Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC sư PHẠM HÀ NỘI 2 NGUYỄN XUÂN HẠNH NGHIÊN CỨU ĐẢC TÍNH HÓA SINH, KHẢ NĂNG CHỐNG BÉO PHÍ VÀ RÓI LOẠN TRAO ĐỐI CHÁT CỦA MỘT SỐ HỢP CHẤT Tự NHIEN TỪ DỊCH CHIẾT QUẢ PHẬT THỦ 0Citrus medica L. var. sarcodactylis (Noot.) Swingle.) LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC HÀ NỘI, 2010 MỞ ĐẦU 1. Lí do chọn đề tài Bệnh béo phì (Obesity) được tổ chức Y tế Thế giới (WHO) định nghĩa là tình trạng tích luỹ mỡ quá mức và không bình thường tại một vùng cơ thể hay toàn thân đến mức ảnh hưởng tới sức khoẻ. Tổ chức Quốc tế theo dõi bệnh béo phì (Internation Obesity Tast Force - IOTF) cho biết tình trạng béo phì đang tăng lên với tốc độ báo động, không những ở các quốc gia phát triển mà ở cả các 1 quốc gia đang phát triển. Hiện nay trên Thế giới có khoảng 1,7 tỷ người thừa cân và mắc bệnh béo phì [3][65]. Ớ Việt Nam, theo điều tra mới nhất của Viện Dinh dưỡng cho thấy tình trạng thừa cân (2007), béo phì cũng đang tăng nhanh, trong đó tỷ lệ béo phì ở người trưởng thành, từ 25 - 64 tuổi, lên tới 16,8% [13]. Người bị béo phì ngoài thân hình nặng nề, khó coi còn có nguy cơ mắc nhiều bệnh như rối loạn lipid máu, rối loạn về tim mạch, đột qụy, tăng huyết áp, sỏi mật, xương khớp, ung thư và Đái tháo đường (ĐTĐ) trong đó biến chứng của bệnh tim mạch và đột qụy là yếu tố gây tử vong hàng đầu [3][31]. Do tốc độ phát triển nhanh của bệnh nên nhu cầu về thuốc điều trị cũng tăng nhanh. Ngày nay, hàng loạt thuốc điều trị bệnh béo phì đã ra đời và đang được sử dụng nhằm hạn chế sự phát triển của bệnh như: Sibutramine, Orlistat, Metformin , tuy nhiên đây đều là những loại thuốc không rẻ và thường kéo theo nhiều phản ứng phụ của cơ thế [3]. Uỷ ban chuyên gia của WHO đã khuyến nghị nên phát triển và sản xuất các thuốc có nguồn gốc thảo dược vì đây là nguồn dược liệu sẵn có, giá thành rẻ và ít độc [19] [31] [56]. Việc nghiên cứu, khảo sát về thành phần hoá học và tác dụng dược lý của các loài cây thuốc có giá trị của Việt Nam nhằm đặt cơ sở khoa học cho việc sử dụng chúng một cách hợp lí, hiệu quả có tầm quan trọng đặc biệt trong Y - Dược học. Phật thủ - Citrus medỉca L. var. sarcodactylis (Noot.) Swingle, thuộc họ Cam - Rutaceae là một cây thuốc quý. Trong dân gian, bộ phận thường dùng là quả, ngoài ra hoa, lá và rễ cũng được dùng, quả Phật thủ có công dụng: Dùng trị các bệnh như: trướng đầy bụng, đau dạ dày; chán ăn, nôn mửa; ho dai dẳng có nhiều đờm [5][18]. Tuy nhiên, về tác dụng chống béo phì và rối loạn trao đổi chất, đặc biệt khả năng hỗ trợ hạ đường huyết các bệnh ĐTĐ thì hầu như chưa được các nhà khoa học ở Việt Nam đề cập nghiên cứu. Xuất phát từ thực tế trên, cùng với mong muốn góp phần vào việc nghiên cứu, phát hiện thêm các thuốc có nguồn gốc thảo dược để dự phòng và chữa bệnh béo phì, chúng tôi chọn đề tài: “Nghiên cứu đặc tính hoá sinh, khả năng chống béo phì và rối loạn trao đổi chất của một số hợp chất tự nhiên từ dịch chiết quả Phật thủ (Citrus medica L. var. sarcodactyỉỉs (Noot.) Swingle.)” 2. Mục đích nghiên cửu 2.1. Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học cơ bản của quả Phật thủ (Citrus medica L. var. sarcodactylỉs (Noot.) Swingle.). 2.2. Bước đầu nghiên cứu tác động của các phân đoạn dịch chiết từ qủa Phật thủ lên trọng lượng cơ 2 thể và một số chỉ số hoá sinh (glucose, cholesterol, triglycerid, HDL-C, LDL-C, lipase) trên mô hình chuột béo phì thực nghiệm. 2.3. Bước đầu nghiên cứu ảnh hưởng của các phân đoạn dịch chiết từ quả Phật thủ lên chỉ so glucose máu của chuột béo phì được tiêm STZ liều thấp (110 * 120mg STZ/kg) để tạo mô hình thực nghiệm ĐTĐ type 2. 3. Nhiệm yụ nghiên cún Dựa trên mục tiêu nghiên cứu chúng tôi xác định các nhiệm vụ cụ thể của luận văn như sau: 3.1. Đưa ra quy trình tách chiết một số họp chất từ quả Phật thủ. 3.2. Khảo sát thành phần các hợp chất tự nhiên có trong quả Phật thủ ở các phân đoạn dịch chiết. 3.3. Nghiên cún tác dụng của một số phân đoạn dịch chiết từ quả Phật thủ lên sự giảm trọng lượng và một số chỉ số hoá sinh trên mô hình chuột béo phì thực nghiệm. 3.4. Nghiên cún khả năng điều hoà đường huyết của các phân đoạn dịch chiết từ quả Phật thủ trên mô hình chuột ĐTĐ mô phỏng theo type 2. 4. Đối tượng và phạm vi nghiên cứu 4.1. Đối tượng 4.1.1. Mau thực vật Quả Phật thủ (Citrus medỉca L. var. sarcodactylỉs (Noot.) Swingle). Thời gian thu hái: Được thu mua vào tháng 11 năm 2009 tại Thành phố Hà Nội và Thành phố Hải Phòng. 4.1.2. Mầu động vật Chuột nhắt trắng chủng Swiss (14 - 16g) 4 tuần tuổi và thức ăn tiêu chuẩn được mua tại Viện Vệ sinh Dịch tễ TW. 4.2. Phạm vi nghiên cứu Nghiên cún đặc tính hoá sinh của một số phân đoạn dịch chiết (cao EtOH, cao n - hexan, cao CHCI3, cao EtOAc) từ quả Phật thủ {Citrus medỉca L. var. sarcodactylis (Noot.) Swingle) trên mô hình chuột béo phì thực nghiệm, chuột béo phì gây ĐTĐ mô phỏng theo type 2, dựa theo các tài liệu [66] và đã được cải biến trong các nghiên cứu ở Việt Nam [6][ 11]. 5. Phương pháp nghiên cửu 5.1. Phương pháp chiết xuất. 5.2. Phương pháp khảo sát thành phần hoá học. 5.2.1. Phương pháp định tính thành phần hoá học của quả Phật thủ. 3 5.2.2. Phương pháp phân lập các hợp chất bằng kĩ thuật sắc kí lóp mỏng [17]. 5.2.3. Định lượng polyphenol tổng số theo phương pháp Folin - Ciocalteau (Singleton và cộng sự 1999). 5.3. Phương pháp tạo mô hình động vật thực nghiệm: Chuột béo phì thực nghiệm, chuột ĐTĐ type 2. 5.4. Phương pháp định lượng một số chỉ số hoá sinh máu [11][17]. 5.5. Phương pháp xử lý thống kê toán học [20]. 6. Những đóng góp mới của đề tài s Đưa ra quy trình tách chiết phân đoạn các họp chất tự nhiên từ quả Phật thủ. S Đánh giá được tác dụng của một số phân đoạn dịch chiết từ quả Phật thủ đến khả năng giảm trọng lượng và một số chỉ số hoá sinh của chuột béo phì thực nghiệm. S Đánh giá được khả năng hạ glucose huyết của các phân đoạn dịch chiết lên mô hình chuột ĐTĐ mô phỏng type 2 thông qua chỉ số glucose huyết. CHƯƠNG 1. TỎNG QUAN TÀI LIỆU 1.1. Các họp chất thực vật thứ sinh (Plant secondary metabolỉtes) 1.1.1. Một số khái niệm cơ bản về hợp chất thực vật thứ sinh Hợp chất thực vật thứ sinh là các sản phẩm của các quá trình trao đổi chất được sinh ra ở thực vật. Chúng