BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH NGUYỄN THỊ HẢI LÝ PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC CÁC HỢP CHẤT TỪ NẤM ĐEN (NIGROFOMES MELANNOPORUS (MONT.) MURR) Ở NGHỆ AN Chuyên ngành: Hóa hữu Mã số: 60.14.01.14 LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS LÊ VĂN HẠC VINH - 2014 MỤC LỤC LỜI MỞ ĐẦU 1 Lí chọn đề tài Đối tượng nghiên cứu 3 Nhiệm vụ nghiên cứu Chương 1: TỔNG QUAN .4 1.1 Giới thiệu terpen sesquiterpen 1.1.1 Vài nét terpen 1.1.2 Vài nét sesquiterpen 1.1.3 Giới thiệu khung driman sesquiterpen 14 1.1.4 Mối liên quan cấu trúc hoạt tính sinh học [3], [13] 23 1.2 Tổng quan họ Nấm Polyporaceae .25 1.2.1 Đặc điểm sinh học [32] 25 1.2.2 Thành phần hóa học 27 1.2.3 Giá trị dược liệu loài Poplyporaceae 33 1.3 Đối tượng nghiên cứu .34 1.3.1 Phân loại khoa học .34 1.3.2 Đặc điểm sinh học [33] .35 1.3.4 Thành phần hóa học 36 Chương 2: PHƯƠNG PHÁP VÀ THỰC NGHIỆM 37 2.1 Phương pháp nghiên cứu .37 2.1.1 Các phương pháp xử lý mẫu chiết 37 2.1.2 Các phương pháp phân tích, phân tách hỗn hợp phân lập hợp chất 37 2.1.3 Phương pháp khảo sát cấu trúc hợp chất 37 2.2 Thực nghiệm 38 2.2.1 Hoá chất, dụng cụ thiết bị .38 2.2.3 Dữ kiện tính chất vật lý phổ hợp chất A .41 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 42 3.1 Phân lập hợp chất .42 3.2 Xác định cấu trúc hợp chất A 42 KẾT LUẬN 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO 60 LỜI MỞ ĐẦU Lí chọn đề tài Ngày với đổi quan niệm dinh dưỡng cách hợp lý không cần nhiều lượng, khơng cần mang lượng mỡ dự trữ không cần thiết mà cần nguồn dinh dưỡng sinh học có giá trị cao, thích hợp với người giảm dần lao động bắp gia tăng hoạt động trí tuệ Với yêu cầu nguồn dinh dưỡng nấm đóng vai trị quan trọng cho người Trước hết, nấm nguồn dinh dưỡng có giá trị cao, thích hợp cho người Trong thể nấm tươi hàm lượng nước tới 90%, chất khơ có 10-12% Trong tổng lượng axit amin nấm có tới 15-40% axit amin không thay thế, 25-35% axit amin tự do, với diện gần đủ loại axit amin, có loại axit amin cần thiết cho người Nấm giàu leucin lysin loại axit amin có ngũ cốc Do đó, xét chất lượng đạm nấm khơng thua đạm động vật Lượng chất béo nấm thấp, khoảng 15-20% (nấm mỡ 2-8%) Nấm tươi chứa hàm lượng gluxit cao (3-28%), có đường pentoza (xiloza, riboza), hexoza (glucoza, galactoza, manoza), dixaccarit (saccaroza), đường amin, đường rượu (monitola iositola) , hàm lượng chất xơ khoảng 3-32% Đặc biệt, nấm có nguồn đường dự trữ dạng glycogen tương tự động vật (thay tinh bột thực vật) Nấm chứa nhiều loại vitamin B, C, K, A, D, E, Trong nhiều vitamin nhóm B vitamin B1, B2, B3, B5, Nếu rau nghèo vitamin B12, cần ăn gam nấm tươi đủ cung cấp lượng vitamin B12 cho nhu cầu ngày Tương tự hầu hết loại rau, nấm nguồn khoáng lớn Nấm rơm ghi nhận giàu K, Na, Ca, P, Mg, chiếm từ 56-70% lượng tro tổng cộng Ăn nấm bảo đảm bổ sung đầy đủ cho nhu cầu khống ngày Trong nấm cịn có chất thơm, chất có hoạt tính sinh học làm nên hương vị riêng biệt hấp dẫn cho người Tóm lại, nấm có lượng đạm thấp động vật cao thực vật, nghèo lượng giàu vitamin muối khống, thích hợp với nhu cầu dinh dưỡng người giai đoạn nay, với người làm