BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LƯƠNG THỊ LAN NGHIÊN CỨU VỀ THỰC VẬT VÀ THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CỦA MỘT LOÀI THUỘC CHI STEPHANIA LOUR. Ở NINH THUẬN KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2015 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LƯƠNG THỊ LAN NGHIÊN CỨU VỀ THỰC VẬT VÀ THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CỦA MỘT LOÀI THUỘC CHI STEPHANIA LOUR. Ở NINH THUẬN KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn : TS. Nguyễn Quốc Huy Nơi thực hiện: Bộ môn Thực vật HÀ NỘI – 2015 LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, tôi xin dành lời cảm ơn chân thành và sâu sắc nhất tới TS. Nguyễn Quốc Huy – người thầy tôi vô cùng kính trọng – người đã theo sát, tận tình hướng dẫn và chỉ dạy cho tôi những kiến thức chuyên môn và bài học cuộc sống quý báu; người khởi nguồn cho những đam mê khoa học và đam mê công việc trong tôi. Tôi cũng xin chân thành cảm ơn các thầy cô, các anh chị kỹ thuật viên của bộ môn Thực vật, bộ môn Dược liệu, phòng thí nghiệm Trung tâm đại học Dược Hà Nội, những người đã tạo mọi điều kiện giúp đỡ tôi hoàn thành khoá luận này. Tôi xin cảm ơn DS. Nguyễn Thị Thuỳ Linh, các bạn Phạm Thị Việt Hồng, Quách Thị Thuý Nga lớp M2K65, Tống Xuân Quang lớp A1K65, em Nguyễn Thị Mai Hạnh lớp M3K66 đã cùng trao đổi kinh nghiệm và hỗ trợ tinh thần cho tôi trong suốt thời gian cùng nghiên cứu khoa học. Tôi xin chân thành cảm ơn gia đình bác Đỗ Ngọc Sâm tại Ba Vì, Hà Nội đã giúp tôi trồng trọt, thu hái và lưu mẫu. Tôi xin chân thành cảm ơn các anh chị khu vực Ninh Thuận, Bình Thuận đã tận tình giúp tôi thu hái, vận chuyển mẫu và cung cấp những thông tin cực kỳ quý báu về công dụng của loài cây này. Cuối cùng, xin được cảm ơn gia đình và bạn bè tôi đã luôn luôn bên cạnh động viên, cổ vũ, giúp tôi có được ngày hôm nay. Hà Nội, tháng 4 năm 2015 Sv. Lương Thị Lan MỤC LỤC Trang DANH MỤC KÝ HIỆU CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ ĐẶT VẤN ĐỀ Chương 1.TỔNG QUAN. 1.1. Đặc điểm thực vật của chi Stephania Lour. 1.1.1. Vị trí phân loại chi Stephania Lour. 1.1.2. Đặc điểm chung của chi Stephania Lour. 1.1.3. Một số khoá phân loại chi Stephania Lour. 1.1.3.1. Khoá phân loại chi Stephania Lour. ở Thái Lan. 1.1.3.2. Khoá phân loại chi Stephania Lour. ở Việt Nam. 1.2. Phân bố chi Stephania Lour. 1.2.1. Trên thế giới 1.2.2. Tại Việt Nam 1.3. Thành phần hoá học. 1.3.1. Một số nghiên cứu về alcaloid trong chi Stephania Lour. trên thế giới. 1.3.2. Một số nghiên cứu về alcaloid trong loàiStephaniapierrei ở Việt Nam. 1.4. Công dụng. 1.4.1. Công dụng dược liệu bình vôi. 1.4.2. Công dụng một số alcaloid phân lập từ các loài thuộc chi bình vôi. Chương 2. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU. 2.1. Nguyên vật liệu, thiết bị. 2.1.1. Nguyên liệu. 2.1.2. Thiết bị. 2.2. Nội dung nghiên cứu. 2.2.1. Nghiên cứu về thực vật. 1 2 2 2 2 3 3 5 7 7 8 10 10 11 12 12 12 14 14 14 14 14 14 2.2.2. Nghiên cứu về hoá học. 2.3. Phương pháp nghiên cứu. 2.3.1. Phương pháp nghiên cứu về thực vật. 2.3.2. Phương pháp nghiên cứu về hoá học. 2.3.2.1. Định tính các nhóm chất bằng các phản ứng hoá học. 2.3.2.2. Định tính các alcaloid bằng SKLM. 2.3.2.3. Chiết phân đoạn và định hướng phân lập. Chương 3. THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN. 3.1. Thực nghiệm và kết quả. 3.1.1. Kết quả về thực vật. 3.1.1.1. Mô tả đặc điểm thực vật, giám định tên khoa học. 3.1.1.2. Đặc điểm vi phẫu. 3.1.1.3. Đặc điểm bột dược liệu. 3.1.2. Kết quả về thành phần hoá học. 3.1.2.1. Định tính các nhóm chất trong dược liệu củ bằng phản ứng hoá học. 3.1.2.2. Định tính các alcaloid trong dược liệu củ bằng sắc ký lớp mỏng 3.1.2.3. Chiết phân đoạn alcaloid và định hướng phân lập các alcaloid trong củ. 3.2. Bàn luận. 3.2.1. Về thực vật. 3.2.2. Về hoá học. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC PHỤ LỤC 1 PHỤ LỤC 2 PHỤ LỤC 3 14 15 15 15 15 15 15 18 18 18 18 19 22 23 23 29 31 38 38 40 41 42 DANH MỤC KÝ HIỆU CÁC CHỮ VIẾT TẮT AcOH Acid acetic BuOH Buthanol CHCl 3 Chloroform EtOAc Ethyl acetat H 2 O Nước MeOH Methanol NH 4 OH Amoniac Rf Retention factor (hệ số lưu) S. Stephania SKLM Sắc ký lớp mỏng STT Số thứ tự TLTK Tài liệu tham khảo DANH MỤC CÁC BẢNG Tên bảng Trang Bảng 1.1. Phân bố các loài thuộc chi Stephania Lour. ở Việt Nam 8 – 9 Bảng 1.2. Các nhóm chất chính trong chi Stephania Lour. 10 -11 Bảng 1.3. Một số alcaloid được phân lập từ các loài thuộc chi Stephania Lour. 11 Bảng 1.4. Các alcaloid được phân lập từ loài Stephania pierrei Diels. 11 Bảng 3.1. Bảng kết quả định tính các nhóm chất trong dược liệu củ. 28- 29 Bảng 3.2. Giá trị Rf và màu sắc các vết khi quan sát dưới bước sóng 366nm của dịch C1 32 Bảng 3.3. Giá trị Rf và màu sắc các vết khi quan sát dưới bước sóng 366nm của dịch C2 33 Bảng 3.4. Giá trị Rf và màu sắc các vết khi quan sát dưới bước sóng 366nm của dịch C3 34 Bảng 3.5. Giá trị Rf và màu sắc các vết khi quan sát dưới bước sóng 366nm của dịch C4 35 Bảng 3.6. Giá trị Rf và màu sắc các vết khi quan sát dưới bước sóng 366nm của dịch C5 36 Bảng 3.7. Bảng so sánh các đặc điểm mô tả với đăc điểm trong khóa phân loại của Nguyễn Chiều 38-39 Bảng 3.8. Bảng so sánh các đặc điểm mô tả với đăc điểm trong khóa phân loại của Thái Lan 39-40 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Tên hình Trang Hình 2.1. Sơ đồ chiết phân đoạn dược liệu củ. 16 Hình 3.1. Cây và hoa đực. 19 Hình 3.2. Hoa cái và quả. 19 Hình 3.3. Vi phẫu thân. 20 Hình 3.4. Vi phẫu cuống lá. 21 Hình 3.5. Vi phẫu gân và phiến lá. 22 Hình 3.6. Đặc điểm bột dược liệu. 23 Hình 3.7. Sắc ký lớp mỏng các alcaloid trong củ. 30 Hình 3.8. Sắc ký đồ sắc ký lớp mỏng dịch C1 khai triển bằng hệ H4 khi quan sát dưới ánh sáng tử ngoại có bước sóng 366nm (1), 254nm (2) và sau khi phun thuốc thử Dragendorff dưới ánh sáng thường (3). 