Bộ Y T Ế TRUỜNG ĐẠI HỌC DUỢC’ HÀ NỘI VŨ THỊ THU HÀ TỔNG HỢP SINH HỌC • VÀ THĂM DÒ TÁC DỤNG • • CỦA - CLOROISATIN VÀ DAN CHAT KHO Á LUẬN TỐT NGHIỆP Dược s ĩ KHOÁ 1999 - 2004 Người hướng dẫn : PGS. TS. NGƯYẼN q u a n g đ t Nơi thực : Thời gian thực hiện: TS. TRẦN VIẾT HÙNG Bộ môn hoá hữu Trường đại học Dược Hà Nội 16/2-28/5/2004 LC55^ Hà Nội, tháng - 2004 ỵ J!Ò.’ơ Cc=0) vị trí (oxim, hydrazon) chất I làm giảm tác dụng kháng khuẩn kháng nấm chất I. Sự giảm hoạt tính cấu trúc phân tử tính chất hoá lý dẫn chất (khó tan nước) làm cho chúng khó thấm qua màng tế bào vi khuẩn vi nấm. -Trong số dẫn chất chất I chất III IV có tác dụng yếu, điều tác dụng nhóm semicarbazon thiosemicarbazon. 35 Hình 1: Vòng vô khuẩn chất (I - VI) với chủng Staphylococcus aureus Hình 2: Vòng vô khuẩn chất (I - VI) với chủng Escherichia coli nồng độ 4mg/ml. 36 Hình 3: Vòng vô khuẩn chất (I - VI) với chủng Salmonella typhi nồng độ 4mg/ml. Hình 4: Vòng vô nấm chất (I - VI) với chủng Candida albicans nồng độ 4mg/ml. 37 Phần KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XUẤT Từ kết nghiên cứu trình bày trên, rút số kết luận sau: 1. Chúng tổng hợp chất gồm: 7-cloroisatin (I) dẫn chất (II - VI) dẫn chất (II - VI) chưa thấy công bố tài liệu tham khảo được. 2. Phản ứng tổng hợp dẫn chất 7-cloroisatin theo dõi sắc ký lớp mỏng để xác định thời gian phản ứng tối ưu. 3. Đã kiểm tra độ tinh khiết chất tổng hợp sắc ký lớp mỏng xác nhận cấu trúc phân tích phổ hồng ngoại, phổ tử ngoại phổ khối lượng. Kết cho phép sơ kết luận chất tổng hợp có công thức dự kiến. 4. Đã thử tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm chất tổng hợp với 10 chủng vi sinh vật kiểm định bao gồm chủng vi khuẩn Gram (+) Bacillus pumilis, Bacillus subtilis, Sarcina lutea, Staphylococcus aureus\ chủng vi khuẩn Gram (-) Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhi, Shigella íỉexneri; chủng vi nấm Aspergillus niger, Candida albicans. Kết cho thấy nồng độ 4mg/ml có chất có tác dụng (I, III IV) chất (I) có tác dụng 10 chủng vi sinh vật kiểm định có tác dụng mạnh nhất. Từ kết thấy nghiên cứu thêm tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm chất I tác dụng sinh học khác chất tổng hợp kháng lao, kháng virus, ức chế men MAO . để đánh giá đầy đủ tổng quát tác dụng sinh học chúng 38 nhằm định hướng cho việc tiếp tục nghiên cứu tổng hợp sàng lọc tác dụng dãy chất này. Đồng thời nghiên cứu tổng hợp thăm dò tác dụng sinh học dẫn chất base Mannich 7-cloroisatin. 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO 1. Bộ môn hữu (1990), Hoá hữu tập 1, Trường Đại học Dược Hà Nội, trang 204 - 205. 2. Dược điển Việt Nam II (1994), Nhà xuất Y học, Tập 3, trang 504. 3. Nguyễn Quang Đạt, Bùi Kim Liên (1977), Nghiên cứu tác dụng chống phân bào, Thông báo khoa học; Đại học Dược Hà Nội; số 27, trang -1 . 4. Nguyễn Quang Đạt, Nguyễn Xuân Thuỷ, Phan Minh Tâm (1981), Tóm tắt báo cáo khoa học hội nghị hoá học toàn quốc, trang 37. 5. Nguyễn Quang Đạt, Trần Viết Hùng cộng (1998), Tổng hợp tác dụng sinh học số dẫn chất isatin, Tạp chí Dược học, số 12, trang - 10. 6. Trần Viết Hùng, Nguyên Quang Đạt (1999), Tổng hợp tác dụng sinh học N- hydroxymethyl- 5- bromoisatin dẫn chất, Tạp chí Dược học, số 10, trang - . 