TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BỘ MÔN HÓA HỌC ------------ NGUYỄN THỊ THU NGÂN KHẢO SÁT HÀM LƯỢNG MỘT SỐ LOẠI CAO ĐIỀU CHẾ TỪ NẤM ĐÔNG CÔ (LENTINULA EDODES) LOẠI TƯƠI, KHÔ LOẠI LỚN, KHÔ LOẠI NHỎ VÀ PHÂN LẬP HỢP CHẤT TỪ CAO PETROLEUM ETHER LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH HÓA HỌC 2013 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BỘ MÔN HÓA HỌC ------------ NGUYỄN THỊ THU NGÂN KHẢO SÁT HÀM LƯỢNG MỘT SỐ LOẠI CAO ĐIỀU CHẾ TỪ NẤM ĐÔNG CÔ (LENTINULA EDODES) LOẠI TƯƠI, KHÔ LOẠI LỚN, KHÔ LOẠI NHỎ VÀ PHÂN LẬP HỢP CHẤT TỪ CAO PETROLEUM ETHER LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH HÓA HỌC CÁN BỘ HƯỚNG DẪN TS. LÊ THANH PHƯỚC 2013 Trường Đại Học Cần Thơ Cộng Hòa Xã Hội Chủ Nghĩa Việt Nam Khoa Khoa Học Tự Nhiên Độc lập − Tự − Hạnh phúc Bộ Môn Hóa Học NHẬN XÉT ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN 1. Cán hướng dẫn: TS. Lê Thanh Phước 2. Đề tài: Khảo sát hàm lượng số loại cao điều chế từ nấm Đông cô (Lentinula edodes) loại tươi, khô loại lớn, khô loại nhỏ phân lập hợp chất từ cao petroleum ether. 3. Sinh viên thực hiện: Nguyễn Thị Thu Ngân MSSV: 2102273 Lớp: Hóa học – Khóa 36 4. Nội dung nhận xét: a. Nhận xét hình thức LVTN: ………………………………………………………………………………… b. Nhận xét nội dung LVTN (Đề nghị ghi chi tiết đầy đủ):  Đánh giá nội dung thực đề tài: ………………………………………………………………………………….  Những vấn đề hạn chế: ………………………………………………………………………………… c. Nhận xét sinh viên tham gia thực đề tài (ghi rõ nội dung sinh viên chịu trách nhiệm thực có): ………………………………………………………………………………… d. Kết luận, đề nghị điểm: Cần Thơ, ngày… tháng… năm 2013 Cán hướng dẫn TS. Lê Thanh Phước Trường Đại Học Cần Thơ Cộng Hòa Xã Hội Chủ Nghĩa Việt Nam Khoa Khoa Học Tự Nhiên Độc lập − Tự − Hạnh phúc Bộ Môn Hóa Học NHẬN XÉT ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ CHẤM PHẢN BIỆN 1. Cán chấm phản biện: 2. Đề tài: Khảo sát hàm lượng số loại cao điều chế từ nấm Đông cô (Lentinula edodes) loại tươi, khô loại lớn, khô loại nhỏ phân lập hợp chất từ cao petroleum ether. 3. Sinh viên thực hiện: Nguyễn Thị Thu Ngân MSSV: 2102273 Lớp: Hóa học – Khóa 36 4. Nội dung nhận xét: a. Nhận xét hình thức LVTN: b. Nhận xét nội dung LVTN (Đề nghị ghi chi tiết đầy đủ):  Đánh giá nội dung thực đề tài:  Những vấn đề hạn chế: c. Nhận xét sinh viên tham gia thực đề tài (ghi rõ nội dung sinh viên chịu trách nhiệm thực có): d. Kết luận, đề nghị điểm: Cần Thơ, ngày… tháng… năm 2013 Cán phản biện Luận văn tốt nghiệp đại học LỜI CẢM ƠN ------------Để đạt kết hôm phải trải qua trình tìm tòi nghiên cứu không mệt mỏi. Do kiến thức kỹ chuyên môn hạn chế nên gặp nhiều khó khăn. Tuy nhiên, dìu dắt tận tình quý thầy cô môn, động viên giúp đỡ người thân, bạn bè, hoàn thành công việc nghiên cứu mình, trao dồi tích lũy thêm nhiều kiến thức bổ ích cho thân, chuẩn bị hành trang trường. Lời em xin gửi lời cám ơn chân thành, sâu sắc đến thầy Lê Thanh Phước, thầy bên cạnh hướng dẫn dạy em suốt trình em thực đề tài. Em xin gửi lời cám ơn sâu sắc đến tất quý thầy cô khoa Khoa Học Tự Nhiên, thầy cô Bộ môn Hóa, cô cố vấn học tập Nguyễn Thị Ánh Hồng. Quý thầy cô tận tình bảo, truyền đạt cho em kiến thức bổ ích suốt thời gian học tập nghiên cứu. Con xin cám ơn cha mẹ bên động viên tinh thần, chăm lo dành cho tốt nhất, giúp yên tâm thực tốt công việc nghiên cứu gia đình nhiều khó khăn. Lời