32 Hình 3.9. Sắc ký đồ sắc ký lớp mỏng dịch C2 khai triển bằng hệ H2 khi quan sát dưới ánh sáng tử ngoại có bước sóng 366nm (1), 254nm (2) và sau khi phun thuốc thử Dragendorff dưới ánh sáng thường (3). 33 Hình 3.10. Sắc ký đồ sắc ký lớp mỏng dịch C3 khai triển bằng hệ H2 khi quan sát dưới ánh sáng tử ngoại có bước sóng 366nm (1), 254nm (2) và sau khi phun thuốc thử Dragendorff dưới ánh sáng thường (3). 34 Hình 3.11. Sắc ký đồ sắc ký lớp mỏng dịch chiết C4 khai triển bằng hệ H2 khi quan sát dưới ánh sáng tử ngoại có bước sóng 366nm (1), 254nm (2) và sau khi phun thuốc thử Dragendorff dưới ánh sáng thường (3). 35 Hình 3.12. Sắc ký đồ sắc ký lớp mỏng dịch C5 khai triển bằng hệ H2 khi quan sát dưới ánh sáng tử ngoại có bước sóng 366nm (1), 254nm (2) và sau khi phun thuốc thử Dragendorff dưới ánh sáng thường (3). 36 Hình 3.13. Sắc ký đồ sắc ký lớp mỏng dịch C6 khai triển bằng hệ H1 khi quan sát dưới ánh sáng tử ngoại có bước sóng 366nm (1), 254nm (2) và sau khi phun thuốc thử Dragendorff dưới ánh sáng thường (3). 37 Hình 3.14. Sắc ký đồ sắc ký lớp mỏng dịch C7 khai triển bằng hệ H1 khi 37 quan sát dưới ánh sáng tử ngoại có bước sóng 366nm (1), 254nm (2) và sau khi phun thuốc thử Dragendorff dưới ánh sáng thường (3). 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Ngày nay với xu hướng chung, con người hướng đến việc sử dụng các sản phẩm từ thiên nhiên nhiều. Nước ta có lợi thế lớn về nguồn dược liệu, và kinh nghiệm sử dụng thuốc từ dân gian từ 54 dân tộc anh em với 4000 loài thực vật có thể làm thuốc trong các nền Y học dân gian, 800 loài thường được dùng trong Y Học cổ truyền chính thống và 300 loài dùng trong công nghiệp Dược [44]. Thực tế hiện nay phát triển sản xuất thuốc tân dược còn nhiều khó khăn cho nênviệc sản xuất các sản phẩmtừ cây cỏ đang là định hướng quan trọng cho các công ty Dược nước ta. Chi bình vôi (Stephania Lour.), thuộc họ Tiết dê (Menispermaceae), là một chi lớn với khoảng hơn 100 loài trên thế giới [36], Việt Nam có khoảng18 loài [19]. Ở Việt Nam các loài bình vôi là nguồn nguyên liệu chính để chiết xuất, phân lập rotundin cho công nghiệp dược sản xuất thuốc an thần, hiện nay nhiều hoạt chất khác đang được quan tâm nghiên cứu để có thể ứng dụng trong ngành Dược như: cepharanthin [31], [35],oxostephanin [18]. Một số loài bình vôi đã được nghiên cứu thường tập trung ở phía bắc và miền trung như: Stephania glabra (Roxb.) Miers (ở Ninh Bình, Hà Nội [36]), Stephania brachyandra Diels (ở Lào Cai [20]), Stephania dielsiana Y. C Wu (ở Hà Nội [18]), Stephania sinica Diels (ở Quảng Bình [14]). Các loài bình vôi phân bố ở Nam Trung bộ và các tỉnh phía Nam chưa được nghiên cứu nhiều