TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI 2 KHOA SINH - KTNN ∞ PHẠM THỊ TƯƠI XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG CÂY HOA CÚC CN01 (Chrysanthemum maximum Seiun - 3) BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY IN VITRO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Sinh lý học thực vật HÀ NỘI, 2014 TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI 2 KHOA SINH - KTNN ∞ PHẠM THỊ TƯƠI XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG CÂY HOA CÚC CN01 (Chrysanthemum maximum Seiun - 3) BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY IN VITRO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Sinh lý học thực vật Người hướng dẫn khoa học ThS. LA VIỆT HỒNG HÀ NỘI, 2014 Phạm Thị Tươi K36B - Sinh LỜI CẢM ƠN Trước hết tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành và sâu sắc đến ThS. La Việt Hồng đã trực tiếp hướng dẫn, tận tình chỉ bảo và tạo mọi điều kiện để tôi hoàn thành khóa luận. Tôi chân thành cảm ơn ban Lãnh đạo trường Đại học Sư phạm Hà Nội 2, Ban chủ nhiệm khoa Sinh - KTNN, đã tạo mọi điều kiện cho tôi học tập và hoàn thành đề tài. Tôi xin chân thành cảm ơn tập thể cán bộ Phòng Nuôi cấy mô tế bào thực vật, Trung tâm Hỗ trợ Nghiên cứu và Chuyển giao Công nghệ, Phòng thí nghiệm sinh lí thực vật, khoa Sinh - KTNN, trường Đại học Sư phạm Hà Nội 2 đã nhiệt tình giúp đỡ và tạo điều kiện trong suốt quá trình tôi thực hiện đề tài. Cuối cùng tôi xin cảm ơn những người thân và bạn bè đã động viên, tạo mọi điều kiện giúp đỡ tôi trong suốt thời gian tôi học tập cũng như hoàn thành khóa luận. Tôi xin chân thành cảm ơn Hà Nội, ngày 15 tháng 5 năm 2014 Sinh viên thực hiện Phạm Thị Tươi Phạm Thị Tươi K36B - Sinh LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết quả nghiên cứu đề tài: “Xây dựng quy trình nhân giống cây hoa cúc CN01 (Chrysanthemum maximum Seiun - 3) bằng kỹ thuật nuôi cấy in vitro” là kết quả nghiên cứu của riêng tôi do ThS. La Việt Hồng hướng dẫn và không trùng lặp với kết quả của tác giả khác. Hà Nội, ngày 15 tháng 5 năm 2014 Sinh viên thực hiện Phạm Thị Tươi Phạm Thị Tươi K36B - Sinh DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT α - NAA α - Napthalene acelic acid Agar Thạch BAP 6 - benzyl amino purin CT Công thức ĐC Đối chứng IAA  - indole - acetic acid IBA Indode - 3 - butyric acid H 2 O 2 Hydro peroxide (nước oxy già) HgCl 2 Thủy ngân Clorua MS Murashige and Skoog, 1962 Phạm Thị Tươi K36B - Sinh DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1. Các công thức thí nghiệm xác định hiệu quả của chất khử trùng 26 Bảng 2.2. Các công thức thí nghiệm xác định ảnh hưởng của nồng độ BAP đến khả năng tái sinh và tạo đa chồi ở cúc CN01 27 Bảng 2.3. Các công thức thí nghiệm xác định ảnh hưởng của nồng độ  - NAA đến