cuối xin gửi lời chân thành, thân mến đến tất bạn Hóa Học K36, bạn lớp Hóa Dược K36 bên cạnh tôi, vượt qua ngày tháng đáng nhớ đời. Xin chân thành cám ơn! Nguyễn Thị Thu Ngân MSSV: 2102273 i Luận văn tốt nghiệp đại học TÓM TẮT -----------Bằng phương pháp tách chiết thông thường kỹ thuật chiết rắn – lỏng kỹ thuật chiết lỏng – lỏng, tiến hành điều chế cao tổng etanol từ loại nấm Đông cô (Lentinula edodes) tươi, khô loại lớn khô loại nhỏ bán thị trường. Định tính nhóm chức có dịch chiết ban đầu nhận thấy thành phần nấm có chứa: alkaloid, flavonoid, terpenoid – sterol, glucoside, saponin tanin. Từ cao tổng etanol tiếp tục điều chế loại cao thành phần: petroleum ether, etyl acetate, n−butanol. Sau so sánh khối lượng cao thu từ loại nấm nêu trên. Dựa vào phương pháp cô lập hợp chất thiên nhiên, sắc ký cột kết hợp sắc ký lớp mỏng, cô lập hợp chất có cao petroleum ether từ nấm Đông cô tươi. Phân tích phổ từ viện Hóa Học – phòng NMR xác định chất thứ ergosterol – sterol có tế bào nấm, tác dụng ánh sáng mặt trời hợp chất ergosterol chuyển hóa thành vitamine D2. Hợp chất thứ ergosterol peroxide dạng chuyển hóa chất thứ nhất. Cả hợp chất tìm có hoạt tính sinh học cao quan tâm nghiên cứu. Nguyễn Thị Thu Ngân MSSV: 2102273 ii Luận văn tốt nghiệp đại học ABSTRACT -----------By conventional extraction techniques such as solid − liquid and liquid − liquid extraction. Modulation total ethanol from kinds of shiitake (Lentinula edodes) fresh, large dried and small dried on the market. Quantitative analysis of the functional groups present in the initial organic extracts. Containing the alkaloids, flavonoids, terpenoids − sterols, glucosides in ingredients of shiitake. There aren’t present of tanins and saponins. From the total ethanol extract, continue to product component categories extract: petroleum ether, ethyl acetate, n−buthanol. Then compare the volume obtained from kinds of above fungi. Based on the method isolation of natural compounds, column chromatography combined with thin layer chromatography. Two compounds are isolated in extract petroleum ether from fresh shiitake. NMR spectral analysis, the first substance is identified as ergosterol − a sterol present in fungal cells, under the influence of sunlight ergosterol compound will be converted to vitamine D2. The second sudstance is ergosterol peroxide − This sterol is trans − formed from ergosterol by photo − oxidation with singlet oxygen. Both of all have bioactivity needs to research. Nguyễn Thị Thu Ngân MSSV: 2102273 iii Luận văn tốt nghiệp đại học LỜI CAM ĐOAN Tôi tên: Nguyễn Thị Thu Ngân, MSSV 2102273, lớp KH1069A1. Đề tài thực hiện: “Khảo sát hàm lượng số loại cao điều chế từ nấm Đông cô (Lentinula edodes) loại tươi, khô loại lớn, khô loại nhỏ phân lập hợp chất từ cao petroleum ether”. Tôi xin cam đoan luận văn công trình nghiên cứu thân, theo gợi ý cán hướng dẫn. Các thông tin số liệu, hình ảnh, kết trình bày luận văn hoàn toàn trung thực chưa công bố luận văn trước đây. Cần Thơ, ngày tháng năm 2013 Nguyễn Thị Thu Ngân Nguyễn Thị Thu Ngân MSSV: 2102273 iv Luận văn tốt nghiệp đại học MỤC LỤC ------------LỜI CẢM ƠN . i TÓM TẮT ii ABSTRACT iii LỜI CAM ĐOAN . iv MỤC LỤC . v DANH MỤC HÌNH . vii DANH MỤC BẢNG viii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ TỪ VIẾT TẮT ix Chương 1: GIỚI THIỆU 1.1 Giới thiệu 1.2 Mục tiêu nghiên cứu . Chương 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung chi Lentinula 2.2 Giới thiệu nấm Đông cô (Lentinula edodes) . 