việc trí óc, vận động Một ý nghĩa quan trọng nấm làm thuốc chữa bệnh Nấm khơng ăn ngon, giàu chất dinh dưỡng, mà cịn không gây xơ cứng động mạch không làm tăng lượng cholesterol máu nhiều loại thịt động vật Từ thời trung cổ người biết sử dụng nấm Polyporus populinus làm thuốc cầm máu, chữa bệnh lao phổi, tê thấp, vàng da, phù thũng (do nấm chứa axit agarichinic) Bào tử nấm Fungus bovista dùng điều trị vết thương nặng cầm máu sau mổ Nấm cỏ tranh (Agaricus campestris) dùng chữa bệnh đái đường, rắn cắn Mộc nhĩ người phương Đơng dùng làm thuốc chữa bệnh lỵ, táo bón, rong huyết Nấm phục linh (Poria cocos) có tác dụng an thần Gần người ta nhắc đến khả chữa bệnh ung thư nấm (đặc biệt loài Fomes fomentarius, Fomitopsis anosa, Inonotus obliquus Phellinus igniarius Các tác giả Nhật Bản có kết tác dụng chữa ung thư, làm giảm lượng cholesterol máu nấm hương (Lentinus edodes) Phần lớn kháng sinh người sử dụng chiết xuất từ nấm (ví dụ: penicilin, streptomicin, tetracilin ) Qua điều nêu trên, ta nói nấm vừa làm thực phẩm tốt cho sức khỏe người, lại vừa dùng làm dược liệu, có tác dụng ngăn ngừa điều chế nhiều loại nhiều thuốc chữa chữa bệnh Vì nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học lồi nấm có giá trị to lớn đời sống, y học phục vụ chăm sóc sức khỏe người Việt Nam nằm trung tâm Đông Nam Á năm có lượng mưa nhiệt độ trung bình tương đối cao Với khí hậu nhiệt đới gió mùa nóng, ẩm tạo cho rừng Việt nam có hệ động, thực vật nấm đa dạng phong phú Nghệ An tỉnh có vườn Quốc gia Pù Mát, khu bảo tồn thiên nhiên Pù Huống khu bảo tồn thiên nhiên Pù Hoạt Đây vùng đánh giá có tính đa dạng sinh học cao, có chứa đựng nguồn lợi lớn đa dạng sinh học, có nguồn lợi lớn nấm sử dụng chúng làm nguyên liệu tốt cho ngành công nghiệp thực phẩm, dược phẩm… Tuy nhiên, nghiên cứu nấm Việt Nam nói chung Nghệ An nói riêng cịn vấn đề mẻ, chưa nhận quan tâm mức nhà khoa học Do vậy, việc nghiên cứu nấm Nghệ An yêu cầu thiết, có ý nghĩa lý luận thực tiễn quan trọng, góp phần quan trọng việc tìm hiểu nguồn tài nguyên thiên nhiên, giá trị kinh tế tầm quan trọng nguồn dược liệu thiên nhiên nước ta nói chung tỉnh Nghệ An nói riêng Vì lý chúng tơi chọn đề tài: “Phân lập xác định cấu trúc hợp chất từ nấm đen (Nigrofomes melannoporus (Mont.) Murr) Nghệ An ” Đối tượng nghiên cứu Luận văn nghiên cứu thành phần hố học lồi nấm Nigrofomes melannoporus (Mont.) Murr thuộc họ Nấm Polyporaceae thu thập Nghệ An Nhiệm vụ nghiên cứu Nhiệm vụ đề cho nghiên cứu luận văn gồm có: - Chiết chọn lọc với dung mơi thích hợp để thu hỗn hợp hợp chất từ dịch chiết thể nấm Nigrofomes melannoporus - Phân tích sắc ký lớp mỏng (TLC) phần chiết để định tính phần chiết xác định hệ dung mơi thích hợp cho phân tách sắc ký cột; - Phân tách phần chiết phân lập hợp chất - Xác định cấu trúc hợp chất phân lập phương pháp phổ đại Chương TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu terpen sesquiterpen 1.1.1 Vài nét terpen Danh từ “Terpen” lần Kekule sử dụng để hiđrocacbon đồng phân C10H16 có mặt hầu hết lớp thực vật bậc thấp tảo, nấm đến thực vật bậc cao, động vật, vi khuẩn Hiện nay, có khoảng 40000 terpen biết đến [19] Khái