BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ HUYỀN TỔNG HỢP VÀ THỬ HOẠT TÍNH KHÁNG TẾ BÀO UNG THƢ CỦA MỘT SỐ DẪN CHẤT 2- ARYL-4-QUINAZOLINON LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC HÀ NỘI 2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ HUYỀN TỔNG HỢP VÀ THỬ HOẠT TÍNH KHÁNG TẾ BÀO UNG THƢ CỦA MỘT SỐ DẪN CHẤT 2- ARYL-4-QUINAZOLINON LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ DƢỢC PHẨM VÀ BÀO CHẾ THUỐC MÃ SỐ: 60720402 Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS Văn Thị Mỹ Huệ TS Lê Nguyễn Thành HÀ NỘI 2014 LỜI CẢM ƠN Để hồn thành khóa luận này, em xin tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến: TS Văn Thị Mỹ Huệ TS Lê Nguyễn Thành ngƣời cô, ngƣời thầy tận tình hƣớng dẫn, tạo điều kiện thuận lợi động viên em suốt trình thực luận văn Em xin cảm ơn giúp đỡ nhiệt tình của: TS Nguyễn Minh Hằng, TS Cao Bích Huệ, ThS Đào Đình Cƣờng, cử nhân Trần Hữu Giáp, cử nhân Nguyễn Anh Dũng, cử nhân Hà Thị Thoa, cử nhân Nguyễn Thị Tú Oanh (Trung tâm nghiên cứu phát triển thuốc - Viện hóa sinh biển - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam), thầy giáo Bộ mơn Hóa hữu thầy cô giáo Bộ mơn, phịng ban, thƣ viện - Trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội Mặc dù có nhiều cố gắng nhƣng hạn chế thời gian, kiến thức nhƣ tài liệu tham khảo nên luận văn em tránh khỏi sai sót nội dung hình thức, em mong nhận đƣợc góp ý thầy cô để luận văn em đƣợc hoàn thiện Cuối cùng, xin cảm ơn bố mẹ, em cảm ơn anh chị, bạn bè động viên, giúp đỡ con/ em suốt trình học tập nghiên cứu vừa qua Hà Nội, ngày tháng năm 2014 Học viên Nguyễn Thị Huyền MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 2-ARYL-4-QUINAZOLINON: DẪN CHẤT TƢƠNG ĐƢƠNG SINH HỌC CỦA 3-ARYLISOQUINOLINON 1.1.1 3-Arylisoquinolinon 1.1.2 Phát triển khung 3-arylisoquinolinon thành 2-aryl-4-quinazolinon 1.1.3 Một số tác dụng sinh học dẫn chất 2-aryl-4-quinazolinon 1.1.3.1 1.1.3.2 1.2 Tác dụng chống ung thƣ Một số tác dụng khác PHƢƠNG PHÁP TỔNG HỢP 10 1.2.1 Phản ứng Niementowski V phản ứng Niementowski V mở rộng 11 1.2.2 Phản ứng Shishoo C J 12 1.2.3 Phản ứng ngƣng tụ anthanilamid benzoyl clorid 12 1.2.4 Phản ứng ngƣng tụ anthranilamid aldehyd CHƢƠNG 2: NGUYÊN VẬT LIỆU, TRANG THIẾT BỊ VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 15 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU, HĨA CHẤT, DUNG MƠI 15 2.2 THIẾT BỊ THÍ NGHIỆM 16 2.3 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.3.1 Phƣơng pháp tổng hợp 2- aryl-4-quinazolinon 16 2.3.2 Phƣơng pháp tinh chế xác định cấu trúc 16 2.3.3 Phƣơng pháp xác định hoạt tính kháng tế bào ung thƣ 17 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 TỔNG HỢP HÓA HỌC 19 19 3.1.1 21 3.1.2 Tổng hợp dẫn chất trung gian aldehyd thơm 24 3.1.3 3.2 Tổng hợp dẫn chất trung gian 2-amino benzamid Tổng hợp dẫn chất 2-aryl-4-quinazolinon (14a-k; 15a-c) 25 KIỂM TRA ĐỘ TINH KHIẾT, KHẲNG ĐỊNH CẤU TRÚC 35 3.2.1 Kiểm tra độ tinh khiết 3.2.2 Khẳng định cấu trúc 3.3 35 37 THỬ HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO UNG THƢ CHƢƠNG 4: BÀN LUẬN 44 46 4.1 VỀ TỔNG HỢP HÓA HỌC 46 4.1.1 trúc 4.1.2 Tổng hợp dẫn chất trung gian aldehyd thơm khẳng định cấu trúc 48 4.1.3 4.2 Tổng hợp dẫn chất trung gian 2-amino benzamid khẳng định cấu 46 Tổng hợp dẫn chất 2-aryl-4-quinazolinon (14a-k; 15a-c) VỀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC 4.2.1 4.2.2 48 50 Phổ hồng ngoại( IR) 50 Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân proton ( H-NMR) 13 13 51 4.2.3 53 4.2.4 4.3 Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân C ( C-NMR) Phổ khối lƣợng (MS) 55 VỀ HOẠT TÍNH KHÁNG TẾ BÀO UNG THƢ KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 57 61 KẾT LUẬN 61 KIẾN NGHỊ 61 TÀI LIỆU THAM KHẢO 64 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT ATCC Tiêu chuẩn Mỹ (the American Type Culture Collection ) 13 Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân C-NMR H-NMR Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân proton CTCT Công thức cấu tạo CTPT Cơng thức phân tử ppm Độ dịch chuyển hóa học (phần triệu) DCM Dicloromethan DMAC N,N-dimethylacetamid DMEM Môi trƣờng nuôi cấy tế bào (Dulbecco's Modified Eagle Medium) DMF Dimethylformamid DMSO Dimethylsulfoxid DMSO-d6 Dimethylsulfoxid deutri hóa EC50 Nồng độ 50% có tác dụng tối đa ESI Ion hóa phun điện (Electron Spray Ionization) EtOAc Ethylacetat Hep-G2 Hepatocellular carcinoma - tế bào ung thƣ gan IC50 Nồng độ ức chế 50% tế bào ung thƣ thử nghiệm IR Phổ hồng ngoại (Infrared Spectrometry) J Hằng số tƣơng tác (Hz) KB Human epidemic carcinoma - tế bào ung thƣ da LU Human lung carcinoma - tế bào ung thƣ phổi MCF-7 Human breast carcinoma - tế bào ung thƣ vú MIC Nồng độ ức chế tối thiểu MOM Methoxy methyl MS Phổ khối lƣợng (Mass Spectrometry) MTT 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromid PMB p-Methoxylbenzyl SKLM Sắc ký lớp mỏng TLC Sắc ký mỏng (Thin Layer Chromatography) Tnc Nhiệt độ nóng chảy DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU Tên bảng TT Trang Bảng 3.1 Kết tổng hợp dẫn chất 14a-k 15a-c 35 Bảng 3.2 Giá trị Rf Tnc dẫn chất 14a-k 15a-c 36 Bảng 3.3 Kết phân tích phổ khối lƣợng (LC-MS) dẫn 38 chất 14a-k 15a-c Bảng 3.4 Số liệu phổ IR dẫn chất 14a-k 15a-c 39 Bảng 3.5 Số liệu phổ 1H-NMR dẫn chất 14a-k 15a-c 40 Bảng 3.6 Số liệu phổ 13C-NMR dẫn chất 14a-k 15a-c 42 Bảng 3.7 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào 14a-k 15a-c 45, 57 dòng tế bào ung thƣ ngƣời Bảng 4.1 Phổ 1H-NMR dẫn chất trung gian 4, 6, 11 48 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ HÌNH VẼ TT Tên hình Hình 1.1 Cấu trúc hợp chất 7,8-dimethoxy-2-methyl-3-(4,5- Trang methylendioxy-2-vinylphenyl) isoquinolin-1(2H)-on Hình 1.2 Cấu trúc dãy hợp chất 3-arylisoquinolinon nghiên cứu Cho cộng Hình 1.3 Cấu trúc hợp chất 3-arylisoquinazolinon nghiên cứu Cho cộng Hình 1.4 Cấu trúc số dẫn chất 3-arylisoquinolinon có hoạt tính chống ung thƣ cao Hình 1.5 Cấu trúc nhóm hợp chất HCT 116 Hình 1.6 Cấu trúc nhóm hợp chất 6-alkylamino- 2,3-dihydro- 3’-methoxy-2-phenyl-4-quinazolinon Hình 1.7 Cấu trúc nhóm hợp chất 6-pyrrolidinyl-2-(2-subtituted phenyl)-4-quinazolinon Hình 1.8 Cấu trúc hợp chất 2- (naphtalen-1-yl)-6-pyrrolidinyl-4quinazolinon Hình 1.9 Cấu trúc hợp chất 2- aryl-6-substituted quinazolinon 10 Hình 1.10 Cấu trúc dẫn chất Ratitrexed 11 Hình 1.11 Cấu trúc hợp chất Methaqualon 12 Hình 4.1 Phổ hồng ngoại chất 15c 51 13 Hình 4.2 a)Phổ 1H-NMR; b) Phổ 1H-NMR giãn rộng chất 15c 14 Hình 4.3 a)Phổ 13 C-NMR; b) Phổ 13 C-NMR giãn rộng chất 52, 53 54, 55 15c 15 Hình 4.4 Phổ khối lƣợng (MS) chất 15c 56 SƠ ĐỒ Tên sơ đồ TT Sơ đồ 1.1 Thiết kế dẫn chất 2-aryl-4-quinazolinon dựa Trang phƣơng pháp nhóm đẳng cấu sinh học Sơ đồ 1.2 Phản ứng tổng hợp Niementowski V 11 Sơ đồ 1.3 Phản ứng tổng hợp Niementowski V cải tiến 11 Sơ đồ 1.4 Phản ứng tổng hợp Patel V.S Patel S.R 11 Sơ đồ 1.5 Phản ứng tổng hợp Shishoo C.J cộng 12 Sơ đồ 1.6 Phản ứng tổng hợp Hour M J cộng 12 Sơ đồ 1.7 Phản ứng ngƣng tụ anthranilamid benzoyl clorid cải 13 tiến Sơ đồ 1.8 Phản ứng tổng hợp Hour M J cộng 13 Sơ đồ 1.9 Phản ứng tổng hợp Na Yeun Kim Cheol-Hong 14 Cheon 10 Sơ đồ 3.1 Tổng hợp dẫn chất trung gian 2-amino benzamid 19 11 Sơ đồ 3.2 Tổng hợp dẫn chất trung gian 2-(dimethylamino) 19 benzaldehyd 12 Sơ đồ 3.3 Tổng hợp dẫn chất 2-aryl-4-quinazolinon 13 Sơ đồ 3.4 Tổng hợp 2-amino-5-methyl benzamid 21 14 Sơ đồ 3.5 Tổng hợp 2-amino-4-methyl benzamid 22 15 Sơ đồ 3.6 Tổng hợp 2-amino-5-(dimethylamino) benzamid 23 16 Sơ đồ 3.7 Tổng hợp 2-(dimethylamino)benzaldehyd 24 17 Sơ đồ 4.1 Cơ chế tổng hợp chất 2-aryl-4-quinazolinon 49 20,25 ... 3’-OCF3 24 5 - 24 6 0,63 1:1 14g 6-CH3 2? ??-F 22 8 -22 9 0,75 1:1 14h 6-CH3 3’-F 308-309 0,70 1:1 14i 6-CH3 2? ??-N(CH3 )2 2 04 -20 5 0, 54 2: 1 10 14j 7-CH3 2? ??-N(CH3 )2 2 14 -21 5 0, 72 2:1 11 14k 7-CH3 2? ??-OCF3 20 4 -20 5... 2? ??-N(CH3 )2 3513 29 21 -29 70 1585-1 621 148 4 10 14j 7-CH3 2? ??-N(CH3 )2 3069 -29 34 1596-16 64 144 9 11 14k 7-CH3 2? ??-OCF3 3 022 -28 80 16 12- 1676 145 3 12 15a 6-CH3 3 041 -29 14 1677 13 15b 7-CH3 31 42 - 29 72 1617-1659 149 9-1577... có hoạt tính kháng tế bào ung thư tốt, luận văn: ? ?Tổng hợp thử hoạt tính kháng tế bào ung thƣ số dẫn chất 2- aryl- 4quinazolinon” tiến hành với hai mục tiêu : 1- Tổng hợp số dẫn chất 2- aryl- 4- quinazolinon