2.2.1 Tên gọi, xuất xứ phân loại. . 2.2.2 Đặc điểm thực vật 2.2.3 Thành phần hóa học 2.2.4 Công dụng . 2.2.5 Nghiên cứu nước . Chương 3: PHƯƠNG TIỆN − PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 10 3.1 Địa điểm, thời gian, phương tiện nghiên cứu 10 3.1.1 Địa điểm 10 3.1.2 Thời gian . 10 3.1.3 Phương tiện nghiên cứu . 10 3.2 Phương pháp nghiên cứu 10 3.2.1 Phương pháp chiết tách . 10 3.2.2 Phân lập hợp chất hữu 11 3.3 Phương pháp chiết tách 11 3.3.1 Kĩ thuật chiết ngâm dầm (rắn − lỏng) . 11 3.3.2 Kĩ thuật chiết lỏng – lỏng 12 3.4 Sắc ký lớp mỏng (SKLM) 13 3.4.1 Giới thiệu chung 13 3.4.2 Chất hấp phụ silica gel 14 3.4.3 Dung môi giải ly 15 3.4.4 Các kỹ thuật SKLM . 16 3.4.5 Ứng dụng SKLM 17 3.5 Sắc ký cột . 17 3.5.1 Nguyên tắc . 18 3.5.2 Kỹ thuật triển khai . 18 3.5.3 Quá trình giải ly cột . 20 Chương 4: KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM VÀ THẢO LUẬN 22 4.1 Xử lý nguyên liệu định tính nhóm chức . 22 4.1.1 Xử lý nguyên liệu 22 Nguyễn Thị Thu Ngân MSSV: 2102273 v Luận văn tốt nghiệp đại học 4.1.2 Định tính nhóm chức . 22 4.2 Điều chế loại cao . 26 4.2.1 Điều chế cao etanol tổng (EtOH) 26 4.2.2 Điều chế cao thành phần . 26 4.2.3 So sánh khối lượng cao . 28 4.3 Phân lập hợp chất có cao PE . 28 4.3.1 Quá trình phân lập chất cao PE 28 4.3.2 Quá trình phân lập chất phân đoạn I cao PE 29 4.3.3 Biện luận cấu trúc hợp chất vừa phân lập . 31 Chương 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ . 34 5.1 Kết luận 34 5.1.1 Khối lượng loại cao . 34 5.1.2 Hợp chất phân lập 34 5.2 Kiến nghị 34 TÀI LIỆU THAM KHẢO . 35 PHỤ LỤC 38 Nguyễn Thị Thu Ngân MSSV: 2102273 vi Luận văn tốt nghiệp đại học Nạp silica gel dạng ướt, nạp mẫu dạng dung dịch. Sau nạp mẫu hứng thể tích lọ 10 ml, tiến hành SKLM đồng thời để theo dõi trình giải ly. Gom phân đoạn giống nhau. Thuốc thử hình H2SO4 10%. Bảng 4.8: Kết sắc ký cột cao PE nấm tươi Phân đoạn Kết SKLM I vết vàng, vết nâu, vết xanh II vết nâu, vết xanh III vết Rf gần IV vết dơ V vết mờ màu vàng Hệ SKLM Khối lượng (g) PE : Ea 8:2 PE : Ea 8:2 PE : Ea 6:4 PE : Ea 6:4 Ea 0,519 0,412 0,020 0,035 0,086 Tổng khối lượng phân đoạn cao PE: 1,072 g Thu suất trình sắc ký cột cao PE: H  1,072 .100  53,6% Nhận xét: Qua trình tách sắc ký cao PE thu phân đoạn. Trong phân đoạn I vết tương đối rõ, có khối lượng tương đối nhiều phân đoạn khác nên tiếp tục sắc ký lần với phân đoạn I. 4.3.2 Quá trình phân lập chất phân đoạn I cao PE Phân đoạn I có khối lượng m = 0,519 g, có vết rõ: vết màu vàng, vết màu nâu vết màu xanh. Sắc ký cột lần với mong muốn phân lập chất tinh khiết. Đường kính chiều dài cột: d = cm, l = 45 cm. Khối lượng silica gel: 10 g. Dung môi khởi đầu PE, tăng dần PE : Ea theo tỷ lệ 99 : 1, 98 : 2, 97 : 3, 96 : 4, 95 : 5, 94 : 6, 93 : 7, 92 : 8, 91 : 9, : 1, : 2, : 3. SKLM với hệ dung PE : EA = : gom chung phân đoạn giống nhau. Bảng 4.9: Kết sắc ký cột phân đoạn I Phân đoạn Kết SKLM Dạng chất I1 vết lẫn tạp Sáp có màu xanh I2 Vết tạp Sáp màu vàng I3 vết dơ Tinh thể trắng I4 vết nâu Tinh thể trắng I5 vết xanh Tinh thể trắng Khối lượng (g) 0,026 0,029 0,093 0,109 0,138 Nguyễn Thị Thu Ngân MSSV: 2102273 29 Luận văn tốt nghiệp đại học Khối lượng tổng cộng phân đoạn I: 0,395 g. Thu suất trình sắc ký cột cao PE: H  0,395 .100  76,1% . 