Đang tải... (xem toàn văn)
ĐẶT VẤN ĐỀ Các dẫn chất của artemisinin trong đó có art unat (ART) không chỉ được sử dụng rộng rãi trong điều trị bệnh sốt rét, mà còn là một chủ đề nghiên cứu (NC) trong tác dụng chống ung thư trên một số dòng tế bào ung thư biểu mô, bạch cầu, gan,….22, 27. Nhằm tăng hiệu quả trong điều trị ung thư của các dược chất, công nghệ nano với việc sử dụng các polym đã được triển khai. Poly(lacticcoglycolic) acid (PLGA) là một polyme có khả năng phân hủy sinh học, một chất mang thuốc, giúp bảo vệ dược chất khỏi tác động của enzym, kéo dài thời gian giải phóng dược chất, và có thể bào chế được dưới dạng tiểu phân nano. Tuy nhiên, nano polyme PLGA vẫn có hạn chế như khả năng bám d nh màng nhầy kém và khả năng nhận diện cao b i hệ thống miễn dịch của cơ thể 42. Do đó, chitosan (CS) là một polysaccharid có khả năng phân hủy sinh học được sử dụng để làm thay đổi đặc tính bề mặt của tiểu phân nano P G như thay đổi thế zeta từ điện âm ang dương, giúp làm tăng khả năng bám d nh tế bào, kéo dài thời gian tuần hoàn của hệ nano và hạn chế sự giải phóng thuốc ồ ạt “bur t r lea ” giai đoạn đầu. Vì vậy, đề tài “Nghi n à hế tiểu phân nano artesunat sử dụng poly(lacticcoglycolic) acid và hit san” được thực hiện với các mục tiêu: 1. Xây dựng công th c và xá định được một số thông số quy trình bào chế tiể h n nan RTPLGA bao ngoài với chitosan. 2. Đánh giá được một số đặc tính của tiểu phân nano ARTPLGACS.
count B Y T I HC HÀ NI TRN TRNG BIÊN NGHIÊN CU BÀO CH TIU PHÂN NANO ARTESUNAT S DNG POLY(LACTIC-CO-GLYCOLIC) ACID VÀ CHITOSAN KHÓA LUN TT NGHIP HÀ NI - 2015 B Y T I HC HÀ NI TRN TRNG BIÊN NGHIÊN CU BÀO CH TIU PHÂN NANO ARTESUNAT S DNG POLY(LACTIC-CO-GLYCOLIC) ACID VÀ CHITOSAN KHÓA LUN TT NGHI ng dn: 1. PGS.TS. Nguyn Ngc Chin 2. NCS. H Hoàng Nhân c hin: 1. Vin Công ngh c phm Quc gia 2. B môn Bào ch HÀ NI - 2015 LI C Lu tiên tôi xin t lòng bi nht i vi: PGS.TS. Nguyn Ngc Chin Ni thy giàu kinh nghim y nhit huyt ng, giúp tôi thc hin khóa lun này. Tôi xin gi li c sâu sc ti NCS. H Hoàng Nhâni thy, i trng dn tôi trong quá trình làm thc nghim. ôi xin chân thành cTh.S Bùi Th , DS. Nguyn Th Thùy Trang, Th.S Nguyn Hnh Thy, nhi ch n ngi luôn nhit tình ch bo, dìu dt tôi trong thi gian qua. gi li c ti các thy cô, các anh ch k thut viên thuc Vin Công ngh c phm Quc gia, B môn Công nghic, B môn Bào ch u kin v thit b, máy móc, hóa ch tôi hoàn thành khóa lun. Tôi xin phép cngào to và các Phòng ban khác, các thy cô và cán b i hc Hà Ny bo, tu kin và tôi hoàn thành khóa hc tng. Cui cùng, tôi c cm tôi, bng viên, giúp tôi trong sut thi gian qua. Sinh viên Trn Trng Biên MC LC DANH MC CÁC KÝ HIU, CÁC CH VIT TT DANH MC CÁC BNG DANH MC CÁC HÌNH V TH T V 1 NG QUAN 2 1.1. Vài nét v tiu phân nano polyme 2 1.1.1. Khái nim 2 1.1.2. Phân loi 2 1.1.3. Mt s tiu phân nano polyme 3 1.1.4. m phân b, hp thu khi s dng các h tiu phân nano polyme ch 4 1.2. Thông tin v polyme poly(lactic-co-glycolic) acid 5 1.2.1. Cu trúc, tính cht, ng dng 5 1.2.2. Nh dng PLGA làm cht mang thuc 6 1.3. Thông tin v chitosan 7 1.3.1. Ngun gc và cu trúc ca chitosan 7 1.3.2. Tính cht ca chitosan 7 1.3.3. Mt s ng dng ca chitosan trong bào ch tiu phân nano polyme 8 1.3.4. nano PLGA s dng chitosan 9 1.3.5. Mt s nghiên cu bào ch tiu phân nano s d PLGA và chitosan 10 1.4. Thông tin v artesunat 11 1.4.1. Công thc hóa hc 11 1.4.2. Tính chng 12 1.4.3. ng hc 12 1.4.4. Tác dng cha artesunat 12 1.4.5. Mt s nghiên cu bào ch h nano polyme artesunat 14 U 16 2.1. Nguyên vt liu, thit b 16 2.1.1. Nguyên liu 16 2.1.2. Thit b 16 2.2. Ni dung nghiên cu 17 2.3. nghiên cu 17 2.3.1. 17 2.3.2. 20 2.3.3. t k thí nghim và tc 25 C NGHIM, KT QU VÀ BÀN LUN 26 3.1. Kt qu xây dng chun biu th ma din tích pic và n artesunat 26 3.2. - 26 3.3. - 27 3.3.1. nh công thc bào ch n 27 3.3.2. La chn mt s thông s n hp ph chitosan 29 3.3.3. Tc bào ch tiu phân nano ART-PLGA/CS 31 45 TÀI LIU THAM KHO PH LC DANH MC CÁC KÝ HIU, CÁC CH VIT TT Ab Kháng th (antibody) ACN Acetonitril ART Artesunat BP n Anh ( British Pharmacopoeia) CS Chitosan Da Dalton DA Deacetyl hóa DC DCM Dicloromethan n Vit Nam DHA Dihydroartemisinin EMA n lý thuc châu Âu (European Medicines Agency) EPR (Enhanced Permeation and Retention) FDA Cc qun lý Thc ph c phm Hoa K (Food and Drug Administration) FT-IR Ph hng ngoi chuyn dng Fourier GI 50 N thuc cn thit có tác dng c ch 50% s phát trin ca t bào (Drug concentration required to inhibit cell growth by 50%) HPLC Sc ký lng hi Liquid Chromatography) kDa Kilo Dalton kl/kl Khng/khng KT KTTP u phân MPS (Mononuclear Phagocyte System) NC PACA poly(alkylcyanoacrylat) PDI PEG Polyethylenglycol PEO Polyethylen oxyd PLA Polylactic acid PLGA Poly(lactic-co-glycolic) acid TEM Kính h (Transmission Electron Microscopy) Tg Nhi chuyn hóa thy tinh (glass transition temperature) tt/tt Th tích/th tích DANH MC CÁC BNG Trang 1.1 và thách thc sinh hc ca các th h tiu phân nano [6] 3 1.2 So sánh liu hiu qu ca ART trên mt s dòng t bào ung [27] 13 2.1 Nguyên lic s dng trong quá trình thc nghim 16 3.1 Ma din tích pic và n ART 26 3.2 CS/PLGAc tính lý hóa tiu phân nano ART-PLGA/CS 27 3.3 phân nano ART-PLGA/CS 29 3.4 Ký hiu và các mc ca bic lp 31 3.5 Ký hiu và các mc ca bin ph thuc 32 Bng 3.6 ng ca các bic ln bin ph thuc 33 3.7 34 3.8 Kt qu nh mt s c tính tiu phân nano ART- PLGA/CS theo công thc t 38 3.9 40 Bng 3.10 a h nano ART-PLGA/CS 42 DANH MC CÁC HÌNH V, TH Trang Hình 1.1 Mô phng các th h tiu phân nano [6] 2 Hình 1.2 Cu trúc hóa hc và s thy phân ca PLGA 5 Hình 1.3 Cu trúc hóa hc ca chitosan 7 Hình 1.4 Cu trúc tiu phân nano polyme PLGA gn chitosan [53] 10 Hình 1.5 Cu trúc hóa hc ca artesunat 11 Hình 2.1 quy trình bào ch tiu phân nano - 19 Hình 2.2 - 19 Hình 3.1 ng chun biu din ma din tích pic và n ART 26 Hình 3.2 nh ng ca thi gian hp ph n KTTP, th zeta và PDI ca tiu phân nano ART-PLGA/CS 30 Hình 3.3 Mu din s ng ca pH dung dch CS và t l n KTTP nano ART-PLGA/CS 34 Hình 3.4 Mu din s ng ca pH dung dch CS và nhit hp ph n PDI ca h tiu phân nano ART-PLGA/CS 35 Hình 3.5 biu din hình dng chui hp ph CS trên b mt tiu phân nano PLGA (A. Chun hp ph, vòng và do; B. Chui liên k m gn; C. Cun hoc khi hp ph; D. Chu[26] 36 Hình 3.6 M u din s ng ca t l CS/PLGA và pH dung d n th zeta ca tiu phân nano trong môi c ct 36 Hình 3.7 Mu din s nh ng ca nhi và pH dung dch n hiu sut mang thuc ca tiu phân nano ART- 37 PLGA/CS Hình 3.8 Hình nh chp TEM ca tiu phân nano polyme 39 Hình 3.9 th th hin phi phóng tích lu ca ART theo thi gian t h 40 Hình 3.10 nano ART-PLGA/CS 41 Hình 3.11 - D(+)Tre: D(+) trehalose dihydrat, Suc: sucrose, Man: manitol) 43 [...]... số nghiên cứu bào chế hệ nano polyme artesunat - Trần Đại Lâm và cộng sự (2006 đã NC bào chế tiểu phân nano polyme CS th o phương pháp tạo phức ion với tripolyphosphat làm chất dẫn thuốc điều trị sốt rét ART và NC quá trình phân hủy sinh học in vitro của tiểu phân nano bào chế được cũng như động học giải phóng thuốc in vitro từ hệ nano Kết quả tiểu phân nano có KT khoảng 200-300 nm, tốc độ phân hủy polyme... sử dụng polyme phân hủy sinh học Hình 1.4 Cấu trúc tiểu phân nano polyme PLGA gắn chitosan [53] a Gắn chitosan bằng phương pháp hấp phụ vật lý b Gắn chitosan bằng phương pháp liên kết hóa học 1.3.5 Một số nghiên cứu bào chế tiểu phân nano sử dụng kết hợp po m PLGA và chitosan - Chen H và cộng sự (2009), Wang Y và cộng sự (2013) đã NC bào chế tiểu phân nano P G -C làm hệ đưa thuốc theo phương pháp bốc... tế bào, kéo dài thời gian tuần hoàn của hệ nano và hạn chế sự giải phóng thuốc ồ ạt “bur t r lea ” đầu Vì vậy, đề tài “Nghi n à giai đoạn hế tiểu phân nano artesunat sử dụng poly( lactic -co- glycolic) acid và hit san” được thực hiện với các mục tiêu: 1 Xây dựng công th c và xá định được một số thông số quy trình bào chế tiể h n nan RT-PLGA bao ngoài với chitosan 2 Đánh giá được một số đặc tính của tiểu. .. mặt tiểu phân nano, tạo các tiểu phân nano ẩn (các “stealth”), giúp làm giảm tối đa tương tác với protein huyết tương (các opsonins), tiểu phân nano ít bị bắt giữ hơn b i MPS và tuần hoàn trong máu dài hơn và có thể thoát mạch thấm qua lớp màng trong vào khối u rắn [3], [25], [47] 1.2 Thông tin về polyme poly( lactic -co- glycolic) acid 1.2.1 Cấu trúc, tính chất, ứng dụng Hình 1.2 Cấu trúc hóa học và sự... β-(1-4)-glycosid nên dễ bị cắt mạch b i các chất hóa học như acid, ba , tác nhân oxy hóa và các enzyme thủy phân [43] 1.3.3 