B YT TRNG I HC DC H NI QUCH TH Lấ H NGHIN CU SINH TNG HP KHNG SINH T X KHUN STREPTOMYCES 15.2.9 (KHểA LUN TT NGHP DUC s KHểA 1999 - 2004) Giỏo viờn hng dn: TS. Cao Vn Thu Ni thc hin : B mụn Cụng nghip Dc Trng i hc Dc H Ni Thi gian thc hin : 15/10/2003 -15/05/2004 H NI, 05-2004 m vớ-ti-L-H LI CM N (& lũ t ( l/it/i rott t tựi bờớ rớt! iõ u ie l l dein ehõn. thnh etn n th n ớjiỳfỡ : QiÊ [...]... (-) 2. 3 KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM VÀ NHẬN XÉT 2. 3.1 Phổ tác dụng của kháng sinh do Streptomyces 15. 2. 9 sinh tổng hợp Phổ tác dụng của kháng sinh do Streptomyces 15. 2. 9 gốc sinh tổng hợp được giới thiệu ở bảng 3 29 Bảng 3: Kết quả thử tác dụng của kháng sinh do Streptomyces 15. 2. 9 gốc sinh tổng hợp với các vỉ khuẩn kiểm định Vi khuẩn Gram(+) Bc 14,00 Vi khuẩn Gram(-) Ec Bp 13, 62 Pro 19, 90 Bs 11,58 Pseu 13, 62. .. 13, 62 SI 14,14 Shi 19, 92 D(mm) D(mm) 12, 34 Sta 10, 42 14,58 ƠVpĩP Nhận xét: Kháng sinh do xạ khuẩn Streptomyces 15. 2. 9 tạo ra có phổ tác dụng rộng trên cả vi khuẩn Gram (+) và vi khuẩn Gram (-) nhưng tác dụng trên vi khuẩn Gram (-) mạnh hơn hẳn Chọn 2 loại vi khuẩn kiểm định đại diện có độ nhạy cảm thích hợp với kháng sinh sinh tổng hợp là Bs và Ec 2. 3 .2 Chọn môi trường nuôi cấy thích hợp Sau thời gian... Giống xạ khuẩn Giống xạ khuẩn Streptomyces 15. 2. 9 đã qua phân lập và tuyển chọn có khả năng sinh tổng hợp kháng sinh phổ tác dụng rộng, đặc tính di truyền ổn định, do phòng thí nghiệm kỹ thuật vi sinh kháng sinh Bộ môn Công Nghiệp Dược, Trường Đại Học Dược Hà Nội cung cấp 2. 1 .2 Chủng vi khuẩn kiểm định [4] Vi khuẩn Gram (-): Vi khuan Gram (+): Escherichia coli ATCC 25 92 2 (Ec) Bacillus cereus ATCC 99 46... GIỐNG XẠ KHUẨN SINH KHÁNG SINH [4], [5], [6], [7], [8], [9] 1.3.1 Phân lập giống xạ khuẩn Để phân lập xạ khuẩn sinh kháng sinh người ta phải lấy mẫu từ các nguồn cơ chất khác nhau: đất ở ruộng, đất quanh rễ cây, bùn, nước cống Từ các mẫu trên đem phân lập thuần khiết những xạ khuẩn sinh kháng sinh mà ta mong muốn bằng các phương pháp đặc trưng và trên các MT chọn lọc Các phương pháp phân lập giống xạ khuẩn: ... Streptomyces 15. 2. 9 không phát triển trên các MT3, MT4, MT5, MT7 và phát triển tốt trên các MT1, MT2, MT6, tiến hành thử hoạt tính kháng sinh được sinh tổng hợp ra trên các MT này bằng phương pháp khối thạch, kết quả giới thiệu ở bảng 4 B ảng 4: Kết quả chọn môi trường nuôi cấy Bs Ec MT D(mm) s D(mm) s 1 9, 87 0,70 9, 53 0 ,93 2 14,06 0, 92 13 ,93 0,68 6 13,04 1,00 11,68 0, 42 Nhận xét: Streptomyces 15. 2. 