BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ HƢƠNG NGHIÊN CỨU ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG ỨC CHẾ ALPHA GLUCOSIDASE CỦA LOÀI THUỘC CHI GYMENMA R.BR Ở VIỆT NAM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ HÀ NỘI - 2015 BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ HƢƠNG NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG ỨC CHẾ ALPHA GLUCOSIDASE CỦA LOÀI THUỘC CHI GYMNEMA R.BR Ở VIỆT NAM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Ngƣời hƣớng dẫn: 1.TS Đào Thị Mai Anh 2.TS Phùng Thanh Hƣơng Nơi thực hiện: Bộ mơn Hóa Sinh Trƣờng đại học Dƣợc Hà Nội HÀ NỘI - 2015 LỜI CẢM ƠN Với lịng thành kính, trước tiên em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới toàn thể thầy giáo anh chị mơn Hóa Sinh tạo điều kiện thuận lợi cho em trình thực đề tài Em xin cảm ơn người thầy trực tiếp dìu dắt em bước đầu làm khoa học, TS Đào Thị Mai Anh Cơ khơng người đáng kính giúp chúng em có định hướng định đắn q trình nghiên cứu mà ln bên chúng em lúc khó khăn nhất, động viên đưa lời khuyên bổ ích cho chúng em Đó tảng vững để từ em tự bước nghiệp em sau Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới cô giáo TS Phùng Thanh Hƣơng ln hỗ trợ chúng em trình học tập nghiên cứu Đồng thời em xin cảm ơn tới người thân gia đình bạn bè ln động viên tiếp thêm sức mạnh cho em lúc khó khăn Em xin chân thành cảm ơn! Sinh Viên Nguyễn Thị Hương MỤC LỤC DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ… CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Đái tháo đường ( Diabetes Melitus) 1.1.1 Định nghĩa 1.1.2 Phân loại 1.1.3 Dịch tễ 1.1.4 Các thuốc điều trị đái tháo đường 1.2 Enzym alpha-glucosidase 1.2.1 Sơ lược enzym alpha-glucosidase 1.2.2 Các yếu tố ảnh hưởng tới hoạt động enzym alpha glucosidase 10 1.2.3 Các chất ức chế enzym alpha-glucosidase 11 1.3 Chi Gymnema R.Br 13 1.3.1 Vị trí, phân loại 13 1.3.2 Đặc điểm thực vật phân bố 14 1.3.3 Thành phần hóa học 15 1.3.4 Tác dụng dược lí 17 1.3.5 Các nghiên cứu tiến hành Việt Nam chi Gymnema 19 CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị 21 2.1.1 Nguyên liệu 21 2.1.2 Hóa chất 22 2.1.3 Thiết bị 23 2.1.4 Dụng cụ 23 2.2 Nội dung nghiên cứu 23 2.3 Phương pháp nghiên cứu 24 2.3.1 Xây dựng phương pháp đánh giá tác dụng ức chế alpha glucosidase dược liệu 24 2.3.2 Áp dụng phương pháp đánh giá tác dụng ức chế enzym alpha glucosidase dược liệu 28 2.3.3 Xác định IC50 dược liệu tiềm 29 2.3.4 Phương pháp xử lí số liệu 29 CHƢƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ, BÀN LUẬN 30 3.1 Kết 30 3.1.1 Kết xây dựng phương pháp đánh giá hoạt tính ức chế alpha glucosidase dược liệu 30 3.1.2 Kết đánh giá tác dụng ức chế alpha glucosidase dược liệu 32 3.1.3 Kết xác định IC50 mẫu dược liệu tiềm 38 3.2 Bàn luận 40 3.2.1 Về phương pháp nghiên cứu 40 3.2.2 Về khả ức chế enzym alpha glucosidase mẫu dược liệu 42 3.2.3 Về đa dạng khả ức chế alpha glucosidase mẫu dược liệu 43 KẾT LUẬN 45 KIẾN NGHỊ 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT ADA American Diabetes Association - Hiệp hội đái tháo đường Hoa Kỳ BCRP Breast Cancer Resistance Protein–Protein kháng thuốc điều trị ung thư vú CVD Cardivascular Disease – Bệnh tim mạch CKD Chronic Kidney Disease – Bệnh thận mạn ĐTĐ Đái tháo đường GDM Gestational Diabetes Mellitus – Đái tháo đường thai kì GLP-1 Glucagon like