là các chất hoá học thứ cấp (Secondary products) được tổng hợp và chuyển hoá từ các chất trao đổi bậc nhất (primary compotunds) như axit amin, axit nucleic, carbonhydrate, lipid, peptid, hoặc từ các sản phẩm trung gian của chu trình đường phân, chu trình pentose - phosphate, chu trình axit citric Khác với các chất trao đổi bậc nhất, giữ vai trò trung tâm và tham gia trực tiếp vào các quá trình trao đổi chất của cơ thể, các hợp chất thực vật thứ sinh không phải là các yếu tố đặc biệt cần thiết cho các quá trình sinh trưởng, phát triến, quang hợp và sinh sản [70]. Chúng được tạo ra trong các tế bào chuyên biệt với vai trò điều hoà mối quan hệ qua lại giữa các tế bào trong cơ thể và là các hợp chất phòng thủ giúp thực vật chống chịu lại với các bệnh xâm nhiễm thực vật đối với môi trường sống xung quanh [61]. Tuỳ thuộc vào cấu trúc hoá học và các thuộc tính lý học của chúng mà các họp chất thực vật thứ sinh được phân loại thành 3 nhóm chính là: Nhóm terpen, nhóm các hợp chất phenolic và nhóm alkaloid. 1.1.1.1. Terpen thực vật 4 Terpen là nhóm hydrocacbon thực vật lớn và đa dạng nhất, được hình thành từ quá trình polymer hoá các tiếu đơn vị isopren (C 5 H8), có công thức cấu tạo chung là (C 5 H8)n. Trong thực vật, terpen được tổng hợp thông qua con đường trao đổi chất acetate/mevanolate hoặc con đường glyceraldehydes - 3 - phosphate/pyravate. Hầu hết các terpen đều thuộc nhóm hydrocarbon, tuy nhiên chúng có thể bị khử hoặc bị oxy hoá để hình thành các hợp chất terpenoid khác nhau như alcohol, ketone, acid và aldehyde. Vì vậy, một số tác giả sử dụng thuật ngữ “terpen” để chỉ chung một nhóm lớn các hợp chất bao gồm cả terpen và terpenoid [63]. Hình 1.1. Cấu trúc một số triterpen 1.1.1.2. Các hợp chấtphenolic từ thực vật Hợp chất phenolic là nhóm các chất khác nhau rất phố biến trong thực vật. Đặc điểm chung của chúng là trong phân tử có vòng thơm (benzen) mang một, hai hay ba nhóm hydroxyl (-OH) gắn trực tiếp vào vòng benzen. Dựa vào thành phần và cấu trúc người ta chia hợp chất phenolic thành 3 nhóm nhỏ [34]: S Nhóm hợp chất phenolỉc đơn giản: Trong phân tử chỉ có một vòng benzen và một vài nhóm hydroxyl. Tuỳ thuộc vào số lượng nhóm -OH mà chúng được gọi là các monophenol (phenol), diphenol (pyrocatechin, hydroquinone ), triphenol (pyrogalol, oxyhydroquynol ). s Nhỏm họp chất phenolic phức tạp: Trong thành phần cấu trúc phân tử của chúng ngoài vòng thơm benzen (C6) chúng còn có dị vòng, mạch nhánh. Đại diện nhóm này có acid cyamic, acid ceramic. s Nhóm họp chất phenolic đa vòng: Là nhóm đa dạng nhất trong các họp chất phenol, có cấu trúc phức tạp do sự liên kết hoặc trùng họp của các đơn phân. Ngoài gốc phenol còn có các nhóm phụ dị vòng mạch nhánh hoặc đa vòng. Nhóm này có flavonoid, tannin và coumarin. Hợp chất phenolic được hình thành một cách dễ dàng trong tất cả các cơ quan thực vật từ những sản phấm đường phân và chu trình pentose phosphate qua acid sikimic hay theo con đường acetate manolate qua acetyl-SCoA. Trong số các chất polyphenol tự nhiên, flavonoid là nhóm chất quan trọng nhất vì chúng phổ biến ở hầu