Một số ứng dụng của chitosan trong bào chế tiểu phân nano polyme CS được ứng dụng rộng rãi trong bào chế hệ đưa thuốc có cấu trúc nano nhờ các tác dụng au - Nhờ t nh thân nước, CS tạo lớp áo thân nước bao ngoài tiểu phân nano có bề mặt kị nước (như P G , PLA, P C ,… Các NC cho thấy tiểu. .. tới đặc tính tiểu phân nano ART-PLGA/CS - Sử dụng thuật toán để thiết kế thí nghiệm, phân tích sự ảnh hư ng của các thành phần trong công thức và một số thông số quy trình, lựa chọn công thức tối ưu - Đánh giá một số đặc tính của hệ tiểu phân nano bào chế được từ công thức tối ưu 2.3 Phương há nghi n u 2.3.1 Phương pháp bào chế Qua tham khảo tài liệu [41], tiến hành bào chế tiểu phân nano ART-PLGA/CS... kéo dài thời gian giải phóng dược chất, và có thể bào chế được dưới dạng tiểu phân nano Tuy nhiên, nano polyme PLGA vẫn có hạn chế như khả năng bám d nh màng nhầy kém và khả năng nhận diện cao b i hệ thống miễn dịch của cơ thể [42] Do đó, chitosan (CS) là một polysaccharid có khả năng phân hủy sinh học được sử dụng để làm thay đổi đặc tính bề mặt của tiểu phân nano P G như thay đổi thế zeta từ điện... (ART) không chỉ được sử dụng rộng rãi trong điều trị bệnh sốt rét, mà còn là một chủ đề nghiên cứu (NC) trong tác dụng chống ung thư trên một số dòng tế bào ung thư biểu mô, bạch cầu, gan,….[22], [27] Nhằm tăng hiệu quả trong điều trị ung thư của các dược chất, công nghệ nano với việc sử dụng các polym đã được triển khai Poly( lactic -co- glycolic) acid (PLGA) là một polyme có khả năng phân hủy sinh học,... bào, đặc biệt là màng tế bào ung thư có điện âm [6], [53], [56], do đó tiểu phân nano cation 9 được cho là được hấp thu chọn lọc b i các tế bào nội mô mạch máu của khối u Điện t ch dương bề mặt s thuận lợi cho sự nhập bào của tiểu phân nano vào tế bào ung thư [6], [26] Ngoài ra, tính chất bám dính màng nhầy của C giúp tăng ự kết dính của tiểu phân nano với màng tế bào, do đó đẩy nhanh sự thực bào vào... như các Eudragit và đặc biệt là các polyme phân hu sinh học như PLGA, polylactic acid (PLA), polycaprolacton (PCL),…[3], [38] Bên cạnh đó, nhiều nghiên cứu sử dụng kết hợp các polyme tổng hợp và polyme thiên nhiên (alginat, chitosan, … do các ưu điểm của polym thiên nhiên như: giá thành thấp, ổn định, an toàn, tương th ch với nhiều dược chất, ít dùng dung môi hữu cơ trong quá trình bào chế [35] Các phương . I HC HÀ NI TRN TRNG BIÊN NGHIÊN CU BÀO CH TIU PHÂN NANO ARTESUNAT S DNG POLY( LACTIC-CO-GLYCOLIC) ACID VÀ CHITOSAN KHÓA LUN TT NGHIP . I HC HÀ NI TRN TRNG BIÊN NGHIÊN CU BÀO CH TIU PHÂN NANO ARTESUNAT S DNG POLY( LACTIC-CO-GLYCOLIC) ACID VÀ CHITOSAN KHÓA LUN TT NGHI ng. ca tiu phân nano ART-PLGA/CS. 2 1. NG QUAN 1.1. Vài nét v tiu phân nano polyme 1.1.1. Khái nim Tiu phân nano polyme ng bao hàm c 2 loi là siêu vi cu (nanospheres)