peptid HbA1C Hemoglobin A1C HDL High Density Lipoprotein – Lipoprotein tỉ trọng cao IDF International Diabetes Federation – Liên đoàn đái tháo đường giới INSR Insulin Receptor LDL Low Density Lipoprotein – Lipoprotein tỉ trọng thấp MeOH Methanol MODY Maturity Onset Diabetes of the young – Đái tháo đường khởi phát bệnh nhân trẻ tuổi pNPG Para – nitrophenyl – α – D - Glucopyranosid STZ Streptozotocin SGLT2 Sodium glucose cotransporter WHO World Health Organization – Tổ chức y tế giới DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Các thuốc điều trị đái tháo đường……………………………………6 Bảng 1.2 Một số hợp chất có hoạt tính ức chế alpha glucosidase cô lập từ thiên nhiên………………………………………………………….12 Bảng 1.3 Đặc điểm thực vật phân bố lồi thuộc chi Gymenma Việt Nam…………………………………………………………………14 Bảng 2.1 Kí hiệu mẫu dịch chiết dược liệu nghiên cứu…………….21 Bảng 2.2 Thể tích hóa chất quy trình thử hoạt tính…………………28 Bảng 3.1 Hoạt tính ức chế alpha glucosidase acarbose nồng độ khác 31 Bảng 3.2 Hoạt tính ức chế alpha glucosidase mẫu Gymnema sylvestre (Retz.) R.Br ex Schult .33 Bảng 3.3 Hoạt tính ức chế alpha glucosidase mẫu Gymnema yunnanense Tsiang………………………………………………….34 Bảng 3.4 Hoạt tính ức chế alpha glucosidase mẫu Gymnema latifolium Wall ex Wight………………………………………………………36 Bảng 3.5 Hoạt tính ức chế alpha glucosidase mẫu Gymnema inodorum (Lour.) Decne Wight……………………………………………… 37 Bảng 3.6 IC50 dược liệu Acarbose…………………………………39 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Số lượng bệnh nhân đái tháo đường (20 – 79 tuổi) năm 2013………5 Hình 1.2 Cấu trúc tiểu phần N tận tiểu phần C tận phân tử alpha glucosidase……………………………………………………………9 Hình 1.3 Cấu trúc acid gymnemic gymnemagenin phân lập từ Gymnema sylvestre (Retz.) R.Br ex Schult…………………………16 Hình 1.4 Cấu trúc Gurmarin………………………………………………17 Hình 3.1 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc lượng p-nitrophenol tạo (thông qua A) theo thời gian với hoạt độ enzym khác 30 Hình 3.2 Đồ thị biểu diễn % ức chế alpha glucosidase acarbose nồng độ khác .32 Hình 3.3 Hoạt tính ức chế alpha glucosidase mẫu Gymnema sylvestre (Retz.) R.Br ex Schult 33 Hình 3.4 Hoạt tính ức chế alpha glucosidase mẫu Gymnema yunnanense Tsiang…………………………………………………35 Hình 3.5 Hoạt tính ức chế alphaglucosidase mẫu Gymnema latifolium Wall ex Wight…………………………………………………… 36 Hình 3.6 Hoạt tính ức chế alpha glucosidase mẫu Gymnema inodorum (Lour.) Decne Wight……………………………………………… 38 Hình 3.7 IC50 dược liệu Acarbose…………………………………39 Hình P.1 Đặc điểm hình thái lồi Gymnema Sylvestre (Retz.) R Br Ex Schult Hình P.2 Đặc điểm hình thái lồi Gymnema inodorum (Lour.) Dence Wight Hình P.3 Đặc điểm hình thái lồi Gymnema Latifolium Wall ex Wight Hình P.4 Đặc điểm hình thái lồi Gymnema yunnanense Tsiang Sơ đồ 2.1 Nội dung nghiên cứu 23 Sơ đồ 2.2 Quy trình thí nghiệm khảo sát động học enzyme………………….26 Sơ đồ 2.3 Quy trình đánh giá tác dụng ức chế alpha glucosidase Acarbose……………………………………………………………27 ĐẶT VẤN ĐỀ “Thế kỉ 21 kỉ bệnh nội tiết rối loạn chuyển hóa” – dự báo chuyên gia y tế từ thập niên 90 kỷ XX Dự báo trở thành thực Theo ước tính liên đồn đái tháo đường quốc tế (IDF), năm 2013 số bệnh nhân mắc bệnh đái tháo đường (ĐTĐ) 382 triệu người gây tổng thiệt hại lên đến 548 tỉ USD [36] Đáng ý có tới 80% bệnh nhân ĐTĐ sống quốc gia có thu nhập bình quân trung bình thấp Bệnh nhân