^ ^ B ộ Y TỂ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI oOo TRẦN THỊ LAN PHƯƠNG BƯỚC ĐẦU NGHIÊN cứu BÀI THUÓC THEO HƯỚNG TĂNG TUẦN HOÀN NÃO (khóa luận tốt nghiệp dược sỹ đại học khóa Người hướng dẫn : TS. Phùng Hòa Bình Người thực hiện : Trần Thị Lan Phương Thời gian thực hiện : 8/2006 - 6/2007 Hà Nội, thảng 6, 2007 . LỜI CẢM ƠN Với lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc, tôi xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành tới: TS. Phùng Hòa Bình, cán bộ giảng dạy Bộ môn Dược học cổ truyền- Trường Đại học Dược Hà Nội, người thầy trực tiếp hướng dẫn tôi tận tình, tạo mọi điều kiện thuận lợi và chỉ bảo giúp tôi những kiến thức quý báu trong quá trình thực hiện và hoàn thành khóa luận. Tôi xin trân trọng cảm ơn tới: Bộ môn Dược học cổ truyền- Trường Đại học Dược Hà Nội, DS Huyền và tập thể cán bộ phòng thí nghiệm trung tâm; DS Nguyễn Kim Phượng và tập thể cán bộ khoa Dược lý Sinh hóa- Viện Dược Liệu, DS Loan và tập thể cán bộ khoa Bào chế - Viện Dược Liệu, Thạc sĩ Chu Thế Ninh, Thạc sĩ Bùi Hồng Cưòng- Công ty Traphaco, đã giúp đỡ, hướng dẫn và tạo mọi điều kiện cho tôi trong quá trình nghiên cứu và hoàn thành khóa luận. Tôi xin trân trọng cảm ơn: Ban giám hiệu, các Bộ môn, Phòng, Ban cùng toàn thể các Thầy, Cô giáo trong trường Đại học Dược Hà Nội đã giảng dạy và truyền đạt những kiến thức quý báu, tạo mọi điều kiện thuận lợi cho tôi trong suốt thời gian học tập và nghiên cứu tại trưÒTig. Tôi xin chân thành cảm ơn tới: gia đình, người thân, bạn bè đã giúp đỡ và tạo mọi điều kiện, động viên tôi trong quá trình học tập và nghiên cứu , hoàn thành khóa luận. Tôi xin trân trọng cảm ơn! Hà nội, tháng 6 năm 2007 Trần Thị lan Phương QUY ƯỚC VIẾT TẮT TRONG KHÓA LUẬN Trong khóa luận CKBQ CT CTl CT2 CKPT CLĐS CLĐP DĐVN DL DĐTQ gDL/kgtt ĐP ĐS PTS TP TNTHNMT chúng tôi sử dụng một số từ viết tắt sau: ; Cao khô Bạch quả. : Công thức. : Công thức 1. : Công thức 2 : Cao khô Phụ tử. : Cao lỏng Đan sâm. : Cao lỏng Đan Phụ. : Dược điển Việt Nam. : Dược liệu : Dược điển Trung Quốc. : Liều thử tính cho 1 g dược liệu cho 1 kilogam thể trọng súc vật thí nghiệm. : Bài thuốc Đan Phụ. : Đan sâm. : Phụ tử sống. : Thành phần. : Thiểu năng tuần hoàn não mạn tính. MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN QUY ƯỚC VIẾT TẮT TRONG KHOÁ LUẬN ĐẶT VẤN ĐÈ 1 PHẦN 1: TỔNG QUAN 2 1.1. Sơ lược về bệnh thiểu năng tuần hoàn não 2 1.1.1. Quan điểm của Y học hiện đại 2 1.1.2. Quan điểm của Y học cổ truyền 5 1.2. CÁC VỊ THUỐC TRONG BÀI THUỐC ĐAN PHỤ 9 1.2.1. Phụ tử và cao khô Phụ tử 9 1.2.2. Đan sâm 14 1.3. Kỹ thuật bào chế viên nén 16 1.3.1. Tá dược 16 1.3.2 Phương pháp dập viên 17 1.3.3. Tiêu chuẩn viên nén 18 1.4 Một số chế phẩm tăng tuần hoàn não từ dược liệu hiện nay 18 PHẦN 2. THựC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 20 2.1. NGUYÊN LIỆU, PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1.1. Nguyên liệu, phương tiện 20 2.1.2. Phương pháp nghiên cứu 21 2.2. THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 24 2.2.1. Bào chế phương thuốc Đan Phụ 24 2.2.2. Kết quả nghiên cứu