7. Trần Viết Hùng, Nguyễn Quang Đạt, Nguyễn Thị Phượng (1999), Tổng hợp tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm cuả 5- Auoroisatin dẫn chất, Tạp chí Dược học, số 11, trang - . 8. Trần Viết Hùng, Nguyễn Quang Đạt, Chu Thị Lộc (2000), Tổng hợp tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm dẫn chất base N- Mannich 5- Auoroisatin- 3- arylimin, Tạp chí Dược học, số 1, trang - 14 . 9. Trần Viết Hùng, Nguyễn Quang Đạt, Phạm Minh Thuỷ (2000), Tổng hợp tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm số base N- Mannich 5- Auoroisatin dẫn chất, Tạp chí Dược học, số 5, trang 14-16. 10. Trần Viết Hùng, Nguyễn Quang Đạt cộng (2000), Nghiên cứu tác dụng chống lao số dẫn chất thiosemicarbazon isonicotinoylhydrazon 5- halogenoisatin, Tạp chí Dược học, số 8, trang 15 - 17. 11. Trần Viết Hùng, Nguyễn Quang Đạt, Phạm Minh Thuỷ (2000), Tổng hợp tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm 5-bromo-lmorpholinomethylisatin dẫn chất, Tạp chí Dược học, số 12, trang 10 - 12. 12. Nguyễn Đình Triệu (1999), Các phương pháp vật lý ứng dụng hoá học, Nhà xuất Đại học quốc gia Hà Nội. 13. Nguyễn Đình Triệu (2001), Các phương pháp phân tích vật lý hoá lý, Nhà xuất khoa học kỹ thuật Hà Nội, tập 1. 14. Trần Thanh Long (2003), Tổng hợp thăm dò tác dụng sinh học 5-fluoroisatin dẫn chất, Khoá luận tốt nghiệp dược sĩ khoá 53. 15. Đồng Thị Hoàng Yến (2000), Tổng hợp thăm dò tác dụng sinh học 5-cloroisatin dẫn chất, Khoá luận tốt nghiệp dược sĩ khoá 50. 16. Bauer - Brit.J.Pharmacol (1960), p.5101; The Merck index (1989), 1l thed, p.943. 17. T.A.Foglia, D.Swem (1968), Reaction of N,N - diclorouretan with indol and derivatives, The Journal o f organic chemistry, vol 33, p.4440-4442. 18. K.C.Josi, V.N.Pathak, S.K.Jain (1980), Synthesis and antibacterial, íungicidal and antiviral of some new isatin derivatives, J.Indian.Chem Soc - 1980, 57(12), p.1176 - 1180g; CA 1981, vol 95, 43046y. 19. K.C.josi and P.Chand (1982), Biologically active indole derivatives, Die Pharmazine, 37(1), p.l - 12. 20. B.A.Grinberg, B.Mazylis (1990), Isatin and related compounds: potential monoaminooxydase inhibitors, Chemija, 2, p.419 - 422; CA1955, vol 69, 9166a. 21. L.S.Kochima, A.Hamada (1954), The tuberculostatic activity of some isatin derivatives, J.Phar.Sor.Japan, 74, p.419 - 422; CA 1955, vol 69, 9166a. 22. C.S.Marvel, G.S.Hiers (1956), Organic sỵnthesis, Collective, vol, p.327 - 330. 23. J.March (1968), Advanced organic chemistry: reaction, mechanisms and structure McGraw, Hill book company, N.Y.Toronto, London 1968. 24. D.Maysinger, M.Movrin, M.M.Saric (1980), Structural analogues of isatin and theữ antimicrobial activity, Die Pharmazie, 35(1), p.14 - 16. 25. M.S.Pani, V.M.Reddy (1994), Isatin [N- (2- alkylbenzoxazole- 5carbonyl)]hydrazon, ỉndìan J. Pharm. Sci., 56(5), 174 - 7, CA1995, vol 123, 143699d. 26. F.D.Pop (1969), Synthesis of potential antineoplastic agents, J.med.Chem, 12(5), p.182. 27. P.W.Sadler (1969), Antiviral chemotherapy with isatin Ị5- thiosemicarbazon, CA., vol 55, 11432c. 28. R.M.Silverstein, G.C.Bassler, J.C.Morril (1981), Spectrometric identiỷication o f organic compounds, 4thed - John Wiley, New york 1981. 