đái tháo đường cần điều trị suốt đời, thuốc điều trị ĐTĐ có giá thành cao nhiều tác dụng phụ gây nhiều khó khăn q trình điều trị chăm sóc bệnh nhân Do đó, việc tìm thuốc có hiệu cao, tác dụng phụ giá thành hợp lí vấn đề cấp thiết, thu hút nhiều quan tâm nhà khoa học giới Có nhiều hướng nghiên cứu khác việc xuất phát từ thảo dược xu hướng phát triển thuốc phổ biến nước có Việt Nam Thực tế, từ lâu thảo dược chế phẩm có nguồn gốc từ thảo dược đóng vai trị đặc biệt quan trọng điều trị ĐTĐ không ưu cạnh tranh chi phí mà cịn tính hiệu an tồn Đã có nhiều loài thảo dược sử dụng để điều trị bệnh này, đó, tác dụng hỗ trợ điều trị ĐTĐ dây thìa canh (Gymnema sylvestre) biết đến nghiên cứu từ lâu giới Ở số nước dây thìa canh sử dụng rộng rãi với nhiều biệt dược khác Diabeticin (Ấn Độ), Sugarest (Mỹ), Gymnema (Nhật Bản), Glucos care (Sigapore) Tại Việt Nam nhà khoa học phát có mặt lồi thuộc chi [5],[9] Kết nghiên cứu gần TS Phùng Thanh Hương ThS Phạm Hà Thanh Tùng tác dụng hạ glucose máu loài thuộc chi Gymnema R.Br thu hái địa phương khác Việt Nam: Gymnema sylvestre (Retz.) R.Br ex Schul, Gymnema latifolium Wall ex Wight, Gymnema yunnanense Tsiang, Gymnema inodorum (Lour.) Decne cho thấy dược liệu có khả hạ đường huyết đáng kể coi 41 lựa chọn hầu hết tác giả triển khai mơ hình nghiên cứu in vitro hoạt tính ức chế enzym alpha glucosidase Để xác định thông số hoạt độ enzym thời gian ngừng phản ứng phù hợp Đề tài tiến hành nghiên cứu khảo sát động học enzym alpha glucosidase hoạt độ khác vòng 60 phút Ở hoạt độ 2U 1U enzym hoạt động mạnh, phản ứng nhanh chóng đạt đến trạng thái bão hịa, phản ứng tuyến tính phút đầu Ở hoạt độ 0,5U enzym hoạt động mạnh, phản ứng đạt trạng thái bão hòa sau khoảng 30 phút, hoạt độ phản ứng đạt tuyến tính vịng 10 phút đầu Ở hoạt độ 0,1U, phản ứng xảy tốt, q trình phản ứng tuyến tính theo thời gian Để so sánh hoạt tính ức chế ức chế enzym mẫu cách xác nhất, nên tiến hành phản ứng khoảng thời gian tuyến tính mà phản ứng xảy mạnh mẽ Nhưng hoạt độ 2U; 1U; 0,5 U thời gian tuyến tính q ngắn, khơng đủ thời gian thực thao tác Vì vậy, đề tài lựa chọn hoạt độ 0,1 U để làm thí nghiệm Lựa chọn thời gian ngừng phản ứng: phản ứng cần dừng khoảng thời gian tuyến tính Tuy nhiên, phải lưu ý thêm thực thí nghiệm thử hoạt tính ức chế dịch chiết dược liệu cịn có ảnh hưởng màu dịch chiết màu sau thêm Na2CO3, nên cần chọn thời gian ngừng phản ứng mà giá trị A thu sau thực thí nghiệm nằm khoảng phù hợp để tránh sai số Do đó, đề tài lựa chọn ngừng phản ứng thời điểm 15 phút Kết xây dựng kiểm chứng thông qua acarbose, dược chất biết đến với tác dụng ức chế alpha glucosidase điển hình Acarbose ức chế alpha glucosidase theo chế cạnh tranh [35] Các cơng trình nghiên cứu tác dụng ức chế alpha glucosidase đa số sử dụng acarbose làm chứng dương Khi áp dụng phương pháp triển khai, giá trị IC50 thu ổn định 802 (733-885) 42 3.2.2 Về khả ức chế enzym alpha glucosidase mẫu dƣợc liệu Là loại dược liệu sử dụng để điều trị bệnh Đái tháo đường từ cách 2000 năm Y học cổ truyền Ấn Độ Ayurveda, loài Gymnema sylvestre thu hút ý nhà khoa học giới khả làm hạ đường huyết mơ hình thử nghiệm động vật bệnh nhân tiểu đường týp Cơ chế hạ đường huyết lồi cho kích thích đảo tụy tiết insulin, làm chậm trình hấp thu glucose vào máu ức chế nhu động ruột cảm ứng kali [70] Kết nghiên cứu thu từ đề tài cho