Nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐHCT Summary Statistics for Ham luong dam amin Phuong phap trich bromelain vo Count Average Standard deviation Coeff. of variation Minimum Maximum Dich trich vo khom 0.413 0.014 3.38983% 0.399 0.427 Ba vo khom xay nhuyen 0.385 0.007 1.81818% 0.378 0.392 ANOVA Table for Ham luong dam amin by Phuong phap trich bromelain vo Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 0.001176 0.001176 9.60 0.0363 Within groups 0.00049 0.0001225 Total (Corr.) 0.001666 Multiple Range Tests for Ham luong dam amin by Phuong phap trich bromelain vo Method: 95.0 percent LSD Level Dich trich vo khom Ba vo khom xay nhuyen Count 3 Contrast Dich trich vo khom - Ba vo khom xay nhuyen * denotes a statistically significant difference. Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Mean 0.385 0.413 Sig. * Homogeneous Groups X X Difference 0.028 +/- Limits 0.0250907 Viện NC&PT Công Nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐHCT LÝ LỊCH KHOA HỌC I. LÝ LỊCH TRÍCH NGANG Họ tên sinh viên: Trần Thanh Liền Ngày, tháng năm sinh: 24/10/1992 Nơi sinh: Châu Thành - Cần Thơ Địa nay: số 1098/10, ấp 3B, thị trấn Bảy Ngàn, huyện Châu Thành A, Tỉnh Hậu Giang Điện thoại: 01658975190 E-mail: lien102823@student.ctu.edu.vn II. QUÁ TRÌNH ĐÀO TẠO 1. Đại học Hệ đào tạo: Chính quy Ngành đào tạo: Công Nghệ Sinh Học Nơi đào tạo: Viện NC & PT Công Nghệ Sinh Học - Trường Đại Học Cần Thơ 2. Trình độ ngoại ngữ Tiếng Anh: Trình độ A Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC&PT Công Nghệ Sinh học [...]... enzyme vỏ khóm được trích ly này để tiến hành thí nghiệm khảo sát các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình thủy phân protein bã đậu nành của bromelain vỏ khóm để tạo thành dịch thủy phân giàu đạm amin Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 23 Viện NC&PT Công Nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐHCT 4.2 Ảnh hưởng của một số yếu tố đến quá trình thủy phân protein từ bã đậu nành 4.2.1 Ảnh hưởng. .. lượng protein của bromelain trong dịch chiết vỏ khóm bằng phương pháp Bradford (phụ lục 1) - Khảo sát hoạt tính bromelain trong dịch chiết vỏ khóm bằng phương pháp Kunitz cải tiến (phụ lục 1) 3.2.3 Khảo sát một số yếu tố ảnh hưởng đến quá trình thủy phân Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng của nồng độ enzyme đến quá trình thủy phân - Mục đích: xác định nồng độ enzyme thích hợp cho quá trình thủy phân để sản phẩm... tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐHCT Với mục đích tận dụng nguồn phế phẩm vỏ khóm để thu nhận bromelain dùng để thủy phân protein có trong bã đậu nành để sản xuất nguồn đạm amin phục vụ cho ngành công nghiệp chăn nuôi mang rất nhiều ý nghĩa về giá trị kinh tế, cũng như việc bảo vệ môi trường Từ đó, đề tài “ Khảo sát một số yếu tố ảnh hưởng đến quá trình thủy phân protein bã đậu nành bằng bromelain. .. al., (2004) đã có công trình nghiên cứu về hoạt động của enzyme phân cắt bã đậu nành Mục tiêu của nghiên cứu này là dùng các loại enzyme thực phẩm để thủy phân bã đậu nành với hiệu quả cao Bã đậu nành được hấp thanh trùng để làm tăng hiệu quả của quá trình thủy phân thành tế bào chính bằng