hóa học 24 2.2.3.Nghiên cứu tác dụng sinh học 32 2.2.4. Nghiên cứu bào chế viên nén 36 2.3.Bàn luận 42 2.3.1. Sự liên quan giữa YHHĐ với YHCT về bệnh thiểu năng tuần hoàn não 42 2.3.2. Lý do phối hợp 2 vị thuốc Đan sâm, Phụ tử 42 2.3.3. về thành phần hóa học 43 2.3.4.Tác dụng sinh học 43 2.3.5. về bào chế 43 KẾT LUẬN VÀ ĐÈ XUẤT 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC 1 : PHƯƠNG PHÁP XÁT HẠT, DẬP VIÊN PHỤ LỤC 2: TIÊU CHUẨN VIÊN NÉN ĐẶT VẤN ĐỀ Phụ tử là một vị thuốc quý của YHCT Phưong Đông nói chung và YHCT Việt Nam nói riêng.Theo quan điểm YHCT, Phụ tử là một vị thuốc hồi dương khứ phong nên thường được dùng trong các trường hợp dương hư như: thận dưoTig hư, chân tay co quắp, phong hàn tý thấp,mạch gần tuyệt [3][l]. Ngoài ra Phụ tử còn được chỉ định điều trị chứng “huyễn vựng”, “chóng mặt”, “choáng váng” [7],[18]. Nhiều công trình nghiên cứu cho thấy, Phụ tử có tác dụng cường tim làm tăng sức co bóp cơ tim, làm tăng lưu lượng máu qua động mạch vành tim, đồng thời làm giãn mạch ngoại vi [36] do đó cải thiện tuần hoàn toàn thân. Tuy nhiên, hiện nay chưa có công trình khoa học nào nghiên cứu tác dụng tăng tuần hoàn não của Phụ tử. Vì lý do đó chúng tôi thực hiện đề tài “Bước đầu nghiên cứu bài thuốc theo hướng tăng tuần hoàn não”, phối họp Phụ tử với Đan sâm - một dược liệu hoạt huyết - nhằm khảo sát bằng thực nghiệm tác dụng của bài thuốc trên tuần hoàn não đồng thời bước đầu nghiên cứu thăm dò dạng bào chế thích hợp thuận tiện sử dụng. Muc tiêu đề tài • • Định tính, định lượng thành phần hoá học chính của bài thuốc. • Thăm dò tác dụng của bài thuốc theo hướng tăng tuần hoàn não. • Nghiên cứu thăm dò dạng bào chế viên nén. Thực hiện 3 mục tiêu trên chúng tôi tiến hành các nội dung sau: ■Bào chế cao lỏng Đan Phụ. ■Định tính, định lượng thành phần hóa học chính của bài thuốc. ■ Thăm dò lưu lượng máu lên não của bài thuốc thông qua đo lưu lượng máu qua động mạch cảnh mèo. ■Bào chế viên nén. PHẦNl TỔNG QUAN 1.1 Sơ lược về bệnh thiểu năng tuần hoàn não. 1.1.1 Quan điểm của Y học hiện đại. 1.1.1.1 Lưu lượng máu não và các yếu tố ảnh hưởng. Tuần hoàn não được cung cấp bởi 4 động mạch lớn[20]: + Hai động mạch cảnh trong xuất phát từ 2 động mạch cảnh gốc cung cấp máu cho 2/3 trước bán cầu đại não [20’. + Hai động mạch thân nền cung cấp máu cho 1/3 bán cầu đại não và thân não [20]. Bình thường lưu lượng máu não khoảng 700-750 ml/phút, bằng 14 - 15% lưu lượng tim. Nếu tính theo ml/lOOg/phút thì lưu lượng máu não bằng 50 - 55ml/100g/phút( đo theo phương pháp Ketty và Schmidt).[8; Lưu lượng máu não rất ổn định, ít thay đổi trên cùng một người và giữa người này với người khác. Tuy nhiên lưu lượng máu não giảm dần theo tuổi, ở người lớn hơn 60 tuổi, lưu lượng máu não giảm rõ và có thể xuống tới 3 6ml/ 1 OOg/phút. [8’ Các yếu tố ảnh hưởng tói lưu lượng máu não Lưu lượng máu não phụ thuộc chủ yếu vào huyết áp và sức cản mạch máu theo công thức[8]: D=p/R Trong đó D: Lưu lượng máu não. P: Huyết áp. R: Sức cản thành mạch. Lưu lượng máu não tăng khi huyết áp tăng hoặc giãn mạch, Lưu lượng giảm nếu có hạ huyết áp hoặc