BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC ẢNH HƯỞNG CỦA NAA VÀ ATONIK LÊN GIAI ĐOẠN RA RỄ VÀ THUẦN DƯỠNG HUỆ TRẮNG (POLIANTHES TUBEROSA L.) IN VITRO TRONG ĐIỀU KIỆN ÁNH SÁNG NHÂN TẠO VÀ ÁNH SÁNG TỰ NHIÊN TRONG NHÀ LƯỚI CÁN BỘ HƯỚNG DẪN PGS.TS NGUYỄN BẢO TOÀN SINH VIÊN THỰC HIỆN LÊ LÝ VŨ VI MSSV:3093169 LỚP:CNSHTT K35 Cần Thơ, Tháng 11/2013 PHẦN KÝ DUYỆT CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN PGs.Ts Nguyễn Bảo Toàn Lê Lý Vũ Vi DUYỆT CỦA HỘI ĐỒNG BẢO VỆ LUẬN VĂN ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… Cần Thơ, ngày tháng năm 2013 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG LỜI CẢM TẠ Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến: Thầy Nguyễn Bảo Toàn, Phùng Thị Hằng, thầy tận tình hướng dẫn, đóng góp nhiều ý kiến kinh nghiệm q báu để tơi hồn thành luận văn tốt nghiệp Mọi người gia đình chăm sóc ủng hộ cho Chị Lan, chị Hạnh, Phú, Diệu, Ngân, em Thu Linh giúp đỡ nhiều trình thực nghiên cứu Xin chân thành cảm ơn! Lê Lý Vũ Vi Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35 - 2013 Trường ĐHCT TĨM LƯỢC Nghiên cứu thực để xác định ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng điều kiện ánh sáng lên giai đoạn rễ in vitro khả thích nghi huệ trắng (Polianthes tuberosa L.) giai đoạn dưỡng Nghiên cứu gồm thí nghiệm Thí nghiệm nhằm xác định ảnh hưởng NAA atonik nồng độ khác giai đoạn rễ in vitro huệ trắng điều kiện ánh sáng nhân tạo tự nhiên nhà lưới Thí nghiệm nhằm xác định khả thích nghi giai đoạn dưỡng Kết thí nghiệm cho thấy, atonik nồng độ ml/l ml/l kích thích rễ in vitro hiệu NAA nồng độ 0,5 mg/l mg/l Điều kiện ánh sáng tự nhiên (120 µmol.m-2.s-1) kích thích rễ in vitro hiệu điều kiện ánh sáng nhân tạo (50 µmol.m -2.s-1) Nghiệm thức atonik ml/l kết hợp ánh sáng tự nhiên thích hợp để tạo rễ in vitro Cây huệ trắng nuôi cấy môi trường có atonik thích nghi tốt so với mơi trường có NAA Khơng có khác biệt khả thích nghi ni cấy điều kiện ánh sáng nhân tạo ánh sáng tự nhiên Cây thích nghi tốt sau ni cấy mơi trường có atonik ml/l atonik ml/l hai điều kiện ánh sáng (tỉ lệ sống 93%) Rễ ex vitro có cấu trúc cải thiện rễ in vitro Từ khóa: ánh sáng, atonik, NAA, Polianthes tuberosa L., rễ in vitro, dưỡng i Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35 - 2013 Trường ĐHCT MỤC LỤC PHẦN KÝ DUYỆT LỜI CẢM TẠ TÓM LƯỢC i MỤC LỤC ii DANH SÁCH BẢNG iv DANH SÁCH HÌNH v TỪ VIẾT TẮT vi CHƯƠNG 1: GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu CHƯƠNG 2: LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu giống huệ Polianthes tuberosa L 2.1.1 Đặc điểm chung huệ trắng (Polianthes tuberosa L.) .3 2.1.2 Giá trị thực tiễn huệ 2.1.3 Tình hình nghiên cứu sản xuất huệ trắng 2.2 Giai đoạn rễ in vitro 2.2.1 Chất điều hòa sinh trưởng 2.2.2 Điều kiện ánh sáng 2.3 Giai đoạn dưỡng .6 CHƯƠNG 3: PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Phương tiện nghiên cứu 3.1.1 Vật liệu thí nghiệm 3.1.2 Thiết bị hóa chất 3.1.3 Điều kiện thí nghiệm 3.2 Phương pháp nghiên cứu 3.2.1 Chuẩn bị môi trường nuôi cấy .8 ii Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35 - 2013 Trường ĐHCT 3.2.2 Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng NAA atonik lên giai đoạn rễ in vitro huệ trắng (Polianthes tuberosa L.) điều kiện ánh sáng nhân tạo tự nhiên 3.2.3 Thí nghiệm 2: Đánh giá khả thích nghi giai đoạn dưỡng nhà lưới 11 CHƯƠNG IV: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 13 4.1 Ảnh hưởng NAA atonik lên giai đoạn rễ in vitro huệ trắng (Polianthes tuberosa L.) điều kiện ánh sáng nhân tạo tự nhiên .13 4.1.1 Hiệu NAA atonik lên số rễ, chiều dài rễ, đường kính rễ, số SPAD huệ trắng in vitro điều kiện ánh sáng nhân tạo tự nhiên .13 4.1.2 Hình thái rễ in vitro 16 4.1.3 Cấu trúc giải phẫu rễ in vitro 17 4.2 Đánh giá khả thích nghi giai đoạn dưỡng nhà lưới .21 4.2.1 Tỉ lệ sống (%) giai đoạn dưỡng nhà lưới 21 4.2.2 Cấu tạo rễ huệ trắng thích nghi 24 4.2.3 Chỉ số SPAD huệ trắng cấy mô vào ngày ngày 30 giai đoạn dưỡng .25 CHƯƠNG V: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ .28 5.1 Kết luận 28 5.2 Đề nghị 28 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC iii Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35 - 2013 Trường ĐHCT DANH SÁCH BẢNG Bảng 3.1 Bảng phối hợp nhân tố chất điều hòa sinh trưởng điều kiện ánh sáng 10 Bảng 4.1 Hiệu chất điều hòa sinh trưởng điều kiện ánh sáng lên số rễ, chiều dài, đường kính rễ số SPAD huệ trắng in vitro thời điểm 60 ngày sau cấy 14 Bảng 4.2 Tỉ lệ sống (%) sau 30 ngày dưỡng nhà lưới 22 Bảng 4.3 Chỉ số SPAD vào ngày ngày 30 giai đoạn dưỡng 26 iv Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35 - 2013 Trường ĐHCT DANH SÁCH HÌNH Hình 3.1 Bao cấy nhựa PP dùng thí nghiệm Hình 4.1 Sự hình thành rễ nghiệm thức vào thời điểm 60 ngày sau cấy 17 Hình 4.2 Sự hình thành lông hút rễ in vitro nghiệm thức vào thời điểm 60 ngày sau cấy nhìn vật kính X4 18 Hình 4.3 Mặt cắt rễ in vitro nghiệm thức vào thời điểm 60 ngày sau cấy nhìn vật kính X10 19 Hình 4.4 Hệ mạch rễ in vitro nghiệm thức vào thời điểm 60 ngày sau cấy nhìn vật kính X40 21 Hình 4.5 Cây huệ trắng cấy mô sau 30 ngày dưỡng 23 Hình 4.6 Rễ tạo thành điều kiện ex vitro sau 30 ngày dưỡng 24 Hình 4.7 Cấu tạo rễ ex vitro sau 30 ngày dưỡng nhìn vật kính X10 25 Hình 4.8 Hệ mạch rễ ex vitro sau 30 ngày dưỡng rễ in vitro 60 ngày sau cấy 25 v Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35 - 2013 Trường ĐHCT TỪ VIẾT TẮT IAA Indole-3-acetic acid MS Murashige and Skoog NAA Napthalene acetic acid SPAD Soil and Plant Analysis Development PP Polypropylen vi Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35 - 2013 Trường ĐHCT CHƯƠNG GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề Huệ trắng (Polianthes tuberosa L.) lồi có giá trị cao canh tác hoa cắt cành Việt Nam Thông thường, huệ nhân giống vơ tính củ Tuy nhiên, bất lợi kỹ thuật dễ mang theo mầm bệnh côn trùng sang củ con, làm giảm suất chất lượng hoa (Huang Chiang, 1975), (Cuc Pilon, 2007) Hơn nữa, hệ số nhân giống từ củ tương đối thấp (Rees, 1969) Do đó, việc nghiên cứu giai đoạn vi nhân giống huệ trắng cần thiết kỹ thuật tạo số lượng lớn mầm bệnh thời gian ngắn Trong vi nhân giống, giai đoạn rễ in vitro dưỡng đóng vai trị quan trọng giai đoạn ảnh hưởng đáng kể đến sức sống cấy mô Chất điều hịa sinh trưởng thường dùng để kích thích tạo rễ in vitro Trong chất sử dụng, atonik chất điều hịa sinh trưởng tổng hợp có thành phần gồm sodium-s-nitrogualacolate, sodium-onitrophenolate