niệm “terpen” dùng để lớp hợp chất thiên nhiên có cấu trúc phân chia thành đơn vị isopren (C5H8) Căn vào số đơn vị isopren hợp thành người ta phân biệt thành hemiterpene C5H8, monoterpen C10H16, sesquiterpen C15H24, diterpen C20H32, sesterterpen C25H40, triterpen C30H48, tetraterpen C40H64 polyterpen (C5H8)n C5 (Hemi-) 2-metyl butan C10 (Mono-) 2,6- dimetyl octan C15 (Sesqui-) 2,6,10 - trimetyl dodecan C20 (Di-) 2,6,10,14 - tetrametyl hexadecan C25 (Sester-) 2,6,10,14,18 - pentametylicosan C30 (Tri-) Squalane C40 (Tetra-) Caroten (C5)n Polyterpen n Hình 1.1: Sự phân loại terpen sở số nhóm isopren Bên cạnh thuật ngữ “terpen” người ta dùng khái niệm “terpenoit” để bao hàm rộng rãi sản phẩm thối biến tự nhiên, thí dụ ionon dẫn xuất tự nhiên tổng hợp terpen, thí dụ terpen - ancol, -andehit, -xeton, - axit, - este, - epoxit, v.v… Tuy nhiên sử dụng thường khơng có phân chia ranh giới thật rõ rệt khái niệm “terpen” “terpenoid” vừa nêu Thuật ngữ “terpen” “terpenoid” nhiều dùng để bao hàm terpen – hidrocacbon lẫn dẫn xuất chúng Tuy dẫn xuất isopren isopren lại tiền chất trình sinh tổng hợp terpenoid Chất liệu để sinh tổng hợp terpenoid pharnesyl pyrophosphat 1.1.2 Vài nét sesquiterpen 1.1.2.1.Khái quát chung Về mặt cấu trúc sesquiterpen terpen có khung gồm 15 nguyên tử C Về mặt lý thuyết chúng tổ hợp gồm đơn vị isopren Sesquiterpen nhóm dẫn chất bậc hai lớn, đến nhà khoa học tìm thấy khoảng 10000 sesquiterpen thiên nhiên [19], chủ yếu thực vật bậc cao, lượng lớn số tìm thấy nấm Nguồn gốc phát sinh sesquiterpen sinh vật từ farnesyl pyrophosphat đóng vịng khác dẫn đến khung serquiterpen khác Về phân loại, dựa theo cấu trúc người ta phân sesquiterpen thành loại chính: sesquiterpen mạch hở, vòng, vòng, vòng vịng với khoảng 80 khung phân lập [6] 1.1.2.2 Một số khung sesquiterpen phân lập từ nấm [19], [27], [25] Dưới số khung sườn sesquiterpenoit nấm sinh tổng hợp từ khung farnesan sở H H H H H H H H Muurolan Amorphan Cadinan Eremophilan Selinan Germacran Eleman Bulgaran Farnesan Bisabolan Himachilan Guaian Humulan Bergamotan H Driman Caryophylan H H Longifolan Longipinan H H H H Hirsutan H Protoilludan H H Ceratopican Cerapican Africanan H H Sterpuran Hình 1.2: Các khung sườn sesquiterpen Nấm sinh tổng hợp từ khung farnesan 10 Farnesan – sesquiterpen mạch hở Tên quốc tế 2,6,10-trimetyl dodecan (1), xem dẫn chất đầu để sinh tổng hợp serquiterpen khác nấm Năm 2010, Stoppacher cộng [39], phân lập chất có khung farnesan α-farnesen (2), β-farnesen (3), trans-nerolidol (5) từ loài nấm Trichoderma atroviride α-farnesene (2) báo cáo có khả tiết pheromone có tác dụng kìm hãm q trình phát triển loài rệp Năm 1975, từ loài nấm Ceratocystis coerulescens, Sprecher cộng [38], phân lập sesquiterpene mạch hở farnesol (4), trans-nerolidol (5); 6,7dihydro-nerolidol (6), 6,7,10,11-tetrahydro-nerolidol (7) Farnesol (4) có tinh dầu nhiều loại thực vật, bên cạnh đó, sử dụng pheromone chống côn trùng, thuốc trừ sâu tự nhiên, farnesol phát huy hiệu thuốc kháng sinhvà coi tác nhân chống ung thư [41] 14 OH 15 11 13 (1) Farnesan (2) α-Farnesen OH (5) trans-Nerolidol nerolidol (3) β-Farnesen OH (4) Farnesol OH (6) 6,7-Dihydro-nerolidol (7) 6,7,10,11-Tetrahydro- 53 Hinh 3.12 Phổ HSQC hợp chất A 54 Hinh 3.13 Phổ HSQC hợp chất A 55 Hinh 3.14 Phổ HMBC hợp chất A 56 Hinh 3.15 Phổ HMBC hợp chất A 57 \ Với phân tích phổ so sánh vơi tài liệu [10] hợp chất có tên madolin A [10] 3.2 Hợp chất B (dehydrovomifoliol) Hợp chất B thu dạng dầu màu sáng, phổ tử ngoại UV hấp thụ cực đại 237 nm Phổ khối lượng EI-MS cho pic ion phân tử m/z 222 [M]+ ứng với công thức phân tử C13H18O3 Phổ 1H-NMR hợp chất B cho thấy tín hiệu proton vinyl δ 5,93 (1H, s, H-4), hai proton trans olefinic δ 6,42 (1H, d, J = 15,8, Hz, H-8) 6,99 (1H, d, J = 15,8 Hz, H-7), thêm vào hai cặp dimetyl proton δ 1,01 (H-11) 1,05 (H-12), proton metyl δ 1,89 (H-13) nối với liên kết đôi nhóm metyl δ 2,30 ppm sát với nhóm carbonyl Các tín hiệu kết cặp δ 2,27 (d, J = 17,0 Hz, H-3) 2,60 (d, J = 17,0 Hz, H-3) gợi ý cho nhóm carbonyl nối với metylen cặp dimetyl C-1 Phổ 13C-NMR hợp chất B cho thấy tín hiệu nhóm carbonyl δ 201,2 (C-9) 201,5 (C-3), tín hiệu cacbon olefinic δ 128,8 (C-4), 132,5 (C-8), 149,1 (C-7) 165,5 (C-5), cacbon oxi hoá δ 80,8 (C-6) Bảng 3.2: Dữ kiện phổ 13C-NMR hợp chất B (dehydrovomifoliol) Cacbon DEPT C CH2 C CH2 Độ dịch chuyển hoá học (ppm) 43,5 51,3 201,5 128,8 58 10 11 12 13 CH C CH CH C CH3 CH3 CH3 CH3 165,5 80,8 149,1 132,5 201,2 28,4 24,3 25,5 20,0 Dưới phổ đồ hợp chất B Hinh 3.16 Phổ IR hợp chất B 59 Hinh 3.17 Phổ UV hợp chất B 60 Hinh 3.18 Phổ 1H-NMR hợp chất B Từ liệu phổ tài liệu tham khảo xác định chất B 3-oxo-6hydroxy-ionon (dehydrovomifoliol) Hợp chất lần phân lập từ Oryza sativa [36] O O 12 11 OH 13 Dehydrovomifoliol KẾT LUẬN 10 61 Nghiên cứu thành phần hố học dịch chiết lồi nấm Nigrofomes melannoporus từ Vườn Quốc gia Pù Mát,tỉnh Nghệ An, thu số kết sau: - Quả thể nấm Nigrofomes melanoporus phơi khô (1350 g) chiết với hỗn hợp dung môi MeOH:CHCl3 nhiệt độ thường thu cặn chiết với khối lượng 78 g - Lượng chiết sắc ký cột silica gel với hệ dung môi rửa giải nhexan-axeton thu 10 phân đoạn - Phân đoạn có khối lượng 5,4 g tiến hành sắc ký silica gel lần thứ hai với loại cột nhỏ, hệ dung môi rửa giải clorofom-metanol thu phân đoạn Phân đoạn F3-3 (58 mg) tách phương pháp sắc kí thu chất A(12 mg) B(17 mg) - Bằng phương pháp phổ đại: phổ hồng ngoại IR, tử ngoại UV, phổ khối lượng (ESI-MS), phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT, HMBC, HSQC, COSY, NOESY để xác định cấu trúc hợp chất tách Từ kết phổ tài liệu tham khảo xác định hai chất A B Từ kết phổ so sánh với tài liệu tham khảo cho phép khẳng định chất A Madolin Từ kết phổ so sánh với tài liệu tham khảo[19] cho phép xác định chất B dehydrovomifoliol Đây hợp chất tìm thấy thể nấm Nigrofomes melanoporus Chất madolin cho có loạt hoạt tính sinh học q hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm, điều hịa sinh trưởng thực vật, gây độc tế bào, hoạt tính kìm hãm sinh trưởng nhuyễn thể trùng có hại TÀI LIỆU THAM KHẢO 62 Tài liệu Tiếng Việt Bộ Nông nghiệp phát triển nông thơn, 2009, Giáo trình mơn học khái qt nghề nhân giống sản xuất nấm Nguyễn Lân Dũng, (2003), Công nghệ nuôi trồng nấm: tập 2, NXB Nông nghiệp Nguyễn Văn