nhất là về thực vật. Gần đây, chúng tôi đã thu hái một loài bình vôiở tỉnh Ninh Thuận, loài này có nhiều đặc điểm thực vật khác biệt với các loài đã nghiên cứu ở Việt Nam. Để góp phần chuẩn hóa dược liệu, bảo tồn, định hướng phát triển và sử dụng loài bình vôi này, đề tài “Nghiên cứu về thực vật và thành phần hoá học của một loài thuộc chi Stephania Lour. ở Ninh Thuận” đã được thực hiện với những mục tiêu sau: 1. Mô tả đặc điểm thực vật và giám định tên khoa học cho loài nghiên cứu. 2. Định tính các nhóm chất chung trong dược liệu củ. 3. Định tính alcaloid trong dược liệu củ bằng SKLM. 4. Chiết phân đoạn và định hướng phân lập các alcaloid trong các phân đoạn. [...]... Nghiên cứu về thực vật - Mô tả đặcđiểm hình thái thực vật - Mô tả đặc điểm vi phẫu thân cây, cuống lá, gân lá - Xácđịnh đặcđiểm bột dược liệu 2.2.2 Nghiên cứu về hoá học - Định tính các nhóm chất bằng phản ứng hoá học - Định tính alcaloid bằng SKLM - Chi t xuất, chi t phân đoạn, định hướng phân lập các alcaloid trong các phân đoạn 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.3.1 Phương pháp nghiên cứu về thực vật 15 - Nghiên. .. nhẵn bóng, quả trưởng thành cuống quả mọc lệch về một phía gần với dấu vết còn lại của núm nhụy, màu xanh khi còn xanh và màu đỏ khi chín Hạt hình móng ngựa, có 14 vân nổi lên trên mặt hạt, chia thành 2 hàng Qua quan sát các đặc điểm của loài nghiên cứu và tham khảo các tài liệu: khóa phân loại trong Thực vật chí Thái Lan[40], Nguyễn Chi u, Việt Nam [10] đã xác định loài nghiên cứu là Stephania pierreiDiels,... QUAN 1.1 ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT CỦA CHISTEPHANIALOUR 1.1.1 Vị trí phân loại chi Stephania Lour Theo các tài liệu [2], [3], [8], [13], [21], [22], chi Stephania Lour được xếp vào họ Tiết dê (Menispermaceae), bộ Hoàng liên (Ranunculales), phân lớp Hoàng liên (Ranunculidae), lớp Ngọc lan (Magnoliopsida), ngành Ngọc lan (Magnoliophyta) 1.1.2 Đặc điểm chung của chi Stephania Lour Chi Stephania Lour được mô tả... qua tham khảo các nghiên cứu đã có [14], [19], [20] về các loài bình vôi khác và thay đổi độ phân cực qua thay đổi thành phần pha động Lựa chọn thuốc thử hiện màu là Dragendorff là thuốc thử đặc hiệu của alcaloid Chương 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1 THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 3.1.1 Kết quả về thực vật 3.1.1.1 Mô tả đặc điểm thực vật, giám định tên khoa học 18 Thân leo cuốn mọc từ củ, mảnh khảnh,... là thành phần chính được quan tâm nghiên cứu nhiều nhất 1.3.1 Một số nghiên cứu về alcaloid trong chi Stephania Lour Trên thế giới:Các alcaloid đã được phân lập từ các loài trong chi bình vôi trên thế giới có thể xếp vào 9 nhóm [19], được trình bày trong Bảng 1.2 Bảng 1.2.Các nhóm chất chính trong chi StephaniaLour Stt 1 Nhóm chất Benzylisoquinolin Số lượng alcaloid Gồm 