B ộ YTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI NGUYỄN THỊ CHIÊN GÓP PHẦN NGHIÊN cứu TÁC DỤNG HẠ 6LUCOSE HUYẾT CỦA HOẠT CHAT THÂN RỄ THỔ PHỤC LINH TRÊN CHUỘT CổN G TRẮNG THỰC NGHIỆM ( KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược sĩ KHOÁ 1997 - 2002 ) Người hướng dẫn : PGS. TS Nguyễn Xuân Thắng. ThS Phùng Thanh Hương. Nơi thực hiện : Bộ môn Hoá Sinh. Bộ môn Dược Liệu. Thời gian thực hiện: 03/2002 - 05/2002. HÀ NỘI, 5 - 2002. Lòi cảm ơn Với lòng biết ơn sâu sắc vả sự kính trọng tôi xin bồỵ tỏ lòi cảm ơn chân thành nhất tói PGỐ.TỐ Nguyễn Ẫuân Thắng , chủ nhiệm bộ môn Hoá ốinh Trưòng Dại học Dược ĩĩồ Nội - ngưòi thầỵ đã cho tôi nhiều kiến thức quý báu để hoàn thảnh luận văn của mình. Tôi xin bậy tỏ lòn§ biết ơn chân thảnh tói Thồ Phùng Thanh ĩĩương, cán bộ ồộ môn Hoá ồinh Trưòng Dại học Dược Hồ Nội - là ngưòi đã dành cho tôi sự giúp đỡ tận Lình trong suốt quá trình thực hiện luận văn tốt nghiệp. Tôi cũng xin trân trọng cảm ơn các thầỵ cô giáo và GÔ Phạm Thanh Phương trong t)ộ môn Hoá sinh trưòng Dại học Dược Hà Nội đã nhiệt tình giúp đõ, tạo điều kiện thuận lợi để tôi hoàn thành luận văn này. Tôi xin chân thành cảm ơn Tổ Trần Văn Thanh - cán bộ Dộ môn Dược liệu và ồộ môn Dược liệu đã giúp đõ tôi trong khi thực hiện luận văn. Cuối cùng, lòi cảm ơn trang trọng nhất vồ không thể thiếu, tôi xin gửi tỏi gia đình, ngưòi thân, bạn bè cùng Đảng uỷ, ồan giám hiệu nhà trưòng, các thầ/ GÔ giáo đã giúp đõ và cổ vũ tôi rất nhiều trên con đường học tập và nghiên cứu khoa học. Hồ nội ngậy 20 tháng 05 năín 2002 ồinh viên Nguỵễn Thị chiên MUC LUC • • ĐẶT VÂN ĐỂ 1 PHẦN 1: TỔNG QUAN 3 1.1. Bệnh Đái tháo đường 3 1.1.1. Khái niệm 3 1.1.2. Tình hình mắc bệnh ĐTĐ trên thế giới và ở Việt Nam 3 1.1.3. Phân loại ĐTĐ 4 1.1.4. Chẩn đoán ĐTĐ 5 1.1.5. Các biến chứng của bệnh ĐTĐ 7 1.1.6. Điều trị ĐTĐ 8 1.2. Thổ phục linh 13 1.2.1. Đặc điểm thực vật và phân bố 13 1.2.2. Thành phần hoá học của thân rễ SG 14 1.2.3. Tác dụng và công dụng của TPL 15 1.2.4. Tình hình nghiên cứu TPL 15 PHẦN 2: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 16 2.1. Chất liệu, đối tượng và phương pháp nghiên cứu 16 2.1.1. Chất liệu nghiên cứu 16 2.1.2. Đối tượng nghiên cứu 16 2.1.3. Phưoỉng pháp nghiên cứu 17 2.1.4. Phương pháp đánh giá kết quả 22 2.2. Kết quả thực nghiêm và nhận xét 22 2.2.1. Nghiên cứu so sánh tác dụng hạ GH của dịch chiết Nước (Dịch 3) và dịch chiết Ethanol (Dịch 4) thân rễ TPL 22 2.2.2. Nghiên cứu ảnh hưởng của hoạt chất thân rễ TPL: Saponin toàn phần (Dịch 1) và Flavonoid toàn phần (Dịch 2) trên nồng độ GH chuột cống trắng 27 2.2.3. Nghiên cứu ảnh hưcmg của các liều hoạt chất thân rễ TPL khác nhau đến mức tăng GH trên mô hình tăng GH do uống Glucose 32 2.3. Bàn luận 34 PHẦN 3: KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XUÂT 