0,519 Hình 4.8: SKLM phân đoạn I, I4 I5 Phân đoạn I4 Sau sắc ký lần phân đoạn I4 chất dạng timh thể màu trắng tương đối sạch. SKLM với hệ dung môi khác vết gọn không lẫn tạp, tạm gọi chất PHUOC_NS1, định chọn gửi phổ. Ba hệ dung môi: Bảng 1: PE : C = : Bảng 2: DC Bảng 3: C : Me = 95 : Hình 4.9: SKLM hợp chất PHUOC_NS1 với hệ dung môi khác Phân đoạn I5: Sau sắc ký lần phân đoạn I5, chất dạng tinh thể màu trắng tương đối sạch. Khảo sát với hệ dung môi khác thu vết gọn, không lẫn tạp chất. Không có hoạt tính UV bước sóng 254 nm 356 nm. Tạm gọi PHUOC_NS2 gửi phổ chất này. Nguyễn Thị Thu Ngân MSSV: 2102273 30 Luận văn tốt nghiệp đại học Ba hệ dung môi: Bảng1: DC Bảng 2: DC : Ea = : Bảng 3: PE : Ea = : Hình 4.10: SKLM hợp chất PHUOC_NS2 với hệ dung môi khác 4.3.3 Biện luận cấu trúc hợp chất vừa phân lập 4.3.3.1 Hợp chất PHUOC_NS1 Các tín hiệu vùng từ trường thấp δ ppm 5,38 (1H, m, H6); 5,57 (1H, m, H7); tín hiệu δ ppm 5,18 (1H, dd, J = 15,2 Hz; J = Hz, H22); 5,22 (1H, dd, J = 15,2 Hz; J = Hz, H23); tín hiệu δ ppm 3,63 (1H, m, H3). Các tín hiệu vùng từ trường cao δ ppm 0,79 (3H, s, H18); 0,94 (1H, s, H19); 1,04 (3H, d, J = Hz, H21); 0,83 (3H, d, J = Hz, H26); 0,84 (3H, d, J = Hz, H27); 0,92 (3H, d, J = Hz, H28). Từ tín hiệu phổ 1H–NMR kết hợp với số tài liệu công bố hợp chất ergosterol kết luận hợp chất PHUOC_NS1 ergosterol [14, 22-24]. Sơ lược hợp chất ergosterol [23] H H HO Hình 4.11: Hợp chất Ergosterol Tên thường: Ergosterol, ergosta−5,7,22−trien−3β−ol. Tên IUPAC: ((3S,9S,10R,13R,14R,17R)−17−(2R,5R,E)−5,6dimethyl hept−3−en−2−yl)−10,13−dimethyl−2,3,4,9,10,11,12,13,14,15,16,17−dodecah ydro−1H−cyclopenta[α]phenanthren−3−ol. Nguyễn Thị Thu Ngân MSSV: 2102273 31 Luận văn tốt nghiệp đại học Ergosterol công thức phân tử C28H44O, có nhóm –OH C3, nối đôi C5 C6, C7 C8, nhóm –CH3 C10 C13, có dây hydrocarbon –C9H17 C17. Nhiệt độ nóng chảy 163oC (điều kiện thường). Dưới tác dụng tia UV chuyển hóa ergosterol thành ergocalciferol (vitamine D2) cắt đứt liên kết C9 C10 trải qua giai đoạn sau: H H H H HO HO Lumisterol Ergosterol H H HO HO Tachisterol Ergocalciferol Hình 4.12: Sự chuyển hóa ergosterol Cơ thể người không tổng hợp vitamine D2 mà phải bổ sung thông qua lượng thức ăn ngày. Vitamine D có vai trò quan trọng để trì xương khỏe mạnh vững chắc. Duy trì ổn định canxi phospho máu. Vitamine D giúp tăng cường hấp thu đồng hóa canxi lên tới 50–80%, cần thiết cho trình cốt hóa, hạn chế loãng xương. Chính thiếu hụt vitamine D nguyên nhân gây bệnh còi xương thể. 4.3.3.2 Hợp chất PHUOC_NS2 Phổ 1H–NMR nhận thấy hợp chất PHUOC_NS2 khung sườn ergosterol. Các tín hiệu vùng từ trường cao δ ppm 1,55 (1H, m, H1a) 1,8 (1H, m, H1b); 1,71 (1H, m, H2a) 1,9 (1H, m, H2b); 1,25 (1H, m, H4a) 2,04 (1H, m, H4b); 1,5 (1H, m, H9); 1,39 (1H, m, H11a) 1,6 (1H, m, H11b); 1,9 (1H, m, H12a) 2,2 (1H, m, H12b); 1,54 (1H, m, H14); 1,23 (1H, m, H15a) 1,49 (1H, m, H15b); 1,32 (1H, m, H16a) 1,76 (1H, m, H16b); 1,24 (1H, m, H17); 0,81 (3H, s, H18); 0,88 (3H, s, H19); 2,05 (1H, m, H20); 1,0 (3H, d, J = 7, H21); 1,8 (1H, m, H24); 1,45 (1H, m, H25); 0,84 (3H, d, J = 4,5 Hz, H26); 0,82 (3H, d, J = 4,5 Hz, H27); 0,9 (3H, d, J = 4,5 Hz, H28). Nguyễn Thị Thu Ngân MSSV: 2102273 32 Luận văn tốt nghiệp đại học Các tín hiệu vùng từ thấp δ ppm 3,9 (1H, m, H3); 6,25 (1H, d, J = 8,5 Hz, H6); 