hết các loài thực vật và mang nhiều đặc tính sinh dược Squalen 5 học có giá trị. 1.1.1.2.1. Flavonoid Flavonoid là những sắc tố, phần lớn có màu vàng (flavus - nghĩa là màu vàng). Tuy nhiên một số sắc tố khác như xanh, đỏ, tím, hoặc không màu cũng xếp vào nhóm flavonoid vì chúng có chung đặc điếm cấu tạo. * Cấu tạo hoá học và phân loại về cấu tạo hoá học, khung cacbon của flavonoid là C 6 -C 3 -C6, gồm 15 nguyên tử cacbon, hai vòng benzen A và B nối với nhau qua dị vòng c, trong đó A kết họp với c tạo khung chroman [39] [43]. Hình 1.2. Fia van (2 - phenyl chroman) Tuỳ theo mức độ oxy hoá vòng pyran, sự có mặt hay không có mặt của nối đôi giữa c 2 với c 3 và nhóm cacbonyl ở c 4 mà có thể phân biệt flavonoid thành các nhóm phụ sau: Flavon và flavonol, flavanol (đihidro flavon), chalcol, aurol, leucoantoxianidin, catechin, isoflavonoid, rotenoid và neoflavonoid [72]. 2'- -3' 6 Hình 1.3. Một sô nhóm flavonoid chính * Hoạt tính sinh học của flavonoid Tác dụng chống oxy hoá (antỉoxỉdant) Flavonoid có khả năng kìm hãm các quá trình oxy hoá dây truyền gây ra bởi các gốc tự do hoạt động. Tuy nhiên hoạt tính này mạnh hay yếu còn phụ thuộc vào đặc điểm của từng flavonoid cụ thể. Gốc tự do sinh ra trong quá trình sinh lý bình thường của cơ thế hay do tác động bên ngoài là nguyên nhân gây phá huỷ ADN, protein, lipid làm phát sinh nhiều bệnh tật nguy hiểm và sự lão hoá cho cơ thể. Flavonoid có bản chất polyphenol nên dễ dàng biến đổi dưới tác động của các enzyme có trong tế bào động thực vật. Đặc biệt flavonoid có nhóm hydroxyl ở vị trí ortho dễ dàng bị oxy hoá bởi xúc tác của enzym polyphenoloxydase tạo semiquynol hoặc quynol [17]. Đây là các gốc tự do bền vững chúng có thể nhận điện tử và trở thành dạng hidroquynol. Bởi vậy các chất này có khả năng phản úng với các gốc tự do hoạt động và loại chúng ra khỏi cơ thể. Quá trình được tóm tắt qua sơ đồ sau: H O Cyanidi n Querceti Epicatechi • ■ Gl OH ö Sapon Rut o - 7 0 2 + Flavonoid (dạng khử) —poiyphenoitKydase > Flavonoid (dạng oxy hoá) (Hidroquynol) (Semiquynol hoặc quynol) Ngoài ra flavonoid còn có tác dụng bảo vệ các hệ thống sinh học nhờ khả năng tạo phức với các kim loại chuyển tiếp như Fe2+, Cu2+ hoạt hoá enzym chống oxy hoá và ức chế sự oxy hoá. Tác dụng thay đổi hoạt độ các enzyme Hợp chat phenol nói chung và flavonoid nói riêng có khả năng tương tác với protein, nhờ tính chất này mà các flavonoid có thế làm thay đối hoạt tính enzyme. Năm 1929, A.I. Oparin và A.L. Kursanop đã phát hiện ra các flavonoid có khả năng ức chế nhiều loại enzyme nhưng tính chất này không hoàn toàn đặc hiệu. Đây chính là cơ sở hoá sinh để định hướng cho việc sử dụng flavonoid thiên nhiên vào lĩnh vực sinh - y học phục vụ sức khoẻ vào đời sống con người [17]. Tác dụng kháng khuẩn Nhiều công trình nghiên cứu trong nước và thế giới đã chứng tỏ tác dụng chống viêm nhiễm (anti-inflamatory), chống vi khuẩn (anti-bacterial) và virut (antiviral) [2] [8]. Tác dụng làm bền thành mạch máu Các dẫn xuất đường của flavonoid có hoạt tính của vitamin p như rutin, hesperidin có tác dụng làm tăng sức bền và tính đàn