Đàn, Nguyễn Viết Tựu (1985), Phương pháp nghiên cứu hoá học thuốc, Nhà xuất Y học, Hà Nội Đỗ Tất Lợi, (2005), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học Nguyễn Bá Hai, (2009), Bài giảng kỹ thuật trồng nấm, ĐH Nông lâm Huế Nguyễn Thị Kim Phụng, (2007), Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ, NXB ĐH Quốc gia TP Hồ Chí Minh Tài liệu Tiếng Anh Abraham W R., Hanssen H P., Urbasch I., (1991), Lepistirones, major volatile metabolites from liquid cultures of Lepista irina (Basidiomycotina)., Z Naturforsch, 46c:169 Audouin P., Vidal J P , Richard H., (1989), Volatile compounds from aroma of some edible mushrooms: morel (Morchella conica), wood blewit (Lepista nuda), clouded agaric (Clitocybe nebularis) and false chanterelle (Hygrophoropsis aurantiaca)., Sci Aliments, 9, 185 Ayer W A., Craw P A., (1989), Metabolites of the fairy ring fungus, Marasmius oreades Norsesquiterpenes, further sesquiterpenes, and agrocybin Can J Chem.; 67: 1371 10 Ayer W A., Craw P A., Stout T J., Clardy J., (1989), Novel sesquiterpenoids from the fairy ring fungus, Marasmius oreades., Can J Chem.; 67: 773 11 B J Jansen, (1993), Total synthesis of insect antifeedant drimane sesquiterpenes, Wageningen, Thesis doctor 12 B Tashkhodzhaev, B Abduazlmov, M B Izbosarov, I D Shamyanov, M Yu Antipin, (2002), 13α-hydroxymethylenedeacetyllaurenobiolit a new germacranolide from Tanacetopsis mucronata, Chem Nat compounds, 38 (6): 557 – 560 13 Devdutt Chaturvedi, (2011), Opportunity, Challenge and Scope of Natural Products in Medicinal Chemistry, Research Signpost, India 14 Ding Z H., Dong Z J., Liu J K., (2001), Albaconol, A novel prenylated 63 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 resorcinol (benzene-1,3-diol) from basidiomycetes Albatrellus confluens, Helvetica Chimica Acta, 84 (1): 259–262 Dong-Z L., Fei W., Liu-M Y., Yong-T Z., Ji-K L., (2007), A new cadinane sesquiterpene with significant Anti-HIV- activity from the cultures of the basidiomycete Tyromyces chioneus, J Antibiot., 60(5): 332–334 Du-Q L., Yuan G., Xiao-L Y., Jian-G T., Li-Y Z., Ji-K L., (2006), Humulane-Type Sesquiterpenoids from the Mushroom Lactarius mitissimu, J Nat Prod., 69: 1354-1357 Du-Q L., Yuan G., Xiao-L Y., Jian-G T., Li-Y Z., Ji-K L., (2007), Highly Oxidized Humulane Sesquiterpenes from the Basidiomycete Lactarius mitissimus, J Antibiot., 60(2): 162-165 Du-Q L., Yuan G., Xiao-L Y., Jian-G T., Li-Y Z., Ji-K L., (2007), Two new highly oxidized humulane sesquiterpenes from the basidiomycete Lactarius mitissimus, Helvetica Chimica Acta, 90: 1112-111 Eberhard Breitmaier, (2006), Terpenes, Wiley – VCH Fäldt J., Jonsell M., Nordlander G., Borg-Karlson A K., (1999), Volatiles of bracket fungi Fomitopsis pinicola and Fomes fomentariusand their functions as insect attractants., J.Chem Ecol., 25: 567-590 Gladys R T V.; Mariane L.; Lorena B T.; Roberta P.; Artur S J., (2008), Submerged culture conditions for the production of mycelial biomass and antimicrobial metabolites by Polyporus tricholoma Mont, Braz J Microbiol., 39 (3): 561-568 Gross B., Gallois A., Spinnler H E., Langlois D., (1989), Volatile