BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI - - VŨ THỊ THƠ ĐỊNH LƢỢNG ĐỒNG THỜI CEFOPERAZON VÀ SULBACTAM TRONG CHẾ PHẨM BẰNG QUANG PHỔ ĐẠO HÀM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ HÀ NỘI - 2013 BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI - - VŨ THỊ THƠ ĐỊNH LƢỢNG ĐỒNG THỜI CEFOPERAZON VÀ SULBACTAM TRONG CHẾ PHẨM BẰNG QUANG PHỔ ĐẠO HÀM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Ngƣời hƣớng dẫn: TS Vũ Đặng Hoàng DS Nguyễn Thị Loan Nơi thực hiện: Bộ mơn Hóa phân tích - Độc chất Trường Đại học Dược Hà Nội HÀ NỘI - 2013 i LỜI CẢM ƠN Trƣớc hết, em xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới TS Vũ Đặng Hoàng DS Nguyễn Thị Loan, ngƣời trực tiếp hƣớng dẫn, hết lịng truyền đạt kiến thức tận tình giúp đỡ em suốt thời gian thực đề tài nghiên cứu mang tên "Định lƣợng đồng thời cefoperazon sulbactam chế phẩm quang phổ đạo hàm" Em xin chân thành cảm ơn quan tâm giúp đỡ nhiệt tình thầy giáo anh chị kỹ thuật viên mơn Hóa phân tích - Độc chất trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội suốt thời gian em làm thực nghiệm môn Em xin chân thành cảm ơn hội đồng chấm khóa luận tốt nghiệp Dƣợc sĩ đại học dành thời gian xem xét, góp ý sửa chữa để khóa luận tốt nghiệp em đƣợc hoàn thiện Em xin cảm ơn Ban Giám hiệu Nhà trƣờng Phòng Đào tạo tạo điều kiện tốt để em hoàn thành tốt khóa học đại học năm trƣờng Cuối cùng, em xin chân thành cảm ơn gia đình bạn bè ln giúp đỡ, động viên, khích lệ hỗ trợ em vật chất lẫn tinh thần suốt trình làm đề tài nhƣ học tập sống Hà Nội, tháng 05 năm 2013 Sinh viên VŨ THỊ THƠ ii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC CÁC CHỮ VÀ KÝ HIỆU VIẾT TẮT iv DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU v DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ VÀ ĐỒ THỊ vi ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU 1.1.1 Tổng quan cefoperazon 1.1.2 Tổng quan sulbactam 1.1.3 Một số phƣơng pháp định lƣợng cefoperazon sulbactam 1.1.3.1 Phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 1.1.3.2 Phƣơng pháp quang phổ UV 1.1.3.3 Một số phƣơng pháp khác 1.2 PHƢƠNG PHÁP QUANG PHỔ HẤP THỤ TỬ NGOẠI - KHẢ KIẾN (UV-Vis) 10 1.2.1 Định luật Lambert-Beer 10 1.2.2 Định lƣợng dung dịch nhiều thành phần phƣơng pháp quang phổ đạo hàm 11 1.2.2.1 Phƣơng pháp phổ đạo hàm 11 1.2.2.2 Phƣơng pháp phổ đạo hàm tỷ đối 13 1.3 PHƢƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) 14 1.3.1 Nguyên tắc chung HPLC 14 1.3.2 Các thông số đặc trƣng cho trình sắc ký 14 CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU, NGUYÊN LIỆU VÀ THIẾT BỊ 19 2.1.1 Đối tƣợng nghiên cứu 19 iii 2.1.2 Nguyên liệu thiết bị 20 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.2.1 Xây dựng phƣơng pháp định lƣợng đồng thời cefoperazon sulbactam quang phổ đạo hàm lấy HPLC làm phƣơng pháp đối chiếu 22 2.2.2 Ứng dụng phƣơng pháp quang phổ nêu HPLC để