BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI • • • • — OÌSO — NGUYỄN THANH XUÂN ^^(ỈH1ÊK CỨU XÂY Dựìv« TIĨỈU CIIVẨIV KIỂM !V«lfIỆ»l VỊ 1'HUỐ€ • • • HÀ THỦ 0 TRẮNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Dược s ĩ KHO Ả 2002- 2007 Người hướng dẫn Nơi thực hiện : QtạíẨựễrL (V tũ ‘^ k â tt ể n à r t li Ề tí Thời gian thực hiện : 02/2007 - 05/2007 HÀ NỘI, 05/2007 LỜ3 c á m Ơ R Trong quá trình thực hiện đề tài này tôi đã nhận được sự quan tâm giúp đỡ tận tình của các thầy cô giáo, các anh chị trong các bộ môn của trường. Với lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc, tôi xin trân trọng cảm cm TS. Nguyễn Viết Thân Người thầy đã trực tiếp hướng dẫn tận tình cho tôi trong suốt quá trình thực hiện và hoàn thành luận văn này. Tôi cũng xin bày tỏ lời cảm ơn trân trọng tới gia đình, thầy cô và bè bạn, những người luôn ở bên cạnh động viên, tạo điều kiện thuận lợi, giúp đỡ tôi hoàn thành luận văn này. Hà Nội, ngày 20 tháng 5 năm 2007. sv. NGUYỄN THANH XUÂN MỤC LỤC Trang ĐẶT VẤN ĐỀ 1 PHẦN 1. TỔNG QUAN 2 1.1. Vị trí phân loại cây Hà thủ ô trắng 2 1.2. Đặc điểm thực vật cây Hà thủ ô trắng 2 1.2.1. Đặc điểm thực vật và phân loại thực vật họ Thiên lý 2 1.2.1.1. Đặc điểm thực vật họ Thiên lý. 2 1.2.1.2. Phân loại thực vật họ Thiên lý. 3 1.2.2. Đặc điểm thực vật và phân loại thực vật chi Streptocaulon 5 1.2.2.1. Đặc điểm thực vật chi Streptocaulon. 5 1.2.2.2. Phân loại thực vật chi Streptocaulon. 5 1.1.3. Đặc điểm thực vật loài s. juventas 6 1.3. Thành phần hoá học rễ Hà thủ ô trắng. 7 1.4. Phân bố và sinh thái. 7 1.5. Bộ phận dùng. 8 . 1.6. Tác dụng dược lý và công dụng. 8 1.6.1. Tác dụng dược lý. 1.6.2. Công dụng. PHẦN 2. THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 10 2.1. Nguyên liệu và phương pháp nghiên cứu. 10 2.1.1. Nguyên liệu. 10 2.1.2. Phương pháp nghiên cứu 10 2.1,2.1. Xử lý và bảo quản mẫu. 10 2.1.2.2. Nghiên cứu đặc điểm hình thái bên ngoài, 10 2.1.2.3. Nghiến cứu đặc điểm vi học. 10 2.1.2.4. Nghiên cứu về hoá học bằng sắc ký lớp mỏng. 11 2.1.2.5. Xác định vết Saponin trên sắc ký đồ bằng phương pháp 13 Gelatin huyết. 2.1.2.6. Xác định độ ẩm của dược liệu bằng phương pháp sấy. 14 2.1.2.7. Xác định tro toàn phần trong dược liệu. 14 2.1.2.8. Xác định phần trăm tạp chất trong dược liệu. 15 2.2. Kết quả thực nghiệm 15 2.2.1. Đặc điểm hình thái bên ngoài 15 2.2.1.1. Mô tả cây 15 2.2.1.2. Mô tả dược liệu 16 2.2.2. Đặc điểm vi học. 15 2.2.2.1. Đặc điểm vi học lá 16 2.2.2.2. Đặc điểm vi học thân, 16 2.2.23. Đặc điểm vi học rễ. 17 2.2.3. Định tính hoá học bằng sắc ký lớp mỏng. 18 2.2.4. Định tính xác định vết Saponin bằng phương pháp Gelatin- 25 huyết. 