co mạch. Ngoài ra lưu lượng máu não quan hệ mật thiết với chuyển hóa của mô não. Trong đó, 3 yếu tố quan trọng là : nồng độ CO2, O2. Ngoài ra lưu lượng máu não giảm khi thành mạch bị xơ cứng, dầy thành mạch. [8] 1.1.1.2. Nguyên nhân và cơ chế bệnh sinh Bệnh thiểu năng tuần hoàn não do các nguyên nhân chủ yếu sau > Bệnh nội tại trong lòng mạch: thiểu năng tuần hoàn não ở người có tuổi và người trung niên thường do xơ vữa động mạch, các mảng xơ vữa gây loét, lóp áo trong mạch trở nên thô ráp tạo điều kiện thuận lợi cho tiểu cầu bám vào làm hẹp dần động mạch và rối loạn huyết động gây hiện tượng thiếu máu cục bộ ở não [16]. Ngoài ra viêm động mạch hoặc dị dạng mạch não cũng có thể gây thiếu mãu nuôi não.[28] > Bệnh gây chèn ép mạch máu bên ngoài: thoái hóa xương, khớp, đĩa đệm ở cột sống cổ có thể gây thiểu năng tuần hoàn động mạch sống nền. Theo nhiều tác giả, hơn 80% số người trên 55 tuổi bị tổn thương cột sống cổ có biểu hiện thiểu năng tuần hoàn não. Ngoài ra khi bị chấn thưong đốt sống cổ chèn ép từ bên ngoài do u, ung thư cũng dẫn đến thiểu năng tuần hoàn não.[28] > Các bệnh toàn thân: huyết áp thấp, thiếu máu.[28' l.LLS.Triệu chứng lâm sàng Triệu chứng lâm sàng của TNTHNMT rất phong phú và xuất hiện sớm. Tuy nhiên TNTHNMT có nhiều biểu hiện khác nhau tùy vào vùng não bị thiếu máu. Dưới đây là một số triệu chứng chung và phổ biến nhất. - Bệnh nhân cảm thấy mau già hơn, da khô, tóc rụng nhiều, không được hoạt bát nhanh nhẹn như trước, nhanh mệt mỏi. [23' - Nhức đầu gặp trên 91% bệnh nhân bị xơ vữa động mạch não giai đoạn sớm, nhức đầu có tính chất lan tỏa, có cảm giác đầu luôn căng, nặng, u ám, không được nhẹ nhõm thanh thoát.[23^ - Chóng mặt: gặp trên 87% bệnh nhân. Bệnh nhân luôn có cảm giác bồng bềnh, thấy mọi vật quay xung quanh mình đặc biệt là khi thay đổi tư thế, xoay đầu. [23] - Dị cảm: là triệu chứng sớm, bệnh nhân có cảm giác tê bì, kiến bò, tê mỏi chân tay, ù tai.[23] - Rối loạn về giấc ngủ: hay gặp, bệnh nhân ngủ không sâu, hay mộng mị, có người mất ngủ hoàn toàn. [23] - Rối loạn về tri giác, rối loạn về tập trung, giảm sút trí nhớ, giảm khả năng tư duy, sáng tạo [23’ 1.1.1.4 Điều trị. Điều trị TNTHNMT hiện nay ở Việt Nam và trên Thế giới chủ yếu bằng nội khoa bao gồm 2 biện pháp: biện pháp dùng thuốc và không dùng thuốc. - Biện pháp không dùng thuốc: đây là biện pháp vừa mang tính điều trị vừa mang tính dự phòng nhằm hạn chế các yếu tố nguy hại, hoặc các yếu tố làm nặng thêm bệnh TNTHNMT như: tăng huyết áp, tăng cholesterol máu Ba biện pháp chủ yếu: chế độ ăn, chế độ luyện tập, chế độ lao động [23]. - Biện pháp dùng thuốc: hiện nay có rất nhiều thuốc được sử dụng trong điều trị TNTPỈNMT nhưng theo hóa học người ta chia các thuốc thành 4 nhóm chính[23],[9]: • Nhóm 1: gồm các chất hữu cơ tổng hợp có tác dụng giãn cơ (Cyclandelat,stugeron ) các chất ức chế a giao cảm(Bencyclan,.), các chất kích thích p giao cảm(Pipratecol, Isoxsupril ). • Nhóm 2: gồm các chất có nguồn gốc sinh học: Nicyl, Bradilan, Vasocalm • Nhóm 3: gồm các chất có nguồn gốc thực vật. Nhóm này có ưu điểm là có thể dùng lâu dài, ít tích lũy, ít tác dụng phụ. Những thuốc hay dùng là: Rutine, Vinca mtine, Cavinton, Tanakan. • Nhóm 4 : các chất khác như Agyrax, Suloctidil 1.1.2 Quan điểm của Y học cổ truyền. Y học cổ truyền mô tả triệu chứng của bệnh TNTHNMT trong các chứng “đầu thống”, “huyễn vựng”, “thất miên”,[5],[7],[18],[27]. Theo YHCT đầu là nơi dương khí hội tụ, khí thanh dưong của lục phủ, tinh hoa của huyết ở ngũ tạng hội tụ ở đó. Vì vậy bất luận là do tà khí ngoại cảm hay do nội thương bất túc làm ứ kinh mạch làm cho khí thăng dương không được thư thái đều sinh ra chứng “đầu thồng”, “ huyễn vựng”[7]. Dựa trên cơ sở bệnh sinh, YHCT chia chứng “huyễn vựng” thành một số thể bệnh sau đây: - Thể tỳ hư đàm trệ [5],[7],[18’. - Thể khí huyết lưỡng hư [5],[7],[18'. - Thể can thận âm hư [7],[18],[27’. - Thể can dương thượng cang[5],[3 ĩ . - Thể thận tinh bất túc [31 ]. 1.1.2.1. Thể tỳ hư đàm trệ. • Nguyền nhân: tỳ vị là cơ quan vận hóa thức ăn, hấp thu dinh dưỡng. Khi tỳ vị đàm trệ, giảm vận hóa, đàm trọc sinh ra do ăn uống quá nhiều chất dinh dưỡng gây hại đến tỳ vị. Thức ăn không hóa thành tân dịch mà biến thành đàm thấp khiến thanh dương không thăng, trọc âm không giáng gây “huyễn vựng”, “đầu thống”.[7],[18]. • Triệu chứng: đối với thể tỳ hư đàm trệ bệnh nhân luôn cảm thấy đau đầu, căng, choáng, tối sầm mặt mày, người mệt mỏi, nặng nề mà bụng luôn đầy, buồn nôn, chán ăn, rêu lưỡi mỏng, mạch trầm [7],[18'. • Điều trị: kiện tỳ, táo thấp, tiêu đàm.[7],[18]. [...]... máu não trước khi truyền thuốc Vt: lưu lượng máu não sau khi truyền thuốc X: tỷ lệ (%) tăng lưu lượng máu não sau khi truyền thuốc so với trước khi truyền thuốc Thuốc có tác dụng khi Vs >Vt (P< 0.05) 3) X ử lý kết quả thực nghiệm: Số liệu được xử lý theo phương pháp thống kê toán học Kiểm định sự khác biệt giữa hai giá trị trung bình bằng test Studen (test T).[15] Khoảng tin cậy được xác định theo. .. bình của tỷ lệ (%) tăng lưu lượng tuần hoàn qua động mạch cảnh so với trước khi tiêm thuốc của mẫu nghiên cứu trên lô nghiên cứu SE là sai số chuẩn ở ngưỡng 95%, khi p > 0.05 hai giá trị trung bình khác nhau không có ý nghĩa thống kê, khi p < 0.05 hai giá trị trung bình khác nhau có ý nghĩa thống kê (trợ giúp bởi phần mềm Microsolf excel) 2.L2.4 Nghiên cứu về bào chế - Bào chế viên nén theo phương pháp... • Bài thuốc Đan Phụ(ĐP); khi sử dụng ta phối hợp CLĐS với Cao khô Phụ tử theo tỷ lệ trên 2.2.2 Kết quả nghiên cứu hóa học 2.2.2.1 Chuẩn bị mẫu nghiên cứu Mầu 1: Cao khô Phụ tử (CKPT): Ig Mầu 2 : Bài thuốc Đan Phụ (ĐP)(chứa tương ứng Ig Cao khô Phụ tử) Mầu 3 : Đan sâm (ĐS) : 7g Mau 4 : Phụ tử sống (PT S): Ig 2.2.2.2 Đinh tỉnh 1) Định tính alkaloid a)Định tính bằng thuốc thử chung của alkaloid ■Mầu nghiên. .. Methyl 2.1.2.3 Nghiên cứu tác dụng sinh học: 1) Thử tác dụng trên động mạch cảnh mèo - Nguyên tắc: đo trực tiếp lưu lượng máu chảy qua động mạch cảnh mèo đã gây mê So sánh lưu lượng máu chảy qua động mạch cảnh trước và sau khi truyền thuốc Đan phụ Nếu lưu lượng máu sau khi truyền thuốc lớn hơn lưu lượng máu trước khi truyền thuốc tức là thuốc có tác dụng tăng tuần hoàn