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO Chú giải chữ v iẽ t tă ĐTĐ : Đái tháo đường TPL : Thổ phục linh GH : Glucose huyết SG : Smilax glabra L. Smilacaceae WHO: Tổ chức Y tế Thế giới -World Health Organization IDDM: Insulin Dependent Diabetes Mellitus ĐTĐ phụ thuộc Insulin NIDDM; Non Insulin Dependent Diabetes Mellitus ĐTĐ không phụ thuộc Insulin BẶT VẤN » Ề Các chuyên gia y tế hàng đầu thế giói đã nhận xét về tình hình bệnh tật của thế kỷ 21 như sau: “Bệnh lý của thế kỷ 21 là các bệnh về nội tiết và chuyển hoá, trong đó nổi bật vai trò trọng tâm của bệnh Đái tháo đường”[4]. ĐTĐ đã được biết đến từ thời văn minh cổ đại Trung Quốc, Ai Cập, Ân Độ, Hy Lạp nhưng đặc biệt phát triển trong những năm gần đây [1]. Bệnh tăng nhanh theo tốc độ phát triển của nền kinh tế xã hội. Năm 1994 toàn thê giới có 110 triệu người ĐTĐ, năm 1995 tăng lên 135 triệu ngưòd (4% dân số thế giới). Dự báo năm 2010 có 221 triệu ngưòi và năm 2025 sẽ có 300 triệu ngưòd ĐTĐ (5,4% dân số thế giới) [4]. ĐTĐ là bệnh có tỷ lệ tử vong cao nhất trong các bệnh nội tiết [29,39]. Ngoài ra, những biến chứng mãn tính của bệnh như bệnh mạch vành, bệnh lý võng mạc, bệnh thận - tiết niệu, bệnh lý bàn chân, nhiễm trùng thưcmg nặng nề, phải điều trị lâu dài vói chi phí rất cao [1,7,18]. Chính vì vậy, ĐTĐ là gánh nặng không chỉ cho mỗi cá nhân, gia đình người bệnh mà còn cho cả xã hội. Y học hiện đại đã sử dụng rất nhiều chế phẩm tân dược để điều trị ĐTĐ nhưng hầu hết các thuốc này đều kèm theo nhiều tác dụng không mong muốn đặc biệt là khi điều trị kéo dài. Theo quan niệm của YHCT, ĐTĐ được gọi là bệnh tiêu khát, ở nước ta, rất nhiều vị thuốc, bài thuốc từ lâu đã được dùng chữa ĐTĐ vói đặc trưng là tác dụng không nhanh, mạnh bằng tân dược nhưng ít độc tính, ít tác dụng phụ, mà cũng có tác dụng điều trị tốt, phù hợp với yêu cầu điều trị lâu dài của bệnh. Thổ phục linh là vị thuốc được chế biến từ thân rễ của các cây thuộc chi Smilax, ở Việt Nam phổ biến là loài Smilax glabra L. Smilacaceae mọc hoang Qua sơ bộ điều tra dược liệu học chúng tôi thấy Tomoji Pukunaga (1997) và Nguyễn Ngọc Xuân (1999) đã phát hiện được tác dụng hạ đưòmg huyết của dịch chiết methanol toàn phần thân rễ Thổ Phục Linh trên chuột nhắt trắng [31, 25]. Để góp phần nghiên cứu cụ thể hơn tác dụng hạ Glucose huyết của vị thuốc này chúng tôi tiến hành đề tài vói mục tiêu: 1. Nghiên cứu so sánh ảnh hưởng của dịch chiết nước và dịch chiết ethanol thán rễ TPL trên mô hình tăng Glucose huyết thực nghiêm. 2. Đánh giá ảnh hưởng của hai nhóm hoạt chất TPL trên các mô hình tăng Glucose huyết thực nghiêm và so sánh với tác dụng của hai thuốc trị ĐTĐ thông dụng. PHẦX 1: TỔXG QIJA]\ 1.1. Bệnh Đái tháo đường (ĐTĐ) 1.1.1. Khái niệm [19,33,34,39] ĐTĐ được biết đến từ năm 600 trước Công Nguyên vói tên gọi Diabetes mellitus theo tiếng Hy Lạp nghĩa là trong nước tiểu có đường. Cùng vói sự phát triển của y học những hiểu biết về bệnh ĐTĐ ngày càng sâu sắc hơn. Theo định nghĩa của WHO, ĐTĐ là bệnh mạn tính đặc trưng bởi mức đưòfng cao trong máu, đó là hậu quả của sự rối loạn nội tiết - hiện tượng thiếu hụt tương đối hay tuyệt đối Insulin hay không đáp ứng với Insulin - dẫn tới các rối loạn chuyển hoá Glucid, Lipid, Protid. Khi GH tăng cao vượt quá khả năng tái hấp thu Glucose của thận thì có Glucose niệu, khi đó bệnh đã ở giai đoạn muộn và thường có nhiều biến chứng nặng ở mắt, thận, thần kinh. 1.1.2. Tình hình mắc bệnh ĐTĐ trên thế giới và ở Việt Nam. ĐTĐ đang phát triển mạnh trên phạm vi toàn thế giói, bệnh có tỷ lệ mắc rất cao, chiếm 60% - 70% trong các bệnh nội tiết. Tỷ lệ mắc bệnh thay đổi theo từng dân tộc, từng vùng địa lý khác nhau và tuỳ theo sự phát triển của kinh tế xã hội, Theo báo cáo của Hội ĐTĐ quốc tế, năm 1994 trên toàn thế giới có 11,5 triệu người bị bệnh ĐTĐ týp I, 98,9 triệu người bị bệnh ĐTĐ týp II. Năm 2000 tỷ lệ mắc bệnh theo thứ tự là 18,1 và 157,3- Dự báo năm 2010 số lượng người bị ĐTĐ theo thứ tự sẽ lên tới 23,7 và 215,6 [4, 7,18]. Năm 1991 tỷ lệ mắc bệnh ở một số nước được thống kê như sau [1,19]: - Châu Âu: Anh 1,2%; Đan Mạch 1,6%; Pháp 2%. - Châu Mỹ: Achentina 5%; Mỹ 6,6%. - Châu Phi: Tuzinia 3%; Maly 0,9%. - Châu Á: Thái Lan 3,58%; Philipin 4,27%; Malaysia 3,01%. Hội nghị ĐTĐ Singapore (1997) đã thống kê số bệnh nhân bị ĐTĐ ở 10 nước điển hình như sau: Ấi Độ 19,4 triệu; Trung Quốc 16 triệu; Mỹ 13,9 triệu; Nga 8,9 triệu; Nhật 6,3 triệu; Brazin 4,9 triệu; Indonesia 4,5 triệu; Pakistan 4,3 triệu; Mexico 3,8 triệu; Ucraina 3,6 triệu [18]. ở Việt Nam, theo báo cáo của Bộ Y Tế năm 1998 có 1% - 2% dân số mắc bệnh ĐTĐ (0,8 - 1,5 triệu ngưòd ). Tỷ lệ mắc bệnh ở Hà Nội 1,44%; Huế 0,96%; Thành phố Hồ Chí Minh 2,68% và đang có xu hướng tăng lên [1,19]. Cũng như các nước đang phát triển khác, ở nước ta do trình độ hiểu biết về ĐTĐ còn hạn chế, người bệnh thường được phát hiện ở giai đoạn muộn và thưòíng đến bệnh viện vói những biến chứng nặng nề. Năm 1997 toàn thế giói chi cho điều trị ĐTĐ khoảng 1030 tỷ đôla Mỹ. ở các nước công nghiệp phát triển chi phí cho bệnh ĐTĐ chiếm 5% - 10% ngân sách dành cho y tế [7, 8, 32, 33]. Như vậy trong thế kỷ 21 ĐTĐ sẽ là gánh nặng cho nền kinh tế xã hội toàn thế giói. 1.1.3. Phân loại ĐTĐ [19,25,32,39] WHO (1985) phân loại ĐTĐ như sau: ♦ ĐTĐ nguyên phát ♦ ĐTĐ týp I ( IDDM ) ♦ ĐTĐ týp II (NIDDM) > ĐTĐ týp II thể béo phì. > ĐTĐ týp II không béo. > ĐTĐ khỏi phát ở ngưòd trẻ. ♦ ĐTĐ thứ phát: xảy ra do hậu quả của > Bệnh lý tuyến tuỵ: viêm tuỵ mãn, viêm tuỵ cấp, nhiễm sắt tuỵ > Bệnh nội tiết khác: Cushing, Basedow, to đầu chi. > Do thuốc hoặc hoá chất: hormon, thuốc lọi tiểu, kháng viêm. > Hội chứng di truyền : Turner, Klineflter, bệnh glycogen. > Insulin bất thường. > Do thiếu dinh dưỡng: ĐTĐ xơ, sỏi tuỵ, ĐTĐ do thiếu hụt Protein. ♦ ĐTĐ ở người có thai ♦ Rối loạn dung nạp Glucose 1.1.4. Chẩn đoán ĐTĐ a) Tiêu chuẩn chẩn đoán ĐTĐ [18,19,39]. ĐTĐ được xác định chẩn đoán khi bệnh nhân có bất kỳ một trong ba tiêu chuẩn sau: °GH ở bất kỳ thời điểm nào: 11,1 mmol/1 (200mg/dl). Kèm theo các triệu chứng uống nhiều, đái nhiều, giảm cân và có Đưcmg niệu, có thể có Ceton niệu. ° GH lúc đối: 6,9 mmolA (126 mg/dl), xét nghiệm lúc bệnh nhân đã nhịn đói >10 giờ, °GH làm sau nghiệm pháp tăng đường huyết 2 giờ: 11,1 mmol/1 (200mg/dl) theo tiêu chuẩn WHO 1985. b) Các xét nghiệm cận lâm sàng trong chẩn đoán ĐTĐ [3,18,19,39] Trong bệnh ĐTĐ các xét nghiệm cận lâm sàng không những giúp cho chẩn đoán, phân loại bệnh mà còn có giá trị trong quá trình theo dõi và tiên lượng bệnh. Các xét nghiệm cận lâm sàng trong chẩn đoán ĐTĐ bao gồm: [...]... 2.2.2 Nghiên cứu ảnh hưởng của hoạt chất thân rễ TPL : Saponin toàn phần (Dịch 1) và Flavonoid toàn phần (Dịch 2) trên nồng độ GH chuột cống trắng Nhằm sơ bộ tìm hiểu về cơ chế hạ GH của dịch chiết thân rễ TPL nói chung và của từng hoạt chất thân rễ TPL nói riêng, chúng tôi tiến hành xác định ảnh hưỏfng của từng hoạt chất TPL trên hai mô hình tăng GH thực nghiệm trên chuột cống trắng a) Ảnh hưởng của. .. theo Liu và cộng sự (1992) [36] Nguyễn Ngọc Xuân nghiên cứu chứng minh tác dụng hạ GH của dịch chiết methanol toàn phần thân rễ Thổ phục linh trên các mô hình tăng GH thực nghiệm trên chuột nhắt trắng [25] PHẨN 2 : TH ựC NGHIỆM VÀ K Ế T q ilẢ 2.1 Chất liệu, đối tượng và phưdng pháp nghiên cứu 2.1.1 Chất liệu nghiên cứu a) Nguyên liệu: Thân rễ cây Thổ phục linh (Smilax glabra L.), họ Khúc Khắc (Smilacaceae),... tắc trên ♦ Kết quả Glucose máu (mmol/1) = ^Ẽmaũ ^ 180 Hình 2.2 Sơ đồ chiết xuất thành phần thân rễ Thổ Phục Linh bằng các dung môi khác nhau c) Nghiên cứu so sánh tác dụng hạ GH của dịch chiết nước (Dịch 3) và dịch chiết ethanol (Dịch 4) thân rễ TPL ♦ Ảnh hưởng của Dịch 3 và Dịch 4 trên GH của chuột bình thường Chuột thí nghiệm nhịn đói 12 giờ chia thành 3 lô, mỗi lô 5 con Định lượng GH lúc đói của chuột, ... trợ giúp của phần mềm EXCEL 2000 2.2 Kết quả thực nghiệm và nhận xét 2.2.1 Nghiên cứu so sánh tác dụng hạ GH của dịch chiết nước (Dịch 3) và dịch chiết ethanol (Dịch 4) thân rễ TPL a) Ảnh hưởng của Dịch 3 và Dịch 4 trên GH của chuột bình thường Sau khi cho chuột uống Dịch 3 (lOml/kg) và Dịch 4 (10 ml/kg) chúng tôi xác định mức độ giảm GH Kết quả được trình bày ở bảng 2.3 và hình 2.3 Glucose huyết trung... bắp Adrenalin (0,5 mg/kg trọng lượng chuột) Định lượng GH sau khi tiêm Adrenalin ( 0,5 giờ định lượng 1 lẩn, trong 3 g iờ ) d) Nghiên cứu ảnh hưởng của hoạt chất thân rễ TPL: Saponin toàn phần (Dịch 1) và Flavonoid toàn phần (Dịch 2) tới nồng độ GH của chuột công trắng ♦ Ảnh hưởng của Dịch ỉ và Dịch 2 trên mô hình tăng GH do uống glucose 30% (lOml/kg chuột) Chuột thí nghiệm nhịn đói 12 giờ, chia thành... xị, 1.2.4 Tình hình nghiên cứu TPL Chen và cộng sự (1990) nghiên cứu bài thuốc có tác dụng tốt trong điều trị viêm gan B trong đó có SG [28] Đỗ Trung Đàm (1994) chứng minh bài thuốc chứa SG có tác dụng tốt trong điều trị thấp khớp [12] Tomoji Fukunaga và cộng sự (1997) đã chứng minh dịch chiết methanol từ thân rễ loài Smilax glabra L có tác dụng hạ GH trên chuột bình thường và chuột gây bệnh ĐTĐ [31]... 0,5 mg/kg chuột Riêng với lô dùng Insulin, định lượng GH và tiêm Adrenalin sau khi tiêm Insulin 2 giờ Định lượng GH sau khi tiêm Adrenalin 0,5 giờ llần, trong 3 giờ e) Nghiên cứu ảnh hưởng của các liều hoạt chất thân rễ TPL khác nhau đến mức tăng GH trên mô hình táng GH do uống Glucose ♦ Ảnh hưởng của các liều khác nhau của Saponin toàn phần (Dịch I) tới mức tăng GH của chuột uống dung dịch Glucose. ..© Glucose huyết Thường sử dụng hai loại xét nghiêm GH đó là định lượng GH lúc đói và nghiệm pháp tăng GH WHO đã đưa ra tiêu chuẩn chẩn đoán ĐTĐ dựa trên kết quả xét nghiệm GH ở bảng 1.1 Bảng 1.1 Tiêu chuẩn chẩn đoán ĐTĐ của WHO 1985 Glucose huyết lúc đói Đái tháo đường >5,6 mmol/1 nghiệm pháp tăng đường huyết >11,1 mmol/1 > 6,7 mmol/1 Rối loạn dung Glucose huyết 2 giờ sau khi làm nạp Glucose. .. Gliclazid Bắt đầu có Tác dụng Thòi gian Biệt dược tác dụng mạnh nhất kéo dài tác dụng (giờ) (giờ) (giờ) Oramid Orabet Tolinase Meldian Diabinase Glyburid Maninin Glucotrol Diamicron 1 3 -5 6-12 1,5 4 -8 1 2 -2 4 1 2 -4 4 0 -6 0 1 4 -5 24 0,5 1 1 -3 3 -5 10-16 6-12 ❖ NhốmBiguanỉd Tác dụng làm tăng tính thấm của màng tế bào đối với Glucose tăng sử dụng Glucose ở tổ chức ngoại vi, làm giảm hấp thu Glucose ở ruột... GMBH-Germany ) c) Hoá chất và máy móc thí nghiệm - Các hoá chất thí nghiệm đạt tiêu chuẩn định lượng do bộ môn Hoá sinh cung cấp - Máy ly tâm Clay Adams - Máy đo mật độ quang UV-VIS (722-Tmng quốc) 2.1.2 Đối tượng nghiên cứu Chuột cống trắng đực, thuần chủng, khoẻ mạnh, trọng lượng từ 100-120g do Học viện Quân y cung cấp Chuột được chia thành các lô, mỗi lô 5 con 2.1.3 Phưotig pháp nghiên cứu [2,11,16,24,37] . hiện được tác dụng hạ đưòmg huyết của dịch chiết methanol toàn phần thân rễ Thổ Phục Linh trên chuột nhắt trắng [31, 25]. Để góp phần nghiên cứu cụ thể hơn tác dụng hạ Glucose huyết của vị thuốc. YTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI NGUYỄN THỊ CHIÊN GÓP PHẦN NGHIÊN cứu TÁC DỤNG HẠ 6LUCOSE HUYẾT CỦA HOẠT CHAT THÂN RỄ THỔ PHỤC LINH TRÊN CHUỘT CổN G TRẮNG THỰC NGHIỆM ( KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược sĩ KHOÁ. [36]. Nguyễn Ngọc Xuân nghiên cứu chứng minh tác dụng hạ GH của dịch chiết methanol toàn phần thân rễ Thổ phục linh trên các mô hình tăng GH thực nghiệm trên chuột nhắt trắng [25].