compounds produced by the lignilolytic fungus Phlebia radiata Fr (Basidiomycotes) and influence of strain specificity on the odorous profile., J Biotechnol., 10: 303-308 Ivan M., Luis P., Enrique W., Alejandro M., Luis E., Luis M., Joan V., Mauricio C., (2013), Comparative study on the Larvicidal activity of drimane sesquiterpenes and nordrimane compounds against Drosophila melanogaster til-til, Molecules., 18: 4192-4208 Jiang Y Z., Jian H D., Zheng H L., Ze J D., Tao F., Hong B Z., Ji K L., (2013), Two new sesquiterpenes from cultures of the basidiomycete Agaricus arvensis, J.A.N.P.Research, 15 (3):305-309 Jordan K Zjawiony, (2004), Biologically active compounds from Aphyllophorales (Polypore) Fungi, J Nat Prod., 67, 300-310 Kazuko Y., Kazuaki K., Masumi S., Masami T., Hirofumi Y., Hiroshi I., 64 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 Shigenobu A., Toshihiro H., (2013); Yellow Pigments, Fomitellanols A and B, and drimane sesquiterpenoids, cryptoporic acids P and Q, from Fomitella fraxinea and their inhibitory activity against COX and 5-LO, Molecules, 18(4): 4181-4191 K H Overton, (1972), Terpenoids and Steroids: V 2, The Chemical Society Ki H K., Hyung J N., Sang U C., Ki M P., Soon J S., Kang R L., (2010), Lactarane sesquiterpenoids from Lactarius subvellereus and their cytotoxicity, Bioorg Med Chem Lett., 20: 5385–5388 Ki H K., Hyung J N., Sang U C., Ki M P., Soon J S., Kang R L., (2010), Russulfoen, a new cytotoxic marasmane sesquiterpene from Russula foetens, J Antibiotics., 63: 575–577 Liu Q, Shu X, Wang L, Sun A, Liu J, Cao X., (2008), Albaconol, a plantderived small molecule, inhibits macrophage function by suppressing NFkappaB activation and enhancing SOCS1 expression., Cell Mol Immunol., 5(4): 271-278 Marcos D., Iván M., Francisco G., Ricardo D E., Mauricio C F., Susana A Z., (2013), Structural requirements for the antifungal activities of natural rrimane sesquiterpenes and analogues, supported by conformational and electronic studies, Molecules., 18: 2029-2051 Overholts L O., (1915), Comparative studies in the Polyporaceae, Missouri Botanical Garden Press Overholts L O., (1953) “The Polyporaceae of the United States, Alaska and Canada,” University of Michigan Press, Ann Arbor, Mich., p 48 R F Magnani., E Rodrigues, C Daolioa, A G Ferreiraa, (2003), Caryophyllene Sesquiterpenes from Pestalotiopsis sp., Z Naturforsch., 58c: 319-324 Ryo A., Shinya M., Kengo S., Toshizumi M., Makoto U., (2011), Absolute configurations of (-)-hirsutanol A and (-)-hirsutanol C produced by Gloeostereum incarnatum, J Antibiotics., 64(10): 693-696 Shiono, Y.; Hiramatsu, F.; Murayama, T.; Koseki, T.; Funakoshi, T.; Ueda, K.; Yasuda, H., (2007), Two drimane-type sesquiterpenes, strobilactones A and B, from the liquid culture of the edible mushroom Strobilurus ohshimae, Z Naturforsch, 12: 1585-1589 Shuang W., Zheng-H L., Ze-J D., Ji K L., T F., (2013), Norbisabolane and eremophilane sesquiterpenoids from cultures of the basidiomycete Polyporus ellisii, Fitoterapia, 91: 194 – 198 65 38 Sprecher E, Kubeczka K-H, Ratschko M., (1975), Flüchtige Terpene in