động mạch cảnh Chỉ tiêu theo dõi:... đó phù họp với cơ chế điều trị bệnh thiểu năng tuần hoàn não ■Đan sâm có tác dụng giãn mạch vành, tăng lưu lượng tuần hoàn, giảm Cholesterol và xơ vữa động mạch do đó khi phối hợp hai vị thuốc với nhau dự đoán có khả năng làm tăng lưu lượng máu não tức thời, đồng thời làm giảm nguy cơ xơ vữa động mạch và huyết khối- một nguyên nhân làm giảm lưu lượng máu não- nên có tác dụng phòng và điều trị lâu dài... -> 300.00 Hình 2.5 Phổ ú v alkaloid của bài thuốc Đan-Phụ Nhận xét: - Phổ u v alkaloid Phụ tử sống có cực đại hấp thụ ở bước sóng kmax =232nm - Phổ u v alkaloid phụ tử cao khô có cực đại hấp thụ ở bước sóng > -niax =232nm và >,niax'^274nm - Phổ u v alkaloid của bài thuốc Đan Phụ có cực đại hấp thụ ở bước sóng > =232nm và )tn,ax=274nm u„,ax - Kết quả nghiên cứu phù hợp với công bố của các tác giả[13]... cao lỏng bạch quả 40mg Dạng thuốc: viên nén Nhận xét chung: ■Thiểu năng tuần hoàn não có nhiều nguyên nhân Theo YHHĐ do huyết áp cao, huyết áp thấp, giảm sức co bóp cơ tim, thoái hóa đốt sống cổ gây chèn ép mạch máu, xơ vữa động mạch Theo YHCT do can thận âm hư, khí huyết lưỡng hư, tỳ hư đàm trệ ■Phụ tử có tác dụng làm tăng co bóp cơ tim, giãn mạch ngoại vi, do đó có thể làm tăng lưu lượng máu qua động... điểm 5 phút trước truyền và sau truyền thuốc Chỉ tiêu đánh giá: + So sánh lưu lượng máu qua động mạch cảnh (ml/phút) trước khi bơm thuốc và sau khi bơm thuốc qua đưòng tĩnh mạch cảnh mèo bằng test T + So sánh tỷ lệ (%) tăng lun lượng máu qua động mạch cảnh của bài thuốc Đan Phụ với mẫu Tanakan Tỷ lệ (%) tăng lưu lượng máu (ml) qua động mạch cảnh sau so với trước tính theo công thức: X Vs- Vt = _ 1 _ Vt... riêng cao khô phụ tử) có phản ứng âm tính với thuốc thử Nessler 2.2.2.3.Định lượng alkaloỉd Áp dụng phương pháp của Dược điển Trung Quốc có cải tiến để định lượng alkaloid trong cao khô Phụ tử • Mầu nghiên cứu: mẫu CKPT • Chiết xuất: Xác định hàm ẩm của mẫu nghiên cứu bằng cân xác định độ ẩm tự động Cân chính xác mẫu nghiên cún đã xác định hàm ẩm Cho mẫu nghiên cứu vào bình nón có nút mài dung tích 150ml... dụng + Thuốc Tanakan viên nén hàm lượng 40mg cao khô bạch quả, sản phẩm của công ty Beaufour Ipsen pharma, Pháp - Súc vật thí nghiệm Mèo trưởng thành, khỏe mạnh, cả hai giống, trọng lượng từ 2 đến 2 2kg/con 2.1.2 Phương pháp nghiên cứu 2.1.2.1 Xây dựng phương thuốc Đan Phụ Công thức: Đan sâm 200g Cao khô Phụ tử 30g 2.1.2.2 Nghiên cứu về hỏa học 1) Định tính a) Định tính alkaloid - Định tính bằng thuốc . công trình khoa học nào nghiên cứu tác dụng tăng tuần hoàn não của Phụ tử. Vì lý do đó chúng tôi thực hiện đề tài Bước đầu nghiên cứu bài thuốc theo hướng tăng tuần hoàn não , phối họp Phụ tử. Dược HÀ NỘI oOo TRẦN THỊ LAN PHƯƠNG BƯỚC ĐẦU NGHIÊN cứu BÀI THUÓC THEO HƯỚNG TĂNG TUẦN HOÀN NÃO (khóa luận tốt nghiệp dược sỹ đại học khóa Người hướng dẫn : TS. Phùng Hòa Bình Người thực. của bài thuốc trên tuần hoàn não đồng thời bước đầu nghiên cứu thăm dò dạng bào chế thích hợp thuận tiện sử dụng. Muc tiêu đề tài • • Định tính, định lượng thành phần hoá học chính của bài thuốc. •