cellulase Hầu hết các bã đậu nành còn lại sau khi hấp và thủy phân bằng cellulase bã đậu nành còn lại vách tế bào... Hình 4: Biểu đồ ảnh hưởng của nồng độ enzyme đến hàm lượng đạm *Ghi chú: Các giá trị có cùng ký tự không khác biệt ý nghĩa thống kê ở mức 5% %CV (formol): 3,57; %CV (amoniac): 0; %CV (amin): 3,73 Kết quả khảo sát ảnh hưởng của nồng độ enzyme bổ sung vào quá trình thủy phân (hình 4) cho thấy nồng độ enzyme là một yếu tố có ảnh hưởng lớn đến quá trình thủy phân bã đậu nành Sau thời gian thủy phân là 16 giờ... Viện NC&PT Công Nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐHCT Thí nghiệm 5: Khảo sát phương pháp trích ly bromelain vỏ để thủy phân bã đậu nành ở phạm vi phòng thí nghiệm - Mục đích: xác định quy trình trích bromelain vỏ thích hợp cho quá trình thủy phân để sản phẩm sinh ra có hàm lượng đạm amin cao Đồng thời đánh giá khả năng thủy phân bã đậu nành ở phạm vi phòng thí nghiệm - Bố... thay thế protein bột cá bằng bã đậu nành có ảnh hưởng đáng kể đến tăng trọng của cá (WG), tỉ lệ tăng trưởng (SGR), tỷ lệ chuyển đổi thức ăn (FCR), hiệu quả sử dụng protein (PER), giá trị chuyển đổi kinh tế (ECR ) Những kết quả này chỉ ra rằng có đến 40% protein bột cá có thể được thay thế bằng bã đậu nành mà không gây ra giảm tăng trọng của cá Mức độ tối ưu để thay thế protein bột cá bằng bã đậu nành là... Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐHCT CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Thành phần nguyên liệu 4.1.1 Hàm lượng nitơ, protein tổng số, hàm lượng amin và độ ẩm trong bã đậu nành Kết quả khảo sát cho thấy hàm lượng nitơ tổng số của bã đậu nành là 4,8628 %, hàm lượng protein tổng số là 30,39 % Cho thấy qua quá trình xử lý nhiệt, ép lấy nước từ mẫu đậu nành, protein trong bã đậu vẫn còn... lượng bã đậu nành thô Rekha và Vijayalakshmi (2011) đã nghiên cứu bổ sung bã đậu nành đã thủy phân để làm tăng tốc lên men bột bánh mì "Idli", một loại bánh mì đặc trưng ở Ấn Độ Mục đích của việc này là để giảm thời gian lên men tự nhiên của "Idli" thông thường từ 10 giờ đến 14 giờ bằng cách cho thêm bã đậu nành vào bột làm bánh mì "Idli" Bột mì màu đen sẽ được thay thế bằng một lượng bã đậu nành với... Aspergillus oryzae Sau đó, dịch thủy phân này được lên men citric bằng chủng nấm mốc Aspergillus niger Kết quả nghiên cứu một số yếu tố ảnh hưởng đến quá trình thủy phân và lên men cho thấy, phương Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 6 Viện NC&PT Công Nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐHCT pháp thủy phân và lên men đồng thời là hiệu quả nhất Bã đậu nành được bổ sung 3% methanol . enzyme trong cây khóm 8 2.2.2. Sơ lược về bromelain 9 2.2.3. Bromelain vỏ khóm 10 2.2.4. Hoạt tính của bromelain 10 2.2.5. Cơ chế tác động 11 2.2.6. Các yếu tố ảnh hưởng đến hoạt tính bromelain. (Kjeldahl, 1883) 15 2.3.3. Phương pháp chuẩn độ đạm formol (Horwitz, 2000) 16 2.3.4. Phương pháp chuẩn độ amoniac (Peters, 2003) 16 Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành. tấn, đến năm 2002 xuất 100 00 tấn khóm hộp và 2000 tấn nước khóm cô đặc. Ước tính tổng kim ngạch xuất khẩu khóm cả nước năm 2011 đạt 41,1 triệu USD, tăng 61% so với năm 2 010 (Sở Công Thương Tỉnh