thấy, cắn dịch chiết ethanol mẫu thuộc chi Gymenma sylvestre thu hái Việt Nam thể tác dụng ức chế alpha glucosidase mẫu tác dụng ức chế nồng độ nghiên cứu Trong đó, mẫu Gymnema sylvestre thu hái từ Thái Nguyên cho hoạt tính ức chế cao nhất, khả ức chế loài tỉ lệ thuận với nồng độ dịch chiết, IC50 loài chí cịn thấp acarbose (IC50=463 µg/mL) Tác dụng ức chế alpha glucosidase loài Gymenma sylvestre báo cáo nồng độ 500µg/mL [52] Điều chứng tỏ rằng, thành phần dịch chiết Gymnema Sylvestre có chứa hoạt chất có khả ức chế enzym alpha glucosidase Thực tế, thành phần lồi Gymnema sylvestre có chứa Conduritol A, hoạt chất cô lập từ vỏ nho Marsdenia condurango biết đến với hoạt tính ức chế alpha glucosidase mạnh [46] Ngồi ra, theo cơng bố thành phần hóa học lồi Gymnema Sylvestre ngồi triterpen saponin cịn có thành phần khác olean saponin, dammaren saponin, triterpenoid saponin, flavonol glycosid [66] Điều đặc biệt thành phần chứa khung đường trở thành chất ức chế cạnh tranh với chất alpha glucosidase, thực tế, thuốc sử dụng thị trường acarbose, voglibose hợp chất từ tự nhiên có tác dụng ức chế alpha glucosidase đa phần chứa liên kết glycosid Sự ức chế khơng có hoạt chất chịu trách nhiệm mà phối hợp nhiều chất Nghiên cứu tác dụng loài khác thuộc chi Gymnema R.Br 43 nhiều hạn chế, đặc biệt, nay, Việt Nam, tác dụng hạ đường huyết lồi Gymnema lactifolium chưa có báo cáo giới Kết nghiên cứu đề tài loài Gymnema yunnanense Tsiang, Gymnema inodorum Gymnema latifolium Wall ex Wight thu hái từ địa phương khác Việt Nam cho thấy số 13 mẫu thể hoạt tính ức chế alpha glucosidase, GY5 Gymnema yunnanense Tsiang thu hái Kontum có hoạt tính ức chế cao nhất: IC50 dung dịch cắn dịch chiết từ mẫu dược liệu 640 µg/mL Như vậy, tương tự loài Gymnema sylvestre (Retz.) R.Br ex Schult, thành phần cắn dịch chiết loài Gymnema yunnanense Tsiang, Gymnema inodorum Gymnema latifolium Wall ex Wight có chứa hoạt chất có khả ức chế enzym alpha glucosidase Kết phù hợp với nguyên lý loài bậc taxon thực vật thường có thành phần hóa học tương tự tác dụng sinh học gần giống 3.2.3 Về đa dạng khả ức chế alpha glucosidase mẫu dƣợc liệu Từ kết đề tài cho thấy có đa dạng khả ức chế enzym alpha glucosidase 18 mẫu dược liệu: lồi khác hoạt tính ức chế khác nhau, chí lồi, khả ức chế mẫu thu hái địa phương khác khác Như phân tích trên, tác dụng ức chế alpha glucosidase tác dụng phối hợp nhiều nhóm hoạt chất khác nhau, đó, hoạt tính ức chế phụ thuộc vào thành phần, hàm lượng, tỉ lệ thành phần hóa học Các yếu tố chịu chi phối đặc điểm di truyền điều kiện khí hậu, thổ nhưỡng lồi khác trồng điều kiện địa lí khác có khơng tương đồng hàm lượng thành phần hoạt chất Điều chứng minh nghiên cứu thực nghiệm loài thuộc chi Gymnema R.Br Việt Nam Nghiên cứu Nguyễn Ngọc Tú cho thấy khác biệt sắc kí đồ loài thuộc chi Gymenma R.Br Việt Nam, loài, mẫu thu hái địa phương khác cho kết khác [17] Năm 2012, Phạm Hà Thanh Tùng công bố nghiên cứu xác định khác biệt di truyền sử dụng thị phân tử RADP 26 44 mẫu thuộc loài thuộc chi Gymnema R.Br cho thấy khác biệt mẫu theo loài theo phân bố địa lí [18] Các kết giúp lí giải tính đa dạng khả ức chế enzym alpha glucosidase 20 mẫu đề tài 45 KẾT LUẬN Sau trình tiến hành đề tài, rút kết luận sau: Đã khảo sát hoạt tính ức chế alpha glucosidase 20 mẫu dịch chiết loài thuộc chi Gymnema R.Br Việt Nam: 18/20 