2.2.5. Định tính Glycosid tim trong rễ bằng phản ứng hoá học 25 2.2.6. Kết quả xác định độ ẩm. 26 2.2.7. Kết quả xác định tro toàn phần. 26 2.2.8. Kết quả xác định phần trăm tạp chất. 27 PHẦN 3. KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XUẤT 30 ĐẶT VẤN ĐỂ Dược điển Việt Nam là công cụ, cơ sở pháp lý cho việc kiểm nghiệm dược liệu, góp phần nâng cao hiệu quả việc sử dụng thuốc đông dược. Hiện nay, Dược điển Việt Nam III có khoảng 310 chuyên luận dược liệu, so với số lượng dược liệu được sử dụng làm thuốc (khoảng 500 vị dược liệu thông dụng) thì con số này còn hạn chế. Hà thủ ô trắng là vị thuốc đã được nhân dân ta sử dụng từ lâu. Tuy nhiên, việc kiểm nghiệm dược liệu này lại gặp không ít khó khăn do chưa có chuyên luận trong Dược điển. Để tạo điều kiện thuận lợi cho công tác kiểm nghiệm dược liệu này, chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài: " Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm vị thuốc Hà thủ ô trắng", với mục tiêu: - Xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm vị thuốc Hà thủ ô trắng cho DĐVNIV. - Hình ảnh hoá, lượng hoá các dữ liệu về vị thuốc trong quá trình kiểm nghiệm tạo điều kiện cho việc kiểm nghiệm dễ dàng và chính xác hơn, Nội dung khoá luận: - Thành lập tiêu chuẩn về đặc điểm hình thái bên ngoài, đặc điểm hiển vi của vị thuốc (gồm đặc điểm vi phẫu và đặc điểm bột). - Thành lập một số tiêu chuẩn hoá học của vị thuốc: + Sắc ký đồ của dịch chiết dược liệu trong một số điều kiện nhất định. + Định tính nhóm chức chính trong dược liệu. - Thành lập một số tiêu chuẩn khác: Độ ẩm, tỷ lệ tro toàn phần và tạp chất có trong dược liệu. PHẦN 1: TỔNG QUAN 1.1. Vị trí phân loại cây Hà thủ ô trắng. Theo hệ thống phân loại Takhtajan 1987 : Hà thủ ô trắng thuộc loài (juventas), chi (Streptocaulon), họ Thiên lý (Asclepiadaceae), bộ Long đởm {Gentianales), liên bộ Long đởm (Gentiananae), phân lớp Hoa môi (Lamiidae), lớp Ngọc lan (Magnoliopsida), ngành Ngọc lan (Magnoỉiophyta), giới thực vật (Pỉantae). Giới thực vật (Plantae) Ngành Ngọc lan (Magnoliophyta) Lớp Ngọc lan (Magrolỉopsìda) Phân lớp Hoa môi (Lamiidae) Liên bộ Long đởm (Gentiananae) Bộ Long đởm {Gentianales) Họ Thiên lý (Ascỉepidaceae) Chi Streptocaulon Loài juventas 1.2. Đặc điểm thực vật cây Hà thủ ô trắng. 1.2.1. Đặc điểm thực vật và phân loại thực vật họ Thiên lý. 1.2.1.1. Đặc điểm thực vật họ Thiên lý. Theo sách Thực vật dược, họ Thiên lý có các đặc điểm sau: Cây thường là dây leo, cây thảo nhiều năm, cây bụi, ít khi là cây gỗ. Toàn cây có nhựa mủ. Lá đơn nguyên, thưcmg mọc đối, đôi khi mọc vòng. Không có lá kèm, Cụm hoa thưcmg là xim có khi là chùm hoặc trông như tán. Hoa đều, lưỡng tính, mẫu 5: 5 lá đài dính nhau ở gốc thành ống ngắn, 5 cánh hoa dính lion thành hình ống, tiền khai hoa vặn, thường có phần phụ ở mặt trong và có tuyến mật, 5 nhị, bao phấn dính vói núm nhụy hình khối 5 mặt. Hạt phấn dính liền tạo thành khối 4 hạt phấn (tetrad) hoặc thành khối phấn có chuôi và gót dính để dính vào sâu bọ, chúng sẽ đưa khối phấn này sang hoa khác để thụ phấn cho hoa sau. Bộ nhụy gồm 2 lá noãn, bầu trên, rời nhau ở bầu và vòi, dính nhau ở núm nhụy, nhiều noãn. Quả gồm 2 đại. Hạt thường có mào lông ở một đầu [4]. I.2.I.2. Phân loại thực vật họ Thiên lý. Theo sách Thực vật dược, họ Thiên lý có 240 chi, 2000 loài. Phân bố chủ yếu ở vùng nhiệt đối, cận nhiệt đói, một số ít ở ôn đới, ở Việt Nam có gần 50 chi, khoảng 110 loài. Theo Phạm Hoàng Hộ, họ Thiên lý gồm các chi: Chi Asclepias. ơii Atherandra. Chi