khả năng hình thành rễ của chồi cúc CN01 28 Bảng 2.4. Các công thức thí nghiệm xác định ảnh hưởng của các giá thể dinh dưỡng đến tỉ lệ sống của cây in vitro ngoài tự nhiên 28 Bảng 3.1. Hiệu quả chất khử trùng trên mẫu đỉnh sinh trưởng của cây cúc CN01 31 Bảng 3.2. Ảnh hưởng của nồng độ BAP đến hệ số nhân chồi cúc CN01 Số mẫu cấy 36 Bảng 3.3. Ảnh hưởng của nồng độ  - NAA đến số lượng và chiều dài rễ cúc CN01 38 Bảng 3.4. Ảnh hưởng của giá thể đến tỷ lệ sống của cây trong vườn ươm 41 Phạm Thị Tươi K36B - Sinh DANH MỤC HÌNH Hình 1.1. Chrysanthemum maximum Seiun - 3 8 Hình 2.1. Chồi đỉnh cây hoa cúc CN01 24 Hình 3.1. Mẫu cúc bị nhiễm khuẩn sau 5 ngày nuôi cấy 33 Hình 3.2. Mẫu cúc bị mốc sau 5 ngày nuôi cấy 33 Hình 3.3. Mẫu cúc sạch nhưng chết sau 5 ngày nuôi cấy 33 Hình 3.4. Mẫu cúc vô trùng sau 5 ngày nuôi cấy 33 Hình 3.5. Sơ đồ quy trình tạo vật liệu in vitro từ đỉnh sinh trưởng của cây cúc CN01 34 Hình 3.6. Ảnh hưởng của BAP đến khả năng tạo đa chồi cúc CN01 37 Hình 3.7. Hình ảnh ra rễ của cúc CN01 40 Hình 3.8. Rèn luyện cây con ngoài môi trường tự nhiên 41 Phạm Thị Tươi K36B - Sinh DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1. Hiệu quả chất khử trùng trên mẫu đỉnh sinh trưởng của cây cúc CN01 32 Biểu đồ 3.2. Ảnh hưởng của nồng độ BAP đế hệ số nhân chồi cúc CN01 36 Biểu đồ 3.3. Ảnh hưởng của nồng độ  - NAA đến số lượng và chiều dài rễ cúc CN01 39 Phạm Thị Tươi K36B - Sinh MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 1. Lí do chọn đề tài 1 2. Mục đích và nhiệm vụ nghiên cứu 2 2.1. Mục đích nghiên cứu 2 2.2. Nhiệm vụ nghiên cứu 2 3. Ý nghĩa lí luận và ý nghĩa thực tiễn 2 NỘI DUNG 3 CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 1.1. Giới thiệu về cây hoa cúc 3 1.1.1. Nguồn gốc cây hoa cúc 3 1.1.2. Vị trí phân loại 3 1.1.3. Đặc điểm thực vật học và sinh thái cây hoa cúc 4 1.1.3.1. Đặc điểm thực vật học 4 1.1.3.2. Sinh thái cây hoa cúc 5 1.2. Giá trị kinh tế của cây hoa cúc 7 1.3. Đặc điểm cây hoa cúc CN0l 7 1.4. Tình hình sản xuất và thương mại cây hoa cúc trên thế giới và Việt Nam 8 1.4.1. Tình hình sản xuất và thương mại cây hoa cúc trên thế giới 8 1.4.2. Tình hình sản xuất và thương mại hoa cúc ở Việt Nam 9 1.5. Tình hình nghiên cứu cây hoa cúc trên thế giới và ở Việt Nam trong lĩnh vực nuôi cấy mô tế bào 10 1.5.1. Tình hình nghiên cứu cây hoa cúc trên thế giới 10 1.5.2. Tình hình nghiên cứu về cây hoa cúc ở Việt Nam 11 1.6. Nuôi cấy mô tế bào thực vật và ứng dụng trong công tác nhân giống 13 Phạm Thị Tươi K36B - Sinh 1.6.1. Khái niệm về nuôi cấy mô tế bào 13 1.6.2. Cơ sở khoa học của nuôi cấy mô và tế bào thực vật 13 1.6.2.1. Tính toàn năng của tế bào thực vật 13 1.6.2.2. Sự phân hóa và phản phân hóa của tế bào 13 1.7. Các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình nuôi cấy mô tế bào thực vật 14 1.7.1. Vật liệu nuôi cấy 14 1.7.2. Môi trường nuôi cấy 15 1.7.3. Ảnh hưởng của điều kiện nuôi cấy 19 1.8. Các nguyên tắc kỹ thuật về nhân giống in vitro 19 1.9. Ứng dụng của nuôi cấy in vitro trong sản xuất 21 CHƯƠNG 2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.1. Vật liệu thực vật 24 2.2. Thời gian và địa điểm nghiên cứu 24 2.3. Dụng cụ và thiết bị thí nghiệm 24 2.3.1. Thiết bị 24 2.3.2. Dụng cụ 25 2.4. Môi trường nuôi cấy 25 2.5. Điều kiện nuôi cấy 25 2.6. Phương pháp nghiên cứu 25 2.6.1. Phương pháp bố trí thí nghiệm 25 2.6.2. Phương pháp xử lí số liệu 29 3.1. Tạo vật liệu in vitro 30 3.2. Ảnh hưởng của nồng độ BAP đến khả năng tái sinh và tạo đa chồi cúc CN01 34 3.3. Ảnh hưởng của nồng độ  - NAA đến quá trình hình thành rễ tạo cây hoàn chỉnh của chồi cúc CN01 37 [...]... đề tài: Xây dựng quy trình nhân giống Phạm Thị Tươi 1 K36B - Sinh cây hoa cúc CN01 (Chrysanthemum maximum Seiun - 3) bằng kỹ thuật nuôi cấy in vitro 2 Mục đích và nhiệm vụ nghiên cứu 2.1 Mục đích nghiên cứu Xây dựng quy trình nhân giống in vitro cây hoa cúc CN01 để góp phần đáp ứng thực tiễn sản xuất hoa cúc hiện nay 2.2 Nhiệm vụ nghiên cứu - Nghiên cứu phương pháp khử trùng tạo vật liệu in vitro -... tái sinh và nhân nhanh chồi cúc CN01 - Nghiên cứu ảnh hưởng của  - NAA đến khả năng tạo rễ để tạo cây in vitro hoàn chỉnh - Nghiên cứu ảnh hưởng của giá thể đến tỷ lệ sống của cây con sau giai đoạn nuôi cấy 3 Ý nghĩa lí luận và ý nghĩa thực tiễn - Cung cấp tư liệu khoa học cho nghiên cứu kỹ thuật nuôi cấy mô cây hoa cúc CN01 - Đưa ra quy trình nuôi cấy mô cây hoa cúc CN01 phục vụ cho việc nhân giống. .. nghiên cứu xây dựng quy trình nhân giống cây hoa cúc bằng Phạm Thị Tươi 11 K36B - Sinh phương pháp nuôi cấy in vitro Tiến hành thu thập, khảo sát và đánh giá một số giống cúc mới, kết quả là từ 2/1993 đến tháng 2/1999, giống cúc CN93 và CN98 đã được Hội đồng khoa học Bộ Nông nghiệp cho phép khu vực hóa, đến tháng 4/1996 và 9/2000 lần lượt hai giống cúc CN93 và CN98 đã được công nhận là giống cúc quốc... xuất hoa cây cảnh, kỹ thuật nuôi cấy in vitro và các công nghệ sinh học khác như: tạo phôi soma, biến dị soma, đã ngày càng đóng góp rất nhiều vào thị trường Hoa - Cây cảnh trên thế giới Năm 1985, kim ngạch của thị trường này ước tính 20 - 25 tỷ USD Ở Hà Lan, kỹ thuật vi nhân giống trở thành nền tảng của công nghệ hoa và cây cảnh Năm l987, Thái Lan có 20 công ty tư nhân dùng kỹ thuật nuôi cấy in vitro. .. thiện quy trình nhân giống cao su Ngoài ra, các phòng thí nghiệm nuôi cấy mô, tế bào trong cả nước đã nghiên cứu thành công nhiều quy trình nhân giống cây hoa và cây ăn quả Nuôi cấy mô thực vật hiện nay được đưa vào trong các chương trình chọn giống và nhân giống hiện đại, góp phần tích cực vào lý luận