6 chất được phân lập từ 6 loài. .. [11], Hòa Bình, Hà Nam, Ninh Bình tới [34] Bà Rịa – Vũng Tàu 16 S tetrandra S.Moore Lào Cai, Yên Bái, Hà Bắc, Hà [7], [19], Giang, Hà Tây, Quảng Ninh [27] Các tỉnh phía Nam [11], [19] 17 S verosa (Bl.) Spreng 18 S viridiflavens H.S.Lo Sơn La [12], [15], et M.Yang [19] 1.3 THÀNH PHẦN HÓA HỌC 10 Các loài thuộc chi Stephania được nghiên cứu nhiều không chỉ về thực vật mà còn về hóa học Nhiều hợp chất đã... mang một dải hình móng ngựa gồm 2 hoặc 4 dãy dọc các bướu (gai) hay những gờ ngang (vân) Giá noãn có lỗ thủng hoặc không (S subpeltata) Đặc điểm hình thái của hạt đặc trưng cho từng loài [28] Cây mầm có lá mầm ít nhiều bằng rễ mầm, bao quanh bởi nội nhũ [36] 1.1.3 Một số khóa phân loại chi Stephania Lour 1.1.3.1 Khóa phân loại chi Stephania Lour ở Thái Lan Thực vật chí Thái Lan [40] đã phân loại 15 loài. .. loài bình vôi ở nước ta có diện phân bố rất rộng trên cả ba miền Bắc, Trung, Nam Thường tập trung ở vùng núi đá vôi như Tuyên Quang, Cao Bằng, Thái Nguyên, Phú Thọ, Lạng Sơn, Quảng Ninh, Thanh Hoá, Lâm Đồng, Bà Rịa Vũng Tàu Riêng loài Stephania pierreiDiels tập trung chủ yếu ở các tỉnh ven biển Bình Định, Phú Yên, Ninh Thuận [27] Phân bố của các loài Stephania Lour ở Việt Nam được trình bày ở Bảng 1.1... gây ngủ ở liều thấp nhưng lại có tác dụng kích thích hệ thần kinh trung ương, gây co giật và chết khi dùng ở liều cao Roemerin có tác dụng giãn mạch, hạ huyết áp, làm giảm cả huyết áp tối đa và huyết áp tối thiểu [26], [39] Chương 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU, THIẾT BỊ 14 2.1.1 Nguyên liệu Mẫu được thu hái tại Ninh Thuận vào năm 2012, lấy củ làm nguyên liệu nghiên cứu, lấy... Nikon của Nhật tại bộ môn Thực vật trườngĐại học Dược Hà Nội - Cất thu hồi dung môi trên máy Buchi Rotavapor tại bộ môn Thực vật trường Đại học Dược Hà Nội - Sắc ký lớp mỏng được thực hiện bằng hệ thống phun mẫu lên bản mỏng Linomat 5, hệ thống triển khai bản mỏng ADC2, quan sát bản mỏng trước và sau phun thuốc thử ở các bước sóng trên máy soi UV Camag TLC Visualizer 2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 2.2.1 Nghiên . định hướng phát triển và sử dụng loài bình vôi này, đề tài Nghiên cứu về thực vật và thành phần hoá học của một loài thuộc chi Stephania Lour. ở Ninh Thuận đã được thực hiện với những mục. BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LƯƠNG THỊ LAN NGHIÊN CỨU VỀ THỰC VẬT VÀ THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CỦA MỘT LOÀI THUỘC CHI STEPHANIA LOUR. Ở NINH THUẬN KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP. BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LƯƠNG THỊ LAN NGHIÊN CỨU VỀ THỰC VẬT VÀ THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CỦA MỘT LOÀI THUỘC CHI STEPHANIA LOUR. Ở NINH THUẬN KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP