Đang tải... (xem toàn văn)
MỤC LỤC LỜI CAM ðOAN ................................................................................................ i LỜI CẢM ƠN..................................................................................................... ii MỤC LỤC.........................................................................................................iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT................................................................. vi DANH MỤC CÁC BẢNG................................................................................ vii DANH MỤC CÁC HÌNH.................................................................................. ix MỞ ðẦU ........................................................................................................... 1 Chương 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU ............................................................... 3 1.1. Tình hình sản xuất, tiêu thụ trứng gia cầm .................................................. 3 1.1.1. Tình hình chăn nuôi gia cầm .................................................................... 3 1.1.2. tình hình sản xuất trứng gia cầm ở Việt Nam................................................... 4 1.1.3. Tình hình sản xuất trứng gia cầm trên thế giới........................................... 5 1.1.4. Tình hình tiêu thụ trứng gia cầm................................................................ 5 1.1.5. Tình hình chăn nuôi gia cầm ở ñồng bằng sông Cửu Long ........................ 7 1.1.6. Tình hình xuất khẩu trứng gia cầm và ñòi hỏi của thị trường................... 10 1.2. Chất phụ gia và chất màu sudan ................................................................. 12 1.2.1 Chất phụ gia............................................................................................. 12 1.2.2 Chất màu sudan ....................................................................................... 15 1.3. Phương pháp phân tích chất màu sudan trong trứng và phê duyệt phương pháp thử............................................................................................................ 22 1.3.1. Phương pháp phân tích chất màu sudan trong trứng ................................ 22 1.3.2. Chuẩn hóa phương pháp thử.................................................................... 24 1.4. Tình hình nghiên cứu tồn dư chất màu sudan trong trứng........................... 27 1.4.1. Tình hình nghiên cứu nước ngoài ............................................................ 27 1.4.2 Tình hình nghiên cứu trong nước ............................................................. 29 1.5. Tiêu chuẩn ATTP thực phẩm của chất màu sudan và yêu cầu của thị trường xuất khẩu. ......................................................................................................... 30 Chương 2. ðỐI TƯỢNG – NỘI DUNG – PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU.... 31 2.1 ðối tượng nghiên cứu.................................................................................. 31 2.2. ðịa ñiểm nghiên cứu: ................................................................................. 31 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… iv 2.3.Thời gian nghiên cứu: ................................................................................. 31 2.4. Nội dung nghiên cứu:................................................................................. 31 2.5. Phương pháp nghiên cứu:........................................................................... 31 2.5.1. Bố trí thí nghiệm ..................................................................................... 31 2.5.2. Thiết bị, vật tư, hóa chất và phương pháp phân tích................................. 36 2.5.3. Phương pháp xử lý số liệu ....................................................................... 