BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ THÙY LINH XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH PHÁT HIỆN NHANH THUỐC GIẢ BẰNG PHỔ RAMAN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2015 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ THÙY LINH XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH PHÁT HIỆN NHANH THUỐC GIẢ BẰNG PHỔ RAMAN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: Ths. Đặng Thị Ngọc Lan Nơi thực hiện: 1. Viện kiểm nghiệm thuốc TW 2. Bộ môn Hóa phân tích và Độc chất Trường Đại học Dược Hà Nội HÀ NỘI - 2015 LỜI CẢM ƠN Với lòng biết ơn sâu sắc, tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành nhất đến PGS.TS. Thái Nguyễn Hùng Thu và ThS. Đặng Thị Ngọc Lan đã trực tiếp hướng dẫn, giúp đỡ, chỉ bảo tận tình để tôi hoàn thành khóa luận. Tôi cũng xin chân thành cảm ơn các cán bộ ở Khoa kiểm nghiệm nguyên liệu- Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung Ương đã hướng dẫn tận tình trong thời gian tôi làm thực nghiệm, hoàn chỉnh nghiên cứu này tốt nhất. Tôi xin cảm ơn các thầy cô trong bộ môn Hóa phân tích và Độc chất đã tạo điều kiện cung cấp cho tôi các tài liệu cần thiết để hoàn thành khóa luận này. Tôi cũng xin cảm ơn Ban giám hiệu, các phòng ban, các thầy cô giáo và cán bộ nhân viên Trường đại học Dược Hà Nội - những người đã dạy bảo và trang bị cho tôi những kiến thức khoa học nền tảng suốt thời gian học dưới mái trường. Cuối cùng, tôi xin gửi lời cảm ơn thân thương nhất đến gia đình đã luôn ở bên động viên, giúp đỡ tôi trong quá trình học tập và hoàn thiện khóa luận. Hà Nội, ngày 10 tháng 5 năm 2015 Sinh viên Nguyễn Thị Thùy Linh MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ 1 CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN 3 1.1. Tổng quan về thuốc giả 3 1.2. Tổng quan về Isoniazid và Ethambutol 5 1.2.2. Danh pháp 5 1.2.2. Các phương pháp định tính Isoniazid và Ethambutol 6 1.3. Tổng quan về phương pháp quang phổ Raman 7 1.3.1. Lịch sử phát triển 7 1.3.2. Nguyên lý cơ bản của quang phổ Raman 9 1.3.3. Nguyên tắc cấu tạo của thiết bị quang phổ Raman 12 1.3.4. Ưu nhược điểm của quang phổ Raman 13 1.3.5. Một số ứng dụng của quang phổ Raman trong thực tiễn 17 CHƯƠNG 2. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1. Nguyên vật liệu, thiết bị 18 2.1.1. Nguyên vật liệu 18 2.1.2. Thiết bị 18 2.2. Nội dung nghiên cứu 19 2.3. Phương pháp nghiên cứu 19 CHƯƠNG 3. THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 21 3.1. Công thức bào chế viên nén và viên nang của các hoạt chất dùng trong nghiên cứu 21 3.1.1. Công thức bào chế viên nén và viên nang của hoạt chất Isoniazid 21 3.1.2. Công thức bào chế viên nén và viên nang của hoạt chất Ethambutol 24 3.2. Kiểm tra chất lượng của các mẫu viên nghiên cứu 27 3.3. Kết quả và bàn luận 27 3.3.1 Bộ dịch chuyển Raman cơ bản của Isoniazid 27 3.3.2 Bộ dịch chuyển Raman cơ bản