mẫu thể hoạt tính ức chế enzym alpha glucosidase Khả ức chế loài khác khác nhau, hoạt tính mẫu trồng nơi khác loài khác Đã xác định IC50 mẫu dược liệu tiềm Trong đó, mẫu GS1 Gymnema sylvestre (Retz.) R.Br ex Schult thu hái Thái Nguyên (IC50 = 463 µg/mL) mẫu GY5 Gymnema yunnanense Tsiang thu hái Kontum (IC50 = 640 µg/mL) mẫu dược liệu có hoạt tính ức chế enzym glucosidase mạnh với IC50 nhỏ so với chứng dương Acarbose KIẾN NGHỊ Tiếp tục thử nghiệm ảnh hưởng dược liệu alpha glucosidase mơ hình in vivo Nghiên cứu chế hạ đường huyết khác dịch chiết loài thuộc chi Gymnema R.Br TÀI LIỆU THAM KHẢO A.TIẾNG VIỆT Bệnh viện nội tiết trung ương (2013), Báo cáo hội nghị tổng kết hoạt động Dự án phòng chống đái tháo đường quốc gia năm 2012 triển khai kế hoạch năm 2013 Trần Thế Bách (2007), Nghiên cứu phân loại họ Thiên Lý Việt Nam, Viện sinh thái tài nguyên sinh vật Tạ Văn Bình (2003), Dịch tễ học bệnh đái tháo đường - Các yếu tố nguy vấn đề liên quan đến quản lý bệnh đái tháo đường khu vực nội thành thành phố lớn, Nhà xuất Y học, Hà Nội Phạm Thị Trân Châu , Phan Tuấn Nghĩa (2009), Công nghệ sinh học - tập 3: Enzym ứng dụng, Nhà xuất Giáo Dục pp 56-80 Võ Văn Chi (1999), Từ Điển thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học Nguyễn Thị Đông (2013), Nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết động vật thực nghiệm phân đoạn dịch chiết chloroform từ thân ý dĩ, Luận văn thạc sĩ dược học Trường đại học Dược Hà Nội Phạm Văn Hải (2010), Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học tác dụng sinh học dây thìa canh to Hịa Bình, Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ Trường đại học Dược Hà Nội Nguyễn Thị Thu Hiền (2014), Nghiên cứu đặc điểm hình thái, di truyền bán định lượng Gymnemagenin lồi dây thìa canh to (Gymnema Latfolium Wall Ex Wight) Việt Nam, Luận văn thạc sĩ dược học Trường đại học Dược Hà Nội Phạm Hoàng Hộ (2000), Cây cỏ Việt Nam 2, ed, NXB Trẻ, pp 738740 10 Phùng Thanh Hương (2010), Nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết ảnh hưởng chuyển hóa glucose dịch chiết lăng nước (Lagerstroemia speciosa L Pers.) Việt Nam, Luận án tiến sỹ dược học, Trường Đại học Dược Hà Nội 11 Phùng Thanh Hương , Phạm Hà Thanh Tùng (2014), "Đánh giá tác dụng hạ glucose máu thực nghiệm loài Gymnema R Br Việt Nam", Tạp chí dược học 462, pp 43-48 12 Vũ Ngọc Lộ (2005), "Những dược liệu có tác dụng hạ glucose máu điều trị bệnh tiểu đường", Tạp chí dược học Số pp tr 6,7,8 13 Trần Văn Ơn , Phùng Thanh Hương (2011), "Sàng lọc dược liệu có tác dụng điều trị đái tháo đường Việt Nam nghiên cứu thành phần hóa học, độc tính, hạ đường huyết số dược liệu điển hình", Đề tài khoa học phát triển công nghệ cấp Bộ 14 Trương Thị Tâm (2008), Nghiên cứu thành phần hóa học bước đầu thử hoạt tính phân đoạn dịch chiết dây thìa canh (Gymnema Sylvestre (Retz) R.BR ex Schult - Asclepiadaceae), Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học Trường đại học Dược Hà Nội 15 Phạm Văn Thanh (2001), Nghiên cứu thuốc điều trị bệnh đái tháo đường tử mướp đắng (Momordica charantia), Luận văn tiến sỹ dược học Trường đại học Dược Hà Nội 16 Đinh Thị Thu Thủy (2014), Đánh giá tác dụng hạ glucose máu dịch chiết lồi chi Gymnema R.Br Việt Nam, Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ, Trường Đại học Dược Hà Nội 17 Nguyễn Ngọc Tú (2013), Nghiên cứu phân loại