Pilzen, Arch Pharm., 308:843-851 39 Stoppacher N., Kluger B., Zeilinger S., Krska R., Schuhmacher R., (2010), Identification and profiling of volatile metabolites of the biocontrol fungus Trichoderma atrovirideby HS-SPME-GC-MS., J Microbiol Methods, 81: 187-193 40 Vatcharin R., Chittreeya T., Saowanit S., Chaveng P., Masahiko I., Rapheephat S., (2005), Hirsutane sesquiterpenes from the fungus Lentinus connatus BCC 8996, J Nat Prod., 68 (11): 1674–1676 41 Wang C., Kim J.Y., (2011), Microbial production of farnesol (FOH): Current states and beyond., Process Biochem., 46: 1221-1229 42 William A Aye, Hossein S Gho, (1981), 1-Sterpurene-3,12,14-trio1 and 1sterpurene, metabolites of silver-leaf disease fungus Stereum purpureum, Can J Chem., 59:2536 -2538 43 Xiang-D Q., Hong-J S., Ze-J D., Ji-K L., (2008), Six New Induced Sesquiterpenes from the Cultures of Ascomycete Daldinia concentrica, J Antibiot., 61(9): 556–562 44 Xiao Y Y., Tao F ENG, Jian H D , Zhen H L., Yan L , Qiong Y F., Ji K L., (2013), Two new drimane sesquiterpenoids from cultures of the basidiomycete Trichaptum biforme, Nat Prod Bioprospect., 3: 154–157 45 Xu D., Sheng Y., Zhou Z Y., Liu R., Leng Y., Liu J K., (2009), Sesquiterpenes from cultures of the basidiomycete Clitocybe conglobata and their 11β-hydroxysteroid dehydrogenase inhibitory activity, Chem Pharm Bull.; 57(4):433-435 46 Yasufumi M., Yasuo H., Yukika S., Akiko K., Hisao S., (1995), Haploporic Acid A, a novel dimeric drimane sesquiterpenoid from the Basidiomycete Haploporus odorus; Bioscience, Biotech and Biochem., 59 (10): 2008-2009 47 Yoshinori A., Toshihiro H., Yasuo M., Motoo T., Yoshimasa F., (1992), Cryptoporic acids A-G, drimane-type sesquiterpenoid ethers of isocitric acid from the fungus Cryptoporus volvatus, Phytochemistry, 31(2): 579–592 48 Yoshihito S., Takayuki S., Manabu K., Chinatsu T., Shinsuke S., Tetsuya M., Michimasa I., (2004), Protoilludane-type sesquiterpenes, echinocidins A and B, from a mycelial culture of Echinodontium tsugicola, Z Naturforsch., 59b, 925 – 929 49 Zheng Y B., Lu C H., Xu L., Su W J., Shen Y M., (2012), Three new 66 sesquiterpenoids from Agrocybe sp., Chem Res Chinese Uni., 28(6): 976 -979 50 Zhou H, Zhu T, Cai S, Gu Q, Li D., (2011), Drimane sesquiterpenoids from the mangrove-derived fungus Aspergillus ustus., Chem Pharm Bull.;59(6):762-766 51 Zhong L H., Yang D., Yicun H., Lidong L., Taihui L , Wanhui Y., Xiaoyi W., (2004), Sesquiterpenes from the mycelial cultures of Dichomitus squalens, J Nat Prod., 67 (12): 2121–2123 ... nhiên nước ta nói chung tỉnh Nghệ An nói riêng Vì lý chúng tơi chọn đề tài: ? ?Phân lập xác định cấu trúc hợp chất từ nấm đen (Nigrofomes melannoporus (Mont. ) Murr) Nghệ An ” Đối tượng nghiên cứu... Cadinan Eremophilan Selinan Germacran Eleman Bulgaran Farnesan Bisabolan Himachilan Guaian Humulan Bergamotan H Driman Caryophylan H H Longifolan Longipinan H H H H Hirsutan H Protoilludan H... mơi thích hợp để thu hỗn hợp hợp chất dùng cho nghiên cứu nêu phần thực nghiệm 2.1.2 Các phương pháp phân tích, phân tách hỗn hợp phân lập hợp chất Để phân tích phân tách phân lập hợp chất, sử