sodium-p–nitrophenolate, có tác dụng kích thích rễ Nguyễn Minh Kiên (2011) báo cáo atonik có tác dụng kích thích rễ in vitro huệ trắng Trong đó, NAA auxin thường sử dụng để kích thích tạo rễ in vitro Tuy nhiên, hiệu NAA rễ huệ in vitro hạn chế huệ trắng Trong nuôi cấy in vitro, ánh sáng nhân tạo thường sử dụng Do đó, giá thành cao chi phí thắp sáng cao Hơn nữa, việc sử dụng ánh sáng nhân tạo cịn làm thích nghi với xạ cao ánh sáng tự nhiên giai đoạn dưỡng Vì vậy, sử dụng nguồn ánh sáng tự nhiên giảm giá thành tăng khả thích nghi giai đoạn dưỡng (Pospisilova et al., 1998) Việc sử dụng ánh sáng tự nhiên nuôi cấy in vitro nghiên cứu nhiều lồi khóm (Ananas comosus) (Be Debergh, 2006), cỏ vertiver (Vetiveria zizanioides L.) (Be et al., 2008) Đối với huệ trắng, ảnh hưởng ánh sáng nhân tạo tự nhiên lên rễ in vitro dưỡng chưa cơng bố Vì vậy, nghiên cứu “Ảnh hưởng NAA atonik lên giai đoạn rễ dưỡng huệ trắng (Polianthes tuberosa L.) in vitro hai điều kiện ánh sáng nhân tạo ánh sáng tự nhiên nhà lưới” tiến hành Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35 - 2013 Trường Đại Học Cần Thơ Hình 4.6 Rễ tạo thành điều kiện ex vitro sau 30 ngày dưỡng Những rễ sống sót thích nghi có hình thái cấu trúc nghiệm thức Sau thích nghi điều kiện dưỡng, phần kéo dài rễ in vitro (Hình 4.7 A) có cấu tạo tương tự rễ tạo thành điều kiện ex vitro (Hình 4.7 B) A B Hình 4.7 Cấu tạo rễ sau 30 ngày dưỡng nhìn vật kính X10 Thước đo tương đương 0,1 mm A: Phần kéo dài rễ phát sinh in vitro B: Rễ tạo thành ex vitro A B Hình 4.8 Hệ mạch rễ ex vitro sau 30 ngày dưỡng rễ in vitro thời điểm 60 ngày sau cấy Thước đo tương đương 0,01 mm A: Hệ mạch rễ phát sinh ex vitro B: Hệ mạch rễ phát sinh in vitro Hệ mạch rễ ex vitro phát triển so với rễ in vitro Tuy đường kính rễ nhỏ rễ ex vitro (Hình 4.8 A), có số mạch gỗ nhiều kích thước mạch lớn hơn, tẩm mộc tố nhiều so với rễ in vitro (Hình 4.8 B) Điều làm tăng khả dẫn nước chất dinh dưỡng rễ (Schultz Matthews, 1993) Kết giải phẫu cho 25 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35 - 2013 Trường Đại Học Cần Thơ thấy, khơng có khác biệt rõ rệt cấu trúc phần rễ ex vitro nghiệm thức Sau thời gian thích nghi, rễ cấy mơ hồn thiện mặt cấu trúc, thể khả thích nghi với điều kiện mơi trường bên 4.2.3 Chỉ số SPAD huệ trắng cấy mô vào ngày ngày 30 giai đoạn dưỡng Bảng 4.3 Chỉ số SPAD vào ngày ngày 30 giai đoạn dưỡng Nhân tố SPAD ngày SPAD 30 ngày Chất điều hòa sinh trưởng (A) ml/l (0) 14,3 (cm) 24,1c NAA 0,5 mg/l (N0,5) 20,1b 26,9abc NAA mg/l (N1) 18,5c 24,7bc Atonik ml/l (A2) 23,1a 28,7ab Atonik ml/l (A4) 23,3a 29,8a Nhân tạo (T) 14,9b 24,6b Tự nhiên (N) 24,8a 29,2a 0T 9,5f 21,6 d Điều kiện ánh sáng (B) N0,5T 18,2 cd 23,6 N1T 13,4e 23,2 A2T 16,9cd 26,7 A4T 16,4d 27,8 0N 19,1c 26,6 N0,5N 22,1b 29,2 N1N 23,6b 26,3 A2N 29,6a 30,3 A4N 29,8a 31,8 F(A) ** * F(B) ** ** F(AxB) ** ns CV(%) 6,2 13,3 Những số có chữ theo sau giống cột khơng khác biệt thống kê ; ns: khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê; * khác biệt mức ý nghĩa 5%, ** khác biệt mức ý nghĩa 1% Kết Bảng 4.3 cho thấy ngày dưỡng thứ 7, nghiệm thức atonik ml/l atonik ml/l cho số SPAD cao có ý nghĩa thống kê so với nghiệm 26 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35 - 2013 Trường Đại Học Cần Thơ thức lại Các nghiệm thức điều kiện ánh sáng tự nhiên có số SPAD cao thống kê so với nghiệm thức ánh sáng nhân tạo Các nghiệm thức atonik ml/l atonik ml/l ánh sáng tự nhiên cho số SPAD cao khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nghiệm thức lại Ở ngày 30 giai đoạn dưỡng, nghiệm thức atonik ml/l atonik ml/l cho số SPAD cao nghiệm thức lại Tương tự, nghiệm thức ánh sáng tự nhiên có số SPAD cao khác biệt thống kê so với nghiệm thức ánh sáng nhân tạo Tuy nhiên, khơng có khác biệt mặt thống kê nghiệm thức kết tương tác Có thể thấy số SPAD nghiệm thức ngày 30 cao rõ rệt so với ngày giai đoạn dưỡng nhà lưới Sự gia tăng số SPAD thể hàm lượng diệp lục tăng lên giai đoạn dưỡng Điều thể thích nghi với xạ ánh sáng cao nhà lưới, thể qua gia tăng hàm lượng diệp lục (Lavanya et al., 2009) Dựa vào kết ghi nhận được, huệ trắng cấy mơ thí nghiệm thích nghi với điều kiện dưỡng nhà lưới 27 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35 - 2013 Trường Đại Học Cần Thơ CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Với huệ trắng, atonik nồng độ ml/l ml/l kích thích rễ in vitro hiệu NAA nồng độ 0,5 mg/l mg/l Điều kiện ánh sáng tự nhiên (120 µmol.m-2.s-1) kích thích rễ in vitro hiệu điều kiện ánh sáng nhân tạo (50 µmol.m-2.s-1) Sự kết hợp atonik ml/l với điều kiện ánh sáng tự nhiên (120 µmol.m-2.s-1) thích hợp cho rễ in vitro huệ trắng Cây huệ trắng ni cấy mơi trường có atonik (2 ml/l ml/l) thích nghi tốt so với mơi trường có NAA (0,5 mg/l mg/l) Khơng có khác biệt khả thích nghi nuôi cấy điều kiện ánh sáng tự nhiên ánh sáng nhân tạo Cây thích nghi tốt sau ni cấy mơi trường có atonik ml/l atonik ml/l hai điều kiện ánh sáng (tỉ lệ sống 93%) 5.2 Đề nghị Sử dụng atonik ml/l kết hợp với ánh sáng tự nhiên (120 µmol.m-2.s-1) cho giai đoạn rễ in vitro huệ trắng 28 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35 - 2013 Trường Đại Học Cần Thơ TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Bùi Xuân Vinh 2013 Cải tiến giai đoạn vi nhân giống lan đơn thân Aerides Luận văn tốt nghiệp Đại học, trang 26-42 Hà Thị Lệ Ánh 2000 Hình thái giải phẫu thực vật Đại học Cần Thơ, trang 46 Huỳnh Thị Huế Trang, Lê Hồng Giang Nguyễn Bảo Toàn 2007 Phục hồi giống hoa huệ trắng (Polianthes tuberosa Linn.) nhiễm bệnh chai nuôi cấy phân sinh mô chồi Nhà xuất Nông Nghiệp, TP Hồ Chí Minh, trang 141152 Lê Duy 2011 Ảnh hưởng ánh sáng, giá thể, dinh dưỡng điều kiện trồng nước Xà Lách Xoong (Nasturtium officinale B.Br) thuỷ canh Luận Văn Thạc Sĩ Khoa Học, trang 28-40 Nguyễn Bảo Tồn 2010 Giáo trình ni cấy mô tế bào thực vật Nxb Đại Học Cần Thơ, trang 55-63 Nguyễn Minh Kiên 2011 Cải tiến hệ thống nuôi cấy mô giai đoạn quy trình vi nhân giống hoa huệ trắng (Polianthes tuberosa) tử linh lan (Saintpaulia ionatha) Luận văn Thạc sĩ Khoa học, trang 6-26 Nguyễn Thị Mai Hạnh 2013 Cải tiến giai đoạn vi nhân giống lan đơn thân Aerides sp Luận văn Thạc sĩ Khoa học, trang 17-37 Tiếng Anh Aracama, C., M Kane, S Wilson and N Philman 2008 Comparative growth, morphology, and anatomy of easy and difficult-to-acclimatize sea oats (Uniola paniculata) genotypes during in vitro culture and ex vitro acclimatization J Amer.Soc.Hort.Sci, 133(6):830-843 Aube, M., J Roby and M Kocifaj 2013 Evaluating potential spectral impacts of various artificial lights on melatonin suppression, photosynthesis, and star visibility PloS One, 8(7):1-15 Be, L.V and P.C Debergh 2006 Potential low-cost micropropagation of pineapple (Ananas comosus) South African Journal of Botany, 72:191 – 194 Be, L.V., V.T Tan, N.T.T Uyen and L.V Dung 2008 In vitro propagation of Vetiveria zizanioides L AU Journal of Tech, 12(1):18-24 Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35 - 2013 Trường Đại Học Cần Thơ Bhonde, S.R., K J Srivalava and U.B Pandey 1992 Effect of growth regulators on yield of khariff onion Newsletter Associated Agricultural Development Fundation, 12(1):6-8 Biondi, S., C Lenzi, R Baraldi and N Bagni 1997 Hormonal effects on growth and morphology of normal and hairy roots of Hyoscyamus muticus Journal of Plant Growth Regulation, 16(3):159-167 Cuc, N.T.T and M Pilon 2007 An Aphelenchoides sp nematode parasitic of Polianthes tuberosa in the Mekong Delta Journal of Nematology, 39(3):248– 257 Dai, C., V.N Lambeth, R Raben and D Mertz 1987 Micropropagation of Rhododendron prinophyllum by ovary culture HortScience, 22:491-493 Datta, K S., R.C Premsagar and R.L Kapoor 1986 Effect of atonik, miraculan and phenols on growth and yield of pearl millet Annual Biology, 2:9-14 Diaz-Perez, J.C., K.A Shakel and E.G Sutter 1995 Effects of in vitro formed roots and acclimatization on water status and gas exchange of tissue cultured apple J Amer.Soc.Hort.Sci, 120(3):435-440 Djanaguiraman, M., J.A Sheeba , D D Devi and U Bangarusamy 2005 Effect of atonik seed treatment on seedling physiology of cotton and tomato Journal of Biological Sciences, 5:163-169 Fila, G., J Ghashghaie, J Hoarau and G Cornic 1998 Photosynthesis, leaf conductance and water relations of in vitro cultured grapevine rootstock in relation to acclimatisation Physiologia Plantarum, 102: 411-418 George, E.F 1993 Plant propagation by tissue culture Part 1: The Technology, Exegetics Ltd Edington, pp 421-733 Halliday, K J., J F Martınez-Garcia and E Josse 2009 Cold Spring Harb Perspect Biol, 1(6): 1-17 Huang, C.S and Y.C Chiang 1975 The influence of temperature on the ability of Aphelenchoide bessevi to survive dehydration Nematologica, 21:351-357 Kim, Y-S., E-J Hahn, E.C Yeung and K-Y Paek 2003 Lateral root development and saponin accumulation as affected by IBA or NAA in adventitious root cultures of Panax ginseng C.A Meyer In vitro Cellular and Developmental Biology – Plant, 39(2): 245-249 Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35 - 2013 Trường Đại Học Cần Thơ Kollarova, K., D Liskova, D Kakoniova and A Lux 2004 Effect of auxins on Karwinskia humboldtiana root cultures Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 79(2):213-221 Kyte, L 1987 Cost-effective in vitro propagation methods for pineapple Plant Cell, 21:844-850 Lavanya, M., B Venkateshwarlu and B.P Devi 2009 Acclimatization of neem microshoots adaptable to semi sterile conditions Indian Journal of Biotechnology, 8:218-222 Ling, Q., W Huang and P Jarvis 2011 Use of a SPAD-502 meter to measure leaf chlorophyll concentration in Arabidopsis thaliana Photosynth Res, 108(1):89 Majima, T., K Otsuji, R Nagatomi and T Konno 1995 Polysaccharide (Ank-102) from Polianthes tuberosa cells deteriorates the resistance of mice to listeria monocytogenes infection Journal of Medicinal Plants Research, 6(24):41074112 Markwell J., J Osterman, and J Mitchell 1995 Calibration of the Minolta SPAD-502 leaf chlorophyll meter Photosyntheis Research 46: 467–472 Mayer, J.L.S., L.L.F Ribas, C Bona and M Quoirin 2008 Comparative leaf and root anatomy of ex vitro and in vitro cultured Cymbidium Acta Botanica Brasilica, 22(2): 323-332 McClelland, M.T., M.A.L Smith and Z.B Carothers 1990 The effects of in vitro and ex vitro root initiation on subsequent microcutting root quality in three woody plants Plant Cell Tissue and Organ Culture, 23:115-123 Murashige, T and F Skoog 1962 A revised medium for rapid growth and bio-assays with tobaco tissue culture Physiologia Plantarum, 15: 473-497 Nasreen, H., N.H Khan and F H Shan 1994 Regernation of plantlets and proptocorms from Polianthes tuberosa Pakistan Journal of Argriculture, 15(1):43-48 Naz, S., F Aslam, S Ilyas, K Shahzadi and A Tariq 2012 In vitro propagation of tuberose (Polianthes tuberosa) Journal of Medical Plant, 6(24):4107-4102 Nemali, K.S and M.W Iersel 2004 Acclimation of Wax begonia to light intensity: changes in photosynthesis, repiration, and chlorophyll concerntration, J Amer Soc Hort Sci, 129(5):745-751 Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35 - 2013 Trường Đại Học Cần Thơ Patil, D.A and R.M Pai 2011 The Agavaceae: Taxonomic and Phylogenetic Appraisal Journal of Experimental Sciences, 2(3), 20-24 Porra, J.R 2002 The chequered history of the development and use of simultaneous equations for the accurate determination of chlorophylls a and b Photosynthesis Research, 73: 149–156 Pospisilova, J., I Ticha, P Kadlecek, D Haisel and S Plzakova 1999 Acclimatization of micropropagated plants to ex vitro conditions Biologia Plantarum, 42(4):481-497 Pospisilova, J., N.Wilhelmova, H SynkovA, J CatskY, D Krebs, I Tichá, I Hanackova and B Snopek 1998 Acclimation of tobacco plantlets to ex vitroconditions as affected byapplication of abscisic acid Journal of Experimental Botany, 49: 863-869 Przybysz, K., W Mariola., A Slowinski and H Gawronska 2010 Stimulatory effect of Asahi SL on selected plant species Acta Scientiraum Polonorum, 9(2):53-64 Rees, A.R 1969 The initiation and growth of narcissus bulbs Annual Botany, 33:277288 Roberts, M 2000 Edible and Medicinal flowers New Africa Books, pp.76-77 Sadiqa, F , A Rashid, V.U Ahmad, K.M Khan and S.B Usmani 1999 A novel steroidal saponin from Polianthes tuberosa Linn Natural Product Letter, 14(2):115-122 Saez, P.L., L Bravo, M.I Latsague, M.E Sanchez and D.G Rios 2012 Increased light intensity duringin vitroculture improves water loss control and photosynthetic performance of Castanea sativa grown in ventilated vessels Scientia Horticulturae, 138:7-16 Sangavai, C and P Chellapand 2008 In vitro propagation of a tuberose plant (Polianthes tuberose L.) Electronic Journal of Biology, 4(3):98-101 Schultz, H.R and M.A Matthews 1993 Xylem development and hydraulic conductance in sun and shade shoots of grapevine (Vitis vinifera L.): evidence that low light uncouples water transport capacity from leaf area Planta, 190: 393–406 Taiz, L and E Zeiger 2002 Plant Physiology Sinauer Associates, pp 424-520 Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35 - 2013 Trường Đại Học Cần Thơ Van Huylenbroeck, J.M., H Huygens and P.C Debergh 1995 Photoinhibition during acclimatization of micropropagated Spathiphyllum "Petite" plantlets, In vitro cell Developmental Biology, 31: 160-164 Vuylsteker, C., E Dewaele and S Rambour 1998 Auxin induced lateral root formation in chicory Annals of Botany, 81: 449-454 Webb, P 1976 Rooth growth in Acer saccharum Marsh Seedlings: Effects of light intensities and photoperiods on root elongations Botanical Gazette, 137(3): 211217 Yan, C., K Xun, Y Li and X Song 2011 Effect of compound sodium nitrophenolate and DA-6 on growth，yield and quality of ginger Chinese Vegetables, 1(20):6973 Zheng, Z-L 2009 Carbon and nitrogen nutrient balance signaling in plants Plant Behavior, 4(7):584-591 Trang web Tài liệu Atonik Cục Bảo vệ Môi trường Hoa Kì , US Environmental Protection Agency (EPA) http://www.regulations.gov/#!documentDetail;D=EPA-HQ-OPP-2008-08320002;oldLink=false (ngày truy cập: 24 tháng 11 năm 2013) Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35 - 2013 Trường Đại Học Cần Thơ PHỤ LỤC Bảng Thành phần môi trường đa lượng MS (Murashige and Skoog, 1962) Đa lượng MS Nồng độ g/l (NH4)SO4 1.650 KNO3 1.900 MgSO4.7H2O 370 Ca(Cl)2 330 KH2PO4 170 Bảng Thành phần công thức pha vi lượng MS (Murashige and Skoog, 1962) Vi lượng MS Nồng độ mg/l H3BO3 6,2 MnSO4 22,3 ZnSO4.2H2O 11,5 Na2MoO4.2H2O 0,25 CuSO4.5H2O 0,025 KI 0,83 CoCl2 0,025 Bảng Công thức pha môi trường nuôi cấy chung cho thí nghiệm Hóa chất Sử dụng MS1 100 ml/l MS2 100 ml/l MS3 100 ml/l Nước dừa 80 ml/l FeEDTA mg/l Vi lượng MS mg/l Myoinosytol 10 ml/l Biotine 20 mg/l Vitamine B1 & B6 mg/l Pepton mg/l Đường 20 g/l Agar g/l Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35 - 2013 Trường Đại Học Cần Thơ Bảng Thành phần công thức pha FeEDTA (Murashige and Skoog, 1962) FeEDTA Nồng độ mg/l FeSO4.7H2O 27,80 EDTA 37,30 Bảng Hiệu NAA Atonik lên số rễ in vitro điều kiện ánh sáng nhân tạo tự nhiên Dependent Variable:Số rễ Source Type III Sum of Squares df Mean Square F Sig Corrected Model 493.907 a 54.879 54.962 000 Intercept 2326.029 2326.029 2.330E3 000 Hóa chất 360.182 90.046 90.182 000 Ánh sáng 40.482 40.482 40.544 000 Hóa chất*ánh sáng 93.243 23.311 23.346 000 Error 39.939 40 998 Total 2859.876 50 533.847 49 Corrected Total a R Squared = 925 (Adjusted R Squared = 908) Bảng Hiệu NAA Atonik lên đường kính rễ in vitro điều kiện ánh sáng nhân tạo tự nhiên nhân tạo tự nhiên Dependent Variable:Đường kính Source Type III Sum of Squares df Mean Square F Sig Corrected Model 4.822a 536 41.603 000 Intercept 31.173 31.173 2.420E3 000 HC 3.433 858 66.634 000 AS 1.198 1.198 93.031 000 HC * AS 191 048 3.715 012 Error 515 40 013 Total 36.511 50 5.337 49 Corrected Total a R Squared = 903 (Adjusted R Squared = 882) Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35 - 2013 Trường Đại Học Cần Thơ Bảng Hiệu NAA Atonik lên chiều dài rễ in vitro điều kiện ánh sáng nhân Variable:Chiều Dependenttạo tự nhiên dài rễ Source Type III Sum of Squares df Mean Square F Sig Corrected Model 60.063 a 6.674 27.512 000 Intercept 377.136 377.136 1.555E3 000 Hóa chất 51.957 12.989 53.547 000 Ánh sáng 5.082 5.082 20.949 000 Hóa chất*ánh sáng 3.025 756 3.118 025 Error 9.703 40 243 Total 446.902 50 69.766 49 Corrected Total a R Squared = 861 (Adjusted R Squared = 830) Bảng Hiệu NAA Atonik số SPAD chồi in vitro điều kiện ánh sáng nhân tạo tự nhiên Dependent Variable: Chỉ số SPAD Source Type III Sum of Squares df Mean Square F Sig Corrected Model 1992.196a 221.355 117.370 000 Intercept 18438.145 18438.145 9.777E3 000 Hóa chất 485.258 121.314 64.325 000 Ánh sáng 1361.167 1361.167 721.738 000 145.771 36.443 19.323 000 Error 75.438 40 1.886 Total 20505.779 50 2067.634 49 Hóa chất*ánh sáng Corrected Total a R Squared = 964 (Adjusted R Squared = 955) Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35 - 2013 Trường Đại Học Cần Thơ Bảng Tỉ lệ sống sau 30 ngày dưỡng Dependent Variable:Tỉ lệ sống Type III Sum Source of Squares df Mean Square F Sig 685.032a 76.115 8.723 000 Intercept 79887.644 79887.644 9.156E3 000 Hóa chất 619.701 154.925 17.755 000 Ánh sáng 14.144 14.144 1.621 218 Hóa chất*ánh sáng 51.187 12.797 1.467 250 Error 174.513 20 8.726 Total 80747.188 30 Corrected Total 859.544 29 Corrected Model a R Squared = 797 (Adjusted R Squared = 706) Bảng 10 Chỉ số SPAD sau ngày dưỡng Dependent Variable:SPAD ngày Source Corrected Model Intercept Hóa chất Ánh sáng Hóa chất*ánh sáng Error Total Corrected Total Type III Sum of Squares 1156.881a 11833.780 328.884 744.510 83.487 30.644 13021.305 1187.526 df 4 20 30 29 Mean Square 128.542 11833.780 82.221 744.510 20.872 1.532 a R Squared = 974 (Adjusted R Squared = 963) F 83.893 7.723E3 53.661 485.904 13.622 Sig .000 000 000 000 000 Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35 - 2013 Trường Đại Học Cần Thơ Bảng 11 Chỉ số SPAD sau 30 ngày dưỡng Dependent Variable:SPAD 30ngày Source Type III Sum of Squares df Mean Square F Sig 314.495a 34.944 2.743 029 Intercept 21658.116 21658.116 1.700E3 000 Hóa chất 146.777 36.694 2.880 049 Ánh sáng 157.476 157.476 12.360 002 10.243 2.561 201 935 Error 254.820 20 12.741 Total 22227.431 30 569.315 29 Corrected Model Hóa chất*ánh sáng Corrected Total a R Squared = 552 (Adjusted R Squared = 351) Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35 - 2013 Trường Đại Học Cần Thơ PHẦN KÝ DUYỆT CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN (ký tên) (ký tên) PGS TS Nguyễn Bảo Toàn Lê Lý Vũ Vi XÉT DUYỆT CỦA BỘ MÔN ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………… Cần Thơ, ngày tháng năm 2013 ... 1: Ảnh hưởng NAA atonik lên giai đoạn rễ in vitro huệ trắng điều kiện ánh sáng nhân tạo tự nhiên Mục tiêu Xác định hiệu NAA atonik lên giai đoạn rễ in vitro huệ trắng điều kiện ánh sáng nhân tạo. .. với huệ trắng, ảnh hưởng ánh sáng nhân tạo tự nhiên lên rễ in vitro dưỡng chưa cơng bố Vì vậy, nghiên cứu ? ?Ảnh hưởng NAA atonik lên giai đoạn rễ dưỡng huệ trắng (Polianthes tuberosa L.) in vitro. .. định ảnh hưởng NAA atonik giai đoạn rễ in vitro huệ trắng (Polianthes tuberosa L.) điều kiện ánh sáng nhân tạo phòng tăng trưởng điều kiện ánh sáng tự nhiên nhà lưới Xác định khả thích nghi huệ trắng