9. .. VM201(Pseu) Bacillus subtilis ATCC 6633 (Bs) Salmonella typhi DT 220 Sarcina lutea ATCC 93 41 Shighella flexneri D 1 12 (Sal) (Shi) (SI) Staphylococcus aureus ATCC 122 8 (Sta) 2. 1.3 Môi trường [4], [ 12] -$ Các MT nuôi cấy xạ khuẩn: • Các MT nuôi cấy xạ khuẩn được trình bày ở bảng 1 16 Bảng 1: Các môi trường nuôi cấy xạ khuẩn MT MT1 Thành p h ầ n ^ " " - ^ Tinh bột 2 Lactose MT2 MT3 MT4 MT5 MT6 2, 4 2 2... CuS04.5H20 0, 69 g, FeS04.7H20 0,11 g, MnCl2 4H20 0, 79 g, ZnSƠ4 7H2Ơ 0 ,15 g, nước cất 1000 ml + ISP9: (NH4)2S04 2, 64 g, KH2 PƠ4 2, 38 g, MgS047H20 1,0 g, dung dịch B 1,00 ml, thạch 15, 0 g, nước cất 1000 mi, pH=6,8-7,0 + D* ISP9: ISP9 sau khi đã tiệt trùng để nguội tới 60°c thì cho một trong các nguồn đường A vào từng môi trường ISP9 riêng rẽ sao cho nồng độ đường trong môi trường là khoảng 1% 2. 1.4 Dụng... đũa thuỷ tinh 20 2. 2 PHƯƠNG PHÁP THỰC NGHIỆM 2. 2.1 Phương pháp giữ giống [4], [7], [8], [9] Streptomyces 15. 2. 9 được cấy vạch trên MT thạch nghiêng (MT2), rồi ủ 30°c Trong 6- 10 ngày chủng phát triển tốt, cho các ống giống vào tủ lạnh bảo quản ở 2 c giữ giống, đem tiến hành các nghiên cứu tiếp theo trong tủ ấm 2. 2 .2 Đánh giá hoạt tính kháng sinh bằng phương pháp khuyếch tán [4], [5], [9] - Nguyên tắc:... phụ Ở đây các nhà nghiên cứu dùng sinh khối của xạ khuẩn Streptomyces rimonus, là sản phẩm thải loại từ quá trình lên men sinh tổng hợp kháng sinh Oxytetracyclin, được xử lý để thu hồi ion Zn2+ Các hạt sinh khối đã sử dụng có thể tái tạo lại dễ dàng mà không làm thay đổi độ cứng và không làm giảm khả năng gắn Zn2+ của hạt sinh khối Xử lý sinh khối: Các thí nghiệm đã tiến hành xử lý sinh khối bằng các... (DOI) synthase [18] Nghiên cứu này được tiến hành trong quá trình sinh tổng hợp kháng sinh butirosin từ Bacillus circulans, DOI synthase có trong Bacillus circulans, là enzym then chốt để sinh tổng hợp 2- doexystreptamin (DOS)- một trong hai cấu trúc cơ bản của kháng sinh nhóm aminoglycosid DOI synthase cấu tạo bởi 2 tiểu phần, tiểu phần nhỏ 20 -kDa và tiểu phần lớn 40-kDa Tiểu phần 20 -kDa của DOI synthase . loại xạ khuẩn theo ISP 28 2. 3. Kết quả thực nghiệm và nhận xét 29 2. 3.1. Phổ tác dụng của kháng sinh do Streptomyces 15. 2. 9 sinh tổng hợp. 29 2. 3 .2. Chọn môi trường nuôi cấy thích hợp 30 2. 3.3 năng suất sinh tổng hợp kháng sinh. - Sơ bộ nghiên cứu chiết tách kháng sinh và một vài tính chất của kháng sinh đã được sinh tổng hợp. - Phân loại Streptomyces 15. 2. 9. 1 PHẦN 1 TỔNG QUAN 1.1.VÀI. thích hợp 24 2. 2.5. Phương pháp lên men gián đoạn 24 2. 2.6. Phương pháp xác định độ bền của kháng sinh trong dịch lên men. 25 2. 2.7. Chiết kháng sinh từ dịch lọc bằng dung môi hữu cơ 26 2. 2.8.