6,5 (1H, d, J = 8,5 Hz, H7); 5,15 (1H, dd, J = Hz; J = 15 Hz, H22); 5,25 (1H, dd, J = 7,5 Hz; J = 15 Hz, H23). Từ tín hiệu phổ 1H–NMR kết hợp với phổ chuẩn từ kết công bố hợp chất ergosterol peroxide kết luận hợp chất PHUOC_NS2 ergosterol peroxide [25-28]. Sơ lược hợp chất ergosterol peroxide: Tên thường: Ergosterol peroxide hay (5α,8α−epidioxy−22E−ergosta− 6,22-dien−3β−ol). Tên IUPAC: (3S,5S,8S,9R,10R,13R,14R,17R)−10,13−dimethyl−17−[(1R, 2E,4R)−1,4,5−trimethylhex−2−en−1−yl]−1,3,4,9,10,11,12,13,14,15,16, 17−dodecahydro−2H−5,8−epidioxycyclopenta[a]phenanthren−3−ol. Công thức phân tử C28H44O3, hoạt tính UV, nhiệt độ nóng chảy 256 C. Là hợp chất sterol hình thành trình oxy hóa ergosterol. o Hình 4.13: Hợp chất ergosterol peroxide Theo nghiên cứu công bố, hợp chất ergosterol peroxide có hoạt tính sinh học cao: đặc tính chống oxi hóa, kháng viêm, kháng khuẩn, kháng virus, hạn chế phát triển tế bào khối u. Đây hợp chất có ý nghĩa nghiên cứu y học [25, 28]. Trong điều kiện có oxi ánh sáng có chuyển đổi từ ergosterol thành ergosterol peroxide [25-28]. Hình 4.14: Sự chuyển đổi ergosterol thành ergosterol peroxide Nguyễn Thị Thu Ngân MSSV: 2102273 33 Luận văn tốt nghiệp đại học Chương 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận 5.1.1 Khối lượng loại cao Gần tháng thực đề tài: “Khảo sát hàm lượng số loại cao điều chế từ nấm Đông cô (Lentinula edodes) loại tươi, khô loại lớn, khô loại nhỏ phân lập hợp chất từ cao petroleum ether” thu số kết sau: Trong loại nấm Đông cô khảo sát hiệu suất thu cao tổng etanol nấm tươi cao nhất, thứ hai nấm khô nhỏ cuối nấm khô lớn. Cao PE: Nấm khô nhỏ có khối lượng cao lớn nhất, nấm tươi thứ hai, cuối nấm khô lớn. Cao Ea: Khối lượng cao etyl acetate loại nấm nhau. Cao n−BuOH: Nấm tươi cao nhất, nấm khô lớn cuối nấm khô nhỏ. 5.1.2 Hợp chất phân lập Sắc ký cột cao petroleum ether nấm Đông cô tươi phân lập hợp chất ergosterol ergosterol peroxide. 5.2 Kiến nghị Với giới hạn cho phép đề tài hạn chế thời gian nên chưa khảo sát tất loại cao loại nấm. Đồng thời chưa thử hoạt tính sinh học chất phân lập được. Tiếp tục tiến hành nghiên cứu thành phần chất nhiều loại cao nhiều loại nấm nữa, thử hoạt tính sinh học hợp chất phân lập nấm Đông cô. Nguyễn Thị Thu Ngân MSSV: 2102273 34 Luận văn tốt nghiệp đại học TÀI LIỆU THAM KHẢO ------------[1] Valentina E. Nikitina, Olga M. Tsivileva1, Alexei N. Pankratov and Nikolai A. Bychkov, 2007. Lentinula edodes biotechnology from letinan to lectins. Laboratory of Microbiology and Mycology, Institute of Biochemistry and Physiology of Plants and Microorganisms, Russian Academy of Sciences, Russia. [2] Mohammad Ismail Haji Mokhtar, 2000. Potential of fungi used in traditional Chinese medicine: Shiitake (Lentinula edodes). [3] Jane Clarke. Mushrooms the new superfood. Mushroom bureau, Regal House, 70 London Road, Twickenham, Middlesex, TW1 3QS. [4] Hung, P. V. and Nhi, N. N. Y., 2012. Nutritional composition and antioxidant capacity of several edible mushrooms grown in the Southern Vietnam. School of Biotechnology, International University, Vietnam National University in HoChiMinh City, Quarter 6, Linh Trung Ward, Thu Duc District, HoChiMinh City, Vietnam. [5] Julita Reguła and Marek Siwulski. Dried shiitake (Lentinula edodes) and oyster (Pleurotus ostreatus) mushrooms as a good source of nutrient. Agriculture University