của Ethambutol 36 3.3.3 Bàn luận 45 3.4. Ứng dụng khảo sát các chế phẩm trên thị trường 47 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 49 Kết luận 49 Kiến nghị 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VIẾT TẮT CT Công thức FT Fourier Transform Biến đổi Fourier NIR Near Infrared Hồng ngoại gần IR Infrared Hồng ngoại S/N Signal-to-noise Tỷ lệ tín hiệu trên nhiễu UV-VIS Ultraviolet–visible Tử ngoại-khả kiến TLTK Tài liệu tham khảo TT Thuốc thử DANH MỤC CÁC BẢNG STT Bảng Nội dung Trang 1 Bảng 1.1 Tỉ lệ thuốc kém chất lượng qua các năm từ 2009 - 2013 3 2 Bảng 1.2 Tỉ lệ thuốc đông dược, dược liệu không đạt chất lượng từ năm 2009-2013 3 3 Bảng 1.3 Tỉ lệ thuốc giả qua các năm từ 2009-2013 4 4 Bảng 3.1 Công thức bào chế viên nén Isoniazid 21 5 Bảng 3.2 Công thức bào chế viên nang Isoniazid 23 6 Bảng 3.3 Công thức bào chế viên nén Ethambutol 24 7 Bảng 3.4 Công thức bào chế viên nang Ethambutol 26 8 Bảng 3.5 Tỉ lệ cường độ Raman ở các đỉnh đặc trưng của phổ chuẩn Isoniazid 32 9 Bảng 3.6 Các đỉnh đặc trưng của viên chứa hoạt chất Isoniazid thực chế tạo 33 10 Bảng 3.7 Các đỉnh đặc trưng và tỉ lệ cường độ Raman ở các đỉnh đặc trưng của phổ các viên thực chế tạo chứa Isoniazid 34 11 Bảng 3.8 Các đỉnh đặc trưng và tỉ lệ cường độ Raman ở các đỉnh đặc trưng của phổ các thuốc chứa Isoniazid 34 12 Bảng 3.9 Các đỉnh đặc trưng và tỉ lệ cường độ Raman ở các đỉnh đặc trưng của phổ các viên thực chế tạo chứa 50% Isoniazid 36 13 Bảng 3.10 Tỉ lệ cường độ Raman ở các đỉnh đặc trưng của phổ chuẩn Ethambutol 41 14 Bảng 3.11 Các đỉnh đặc trưng của các viên chứa hoạt chất Ethambutol thực chế tạo. 42 15 Bảng 3.12 Các đỉnh đặc trưng và tỉ lệ cường độ Raman ở các đỉnh đặc trưng của phổ các viên thực chế tạo chứa Ethambutol 43 16 Bảng 3.13 Các đỉnh đặc trưng và tỉ lệ cường độ Raman ở các đỉnh đặc trưng của phổ các viên thực chế tạo chứa 50% Ethambutol 44 17 Bảng 3.14 Bảng kết quả đo phổ Raman của chế phẩm khảo sát có 47 chứa Isoniazid so với thư viện phổ đã thiết lập. 18 Bảng 3.15 Bảng kết quả đo phổ Raman của chế phẩm khảo sát có chứa Ethambutol so với thư viện phổ đã thiết lập 48 DANH MỤC CÁC HÌNH STT Hình Nội dung Trang 1 Hình 1.1. Các thành phần thu được sau khi cho ánh sáng kích thích đến mẫu 10 2 Hình 1.2 Tán xạ Raman Stokes và đối Stokes m, n, r: các mức năng lượng 11 3 Hình 1.3 Sơ đồ cấu tạo máy quang phổ Raman 12 4 Hình 2.1 Máy quang phổ Raman để bàn được sản xuất bởi hãng Renishaw 18 5 Hình 3.1 Phổ Raman chuẩn của Isoniazid 28 6 Hình 3.2 Phổ Raman của viên nang placebo Isoniazid CT4 28 7 Hình 3.3 Phổ Raman của viên nang placebo Isoniazid CT2 29 8 Hình 3.4 Phổ Raman của viên nén placebo Isoniazid CT1 29 9 Hình 3.5 Phổ Raman của viên nén placebo Isoniazid CT3 30 10 Hình 3.6 Phổ Raman của viên nang Isoniazid CT4 30 11 Hình 3.7 Phổ Raman của viên nang Isoniazid CT2 31 12 Hình 3.8 Phổ Raman của viên nén Isoniazid CT1 31 13 Hình 