định lƣợng đồng thời cefoperazon sulbactam chế phẩm 23 2.2.3 Xử lý kết thực nghiệm 23 CHƢƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 24 3.1 KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM VÀ NHẬN XÉT 24 3.1.1 Phƣơng pháp quang phổ đạo hàm 24 3.1.1.1 Chuẩn bị dung môi 24 3.1.1.2 Chuẩn bị mẫu chuẩn mẫu thử 24 3.1.1.3 Xây dựng phƣơng pháp định lƣợng 26 A Chọn bƣớc sóng định lƣợng 26 a Xác định khoảng cộng tính 26 b Phƣơng pháp phổ đạo hàm bậc 27 c Phƣơng pháp phổ đạo hàm tỷ đối 28 B Khảo sát khoảng tuyến tính 30 a Phổ đạo hàm bậc 30 b Phổ đạo hàm tỷ đối 32 3.1.1.4 Độ lặp độ phƣơng pháp 35 3.1.2 Phƣơng pháp HPLC 36 3.1.2.1 Chuẩn bị mẫu nghiên cứu 36 3.1.2.2 Xây dựng phƣơng pháp HPLC 36 3.1.3 Kết định lƣợng 38 3.2 BÀN LUẬN 39 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO I iv DANH MỤC CÁC CHỮ VÀ KÝ HIỆU VIẾT TẮT ACN : Acetonitril BQ : Bảo quản CP : Cefoperazon HD : Hạn dùng HPLC : Sắc ký lỏng hiệu cao (High Performance Liquid Chromatography) MeOH : Methanol NSX : Ngày sản xuất PĐH : Phổ đạo hàm PĐHTĐ : Phổ đạo hàm tỷ đối Ptl : Phân tử lƣợng RSD : Độ lệch chuẩn tƣơng đối (Relative Standard Deviation) SB : Sulbactam SD : Độ lệch chuẩn (Standard Deviation) SĐK : Số đăng ký SKS : Số kiểm soát STT : Số thứ tự TBAH : Tetrabutyl ammonium hydroxid TEAA : Tetraethyl ammonium acetat TLTK : Tài liệu tham khảo TMAH : Tetramethyl ammonium hydroxid TNHH : Trách nhiệm hữu hạn UV : Tử ngoại (Ultra Violet) UV-Vis : Tử ngoại - Khả kiến (Ultra Violet - Visible) [1] : Tài liệu tham khảo số (1.1) : Công thức 1, chƣơng (2.1) : Công thức 1, chƣơng v DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Bảng 1.1 Một số đặc điểm lý hóa cefoperazon Bảng 1.2 Một số đặc điểm lý hóa sulbactam Bảng 1.3 Phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Bảng 1.4 Phƣơng pháp quang phổ UV Bảng 1.5 Một số phƣơng pháp khác Bảng 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 19 Bảng 3.1 Kết khảo sát khoảng tuyến tính CP với giá trị PĐH bậc 30 Bảng 3.2 Kết khảo sát khoảng tuyến tính SB với giá trị PĐH bậc 31 Bảng 3.3 Kết khảo sát khoảng tuyến tính CP với giá trị PĐHTĐ bậc 32 Bảng 3.4 Kết khảo sát khoảng tuyến tính SB với giá trị PĐHTĐ bậc 33 Bảng 3.5 Kết khảo sát khoảng tuyến tính CP SB 34 Bảng 3.6 Độ lặp độ phƣơng pháp quang phổ đạo hàm 35 Bảng 3.7 Thơng số q trình HPLC hỗn hợp CP 20 mg/l + SB 20 mg/l 37 Bảng 3.8 Kết định lƣợng chế phẩm quang phổ đạo hàm HPLC 38 vi DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ VÀ ĐỒ THỊ Hình 1.1 Phổ hấp thụ (a), phổ đạo hàm bậc (b) bậc (c) (dải phổ nét chấm có vị trí cƣờng độ nhƣng độ rộng gấp đơi); phổ hấp thụ trans-stilbene cyclohexane (d) phổ đạo hàm bậc (e), bậc (f) tƣơng ứng 12 Hình 1.2 Sơ đồ tách chất A B cột có độ phân giải khác 17 Hình 3.1 Phổ hấp thụ SB 20 mg/l, CP 20 mg/l, phổ cộng phổ hỗn hợp SB 20 mg/l + CP 20 mg/l 26 Hình 3.2 PĐH bậc dãy dung dịch SB nồng