29. R.S.Varma, W.L.Nobles (1967), Synthesis and antiviral of certain Ndialkylaminomethyl isatin P- thiosemicarbazon, J.Med.Chem 1967, vol 10(5), pp.972 - 973. 30. R.S.Varma, W.L.Nobles (1975), Antiviral and antiíungal activity of isatin N- Mannich base, J.Pharm.Sci., 64(5), p. 181 - 182. 31. Grignard (1953), Traité de chime organique\ Mason etje, Editeus, Paris, Tome XIX, p.337 - 346. 32. K.B.Bauypo, r . n . MHineHKO (1976), ỈỈMeHHbie peaKụuu B opsaHUHecKoủ XUMUU, M ocKBa H a^a , « X H M H H » . 33. r . H. ^CyHrneTy, M. A. PexTep (1976), Hsamuu u ezo npouseoÒHbie, IIlMHỈÍHXa KỉIIỊHHeB. 34. A. T>. Tomhhh, iĩ. “CeMUKapốasoHbi pnda XXVI. u A. XapHM, A. K. Ky^eHKo (1973), muoceMUKapôasoHbi K eonpocy 2emep0 iịUKJiuHecK020 o npomueoapuốKoeoủ aKmuenocmu np0U360ÒHhix u3amuH”, Xhmhko ộapMaụeBMHHecKHÌí )KypHaji, 7, 10-13. 35. /Ị. r. lỊe^epe, T>. A. TpHHốepr. A. c. PocKa, ^CyHraeMy, A. A. IIpHKyjiHC (1984), MOHOOMUHOKCudasbi e JI. M. 3opHH, r. H. “OốpamuMbie uH2uôumopbi pndy XHMHKOỘapMaiỊeBMHHecKHỈĐKypHaii, 5, 555-558. uHÒonuHo”, PHỤ LỤC Phụ lục : Phổ hồng ngoại chất I Phụ lục : Phổ hồng ngoại chất II Phụ lục : Phổ hồng ngoại chất III Phụ lục : Phổ hồng ngoại chất IV Phụ lục : Phổ hồng ngoại chất V Phụ lục : Phổ hồng ngoại chất VI Phụ lục : Phổ tử ngoại chất I Phụ lục : Phổ tử ngoại chất II Phụ lục : Phổ tử ngoại chất III Phụ lục 10: Phổ tử ngoại chất IV Phụ lục 11: Phổ tử ngoại chất V Phụ lục 12: Phổ tử ngoại chất VI Phụ lục 13: Phổ khối chất I Phụ lục 14: Phổ khối chất III PERKIN ELMER 04/04/02 14:57 Phong TNTT-DH Duoc X: scan, 4.0cm-l, smooth Samp.Hl/Ha-Hco 1476.5 1500 Chất I: - cloroisatin 1000 1: Phổ hồng ngoại chất I 500 CIỈT1 [...]... nghiên cứu sơ bộ về tác dụng kháng MAO của isatin đã được công bố, B.Grinberg và cộng sự đã tổng hợp và thử tác dụng của 18 dẫn chất của isatin trên gan lợn Kết quả cho thấy 18 chất này có tác dụng ức chế MAO trong dịch đồng nhất của gan lợn [19] 8 Bảng 1: Tóm tắt tác dụng sinh học của dẫn chất isatin STT 1 Công thức hoá học R = -Br' - N o > R’ = -H, -CH2OH \ Tác dụng x Kháng khuẩn, 1 A = = 0 , =N- NHAr... vết gọn rõ có Rf = 0,82 *Kết quả: Đã tổng hợp được 7- cloroistin có nhiệt độ nóng chảy 176 ,5 - 177 °c với hiệu suất phản ứng là 56%, đạt tinh khiết sắc ký lớp mỏng 2.2.2.TỔNG HỢP MỘT s ố DAN CHÂT của 7- CLOROISATIN: Dựa vào tính chất của nhóm carbonyl ở vị trí (3, chúng tôi tiến hành tổng hợp một số dẫn chất azomethin của 7- cloroisatin bằng cách ngưng tụ nó với các hợp chất có công thức chung H2 N-B theo... —í Tại Việt Nam, tác giả Nguyễn Quang Đạt và cộng sự [3], [4] đã tổng hợp và thăm dò tác dụng chống phân bào của một số dẫn chất hydrazon, base Mannich của 5-bromoisatin và 5-sulfomidoisatin, các azomethin của 5-nitroisatỉn trên mô phân sinh của rễ cây Raphanus sativus L Kết quả cho thấy chúng kìm hãm mô phân sinh thực vật khá cao 1.1.4.TÁC DỤNG KHÁNG VIRUS Từ năm 1960, Methisazon và một số dẫn chất... tử của hai chất (I, III) Sơ đồ phân mảnh của chất I H XTIT - H C N IT_ NH — > H— \\ + + m /z 90 H m /z 6 3 -C 1 ,+ NH - CO - HCN C1 m /z 125 o -CO Ỵ C1 Ỵ H S -ri- -NH 'C 1 á m /z 9 8 m /z 153 - CO 30 2.4.THỬ TÁC DỤNG SINH HỌC Trong các tài liệu tham khảo được, chúng tôi thấy có rất ít công trình nghiên cứu hoạt tính sinh học của 