3.9 Phổ Raman của viên nén Isoniazid CT3 32 14 Hình 3.10 Phổ Raman của viên nang chứa 50% Isoniazid CT4 35 15 Hình 3.11 Phổ Raman của viên nén chứa 50% Isoniazid CT1 35 16 Hình 3.12 Phổ Raman chuẩn của Ethambutol 37 17 Hình 3.13 Phổ Raman của viên nén placebo Ethambutol CT1 37 18 Hình 3.14 Phổ Raman của viên nén placebo Ethambutol CT2 38 19 Hình 3.15 Phổ Raman của viên nang placebo Ethambutol CT3 38 20 Hình 3.16 Phổ Raman của viên nang placebo Ethambutol CT4 39 21 Hình 3.17 Phổ Raman của viên nén Ethambutol CT1 39 22 Hình 3.18 Phổ Raman của viên nén Ethambutol CT2 40 23 Hình 3.19 Phổ Raman của viên nang Ethambutol CT3 40 24 Hình 3.20 Phổ Raman của viên nang Ethambutol CT4 41 25 Hình 3.21 Phổ Raman của viên nang chứa 50% Ethambutol CT3 43 26 Hình 3.22 Phổ Raman của viên nén chứa 50% Ethambutol CT1 44 27 Hình 3.23 Hình ảnh chồng phổ của nguyên liệu Isoniazid với phổ chuẩn 46 28 Hình 3.24 Hình ảnh chồng phổ của nguyên liệu Ethambutol với phổ chuẩn 46 29 Hình 3.25 Phổ Raman của một số chế phẩm khảo sát 48 [...]... nhóm nghiên cứu chúng tôi thực hiện đề tài: Xây dựng phương pháp phân tích phát hiện nhanh thuốc giả bằng phổ Raman với 2 mục tiêu: 1 Xây dựng bộ dịch chuyển Raman cơ bản của 2 hoạt chất Isoniazid và Ethambutol 2 Xác định khoảng dao động về vị trí và cường độ của các giá trị dịch chuyển Raman dưới ảnh hưởng của một số tá dược thường dùng trong viên nén và viên nang để xây dựng quy trình định tính các... đến phổ dao động phân tử, quang phổ Raman và IR luôn có quan hệ mật thiết với nhau, có tính chất bổ sung cho nhau trong trong các phép phân tích xác định cấu trúc phân tử So với phương pháp quang phổ IR thì phương pháp phân tích phổ Raman có một số lợi thế hơn như sau: 15  Đối với các hợp chất hút ẩm và các hợp chất nhạy trong không khí, cho vào ống thủy tinh nút kín rồi thu phổ Raman, trong phổ IR... phương pháp phân tích truyền thống thì cho kết quả chính xác nhưng tốn rất nhiều thời gian Có một phương pháp phân tích quang phổ trong ngành Dược còn khá mới mẻ là phương pháp phổ Raman Quang phổ Raman được ra đời từ những năm 30 của thế kỷ trước nhưng do hạn chế về khoa học kỹ thuật nên nó còn phát triển khá chậm Ngày nay, với sự phát triển mạnh mẽ về công nghệ laser, phổ Raman ngày càng phát triển và... tính (A) của ion clorid (phụ lục 8.1) Các phương pháp định tính Isoniazid và Ethambutol hydroclorid ở trên là các phương pháp dùng các phản ứng hóa học và phương pháp sắc ký lớp mỏng phải sử dụng nhiều dung môi, thuốc thử vừa tốn nhiều thời gian, vừa độc hại Ngoài ra phương pháp thường được sử dụng rộng rãi để định tính là phương pháp phổ hồng ngoại Phương pháp phổ hồng ngoại rất nhạy với các chất hút... quang phổ Raman Nhờ sự phát triển của một loạt các bộ phận như nguồn laser, sự tiến bộ về công nghệ của detector, sự phát triển vượt bậc của các bộ lọc quang, sự cải tiến đáng kể về công nghệ phần mềm và ứng dụng