độ thay đổi (10 - 35 mg/l) dãy dung dịch CP nồng độ thay đổi (10 - 35 mg/l) 27 Hình 3.3 PĐHTĐ bậc dãy dung dịch hỗn hợp CP (10 - 35 mg/l) + SB 20 mg/l với số chia SB 20 mg/l dãy dung dịch CP (10 - 35 mg/l) với số chia SB 20 mg/l 28 Hình 3.4 PĐHTĐ bậc dãy dung dịch hỗn hợp SB (10 - 35 mg/l) + CP 20 mg/l với số chia CP 10 mg/l dãy dung dịch SB (10 - 35 mg/l) với số chia CP 10 mg/l 29 Hình 3.5 Đồ thị biểu diễn đƣờng chuẩn CP (10 - 35 mg/l) với giá trị PĐH bậc 30 Hình 3.6 Đồ thị biểu diễn đƣờng chuẩn SB (10 - 35 mg/l) với giá trị PĐH bậc 31 Hình 3.7 Đồ thị biểu diễn đƣờng chuẩn CP (10 - 35 mg/l) với giá trị PĐHTĐ bậc 32 Hình 3.8 Đồ thị biểu diễn đƣờng chuẩn SB (10 - 35 mg/l) với giá trị PĐHTĐ bậc 33 Hình 3.9 Sắc ký đồ rửa giải hỗn hợp chuẩn CP 20 mg/l + SB 20 mg/l 36 ĐẶT VẤN ĐỀ Tính đề kháng kháng sinh vi khuẩn ngày gia tăng với nhiều chế khác nhƣ: sinh men kháng thuốc, thay đổi tính thấm màng tế bào, biến đổi đích tác dụng…Theo Tổ chức Y tế giới Việt Nam nằm danh sách nƣớc có tỷ lệ kháng kháng sinh cao giới, đó, vấn đề sử dụng kháng sinh an toàn hiệu vấn đề mang tính thời Cefoperazon kháng sinh bán tổng hợp thuộc nhóm cephalosporin hệ III, đƣợc dùng theo đƣờng tiêm có tác dụng diệt khuẩn ức chế tổng hợp thành tế bào vi khuẩn Cefoperazon đƣợc kết hợp với sulbactam chế phẩm thuốc bột pha tiêm Sulbactam chất có cấu trúc tƣơng tự nhƣ betalactam, có khả gắn kết vào beta-lactamase vi khuẩn tiết làm bất hoạt enzym Do vậy, sulbactam bảo vệ kháng sinh beta-lactam khỏi bị phân hủy enzym Sự kết hợp góp phần trì hoạt phổ giảm tình trạng kháng thuốc cefoperazon lâm sàng Hỗn hợp cefoperazon sulbactam thƣờng đƣợc định để điều trị nhiễm khuẩn nặng vi khuẩn Gram (-), Gram (+) nhạy cảm vi khuẩn kháng kháng sinh beta-lactam khác Để định lƣợng đồng thời chế phẩm thuốc đa thành phần, sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) quang phổ đạo hàm thƣờng đƣợc triển khai nghiên cứu Với mong muốn đề xuất phƣơng pháp định lƣợng đồng thời hỗn hợp hai thành phần có khả ứng dụng cơng tác kiểm nghiệm thuốc, tiến hành đề tài: "Định lượng đồng thời cefoperazon sulbactam chế phẩm quang phổ đạo hàm" với hai mục tiêu: - Xây dựng phép định lƣợng đồng thời cefoperazon sulbactam quang phổ đạo hàm, lấy phƣơng pháp HPLC làm phƣơng pháp đối chiếu - Ứng dụng phƣơng pháp để định lƣợng đồng thời cefoperazon sulbactam chế phẩm: Sulperazon, Jincetam, Bacamp Cefactam CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU 1.1.1 Tổng quan cefoperazon Bảng 1.1 Một số đặc điểm lý hóa cefoperazon Đặc điểm Cefoperazon Nguồn gốc Là kháng sinh bán tổng hợp thuộc nhóm cephalosporin hệ III Công thức cấu tạo C25H27N9O 8S2 Tên khoa học Ptl: 667,65 - thia - - azabicyclo [4.2.0] octo - - ene - - cacboxylic, [[[[4 - ethyl - 2,3 dioxo - - pyperarizyl) carbonyl] amino] - hydroxyphenyl)acetyl]amino] - - [[(1 - methyl - 1H - tetrazol - yl) thiol] methyl] - - oxo, monosodium