loài chi Gymnema R.BR thu Việt Nam sử dụng vân tay hóa học HPTLC, Luận văn thạc sĩ dược học Trường đại học Dược Hà Nội 18 Phạm Hà Thanh Tùng (2012), Nghiên cứu tính đa dạng thực vật thành phần hóa học lồi chi Gymnema R Br Việt Nam, Trường đaị học Dược Hà Nội B TIẾNG ANH 19 Akert K., Lanza A.E , Raffa B.R (2010), "Diabetes mellitus and alzheimer's disease: shared pathology and treatment", Bristish Journal of clinical pharmacology, pp 365 - 376 20 American Diabetes Association (2014), "Diagnosis and Classification of Diabetes Mellitus", Diabetes care 37, pp S82 - S90 21 Anchalee Chiabchalard, Tewin Tencomnao , Rachana Santiyanon (2010), "Effect of Gymnema inodorum on postprandial peak plasma glucose levels in healthy human", African Journal of Biotechnology 9(7), pp p 1079 1085 22 Ang E et al (2009), "Safety and efficacy of AIR inhaled insulin compared with subcutaneous insulin in patients having diabetes and asthma: A 12month, randomized, noninferiority trial", Diabetes technol Ther, pp 35-44 23 Ankit S (2010), "Gymnema sylvestre (Gurma): A review", Der Pharmacia Lettre (1), pp 275-284 24 Asano N (2003), " Glycosidase inhibitors: update and perspectives on practical use", Glycobiology 13(10), pp 93-104 25 Asano N et al (2001), "Novel alpha-L-fucosidase inhibitors from the bark of Angylocalyx pynaertii (Leguminosae)", European Journal of Biochemistry 268(1), pp 35 - 41 26 Asp N G., Gudmand-Hoyer E , Andersen B (1985), "Distribution of disaccharidases, alkaline phosphatase, and some intracelllar enzymes along the human small intestine", Scand J Gastroenterol 10, pp 647-650 27 American Diabetes Association (2015), "Standards of Medical Care in Diabetes", Diabetes care 38, pp 51 - 593 28 Baskaran (1990), "Antidiabetic effect of a leaf extract from Gymnema sylvestre innon-insulin-dependent diabetes mellitus patients", Journal of Ethnopharmacology 30(3), pp p 295 - 300 29 Bishayee A , Malay C (1994), "Hypolipidaemic and antiatherosclerotic effects of oral Gymnema sylvestre R Br leaf extract in albino rats fed on a high fat diet", Phytotherapy research 8, pp 118-120 30 Brayer G.D et al (2000), "Subsite mapping of the human pancreatic alphaamylase active site through structural, kinetic, and mutagenesis techniques", Biochemistry 39, pp 4778 - 4791 31 Carene M N Picot, A Hussein Subratty , M Fawzi Mahomoodally (2014), "Inhibitory Potential of Five Traditionally Used Native Antidiabetic Medicinal Plants on alpha Amylase, alpha Glucosidase, Glucose Entrapment, and Amylolysis Kinetics I n V i t r o", Hindawi Publishing Corporation Advances in Pharmacological Sciences 2014, pp 32 Chand P et al (2008), "Anti salmonella activity of selected medicinal plants", Turk J Biol 33, pp 59-64 33 Chen H et al (2004), "A new method for screening alpha glucosidase inhibitors and application to marine microorganisms", Pharmaceutical Biology 42, pp 416 - 421 34 Fahimeh M A et al (2012), "In vitro α -glucosidase inhibitory activity of phenolic constituents from aerial parts of Polygonum hyrcanicum", DARU journal of pharmaceutical sciences 35 Hong Luo et al (2001), "Inhibitory effect and mechanism of acarbose combined with gymnemic acid on maltose absorption in rat intestine", World Journal of Gastroenterology 7(1), pp - 15 36 International Diabetes Federation (2013), "IDF Diabetes Atlas 