sinh học cây trồng và thực tiễn nông nghiệp Mở ra một hướng đi mới cho nghiên cứu di truyền học, sinh... nuôi cấy in vitro trên quy mô Phạm Thị Tươi 22 K36B - Sinh thương mại để sản xuất hoa cắt Colombia là nước sản xuất hoa Cẩm Chướng lớn nhất thế giới nhờ công nghệ nuôi cấy in vitro Nuôi cấy in vitro đã được đưa vào chương trình chọn và nhân giống hiện đại Bằng phương pháp này, con người đã xây dựng nên các hệ thống sản xuất giống gốc, cho nhiều loại cây hoàn toàn sạch virut (khoai tây, đu đủ,…) Ở Việt... nhiều phòng nuôi cấy mô trong cả nước đã thành lập và thu được thành quả đáng kể Viện Sinh vật - Viện Khoa học Việt Nam đã hoàn thiện quy trình nhân giống in vitro một số giống cây trồng có khả năng chống chịu như lúa, thuốc lá, khoai lang, dứa sợi, Tại trường Đại học Nông nghiệp I - Hà Nội hoàn thiện quy trình nhân giống khoai tây Tại các tỉnh phía Nam xây dựng được ngân hàng cà phê với 10 giống khác... nhất của phương pháp nuôi cấy mô thực vật là phục tráng giống cây trồng Kỹ thuật này đặc biệt có giá trị đối với khoai tây, cây ăn quả và nhiều loại cây trồng nhân giống vô tính khác Đối với khoai tây, bệnh nguy hiểm nhất đó là bệnh virut - một trong những nguyên nhân chính gây nên hiện tượng thoái hoá giống Một số tác giả đã dùng kỹ thuật nuôi cấy đỉnh sinh trưởng tạo được cây khoai tây không có virut,... ẩm 70% - 80% - Nhân giống bằng nuôi cấy in vitro: là phương pháp được dùng phổ biến hiện nay ở các nước trồng cúc bởi cây cúc dễ nhân giống trong ống nghiệm, hệ số nhân giống cao, giá thành hạ, cây con sạch bệnh Đặc biệt, phương pháp Phạm Thị Tươi 9 K36B - Sinh này có thể duy trì và nhân giống quanh năm, không phụ thuộc vào điều kiện ngoại cảnh Từ các mô, các cơ quan khác nhau qua nuôi cấy người ta có... thể tạo ra những cây hoàn chỉnh, hoàn toàn sạch bệnh và đồng nhất về mặt di truyền 1.5 Tình hình nghiên cứu cây hoa cúc trên thế giới và ở Việt Nam trong lĩnh vực nuôi cấy mô tế bào Do giá trị kinh tế cũng như giá trị sử dụng của cây hoa rất cao mà trên thế giới có rất nhiều nước đi sâu nghiên cứu kỹ thuật trồng hoa, kỹ thuật nhân và tạo giống hoa mới 1.5.1 Tình hình nghiên cứu cây hoa cúc trên thế giới . SƯ PHẠM HÀ NỘI 2 KHOA SINH - KTNN ∞ PHẠM THỊ TƯƠI XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG CÂY HOA CÚC CN01 (Chrysanthemum maximum Seiun - 3) BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY IN VITRO KHÓA. tiến hành nghiên cứu đề tài: Xây dựng quy trình nhân giống Phạm Thị Tươi 2 K36B - Sinh cây hoa cúc CN01 (Chrysanthemum maximum Seiun - 3) bằng kỹ thuật nuôi cấy in vitro . 2. Mục đích và nhiệm. xin cam đoan kết quả nghiên cứu đề tài: Xây dựng quy trình nhân giống cây hoa cúc CN01 (Chrysanthemum maximum Seiun - 3) bằng kỹ thuật nuôi cấy in vitro là kết quả nghiên cứu của riêng tôi