salt (6R, (6,7 R*)) Tính chất Bột màu trắng, khơng mùi có vị đắng Tan tốt nƣớc, tan methanol, tan alcohol hầu nhƣ không tan dung môi hữu 32 b Phổ đạo hàm tỷ đối  Với CP: Tiến hành khảo sát mối quan hệ giá trị PĐHTĐ bậc nồng độ CP (10 - 35 mg/l) λ = 260,9 nm Kết thể Bảng 3.3 Hình 3.7 Bảng 3.3 Kết khảo sát khoảng tuyến tính CP với giá trị PĐHTĐ bậc Nồng độ (mg/l) Giá trị PĐHTĐ bậc 10 23,646 15 35,721 20 46,128 25 58,499 30 70,279 35 80,954 Giá trị PĐHTĐ bậc 100 y = 2,3005x + 0,7769 r = 0,9998 80 60 40 20 10 15 20 25 30 35 40 Nồng độ (mg/l) Hình 3.7 Đồ thị biểu diễn đƣờng chuẩn CP (10 - 35 mg/l) với giá trị PĐHTĐ bậc 33  Với SB: Tiến hành khảo sát mối quan hệ giá trị PĐHTĐ bậc nồng độ SB (10 - 35 mg/l) λ = 236,6 nm Kết thể Bảng 3.4 Hình 3.8 Bảng 3.4 Kết khảo sát khoảng tuyến tính SB với giá trị PĐHTĐ bậc Nồng độ (mg/l) Giá trị PĐHTĐ bậc 10 – 0,353 15 – 0,532 20 – 0,699 25 – 0,872 30 – 1,032 35 – 1,193 Nồng độ (mg/l) 10 15 20 25 30 35 40 0,0 Giá trị PĐHTĐ bậc -0,2 y = – 0,0336x – 0,0251 r = – 0,9998 -0,4 -0,6 -0,8 -1,0 -1,2 -1,4 Hình 3.8 Đồ thị biểu diễn đƣờng chuẩn SB (10 - 35 mg/l) với giá trị PĐHTĐ bậc 34 Tóm lại, mối quan hệ nồng độ CP SB với giá trị PĐH, ĐHTĐ bƣớc sóng định lƣợng đƣợc trình bày Bảng 3.5 Bảng 3.5 Kết khảo sát khoảng tuyến tính CP SB Bƣớc Khoảng sóng tuyến tính (nm) (mg/l) CP 286,0 10 - 35 SB 228,0 10 - 35 Y= 0,0143x 0,0001 0,9998 CP 260,9 10 - 35 Y= 2,3005x + 0,7769 0,9998 SB 236,6 10 - 35 Y= 0,0336x 0,9998 Phƣơng Hoạt pháp chất PĐH bậc PĐHTĐ Hệ số Phƣơng trình hồi quy tƣơng quan r Y= 0,0541x 0,0116 0,0251 0,9998 35 3.1.1.4 Độ lặp độ phƣơng pháp Độ lặp độ phƣơng pháp đƣợc xác định dựa kết định lƣợng hỗn hợp tự tạo CP 20 mg/l + SB 20 mg/l điều kiện (Bảng 3.6) Bảng 3.6 Độ lặp độ phƣơng pháp quang phổ đạo hàm Hàm lƣợng % tìm lại PĐH bậc PĐHTĐ STT CP SB CP SB 100,3 100,1 100,2 100,2 99,7 101,8 101,8 97,1 101,3 100,7 101,9 101,9 101,6 102,9 101,6 101,9 102,2 102,1 100,5 101,8 101,3 105,0 99,9 101,9 TB 101,1 102,1 101,0 100,8 SD 0,9 1,7 0,9 1,9 RSD 0,9 1,7 0,9 1,9 36 3.1.2 Phƣơng pháp HPLC 3.1.2.1 Chuẩn bị mẫu nghiên cứu  Dung môi: Nƣớc cất lần loại bỏ ion  Dung dịch chuẩn dung dịch thử: Các dung dịch chuẩn thử sau đƣợc chuẩn bị nhƣ mô tả mục 3.1.1.2 đƣợc lọc qua màng có kích thƣớc lỗ lọc 0,20 µm 3.1.2.2 Xây dựng phƣơng pháp HPLC - Điều kiện sắc ký: Cột: Apollo C18 150 mm x 4,6 mm; µm Detector UV: 210 nm Tốc độ dòng: 0,8 ml/phút Pha động: hỗn hợp acetonitril - acid photphoric pH 3,2 (60 : 40, tt/tt) Thể tích tiêm mẫu: 20 µl - Hình 3.9 biểu diễn sắc ký đồ hỗn hợp chuẩn CP 20 mg/l + SB 20 mg/l - Các thông số trình sắc ký đƣợc trình bày Bảng 3.7 Hình 3.9 Sắc ký đồ rửa giải hỗn hợp chuẩn CP 20 mg/l + SB 20 mg/l 37 Bảng 3.7 Thông số trình HPLC hỗn hợp CP 20 mg/l + SB 20 mg/l STT Thông số CP SB Độ lặp RSD < 2% Độ 99 Khoảng tuyến tính 10 - 35 mg/l R2 > 0,990 Hệ số bất đối AF = 1,2 Độ phân giải Rs = 12 Số đĩa lý thuyết/mét 44000 162000 Thời gian lƣu (phút) tR = 4,4 tR = 2,7 101% 38 3.1.3 Kết định lƣợng Kết định lƣợng số chế phẩm thuốc bột pha tiêm lƣu hành thị trƣờng quang phổ đạo hàm HPLC đƣợc trình bày Bảng 3.8 Kết cho thấy khơng có sai khác có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) độ (ANOVA) độ lặp (Bartlett) so sánh số liệu quang phổ đạo hàm HPLC với chế phẩm đem định lƣợng Bảng 3.8 Kết định lƣợng chế phẩm quang phổ đạo hàm HPLC Hàm lƣợng % so với nhãn Chế phẩm HPLC PĐH PĐHTĐ CP 100,1 ± 1,1 99,4 ± 0,7 100,4 ± 0,9 SB 99,3 ± 1,2 98,5 ± 1,7 99,2 ± 0,8 CP 100,4  0,9 99,9  1,3 100,5  0,6 SB 100,3  1,2 99,4  1,8 99,7  1,3 CP 99,8  0,7 100,6  1,0 100,0  0,8 SB 99,1  1,0 98,9  1,6 99,3  0,9 CP 100,9  1,1 101,6  0,7 100,4  0,9 SB 100,8  0,8 101,2  1,3 100,5  1,2 Cefactam Sulperazon Jincetam Bacamp 39 3.2 BÀN LUẬN Kết thực nghiệm cho thấy quang phổ đạo hàm định lƣợng đƣợc đồng thời cefoperazon sulbactam hỗn hợp mà không cần chiết tách Ngoài ra, việc sử dụng nƣớc làm dung môi ƣu điểm bật phƣơng pháp Với phƣơng pháp quang phổ đạo hàm, hai yếu tố ảnh hƣởng đến kết định lƣợng bƣớc sóng định lƣợng thơng số phép lấy đạo hàm, phép làm trơn phổ đồ Qua khảo sát, bƣớc sóng đƣợc lựa chọn để định lƣợng chế phẩm thử phổ đạo hàm bậc 286,0 nm với cefoperazon 228,0 nm với sulbactam Về nguyên tắc tiến hành định lƣợng cefoperazon nhiều bƣớc sóng (Hình 3.2), nhiên bƣớc sóng 286,0 đƣợc lựa chọn sai số đinh lƣợng bƣớc sóng nhỏ Tƣơng tự, bƣớc sóng 228,0 nm đƣợc lựa chọn để định lƣợng sulbactam Thông số cho thuật toán đạo hàm bậc đƣợc lựa chọn là: - Phép lấy đạo hàm: Order: 5; No of coefficient: - Phép làm trơn: Order: 3; No of coefficient: 125 Sự khác biệt bƣớc sóng định lƣợng phổ đạo hàm bậc nghiên cứu so với tài liệu tham khảo [8] khác cách xử lý phổ lấy đạo hàm với loại máy đo quang đƣợc sử dụng Với phƣơng pháp PĐHTĐ, việc lựa chọn bƣớc sóng nồng độ chất chuẩn làm mẫu số thực phép chia ảnh hƣởng nhiều đến độ xác kết Tính thích hợp thuật tốn đƣợc khẳng định qua trùng lặp phổ đồ dãy dung dịch thành phần dãy dung dịch hỗn hợp có nồng độ tƣơng ứng (Hình 3.3 Hình 3.4) Qua khảo sát, bƣớc sóng λ = 260,9 nm số chia nồng độ SB = 20 mg/l đƣợc lựa chọn để định lƣợng cefoperazon, cịn bƣớc sóng λ = 236,6 nm số chia nồng độ CP = 10 mg/l đƣợc lựa chọn để định lƣợng sulbactam 40 Thơng số thuật tốn đạo hàm bậc phổ tỷ đối đƣợc lựa chọn tƣơng tự nhƣ thuật toán đạo hàm bậc nêu Kết thẩm định phƣơng pháp quang phổ đạo hàm cho thấy có phụ thuộc tuyến tính chặt chẽ tính hiệu đạo hàm nồng độ CP SB khoảng 10 - 35 mg/l (Bảng 3.5) Phƣơng pháp có độ cao (tỷ lệ phần trăm tìm lại khoảng 100 - 102 %), độ lặp cao (RSD ≤ 2%) Trong nghiên cứu này, HPLC đƣợc sử dung làm phƣơng pháp đối chiếu với quang phổ đạo hàm Các điều kiện sắc ký đƣợc lựa chọn dựa vào cơng trình nghiên cứu trƣớc đƣợc trình bày mục 3.1.2.2 Kết thẩm định cho thấy phƣơng pháp HPLC đáp ứng đƣợc yêu cầu cho phép định lƣợng đồng thời CP SB chế phẩm thuốc bột pha tiêm (Bảng 3.7) Kết thống kê với độ tin cậy 95% cho thấy khơng có khác biệt có ý nghĩa (p > 0,05) độ (ANOVA) độ lặp (Bartlett) quang phổ đạo hàm HPLC Do vậy, phƣơng pháp quang phổ đạo hàm đƣợc xây dựng hồn tồn thay HPLC để định lƣợng đồng thời cefoperazon sulbactam chế phẩm thuốc bột pha tiêm 41 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Dựa vào kết nghiên cứu đề tài, rút số kết luận nhƣ sau: - Xây dựng đƣợc phép định lƣợng đồng thời cefoperazon sulbactam chế phẩm thuốc bột pha tiêm cách trực tiếp (không cần qua giai đoạn chiết tách) phƣơng pháp: phổ đạo hàm bậc 1, phổ đạo hàm tỷ độ lặp độ cao Sự khác biệt độ xác (độ lặp độ đúng) phƣơng pháp nêu HPLC khơng có ý nghĩa thống kê với mức tin cậy đạt 95% - Các phƣơng pháp quang phổ đạo hàm nêu có kỹ thuật đơn giản, sử dụng dung mơi hóa chất thơng thƣờng (nƣớc cất lần) nên dễ thực tiết kiệm kinh phí Do đó, quang phổ đạo hàm có khả ứng dụng cơng tác kiểm nghiệm bột thuốc pha tiêm có chứa cefoperazon sulbactam - Khơng có sai khác đáng kể hàm lƣợng thực tế mẫu thuốc đƣợc định lƣợng với hàm lƣợng ghi nhãn Trên sở kết đạt đƣợc, kiến nghị số vấn đề sau: - Tiếp tục nghiên cứu ứng dụng phƣơng pháp quang phổ đạo hàm vào kiểm nghiệm dạng bào chế đa thành phần khác có khả hấp thụ UV-Vis - Ứng dụng phƣơng pháp quang phổ đạo hàm nêu để định lƣợng đồng thời cefoperazon sulbactam chế phẩm thuốc bột pha tiêm chứa sở kiểm nghiệm có trang bị máy quang phổ đại I TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt: Bộ y tế (2007), Hóa phân tích, tập 2, Nhà xuất y học, Hà Nội Bộ y tế (2007), Kiểm nghiệm dược phẩm, Nhà xuất y học, Hà Nội Bộ y tế (2008), Vật lý đại cương, Nhà xuất y học, Hà Nội Bộ Y tế, Viện kiểm nghiệm, Phân viện kiểm nghiệm (1998), Tài liệu tập huấn kỹ thuật kiểm nghiệm thuốc, tr - 15 Đào Hữu Hồ (2007), Xác suất thống kê, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội, Hà Nội, tr 126 - 133, tr 168 - 185 Tài liệu tiếng Anh: Abdel Fattah M El Walily, Azza Abdel - Kader Gazy, Saied F Belal and Essam F Khamis (1999), “Selective spectrofluorimetric determination of phenolic ß - lactam antibiotics through the formation of their coumarin derivatives”, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, Vol.20, pp 643 - 653 Absalla Ahmed El - Shanawani (1988), “HPLC determination of sulbactam, sultamicillin tousylate, cefaclo, ampicillin and cefoperazone in pharmaceutical preparation”, Acta Poloniae Pharmaceutical - Drug Research, Vol.55(1), pp - 14 Alberto Parra, Javier Garcia - villanova, Vicente rodenas and M Dolores Gomez (1994), “First and second derivative spectrophotometric determination of cefoperazone and sulbactam in injections’’, Journal of Pharmaceutical & Biomedical Analysis, Vol.12(5), pp 653 - 657 II AzzaM M Ali, Nagwa Abo El - Maali, and Mahmoud A Ghandour (1993), “Determination of cefobid using adsorptive stripping voltammetric technique in different media”, Electroanalysis, Vol.5, pp 85 - 89 10 Burcu Dogan, Aysegul Golcu, Mustafa Dolaz and Sibel A Ozkan (2009), “Electrochemical behaviour of the bactericidal Cefoperazone and its selective voltammetric determination in pharmaceutical dosage forms and human serum”, Current Pharmaceutical Analysis, Vol.5, pp 179 - 189 11 Dhandapani B., Thirumoorthy N., Harun Rasheed Shaik.,Rama Kotaiah M., and Chanadrasekhar K B (2010), “RP - HPLC method development and parenteral preparation” Journal of Pharm Tech Research, Vol.2(1), pp 752 755 12 Ehab F Elkady and Samag S Abbas (2011), “Development and validation of a reversed - phase column liquid chromatographic method for the determination of five cephalosporins in pharmaceutical preparation”, Journal of AOAC International, Vol.94(5), pp 1440 - 1446 13 Fardous A Mohamed, Gamal A Saleh, Salwa R El - Shaboury and Azza H Rageh (2008), “Selective densitometric analysis of cephalosporin using dragendorff's reagent”, Chromatographia, Vol.68, pp 365 - 374 14 Gamal A Saleh, Hassan F Askal , Mohamed F Radwan and Mahmoud A Omar (2001), “Use of charge-transfer complexation in the spectrophotometric analysis of certain cephalosprins”, Talanta, Vol.54, pp 1205 - 1215 15 Gamal A Saleh, Salwa R El - Shaboury, Fardous A Mohamed and Azza H Rageh (2009), “Kinetic spectrophotometric determination of certain cephalosporins using oxidized quercetin reagent”, Spectrochimca Acta Part A, Vol.73, pp 946 - 954 III 16 Genowefa Pạjchel and Stefan Tyski (2000), “Adaptation of electrophoresis to the determination of selected cephalosporin for injection”, Journal of Chromatography A, Vol.895, pp 27 - 31 17 Hammam E., El-Attar M A and Betagi A M (2006), “Voltammetric studies on the antibiotic drug cefoperazone Quantification and Pharmacokinetic studies”, Journal of Pharmaceutical and Bioedical Analysis, Vol.42, pp 523 527 18 Hesham Salem and Hassan Askal (2002), “Colourimetric and AAS determination of cephalosporins using Reineck's salt”, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, Vol.29, pp 347 - 354 19 Hesham Salem (2004), “Selective spectrophotometric determination of phenolic ß – lactam antibiotic in pure forms and in their pharmaceutical formulations”, Analytica Chimica Acta, Vol.515, pp 333 - 341 20 Jane J , Subrahmanyam E V S and Sathyanarayana D (2006), “Spectrophotometric determination of certain cephalosporin”, Asian Journal of Chemistry, Vol.18(1), pp 721 - 723 21 Liudmil A., Daniela N., (2000) “Resolution of overlapping UV-VIS absorption bands and quantitative analysis”, Chemical Society Reviews, Vol.29, pp 217 227 22 Lories I Bebawy, Khadiga El Kelani and Laila Abdel Fattah (2003), “Flourimetric determination of some antibiotics in raw material and dosage forms through ternary complex