of Poznan. [6] S. Andres and N. Baumann, 2012. Chemical composition and nutritional value of European species of wild growing mushrooms. Deparment of applied chemistry, faculty of Argiculture, Univesity of south Bohemia. [7] Filip S. Reis, Lililian Barros, Anabela Martins and Isabel C.F.R Ferreira. Chemical composition and nutritional value of the most widely appreciated cultivated mushrooms: An interspecies comparative study. Instituto Politecnico de Bragança, Campus de Santa Apolonia, Portugal. [8] Dawn Soo, 2002. The potential of fungi used in traditional Chinese medicine: shiitake (Lentinula edodes). [9] Y. Choi, S.M. Lee, J. Chun, H.B. Lee and J. Lee. Influence of heat treatment on the antioxidant activities and polyphenolic compounds of Shiitake (Lentinus edodes) mushroom. Department of Food Science and Technology, Research Center for Bioresource and Health, Chungbuk National University, Korea. [10] Hirasawa M, Shouji N, Neta T, Fukushima K and Takada K. Three kinds of antibacterial substances from Lentinula edodes. Department of Microbiology, Nihon University School of Dentistry Matsudo, Chiba, Japan. [11] Adejumo, T. O. and Awosanya, O. B., 2005. Proximate and mineral composition of four edible mushroom species from South Western Nigeria. Dept of Microbiology, Adekunle Ajasin University, P.M.B. 01, Akungba − Akoko, Ondo State, Nigeria. [12] Gao Jinming, HuLina and Liu Jikai, 2001. A novel sterol from Chinese truffles tuber indicum. Department of Phytochemisty, Kunming Institute of Botany, the Chinese Academy of Sciences, Kunming 650204, People’s Republic of China and College of Life Sciences, Northwest Science Nguyễn Thị Thu Ngân MSSV: 2102273 35 Luận văn tốt nghiệp đại học and Technology University of Agriculture and Forestry, Yangling, Shaanxi 712100, People’s Republic of China. [13] O. Soubias, F. Jolibois, S. Massou, A. Milon and V. Re at, 2005. Determination of the orientation and dynamics of ergosterol in model membranes using uniform 13C labeling and dynamically averaged 13C chemical shift anisotropies as experimental restraints. Universite P. Sabatier, Toulouse, France. [14] Dan Qian Chen, Jun Min An, Ya Long Feng, Ting Tian, Xiang Yang Qin and Ying Yong Zhao, 2013. Cloud point extraction combined with liquid chromatography for the determination of ergosterol, a natural product with diuretic activity, in rat plasma, urine and faeces. Key laboratory of resource biology and biotechnology in Western China, ministry of education, the college of life sciences, Northwest University. [15] Michael A. Gold, Mihaela M. Cernusca1 and Larry D. Godsey, 2008. A competitive market analysis of the united states shiitake mushroom market place. [16] Nghiên cứu đa dạng loài nấm Đông cô (Lentinula edodes) Sa Pa, Letinula CF. Lateritia Langbiang, Đà Lạt Letinula SP tìm thấy Cát Tiên, Việt Nam. Sở Khoa học Công nghệ Lâm Đồng, trường Đại học Đà Lạt Vườn Quốc gia Cát Tiên, Đồng Nai. [17] Josefine Enman, Urika Rova and Kris A. Berglund. Quantification of the bioactive compound eritadenine in selected strains of shiitake mushroom (Lentinus edodes). Division of Biochemical and Chemical Process Engineering, Lulea University of Technology, SE − 97187 Lulea, Sweden. [18] Nguyễn Kim Phi Phụng, 2007. Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ. NXB Đại Học Quốc Gia TP Hồ Chí Minh. [19] ThS. Hoàng Minh Hảo, KS. Nguyễn Bình Kha. Công nghệ tách chiết hợp chất thiên nhiên. [20] Nguyễn Thị Diệp Chi, 2008. Bài giảng phương pháp phân tích đại, Đại học Cần Thơ. [21] Nguyễn Ngọc Hạnh, 2002. Tách chiết cô lập hợp chất thiên nhiên. Giáo trình cao học, viện Hóa học. [22] TS. Lê Thanh Phước. Các phương pháp quang phổ hóa hữu cơ, Giáo trình đại học, khoa Khoa Học Tự Nhiên, trường Đại học Cần thơ. [23] ThS. Tôn Nữ Liên Hương, 2008. Nghiên cứu hợp chất thiên nhiên, Giáo trình đại học, khoa Khoa học Tự Nhiên, trường Đại học Cần Thơ. [24] Nguyễn Hữu Đĩnh Trần Thị Đà, 1999. Ứng dụng số phương pháp phổ nghiên cứu cấu trúc phân tử. Nhà xuất Bộ giáo dục. [25] Lưu Thị Ngọc Anh, Nguyễn Cửu Thị Hương Giang Nguyễn Công Hào. Nghiên cứu thành phần hóa học số cao chiết từ nấm Hầu thủ (Hericium erinaceum) trồng Lâm Đồng. Trường ĐH Cần thơ. Viện CN Hóa học. Trường Đại Học Kỹ Thuật Công Nghệ thành phố Hồ Chí Minh. [26] Sang Wook Kim, Sang Shin Park, Tae Jin Min and Kook Hyun Yu, 1999. Antioxidant Activity of ergosterol peroxide. Department of Chemistry, Dongguk University, Seoul 100 − 715, Korea. Nguyễn Thị Thu Ngân MSSV: 2102273 36 Luận văn tốt nghiệp đại học [27] Angel Trigos and Ana Ortega Regules, 2002. Selective destruction of microscopic fungi through photo oxidation of ergosterol. Mycologia, 94 (4), pp. 563 − 568. [28] Trương Bích Ngân, 2012. Nghiên cứu thành phần hóa học số loài thực vật có hoạt tính chống lao vườn Quốc gia Cúc Phương. Viện Hóa học, Hà Nội. Nguyễn Thị Thu Ngân MSSV: 2102273 37 Luận văn tốt nghiệp đại học PHỤ LỤC Phụ lục phổ Ergosterol Nguyễn Thị Thu Ngân MSSV: 2102273 38 Luận văn tốt nghiệp đại học Nguyễn Thị Thu Ngân MSSV: 2102273 39 Luận văn tốt nghiệp đại học a Nguyễn Thị Thu Ngân MSSV: 2102273 40 Luận văn tốt nghiệp đại học Phụ lục phổ ergosterol peroxide Nguyễn Thị Thu Ngân MSSV: 2102273 41 Luận văn tốt nghiệp đại học Nguyễn Thị Thu Ngân MSSV: 2102273 42 Luận văn tốt nghiệp đại học Nguyễn Thị Thu Ngân MSSV: 2102273 43 Luận văn tốt nghiệp đại học Nguyễn Thị Thu Ngân MSSV: 2102273 44 [...]... nghiên cứu và thực hiện đề tài: Khảo sát hàm lượng một số loại cao điều chế từ nấm Đông cô (Lentinula edodes) loại tươi, khô loại lớn, khô loại nhỏ và phân lập hợp chất từ cao petroleum ether Nguyễn Thị Thu Ngân MSSV: 2102273 1 Luận văn tốt nghiệp đại học 1.2 Mục tiêu nghiên cứu Ngâm dầm và thu dịch chiết etanol từ 3 loại nấm Đông cô (Lentinula edodes) tươi, khô lớn và khô nhỏ có bán trên thị trường Định... có trong dịch chiết etanol ban đầu Điều chế cao tổng etanol Từ cao etanol tổng tiếp tục điều chế 3 loại cao thành phần: cao petroleum ether, cao etyl acetate, cao n−butanol So sánh hàm lượng các cao thu được từ 3 loại nấm nêu trên Sử dụng các kỹ thuật cô lập hợp chất thiên nhiên, tiến hành phân lập chất trên cao petroleum ether và xác định cấu trúc hợp chất phân lập được Nguyễn Thị Thu Ngân MSSV: 2102273... về hàm lượng chất dinh dưỡng dưới dạng cao được điều chế có trong từng loại nấm Đông cô tươi và khô nêu trên Đây sẽ là cơ sở cho các nghiên cứu sâu và rộng hơn về loại nấm có nhiều giá trị về dinh dưỡng cũng như giá trị dược phẩm này Đồng thời, phân lập chất trên cao petroleum ether từ nấm Đông cô tươi dựa vào kỹ thuật sắc ký và xác định cấu trúc chất phân lập được, đó là lý do tiến hành nghiên cứu và. .. nghiên cứu 3.1.1 Địa điểm Đề tài luận văn: Khảo sát hàm lượng một số loại cao điều chế từ nấm Đông cô (Lentinula edodes) loại tươi, khô loại lớn, khô loại nhỏ và phân lập hợp chất từ cao petroleum ether được thực hiện tại phòng thí nghiệm Hóa Hữu Cơ – khoa Khoa Học Tự Nhiên, trường Đại học Cần Thơ 3.1.2 Thời gian Thời gian thực hiện đề tài từ tháng 8/2013 đến tháng 11/2013 3.1.3 Phương tiện nghiên cứu... học Điều chế cao: cao etanol tổng, cao petroleum ether, cao etyl acetate, cao n−butanol Sử dụng phương pháp chiết lỏng – lỏng, cô quay thu dung môi So sánh các cao điều chế được từ nấm Đông cô tươi, nấm Đông cô khô loại lớn và loại nhỏ 3.2.2 Phân lập hợp chất hữu cơ Để có thể phân lập hợp chất thiên nhiên thường sử dụng phương pháp sắc ký cột và sử dụng sắc ký lớp mỏng song song sắc ký cột để theo... dạng bịt nilon 200 g Được cắt nhỏ, phơi khô đến khối lượng không đổi và xay thành bột Hình 4.1: Nấm Đông cô tươi, khô loại lớn và khô loại nhỏ Xác định độ ẩm của 3 loại nấm trên trong cùng điều kiện thu được kết quả như sau: Bảng 4.1: Bảng xác định độ ẩm Mẫu nấm Khối lượng ban đầu Nấm tươi (N1) 778 g Nấm khô lớn (N2) 190 g Nấm khô nhỏ (N3) 197 g Khối lượng sau sấy 135 g 178 g 182 g Độ ẩm 82,6% 6,3% 7,6%... chiết tách, cô lập được - Kiểm tra xem hai hợp chất có giống nhau hay không - Tìm hiểu sơ bộ về tính chất của mẫu chất cần khảo sát - Chuẩn bị cho việc sắc ký cột - Theo dõi diễn tiến của một phản ứng tổng hợp hữu cơ - Kiểm tra một hợp chất có kém bền - Cô lập hợp chất (SKLM điều chế) 3.5 Sắc ký cột Sắc ký là một phương pháp vật lý để tách riêng các thành phần trong một hỗn hợp bằng cách phân chia chúng... g nấm Đông cô khô 6 Bảng 4.1: Bảng xác định độ ẩm 22 Bảng 4.2: Kết quả định tính một số nhóm chức 25 Bảng 4.3: Khối lượng cao tổng và hiệu suất thu cao tổng 26 Bảng 4.4: Khối lượng cao PE và hiệu suất thu cao 26 Bảng 4.5: Khối lượng cao Ea và hiệu suất thu cao 26 Bảng 4.6: Khối lượng cao n−butanol và hiệu suất thu cao 27 Bảng 4.7: Bảng tổng kết khối lượng các cao. .. khuẩn và virus: Chất lentinan trong nấm Đông cô có khả năng kháng khuẩn, virus, kháng nấm bệnh và ký sinh trùng, chống bội nhiễm khuẩn ở các bệnh nhân AIDS Nghiên cứu cho thấy hiệu quả điều trị từ việc sử dụng thuốc có chứa hoạt chất chiết xuất từ nấm Đông cô đạt 80,5% [10-12] Chống ung thư: Các công ty của Nhật như Công ty Ajinomoto, Yamanouchi đã từ sợi nấm Đông cô bào chế ra lentinan như là một dược... trọng được rất nhiều nhà khoa học quan tâm Công việc tìm hiểu, nghiên cứu không những giúp ta hiểu rõ về thành phần hóa học của thảo dược mà còn giúp ta hiểu hơn về tác dụng và tính chất của dược liệu Trên thị trường hiện nay nấm Đông cô được bán dưới dạng nấm Đông cô tươi, nấm Đông cô được sấy khô có loại lớn và loại nhỏ Vậy thành phần dinh dưỡng trong 3 loại nấm trên có gì khác biệt? Trong phạm vi giới . THỊ THU NGÂN KHẢO SÁT HÀM LƯỢNG MỘT SỐ LOẠI CAO ĐIỀU CHẾ TỪ NẤM ĐÔNG CÔ (LENTINULA EDODES) LOẠI TƯƠI, KHÔ LOẠI LỚN, KHÔ LOẠI NHỎ VÀ PHÂN LẬP HỢP CHẤT TỪ CAO PETROLEUM ETHER LUẬN. THỊ THU NGÂN KHẢO SÁT HÀM LƯỢNG MỘT SỐ LOẠI CAO ĐIỀU CHẾ TỪ NẤM ĐÔNG CÔ (LENTINULA EDODES) LOẠI TƯƠI, KHÔ LOẠI LỚN, KHÔ LOẠI NHỎ VÀ PHÂN LẬP HỢP CHẤT TỪ CAO PETROLEUM ETHER LUẬN VĂN. biện: 2. Đề tài: Khảo sát hàm lượng một số loại cao điều chế từ nấm Đông cô (Lentinula edodes) loại tươi, khô loại lớn, khô loại nhỏ và phân lập hợp chất từ cao petroleum ether. 3. Sinh viên