6th Edition " 37 Kaplan N.P , Colowick S.P (1966), Methods in Enzymology Vol 8, Elsevier Academic Press 38 Khaled S O H A et al (2007), "Preparation and studies on immobilized αglucosidase from baker’s yeast Saccharomyces cerevisiae", Journal of the Serbian Chemical Society 71(12), pp 1255 - 1263 39 Kiyoshi M et al (2002), "A novel method for the assay of alph glucosidase inhibitory activity using multi-chanel oxygen sensor", The Japan Society for analytical chemistry 18, pp 1315 - 1319 40 Kraft S (2011), "Mystery Diabetes Type Hybrid; Alzheimer’s Drug May Help", Medical New Today 41 Krentz A J , Bailey C J (2005), "Oral antidiabetic agents: current role in type diabetes mellitus", Drugs 65(3), pp 385-411 42 Kyoko I et al (1999), "Homonojirimycin analogues and their glucosides from Lobelia sessilifolia and Adenophora spp (Campanulaceae)", Carbohydrate Research 323, pp 73 - 80 43 Lee D.S (2000), "Dibutyl phthalate, an alpha-glucosidase inhibitor from Streptomyces melanosporofaciens", Journal of Bioscience and Bioengineering 89(3), pp 271 - 273 44 Lyann S et al (2008), "Human Intestinal Maltase –Glucoamylase: Crystal Structure of the N-Terminal Catalytic Subunit and Basis of Inhibition and Substrate Specificity", Journal of Molecular Biology 375, pp 782 - 792 45 Matsuura H et al (2002), "a-Glucosidase Inhibitor from the Seeds of Balsam Pear (Momordica charantia) and the Fruit Bodies of Grifola frondosa", Biosci Biotechnol Biochem 66(7), pp 1576 - 1578 46 Melo E.B., Gomes S.A , Carvalho I (2006), "alpha and beta Glucosidase inhibitors: Chemical structure and biological activity", Tetrahedron 62, pp 10277-10302 47 Mohamed S S., Hansi P H , Kavitha T (2011), "Cinnamon extract inhibits α-glucosidase activity and dampens postprandial glucose excursion in diabetic rats", Nutrition & Metabolism 48 Mutiu I.K., Jesuyon V.O , Anofi O.T.A (2013), "In vitro Studies on the Inhibition of α-Amylase and α-Glucosidase by Leaf Extracts of Picralima nitida (Stapf)", Tropical Journal of Pharmaceutical Research 12(5), pp 719 - 725 49 Nakamura Y et al (1999), "Fecal steroid excretion is increased in rats by oral administration of gymnemic acids contained in Gymnema sylvestre leaves", Journal of Nutrion 129(6), pp 1214-1222 50 Nichols B.L et al (2003), "The maltase-glucoamylase gene: common ancestry to sucrase-isomaltase with complementary starch digestion activities", Proc Natl Acad Sci USA 100, pp 1432 - 1437 51 Nilubon J., Megh R.B , Jun K (2007), "[alpha]-Glucosidase inhibitors from Devil tree (Alstonia scholaris)", Food Chemistry 103(4), pp 1319 - 1323 52 Poongunran J et al (2014), "α-glucosidase inhibitory activity of some plants with known antidiabetic effects", International research sections 18 53 Preuss H G et al (2011), "Niacin-bound chromium increases life span in Zucker Fatty Rats", J Inorg Biochem 105 (10), pp 1344-1349 54 Preuss H G et al (1998), "Comparative effects of chromium, vanadium and gymnema sylvestre on sugar-induced blood pressure elevations in SHR", J Am Coll Nutr 17 (2), pp 116-123 55 Rammohan S., Asmawi M.Z , Amirin S (2008), "In vitro α-glucosidase and α-amylase enzyme inhibitory effcts of Andrographis paniculata extract and andrographolide", Acta Biochimica Polonica 55, pp 391 - 398 56 Ren L et al (2011), "Structural insight into substrate specificity