36 Chương 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN....................................................... 39 3.1. Kết quả chuẩn hóa phương pháp phân tích sudan I, sudan IV trong trứng bằng kỹ thuật sắc ký lỏng siêu hiệu năng 2 lần khối phổ UPLCMSMS. .................... 39 3.1.1. Kết quả xác ñịnh tính ñặc hiệuchọn lọc: ................................................. 39 3.1.2. Kết quả xác ñịnh Giới hạn phát hiện (LOD) ............................................ 40 3.1.3. Kết quả xác ñịnh giới hạn quyết ñịnh (CCα) và khả năng phát hiện (CCβ): 41 3.1.4. Kết quả xác ñịnh ñộ tuyến tính: ............................................................... 43 3.1.5. Kết quả xác ñịnh ñộ thu hồi và ñộ chụm.................................................. 44 3.2. Kết quả xác ñịnh khả năng nhiễm chất nhuộm màu sudan I và IV vào lòng ñỏ trứng bằng ñường thức ăn............................................................................. 46 3.2.1. Kết quả nghiên cứu ñánh giá bằng cảm quan (mắt thường)...................... 46 3.2.2. Kết quả phân tích xác ñịnh chất sudan I và IV trong trứng cút thí nghiệm . 49 3.3. Kết quả thí nghiệm xác ñịnh khả năng nhiễm chất nhuộm màu sudan I, IV vào lòng ñỏ trứng bằng ñường ngâm tẩm. ......................................................... 52 3.4. Kết quả xác ñịnh khả năng nhiễm sudan I, IV vào trứng gia cầm trong chăn nuôi tự nhiên..................................................................................................... 56 3.4.1. Kết quả ñiều tra các cơ sở chăn nuôi gà, vịt............................................. 64 3.4.2. Kết quả ñiều tra các cơ sở thu gom và chế biến trứng gà, vịt. .................. 62 3.4.3. Kết quả phân tích chất nhuộm màu sudan I, IV trong trứng gà, vịt nuôi tự nhiên. ........................................................................................................... 67 KẾT LUẬN – KIẾN NGHỊ ............................................................................ 75 TÀI LIỆU THAM KHẢO............................................................................... 76 PHỤ LỤC 1 ..................................................................................................... 79 PHỤ LỤC 2 ..................................................................................................... 80
BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI NGÔ THỊ BÍCH NGỌC ỨNG DỤNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ ðỂ XÁC ðỊNH SỰ CÓ MẶT CỦA SUDAN TRONG TRỨNG GIA CẦM CHUYÊN NGÀNH : THÚ Y Mà SỐ : 60.64.01.01 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS. TS. NGUYỄN HỮU NAM GS. TS. ðẬU NGỌC HÀO HÀ NỘI, NĂM 2013 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun vn thc s khoa hc Nụng nghip i Lời cam đoan Tôi xin cam đoan rằng, đây là công trình tôi đã nghiên cứu, số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn là trung thực và cha từng đợc sử dụng để bảo vệ một học vị nào. Tôi xin cam đoan, mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận văn đã đợc cảm ơn và các thông tin trích dẫn trong luận văn đã đợc chỉ rõ nguồn gốc. Hà Nội, ngày 19 tháng 09 năm 2013 Ngời thực hiện Ngô Thị Bích Ngọc Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun vn thc s khoa hc Nụng nghip ii Lời cảm ơn Hoàn thành luận văn tốt nghiệp cho phép tôi đợc bày tỏ lòng cảm ơn sâu sắc tới ban giám hiệu, ban chủ nhiệm khoa thú y và ban quản lý đào tạo - trờng Đại học Nông nghiệp Hà Nội, đã dìu dắt, chỉ bảo tôi trong suốt quá trình làm luận văn. Tôi xin chân thành cảm ơn thầy giáo PGS.TS Nguyễn Hữu Nam và GS.TS Đậu Ngọc Hào đã tận tình hớng dẫn, giúp đỡ và đóng góp nhiều ý kiến quý báu, tạo điều kiện cho tôi hoàn thành đề tài luận văn tốt nghiệp. Lòng cảm ơn chân thành của tôi xin phép gửi tới ban lãnh đạo Trung tâm kiểm tra vệ sinh thú y trung ơng I Cục thú y, các cô chú, anh chị đang làm việc trung tâm, tại phòng tồn d đã tạo điều kiện thuận lợi cho tôi về thời gian, vật chất, động viên và giúp đỡ tôi trong suốt thời gian nghiên cứu và hoàn thành đề tài. Nhân dịp này tôi xin bày tỏ lời cảm ơn đến bố mẹ đã có công sinh thành, nuôi dỡng và luôn động viên, hỗ trợ tôi về tinh thần và vật chất. Tôi xin cảm ơn anh chị em, bạn bè và ngời thân đã luôn kề vai sát cánh, động viên tôi trong suốt thời gian qua. Cảm ơn ngời chồng thân yêu đã luôn động viên và ủng hộ tôi trong suốt quá trình học tập. Hà Nội, ngày 19 tháng 09 năm 2013 Ngời thực hiện Ngô Thị Bích Ngọc Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… iii MỤC LỤC LỜI CAM ðOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH ix MỞ ðẦU 1 Chương 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 1.1. Tình hình sản xuất, tiêu thụ trứng gia cầm 3 1.1.1. Tình hình chăn nuôi gia cầm 3 1.1.2. tình hình sản xuất trứng gia cầm ở Việt Nam 4 1.1.3. Tình hình sản xuất trứng gia cầm trên thế giới 5 1.1.4. Tình hình tiêu thụ trứng gia cầm 5 1.1.5. Tình hình chăn nuôi gia cầm ở ñồng bằng sông Cửu Long 7 1.1.6. Tình hình xuất khẩu trứng gia cầm và ñòi hỏi của thị trường 10 1.2. Chất phụ gia và chất màu sudan 12 1.2.1 Chất phụ gia 12 1.2.2 Chất màu sudan 15 1.3. Phương pháp phân tích chất màu sudan trong trứng và phê duyệt phương pháp thử 22 1.3.1. Phương pháp phân tích chất màu sudan trong trứng 22 1.3.2. Chuẩn hóa phương pháp thử 24 1.4. Tình hình nghiên cứu tồn dư chất màu sudan trong trứng 27 1.4.1. Tình hình nghiên cứu nước ngoài 27 1.4.2 Tình hình nghiên cứu trong nước 29 1.5. Tiêu chuẩn ATTP thực phẩm của chất màu sudan và yêu cầu của thị trường xuất khẩu. 30 Chương 2. ðỐI TƯỢNG – NỘI DUNG – PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 31 2.1 ðối tượng nghiên cứu 31 2.2. ðịa ñiểm nghiên cứu: 31 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… iv 2.3.Thời gian nghiên cứu: 31 2.4. Nội dung nghiên cứu: 31 2.5. Phương pháp nghiên cứu: 31 2.5.1. Bố trí thí nghiệm 31 2.5.2. Thiết bị, vật tư, hóa chất và phương pháp phân tích 36 2.5.3. Phương pháp xử lý số liệu 36 Chương 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 39 3.1. Kết quả chuẩn hóa phương pháp phân tích sudan I, sudan IV trong trứng bằng kỹ thuật sắc ký lỏng siêu hiệu năng 2 lần khối phổ UPLC-MS/MS. 39 3.1.1. Kết quả xác ñịnh tính ñặc hiệu/chọn lọc: 39 3.1.2. Kết quả xác ñịnh Giới hạn phát hiện (LOD) 40 3.1.3. Kết quả xác ñịnh giới hạn quyết ñịnh (CCα) và khả năng phát hiện (CCβ):41 3.1.4. Kết quả xác ñịnh ñộ tuyến tính: 43 3.1.5. Kết quả xác ñịnh ñộ thu hồi và ñộ chụm 44 3.2. Kết quả xác ñịnh khả năng nhiễm chất nhuộm màu sudan I và IV vào lòng ñỏ trứng bằng ñường thức ăn 46 3.2.1. Kết quả nghiên cứu ñánh giá bằng cảm quan (mắt thường) 46 3.2.2. Kết quả phân tích xác ñịnh chất sudan I và IV trong trứng cút thí nghiệm . 49 3.3. Kết quả thí nghiệm xác ñịnh khả năng nhiễm chất nhuộm màu sudan I, IV vào lòng ñỏ trứng bằng ñường ngâm tẩm. 52 3.4. Kết quả xác ñịnh khả năng nhiễm sudan I, IV vào trứng gia cầm trong chăn nuôi tự nhiên 56 3.4.1. Kết quả ñiều tra các cơ sở chăn nuôi gà, vịt 64 3.4.2. Kết quả ñiều tra các cơ sở thu gom và chế biến trứng gà, vịt. 62 3.4.3. Kết quả phân tích chất nhuộm màu sudan I, IV trong trứng gà, vịt nuôi tự nhiên. 