formation with terbium (Tb3+)”, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, Vol.32, pp 1219 - 1225 23 Meyyanathan S N., Gopinath R., Rajan S., Phanikumar Y V., Muralidharan S., Krishnaveni N and Suresh B (2007), “A RP - HPLC method for simultaneous estimation of cefoperazone and sulbactam in pharmaceutical formulation”, Indian J.Pharm Res., Vol.41(3), pp 256 - 260 IV 24 Sabina Biillová - René Kizek - Frantisek Jelen (2003), “Square - wave voltammetric determination of cefoperazone in a bacterial culture, pharmaceutical drug, milk, and urine”, Anal Bioanal Chem, Vol.377, pp 362 369 25 Sathish Kumar Shetty A., Yashwanth R., Manzoor Ahmed, Sridhar B K and Vijaya Kumar M (2011), “Development and validation of RP – HPLC method for quantitative - estimation of cefoperazone in bulk and pharmaceutical dosage forms”, International Journal of Pharm Tech Research, Vol.3(3), pp 1075 - 1080 26 Selavka C M., Krull I S and Bratin K (1986), “Analysis for penicillins and cefoperazone by HPLC - photolysis - electrochemical detection (HPLC - hv EC)”, Journal of Pharmaceutical & Biomedical Analysis, Vol.4(1), pp 83 - 93 27 Senthilraja M and Sanjaypai P N (2006), “Spectrophotometric method for the determination of cefoperazone sodium in pharmaceutical formulations”, Indian Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol.68(3), pp 384 - 385 28 Tai-Li Tsou, Yu - Chuan Huang, Chiu - Wey Lee, An - Rong Lee, Hsian Jenn Wang and Su - Hwei Chen (2007), “Simultaneous determination of ampicillin, cefoperazone, and sulbactam in pharmaceutical formulations by HPLC with ß-cyclodextrin stationary phase”, J.Sep Sci, Vol.30, pp 2407 2413 29 USP 30 NF 25 The United States Pharmacopoial convection Inc Rockaville, MD pp 1661, 3230 30 Vinod Kumar K., Dharuman J and Karuna Sree (2010), “RP - HPLC method development and validation for the simultaneous estimation of cefoperazone and sulbactam in dosage form and in plasma”, International Journal of Pharma and Bio Sciences, Vol.1, pp 87 - 92 V 31 Yashwanth R., Sathish Kumar Shetty and Manzoor Ahmed (2011), “Zero order and area under the curve spectrophotometric methods for determination of cefoperazone in pharmaceutical formulation”, International Journal of Pharm Tech Research, Vol.3(3), pp 1255 - 1259 ... hành đề tài: "Định lượng đồng thời cefoperazon sulbactam chế phẩm quang phổ đạo hàm" với hai mục tiêu: - Xây dựng phép định lƣợng đồng thời cefoperazon sulbactam quang phổ đạo hàm, lấy phƣơng... phổ nêu HPLC để định lƣợng đồng thời cefoperazon sulbactam chế phẩm Tiến hành định lƣợng đồng thời cefoperazon sulbactam mẫu phƣơng pháp: - Quang phổ UV-Vis: Phổ đạo hàm, phổ đạo hàm tỷ đối - HPLC... lặp (Bartlett) so sánh số liệu quang phổ đạo hàm HPLC với chế phẩm đem định lƣợng Bảng 3.8 Kết định lƣợng chế phẩm quang phổ đạo hàm HPLC Hàm lƣợng % so với nhãn Chế phẩm HPLC PĐH PĐHTĐ CP 100,1