of human intestinal maltase-glucoamylase", Protein Cell 2(10), pp 827 - 836 57 Satdive R.K., Abhilash P , Devanand P.F (2003), "Antimicrobial activity of Gymnema sylvestre leaf extract", Fitoterapia 74, pp 699-701 58 Sato A , Aso K (1957), "Kojibiose (2-O-α-D-Glucopyranosyl-D-Glucose): Isolation and Structure: Isolation from Hydrol", nature 180, pp 984-985 59 Sei O., Hiromi O , Shinichi K (2008), "α-Glucosidase Inhibitor from Kothala-himbutu (Salacia reticulata WIGHT)", Journal of Natural Products 71, pp 981 - 984 60 Shigematsu N et al (2001), "Effect of administration with the extract of Gymnema sylvestre R Br leaves on lipid metabolism in rats", Biological and pharmaceutiacl Bulletin 24, pp 713-717 61 Shigemura N et al (2008), "Gurmarin sensitivity of sweet taste responses is associated with co-expression patterns of T1r2, T1r3, and gustducin", Biochem Biophys Res Commun 367 (2), pp 356-363 62 Sinsheimer J E., Rao G S , McIlhenny H M (1970), "Constuents from Gymnema sylvestre leaves V Isolation and preliminary characterization of the gymnemic acids", J Pharm Sci 59 (5), pp 622-628 63 Srikanth A.V et al (2010), "Anticancer activity of Gymnema sylvestre R Br", International Journal of Pharmaceutical Sciences and Nanotechnology 3, pp 897-899 64 Suttisri R., Lee I S , Kinghorn A D (1995), "Plant-derived triterpenoid sweetness inhibitors", J Ethnopharmacol 47 (1), pp 9-26 65 Tamaki H et al (2010), "Inhibitory effects of herbal extracts on Breast Cancer Resistance Protein (BCRP) and structure-inhibitory potency relationship of isoflavonoids", Drug Metab Pharm 25, pp 170-179 66 Tiwari P., Mishra B.N , Sangwan N.S (2014), "Phytochemical and pharmacological properties of Gymnema sylvestre: an important medicinal plant.", Biomed Research International, pp 18 trang 67 Mishra B N Tiwari P., Sangwan N S (2014), "Phytochemical and pharmacological properties of Gymnema sylvestre: an important medicinal plant", BioMed Research International 68 Van B et al (1995), "Intestinal brush border glycohydrolases: structure, function, and development", Crit Rev Biochem Mol Biol 30(3), pp 197-262 69 Xie J.T et al (2003), "Anti-diabetic effects of Gymnema yunnanense extract", Pharmacol Res 47(4), pp p 323 - 329 70 Yoshikawa M et al (1997), "Medicinal foodstuffs IX: The inhibitors of glucose absorption from the leaves of Gymnema sylvestre R BR.(Asclepiadaceae): structures of gymnemosides a and b Chem.", Pharm Bull 45(10), pp 1671 - 1676 PHỤ LỤC Hình P.1 Đặc điểm hình thái lồi Gymnema sylvestre (Retz.) R.Br ex Schult Hình P.2 Đặc điểm hình thái Gymnema inodorum (Lour.) Hình P.3 Đặc điểm hình thái Gymnema latifolium Wall ex Wight Hình P.4 Đặc điểm hình thái lồi Gymnema yunnanense Tsiang ... sáng tỏ chế hạ glucose huyết loài thuộc chi Gymnema R. Br Việt Nam tiến hành đề tài “ Nghiên cứu đánh giá khả ức chế alpha glucosidase loài thuộc chi Gymnema R. Br Việt Nam? ?? với mục tiêu sau: Khảo... Các nghiên cứu đƣợc tiến hành Việt Nam chi Gymnema R. Br Ở Việt Nam, nhà khoa học phát có mặt lồi thuộc chi Gymnema R. Br gần có nhiều nghiên cứu triển khai [5], [9] Các nghiên cứu chủ yếu tập trung... tác dụng ức chế alpha glucosidase dƣợc liệu 3.1.2.1 Khả ức chế alpha glucosidase Gymnema sylvestre (Retz.) R. Br ex Schult Khả ức chế alpha glucosidase cắn dịch chi? ??t mẫu Gymnema sylvestre thử nghiệm