67 KẾT LUẬN – KIẾN NGHỊ 75 TÀI LIỆU THAM KHẢO 76 PHỤ LỤC 1 79 PHỤ LỤC 2 80 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… v Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… vi DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT AOAC Association of Officicial Analytical Chemists ATTP An toàn thực phẩm ATVSTP An toàn vệ sinh thực phẩm AVA Agri- Food Veterinary Authority CAC Codex Alimentarius Commission ðBSCL ðồng bằng sông Cửu Long EU Europran Union FAO Food and Agriculture Organization GCMS Gas Chromatography Mass Spectometry HPLC High Performance Liquid Chromatography IP Indentification Point LCMS Liquid Chromatography Mass Spectometry MRL Maximum Reside Limit MRPL Minimum Require Performance Limit MS Mass Spectometry TP.HCM Thành phố Hồ Chí Minh UPLC Ultra performance liquid chromatography WTO Word Trade Organization Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… vii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1: Kết quả xác ñịnh CCα của phương pháp phân tích sudan I, sudan IV trong trứng bằng UPLC-MS/MS 41 Bảng 3.2: Kết quả xác ñịnh CCβ của phương pháp phân tích sudan I, sudan IV trong trứng bằng UPLC-MS/MS 42 Bảng 3.3: ðộ thu hồi, ñộ chụm trung gian của phương pháp phân tích dư lượng sudan I trong trứng 43 Bảng 3.4: ðộ thu hồi, ñộ chụm trung gian của phương pháp phân tích dư lượng sudan IV trong trứng 45 Bảng 3.5: Thông số chuẩn hóa phương pháp phân tích sudan I, IV trong trứng bằng UPLC-MS/MS 45 Bảng 3.6. Mô tả sự khác biệt giữa lô ñối chứng và lô thí nghiệm ñược bổ sung sudan I và IV vào thức ăn 48 Bảng 3.7. Kết quả phân tích các mẫu trứng ở các lô thí nghiệm 50 Bảng 3.8 . Kết quả ñánh giá trứng cút ngâm trong nước muối bão hòa, có hòa trộn chất nhuộm màu sudan I, IV 53 Bảng 3.9. Bảng kết quả khảo sát tình hình chăn nuôi gà, vịt 64 Bảng 3.10. Bảng thống kê số lượng cơ sở thu gom, chế biến trứng gia cầm 62 Bảng 3.11. Bảng kết quả khảo sát cơ sở thu gom trứng và chế biến trứng muối 63 Bảng 3.12: Bảng kết quả phân tích chất nhuộm màu sudan I, sudan IV trong lòng ñỏ và lòng trắng trứng 69 Bảng 3.13: Bảng kết quả phân tích chất nhuộm màu sudan I, IV trong vỏ trứng 71 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… viii Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… ix DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 3.1: Phổ khối m/z của sudan I, sudan IV trên nền mẫu lòng ñỏ trứng 39 Hình 3.2: Hình mô tả tỷ số tín hiệu so với nhiễu của sudan I, sudan IV trên nền mẫu trứng 40 Hình 3.3: ðường chuẩn biểu thị mối tương quan giữa nồng ñộ chuẩn và tín hiệu chuẩn sudan I, sudan IV 44 Hình 3.4: Hình dạng ngoài của trứng bình thường và trứng nhiễm sudan I và IV 46 Hình 3.5: Màu lòng ñỏ của trứng bình thường và trứng nhiễm sudan I và sudan IV 49 Hình 3.6. Sắc ñồ phổ khối của Sudan I và IV trong mẫu lòng ñỏ trứng thí nghiệm 50 Hình 3.7. Trứng ngâm trong dung dịch nước muối bão hòa bổ sung sudan I và IV 54 Hình 3.8. Màu sắc vỏ trứng thường và trứng ngâm trong dung dịch nước muối bão hòa có hòa trộn chất nhuộm màu sudan I, IV 54 Hình 3.9. Hình ảnh về vịt chạy ñồng ñược ñánh dấu ñàn 60 Hình 3.10. Hình ảnh mẫu lòng ñỏ trứng 68 Hình 3.11. Mẫu trứng vịt tươi 71 Hình 3.12. Dịch chiết phân tích chất nhuộm màu sudan I và IV trong vỏ 71 [...]... th t bò nhi m sudan (Quang Du n, 2012) 1.3 Phương pháp phân tích ch t màu sudan trong tr ng và phê duy t phương pháp th 1.3.1 Phương pháp phân tích ch t màu sudan trong tr ng Có nhi u phương pháp nghiên c u ñ xác ñ nh sudan (I, II, III và IV) trong tr ng, trong ñó có S c ký l ng hi u năng cao (HPLC) (He, L và c ng s , 2007), S c ký khí kh i ph (GC-MS) (He, L và c ng s , 2007) và s c ký l ng kh i ph... I, Sudan II, Sudan III và Sudan IV ( tùy theo công th c hóa h c) Các Sudan ñ u ch a các h p ch t azo (ch t có liên k t – N=N -trong c u t o phân t ) và naphtols Thông thư ng lo i sudan ñư c s d ng trong th c ph m là sudan I màu ñ S thay ñ i màu s c c a các sudan là do s chuy n ñ i v trí c a các g c methyl Sudan tan trong d u m và ñ nh màu trong nó Tính ch t và c u trúc c a sudan Sudan I - Sudan I : có. .. Spectometry) Phương pháp s c ký l ng ghép kh i ph là m t thi t b lý tư ng cho các phòng thí nghi m, là phương pháp ñư c dùng trong phân tích v t và các h p ch t c n nh n danh chính xác vì trong nh ng ñi u ki n v n hành nh t ñ nh ngoài th i gian lưu ñ c trưng, hóa ch t còn ñư c nh n danh b ng kh i ph c a nó ð nh y c a phương pháp này còn tùy thu c vào h p ch t c n phân tích và giao di n s d ng Trong s c ký l... nuôi gia c m, các cơ sơ thu gom và ch bi n tr ng mu i thu c 7 t nh ñ ng b ng sông C u Long c a C c Thú y và Trung tâm ki m tra v sinh thú y trung ương I M c tiêu nghiên c u - Chu n hóa phương pháp, xác ñ nh ñư c kh năng phân tích sudan I, sudan IV trong tr ng gia c m b ng k thu t s c ký l ng kh i ph - Xác ñ nh con ñư ng gây ô nhi m ch t nhu m màu sudan I, IV vào trong tr ng - ng d ng k thu t s c ký. .. nhi u detector v i nhau Phương pháp s c ký l ng siêu hi u năng 2 l n kh i ph ( UPLC-MS/MS) UPLC-MS/MS là phương pháp s c ký l ng kh i ph trong ñó dùng s c ký l ng siêu hi u n ng ghép 2 l n kh i ph → Ưu ñi m c a phương pháp này là: có th phân tích ñư c nhi u lo i h p ch t khác nhau, v i hi u su t cao hơn, ñ phân gi i t t hơn, và rút ng n hơn th i gian tách H th ng g m c t s c ký v i kích thư c h t 1,7... 15 Sudan II - Sudan II: Có danh pháp qu c t là (1-( 2,4–dimethylphenyl) azo) -2naphthalenol) + Có công th c phân t : C18H16N2O, kh i lư ng phân t M = 276,33 ( g/mol), s ñăng ký 3118-97-6, màu da cam + Tính ch t v t lý : nhi t ñ nóng ch y 156 – 1580C, Sudan II có d ng hình kim, màu ñ nâu, sáng ánh Không tan trong nư c, ki m, acid y u, tan ít trong ethanol Hòa tan trong eter cho dung d ch màu cam Sudan. .. cho ngư i tiêu dùng trong m t th i gian dài Trên th trư ng có r t nhi u lo i th c ph m không có ngu n g c rõ ràng và không ñư c ki m ñ nh ch t lư ng v sinh an toàn th c ph m, nguy cơ th c ph m không an toàn v sinh là r t l n Hi n nay có r t ít nghiên c u v ch t sudan trong th c ph m, ñ c bi t trong tr ng Vi t Nam, vi c nghiên c u, l a ch n phương pháp ñ phân tích t n dư c a sudan trong tr ng, tìm hi... ng k thu t s c ký l ng kh i ph ñ ki m tra s có m t c a ch t nhu m màu sudan trong tr ng gà, v t t i m t s t nh ñ ng b ng sông C u Long Ý nghĩa khoa h c và th c ti n Xác ñ nh ñư c con ñư ng ô nhi m ch t nhu m màu sudan I, IV vào trong tr ng gia c m, trên cơ s ñó khuy n cáo ngư i s n xu t tr ng có bi n pháp phòng ng a ô nhi m ch t nhu m màu sudan vào tr ng gia c m Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i –... a sudan Sudan là ch t nhu m màu azo tan trong d u, trong ch t béo t ng h p, ñư c s d ng ñ t o màu và nhu m màu trong công nghi p, trong nghiên c u vi sinh, hóa h c theo Tateo, F and Bononi, M (2004) và trong m ph m Sudan ñư c t ch c qu c t v nghiên c u ung thư, x p vào lo i ñ c nhóm 3 không ñư c phép dùng trong th c ph m (Food standard Agency of UK) Sudan g m nhi u lo i, ñây ta quan tâm ñ n 4 lo i Sudan. .. cách b t h p pháp trong th c ph m, ñ c bi t là trong nh ng th c ph m có ch a b t t, tương t, xúc xích, nư c s t và các th c ăn s n (Calbiani, F và c ng s , 2004) Có nhi u dư lu n và nhi u nghiên c u cho r ng, sudan ñư c b sung vào th c ăn cho gia c m nh m làm tăng màu ñ c a lòng ñ tr ng, cũng có nh ng nghi v n thì cho r ng sudan b ng m vào tr ng v t mu i… +) Tình hình s d ng ch t màu sudan trong s n xu . HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI NGÔ THỊ BÍCH NGỌC ỨNG DỤNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ ðỂ XÁC ðỊNH SỰ CÓ MẶT CỦA SUDAN TRONG TRỨNG GIA CẦM CHUYÊN NGÀNH : THÚ Y Mà SỐ : 60.64.01.01. tiễn nêu trên chúng tôi tiến hành nghiên cứu ñề tài Ứng dụng phương pháp sắc ký lỏng khối phổ ñể xác ñịnh sự có mặt của sudan trong trứng gia cầm . ðề tài ñược thực hiện kết hợp với chương trình. phương pháp, xác ñịnh ñược khả năng phân tích sudan I, sudan IV trong trứng gia cầm bằng kỹ thuật sắc ký lỏng khối phổ. - Xác ñịnh con ñường gây ô nhiễm chất nhuộm màu sudan I, IV vào trong trứng .