Atheropsis. Chi Calotropis. Chi Campestigma. Chi Ceropegia. ơii Cosmostigma. Chi Cryptolepsis. Chi Cryptostegia. Chi Cynanchum. Chi Harmandiella. ơ ii Hemidesmus. ơ ii Dischidia. Chi Dregea. Chi Finlaysonia. Chi Fockea. Chi Genianthus. Chi Gomphocarpus, Chi Gongronema, ơ ii Gymnema. Chi Gymnanthera, Chi Gymnemopsis. Chi Sacolobus. Chi Sarcostemma. Chi Heterostemma. Chi Secamone . Chi Hoya. Chi Spirella. Chi Marsdenia, Chi Stapelia. Chi Oxystelma. Chi Streptocaulon. Chi Pentasacme. Chi Telactadium. Chi Pentatropis. Chi Telosma. Chi Periploca. Chi Toxocarpus. Chi Pilostigma. Chi Tylophora. Chi Pseudosacolobus. Chi Vincetoxocopsis. Chi Raphistemma. Qii Zygostelma.[12] Theo Thực vật chí Đông Dương , họ Thiên lý còn có thêm các chi; Oii Atherolepis. ơ ii Brachystelma. ơ ii Leptadenia. ơ ii Myriopteron. Chi Pergularia. Chi Pseudopentatropis. [19] 1.2.2. Đặc điểm thực vât và phân loại thực vật chi Streptocaulon: I.2.2.I. Đặc điểm thực vật chi Streptocaulon: Cỏ hay cây bụi leo. Lá mọc đối. Cụm hoa xim các chuỳ, tam phân, không cuống hay có cuống theo trật tự khác nhau, thường có lông mềm, ở nách những lá mọc đối và ở ngọn; cuống hoa thường có lông nhung; nụ rất nhỏ, hoa rất nhỏ. Đài nhỏ chia 5, với 5 vẩy ở gốc phía trong, Tràng hình bánh xe; ống rất ngắn, thuỳ hình trái xoan, hd phủ sang bên phải. Tràng phụ gồm có 5 sợi đính trên lưng của các chỉ nhị. Nhị đính ở gốc của tràng, chỉ nhị ngắn, xen kẽ với các tuyến nhỏ, bao phấn thuôn, dính ở đỉnh của vòi nhuỵ lõm ở giữa, phần phụ trung đới nhỏ, dính ở đỉnh của vòi. Chuôi gồm những tuyến dính gắn gần đỉnh của vòi nhuỵ; khối phấn 2 trong mỗi ô, gồm những hạt lớn chứa mỗi cái 3-4 hạt phấn xếp thành hàng hay tứ tử. Nhuỵ gồm 2 lá noãn, rời; vòi nhuỵ ngắn, đầu nhuỵ có 5 góc. Quả gồm 2 quả đại, có lông mềm; hạt dẹp, mang một mào lông mềm; vỏ mỏng, phôi nhũ hẹp; lá mầm xoan thuôn [4]. I.2.2.2. Phân loại thực vật chi Streptocaulon: Theo tài Chi Streptocaulon gồm 5 loài ở vùng Ấn độ- Mã Lai. ở nước ta có 4 loài trong đó có vài loài thông dụng. Theo Thực vật chí Đông Dương, trên thế giới có thêm 2 loài: s. wallichii Wight: Bạc căn Wallich. s. tomentosum Wight. [19] Bảng 1: Các loài thuộc chi Streptocaulon phân bố ở Việt Nam. Tên khoa học Tên Việt Nam Phân bố s. grijfithii Hà thủ ô Griffith Cúc Phưcỉng- Ninh Bình s. juventas Hà thủ ô trắng Hà Bắc, Quảng Ninh, Bắc Thái, Vĩnh Phú, Nghệ An. s. horsfieldii Bạc căn Horsfield Phước Tuy, Châu Đốc. s. kleiìĩii Bạc căn Klein. Phan Rang, Phan Thiết, Vũng Tàu. 1.2.3. Đặc điểm thực vật loài Streptocaulon juventas. Theo Cây thuốc và động vật làm thuốc ở Việt Nam, Hà thủ ô trắng còn có tên gọi khác: Củ vú bò, dây sữa bò, cây sữa bò, dây mốc, mã liên an, khâu nước, khâu cần cà (Tày), chừa ma sin (Thái), xạ ú pẹ (Dao), sân rạ, zờ nạ (K’Ho), pắt (K’Dong), có đặc điểm thực vật là: Dây leo, bằng thân quấn, dài hàng mét. Thân màu nâu đỏ sẫm hoặc nâu nhạt, có nhiều lông, dày hơn ở ngọn non, ít phân nhánh. Lá mọc đối, hình trứng ngược, gốc tròn hoặc hơi hình nón cụt, đầu nhọn, dài 8-14 cm, rộng 4-9 cm, mặt trên xanh sẫm ít lông, mặt dưới trắng nhạt phủ lông rất mịn; cuống lá ngắn, có nhiều lông. Cụm hoa mọc ở kẽ lá thành xim phân đôi; hoa nhỏ màu vàng nâu; đài có 5 răng thuôn, có lông; tràng hình chuông gồm 5 cánh hình mác dài gấp 3 lần lá đài; nhị dính liền thành khối. Quả là 2 đại, toả ra như sừng bò, mỗi đại dài 7-9 cm, rộng 5-6 cm, thuôn nhọn ở đầu, khi chín màu vàng nâu, có nhiều lông; hạt nhỏ, dẹt, có chùm lông trắng mịn.Toàn cây có nhựa mủ.[18] 1.3. Thành phần hoá học của rễ Hà thủ ô trắng. Theo một số tài liệu, rễ Hà thủ ô trắng có nhiều tinh bột và alcaloid [14] [15] [18]. Theo bài viết của một số tác giả thuộc Viện y học tự nhiên Trường đại học y dược Toyama và trường đại học y dược Thành phố Hồ Chí Minh cho rằng dịch chiết trong Methanol của rễ cây Hà thủ ô trắng chứa 16 Cardenolid bao gồm 5 loại mới: Acovenosigenin A 3-O-ß- digitoxipyranosid (1), digitoxigenin gentiobioside (2), digitoxigenin 3-0-[0-ß-glucopyranosyl- (l->6)-0-ß-glucopyranosyl-(l->4)-3-0-acetyl-ß-digitoxopyranosid] (3), digitoxigenin 3-0-[0-ß- glucopyranosyl-( 1 ^6)-0-ß-glucopyranosyl-( 1 ->4)- 0-ß-digitalopyranosyl-(1^4)- ß-cymaropyranoside] (4), và periplogenin 3-0- (4-0-ß-glucopyranosyl-ß-digitalopyranoside) (5), và 2 hemiterpenoid mới, (4R)-4-hydroxy-3-isopropylpentyl ß-rutinoside (6) và (R)-2- ethyl- 3- [...]... xác tạo thành dữ liệu cơ sở cho việc xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm vị thuốc Hà thủ ô trắng Các phương pháp được sử dụng: Cảm quan, hiển vi, sắc ký ”dấu vân tay” Đề xuất; 1: Hà thủ ô trắng là một vị thuốc được sử dụng phổ biến hiện nay, thường được phối hợp chung với Hà thủ ô đỏ tạo thành vị thuốc Hà thủ ô do đó cần xây dựng tiêu chuẩn đưa vào Dược điển Việt Nam IV để quản lý, kiểm nghiệm vị thuốc này... chúng tôi đưa ra phần trăm tạp trong dược liệu khô là không quá 0.5% Từ các kết quả trên, chúng tôi đưa ra tiêu chuẩn cho vị thuốc Hà thủ ô trắng: HÀ THỦ Ô TRẮNG (Rễ) Radix Streptocauli Juventatis Rễ phơi hay sấy khô của cây Hà thủ ô trắng (Streptocaulon juventas (Lour) Merr.), họ Thiên lý (Asclepiadaceae) Mô tả Rễ tròn, dài, không đều, củ nhỏ để nguyên, củ to bổ đôi theo chiều dọc sau đó chặt thành... biểu diễn và bảng số liệu các thông số của sắc ký đồ của dịch chiết Hà thủ ô trắng trong Cloroform quan sát ở ánh sáng trắng sau khi phun thuốc thử hiện màu (ảnh 8) -4 1.1 1.3 1.2 1.4 Chú thích Hình 1.1& 1,2: Cây Hà thủ ô ữắng Hình 1.3: Dược liệu Hà thủ ô trắng Hình 1.4: Vi phẫu rễ Hà thủ ô trắng 2.2 2.1 oT r 4.‘ » V ^ t f 1 'ỉ < í : y -t i Chú thích vi phẫu Hà thủ ô trắng Hình 2.1: Vi phẫu thân Hình... hành nghiên cứu xây dựng một số tiêu chuẩn khác (dư lượng thuốc bảo vệ thực vật, dư lượng đồng vị phóng xạ) nếu đưa cây vào trồng trọt 3: Mở rộng ứng dụng phương pháp sắc ký lớp mỏng vói kỹ thuật hiện đại trong kiểm nghiệm dược liệu về mặt hoá học 4: Đề nghị các cơ quan chức năng quan tâm hơn đến công tác kiểm nghiệm dược liệu, đầu tư nhân lực, vật lực cho công tác nghiên cứu, xây dựng tiêu chuẩn kiểm. .. Rễ Hà thủ ô trắng có tác dụng thanh nhiệt giải độc, chữa cảm sốt, viêm ruột, ỉa chảy, viêm thận mãn tính, đau vùng tâm vị, bị thương sưng đau, làm thuốc lợi sữa Hà thủ ô trắng còn dùng chữa thiếu máu, thận gan yếu, thần kinh suy nhược, ăn ngủ kém, đau nhức gân xương, kinh nguyệt không đều, bạch đới, râu tóc bạc sớm, bệnh ngoài da mẩn ngứa Ngày 12-20g dạng thuốc sắc cao hoặc rượu thuốc Lá Hà thủ ô trắng. .. thành ống nghiệm Iml dung dịch H2SO4 đặc để dịch lọc trong ống nghiệm chia thành 2 lớp Thấy xuất hiện vòng tròn tím đỏ ở mặt phân cách giữa hai lớp chất lỏng Độ ẩm Không quá 13% Tạp chất Không quá 0.5% Tro toàn phần Không quá 5% PHẦN 3: KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XUẤT Sau khi tiến hành đề tài, chúng tôi đã xây dựng được hệ thống các tiếu chuẩn của dược liệu Hà thủ ô trắng Cụ thể: 1 Về đặc điểm hình thái: Đã mô tả và... đái buốt Rễ hoặc lá Hà thủ ô trắng, nhai nuốt nước, bã đắp chữa rắn cắn Còn dùng lá và cành đun nước tắm và rửa để chữa lở ngứa Có thể phối hợp với lá Ngải cứu Không dùng Hà thủ ô trắng đối vói người hư yếu, tạng lạnh, đồng thời kiêng ăn tiết lợn, cá lưofn, rau cải, hành tỏi [6] PHẦN 2 : THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 2.1 Nguyên liệu và phương pháp nghiên cứu 2.1.1 Nguyên liệu Mẫu nghiên cứu được thu hái trực... khô ở nhiệt độ < 60°c, bảo quản noi khô ráo 2.1.2.2 Nghiên cứu đặc điểm hình thái bên ngoài - Mô tả đặc điểm cây dược liệu Cây dược liệu được chụp ảnh, mô tả đặc điểm tại noi thu hái trực tiếp - Mô tả đặc điểm dược liệu Các mẫu nghiên cứu được chụp ảnh, mô tả tỉ mỉ về hình dạng, kích thước, màu sắc, thể chất, mùi vị 2.1.2.3 Nghiên cứu đặc điểm vi học - Nghiên cứu đặc điểm vi phẫu của dược liệu Tiến hành... rễ con, phơi hay sấy khô Rễ giống củ sắn, mặt ngoài màu trắng ngà 1.6 Tác dụng và công dụng 1.6.1 Tác dụng dược lý Theo tài liệu Cây thuốc và động vật làm thuốc, Hà thủ ô trắng có tác dụng nâng cao tỷ lệ sống hoặc kéo dài thời gian cầm cự đốỊ với động vật đã tiêm liều độc nọc rắn hổ mang và tác dụng ức chế sự co thắt cơ trơn ruột cô lập gây bỏfi Histamin và Acetylcolin Hà thủ ô trắng có độc tính thấp,... địch chiết rễ Hà thủ ô tì*ắng ở ánh sáng trắng sau khi phun thuốc thử Name 2.2.4 Định tính xác định vết Saponin bằng phương pháp Gelatỉn-huyết Kết quả thu được 2 vết phá huyết ttên bản mỏng sắc ký như hình sau: Hình 9: Bản mỏng phá huyết và bản mỏng sắc ký ở bước sóng Uv366 nm của dịch chiết rễ Hà thủ ô trắng Nhận xét: ở hệ dung môi Cloroform : Ethylacetat (9:1), dịch chiết rễ Hà thủ ô trắng cho 2 vết . cho công tác kiểm nghiệm dược liệu này, chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài: " Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm vị thuốc Hà thủ ô trắng& quot;, với mục tiêu: - Xây dựng tiêu chuẩn. Xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm vị thuốc Hà thủ ô trắng cho DĐVNIV. - Hình ảnh hoá, lượng hoá các dữ liệu về vị thuốc trong quá trình kiểm nghiệm tạo điều kiện cho việc kiểm nghiệm dễ dàng và. làm thuốc (khoảng 500 vị dược liệu thông dụng) thì con số này còn hạn chế. Hà thủ ô trắng là vị thuốc đã được nhân dân ta sử dụng từ lâu. Tuy nhiên, việc kiểm nghiệm dược liệu này lại gặp không