của nó trong các phương pháp phân tích dữ liệu … mà quang phổ Raman được ứng dụng rộng rãi hơn Đặc biệt, với sự phát triển công nghệ nano, ngoài máy quang phổ Raman để bàn với hiệu lực phân tích. .. rất cao, máy quang phổ Raman cầm tay đã ra đời và rất thuận tiện cho việc phân tích nhanh, đánh giá sơ bộ, khảo sát tại thực địa các mẫu cần phân tích. [18] 1.3.2 Nguyên lý cơ bản của quang phổ Raman [11], [18] Trong khi quang phổ hồng ngoại dựa trên sự hấp thụ, phản xạ và phát xạ ánh sáng, quang phổ Raman dựa trên hiện tượng tán xạ Tán xạ này xảy ra do va chạm giữa các photon và các phân tử Ánh sáng... đặc biệt được ứng dụng vào việc phát hiện nhanh thuốc giả trong ngành Dược Với ưu điểm nổi bật là phân tích nhanh, không làm hỏng mẫu, kỹ thuật đơn giản, dễ sử dụng, phổ Raman đang được khai thác và đưa vào nhiều lĩnh vực nghiên cứu, một trong số đó là công tác phân tích, kiểm tra, giám sát chất lượng thuốc với độ tin cậy, chính xác cao Isoniazid và Ethambutol là các thuốc chống lao thiết yếu Chương... lượng viên bằng các phương pháp phân tích thông thường - Đo phổ Raman của chất chuẩn sau đó xây dựng bộ dịch chuyển Raman cơ bản của 2 hoạt chất trên - Đo phổ của các mẫu viên placebo so với phổ chất chuẩn, xác định sự ảnh hưởng của các tá dược - Đo phổ của các mẫu viên chứa dược chất so với thư viện phổ của chất chuẩn Xác định khoảng dao động về vị trí và cường độ của các giá trị dịch chuyển Raman -... vì thế không thể đo phổ hồng ngoại trong dung dịch nước Mặt khác, khi đo phổ hồng ngoại của một hoạt chất trong viên thì phải chuẩn bị mẫu rất phức tạp như hòa tan, lọc, chiết, tách, bốc hơi đến khô, chứ không thể đo trực tiếp phổ hồng ngoại trên nền tá dược Phương pháp phổ Raman là một phương pháp phân tích hiện đại và mới bắt đầu được triển khai để ứng dụng trong Dược và phương pháp này đã khắc phục... ta phổ Raman của mẫu phân tích 1.3.3.2 Nguyên tắc cấu tạo cơ bản [17] Máy quang phổ Raman được phát triển bởi nhiều công ty, nhiều hãng sản xuất khác nhau Nhưng về cơ bản nó bao gồm năm bộ phận sau: Nguồn laser, bộ phận đựng mẫu, quang phổ kế, detector, hệ quang Hình 1.3 mô tả các bộ phận cơ bản của máy quang phổ Raman Hình 1.3: Sơ đồ cấu tạo máy quang phổ Raman 13 1.3.4 Ưu nhược điểm của phương pháp . nhóm nghiên cứu chúng tôi thực hiện đề tài: Xây dựng phương pháp phân tích phát hiện nhanh thuốc giả bằng phổ Raman với 2 mục tiêu: 1. Xây dựng bộ dịch chuyển Raman cơ bản của 2 hoạt chất Isoniazid. XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH PHÁT HIỆN NHANH THUỐC GIẢ BẰNG PHỔ RAMAN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: Ths. Đặng Thị Ngọc Lan Nơi thực hiện: 1. Viện kiểm nghiệm thuốc. TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ THÙY LINH XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH PHÁT HIỆN NHANH THUỐC GIẢ BẰNG PHỔ RAMAN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2015 BỘ