7- cloroisatin và dẫn chất Với mục tiêu thăm dò tác dụng sinh học của. .. Kết luân: 1 Đã tổng hợp được 6 chất gồm 7- cloroisatin (I) và 5 dẫn chất của nó (II-V I) 2 Trong quá trình phản ứng đã tiến hành sắc ký lớp mỏng để xác định thời gian phản ứng tối ưu của các phản ứng tổng hợp dẫn chất của 7- cloroisatin 3 Đã tiến hành xác định nhiệt độ nóng chảy của các chất tổnghợp được và kiểm tra độ tinh khiết của sản phẩm bằng sắc ký lớp mỏng 2.3.KIỂM TRA ĐỘ TINH KHIẺT và x á c n h... 2.2.TỔNG HỢP HOÁ HỌC 2.2.1.TỔNG HỢP 7- CLOROISATIN / 0 o C1 H (I) C8 40 2 H NC1 M = 181, 57 Chúng tôi tiến hành tổng hợp 7- cloroisatin bằng phản ứng Sandmayer 1919 vì phản ứng này dễ thực hiện, đi từ nguyên liệu ban đầu dễ kiếm với quy trình tương tự các tài liệu [15], [22] Sơ đồ phản ứng tổng hợp 7- cloroisatin: 'OH O l Ẳ C1 + CC 1 CH(OH)j + H2N —OH.HC 1 3— H+ 1 H2SO4 đãc -— —* 80° c C1 H Quy trình tổng. .. các chất tổng hợp được đúng như dự kiến Bảng 4: Các dải hấp thụ đặc trưng trong phổ hồng ngoại (crri1 ) C h ất V nh2 V nh V c=o V c= N V ơ - C arom Vc 1 ^arom - C Ôc-H ÔoH (benzen thế 1,2,3) 1614 3223 174 9 1 476 1040 71 2 1023 72 6 1040 72 5 1 072 72 5 1061 74 0 1040 73 1 I 15 97 3126 1685 1620 1555 II 1485 1584 172 3 3455 3 276 1680 1620 1456 m 1580 3240 IV 3414 3145 1693 1488 1606 1453 1 576 171 2 3 179 1688 1620... NGHIỆM -Áp dụng quá trình biến đổi hoá học để tổng hợp các sản phẩm dự kiến -Xác định độ tinh khiết của các sản phẩm tổng hợp được bằng phương pháp sắc ký lớp mỏng và đo nhiệt độ nóng chảy -Xác định cấu trúc của các chất tổng hợp được dựa trên kết quả phân tích phổ uv, IR, MS -Thử tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm của các chất tổng hợp được dựa trên phương pháp khuyếch tán trên thạch theo quy định của Dược... chất tổng hợp được nhằm tìm ra những chất có khả năng kháng khuẩn, kháng nấm, chúng tôi tiến hành thử tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm của các chất tổng hợp được tại phòng thí nghiệm vi sinh thuộc bộ môn Sinh học và Vi sinh Trường Đại học Dược Hà Nội 2.4.1.NGUYÊN TẮC [2] Các chất tổng hợp được thử bằng phương pháp khuyếch tán trên thạch với kỹ thuật đặt khoanh giấy tẩm chất thử Dựa vào sự khuyếch tán của. .. 4 17 258 2 67 406 231 256 271 331 2 37 258 274 372 274 342 298 364 244 I 215 II 213 250 III 204 IV 205 V 203 VI 203 223 254 *Nhận xét mối liên quan cấu trúc - phổ tử ngoại: Phổ tử ngoại của 6 chất nêu trên chứng tỏ có sự hấp thụ mạnh ở vùng tử ngoại của các dẫn chất isatin do cấu trúc có chứa hệ liên hợp n -n và các nhóm chưa no (> c= 0, >C=N, C=S), nghĩa là có sự chuyển dịch điện tử n-MT* và 71 — * >7C . 24], [ 27] , [30], [3 2-3 5] cho thấy isatin và dẫn chất có nhiều tác dụng sinh học đáng quan tâm: - Tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm. - Tác dụng kháng lao. - Tác dụng kháng virus. - Tác dụng chống. M.S.Pani và V.M.Reddy [25] đã tổng hợp và thử tác dụng kháng khuẩn của một dẫn chất của 7- cloroisatin là 7- cloroisatin- 3(3 - 4 amino- 4 - hydroxyl)benzoylhydrazon. Kết quả cho thấy hợp chất. Bộ YT Ế TRUỜNG ĐẠI HỌC DUỢC’ HÀ NỘI VŨ THỊ THU HÀ TỔNG HỢP VÀ THĂM DÒ TÁC DỤNG SINH HỌC • • • CỦA 7 - CLOROISATIN VÀ DAN CHAT KHO Á LUẬN TỐT NGHIỆP Dược s ĩ KHOÁ 1999 - 2004 Người hướng dẫn