hồi của thành mao mạch, giảm sức thẩm thấu của hồng cầu qua thành mao mạch. Hoạt tính này được ứng dụng trong chữa trị các rối loạn chức năng tĩnh mạch, giãn hay suy yếu tĩnh mạch, trĩ, rối loạn tuần hoàn tĩnh mạch [19]. Tác dụng giảm béo phì và lipid máu Theo kết quả nghiên cứu của các nhà khoa học Nhật cho thấy khi chuột béo phì được điều trị bằng dịch chiết giàu ílavonoid từ lá Bằng lăng (.Lagerstroemỉa specciosa L.) thì có trọng lượng giảm đáng kể (~ 10%) [68]. Thí nghiệm tương tự với ílavonoid từ lá Kim ngân (Lonỉcera ịaponìca Thunb.) đối với chuột cống trắng uống cholesterol cũng cho thấy có tác dụng làm giảm các chỉ số cholesterol, triglyceride, LDL-C đồng thời tăng HDL-C [29]. Naringin (C17H32O4) và Hesperidin (C28H34O15) là những Aavonoid có hàm lượng cao trên họ Cam chanh (Rutaceae) đã được nhiều nhà nghiên cún chiết xuất và thử tác dụng trên mô hình chuột béo phì cho kết quả tốt trong việc làm hạ các chỉ số lipid máu [28] [34]. Tác dụng hạ glucose huyết Một số ílavonoid được tách chiết từ nguyên liệu thực vật đã được chứng minh là có tác dụng điều hoà glucose huyết như: Quercetin có trong Đỗ trọng (Eucommia uỉmoides Oliver.) [56], 8 Hesperidin và Naringin có trong các cây thuộc họ Rutaceae [46] [48]. Genistein và Daidzein có trong đậu nành (Glycỉne max L.) [11], Myricetin có trong cây Vông vang (Abelmoschus moschatus) [11] Đã có một số nghiên cứu tác dụng của Naringin của các loài Citrus (họ Cam) có vai trò hạ glucose và lipid máu của bệnh béo phì và tiểu đường [48]. l. LL2.2.Tannín thực vật Tannin là các hợp chất phenolic có trọng lượng phân tử cao có chứa các nhóm hydroxyl và các nhóm chức khác như có khả năng tạo phức với protein và các phân tử lớn khác trong điều kiện môi trường đặc biệt. Tannin thường là các họp chất vô định hình, có màu trắng, màu vàng nhạt hoặc gần như không màu, có hoạt tính quang học, vị chát, dễ bị oxy hoá khi đun nóng hay khi để ngoài ánh sáng. Tác dụng sinh học của tannin là chất bảo vệ cây trồng trước sự tấn công của vi sinh vật gây bệnh và côn trùng ăn lá [44][51]. Trong y học, tannin được sử dụng làm thuốc cầm máu, chữa đi ngoài, ngộ độc kim loại nặng, chữa trĩ, viêm miệng, viêm xoang, điều trị cao huyết áp và đột qụy [1 ]. Hình 1.4. Cấu trúc hóa học của tannin 1.1.1.2.3. Phân nhóm coumarin Coumarin là các dẫn chất của a-pyrone có cấu trúc C 6 -C3, dị vòng chứa oxy và có trong nhiều loại cây. Coumarin là những chất kết tinh không màu, hoặc có màu vàng nhạt, vị đắng, một số lớn dễ thăng hoa, có mùi thơm giống như mùi thơm của valinin hay của cỏ mới khô [26]. về hoá học, coumarin có thể tồn tại trong cây ở dạng aglycon tan nhiều trong các dung môi hữu cơ kém phân cực và dạng kết họp với đường glucose tạo thành glycoside dễ tan trong nước. Hiện nay đã có hơn 1500 loại coumarin khác nhau tồn tại trong tự nhiên trong 800 loài thực vật đã được nhận dạng 9 [52]. Trong cây, coumarins được coi là một trong số các chất “phòng thủ hoá học hữu hiệu” giúp thực vật tránh được những bất lợi do môi trường và dịch bệnh gây ra. Trong đời sống hàng ngày, coumarin được sử dụng làm nước hoa, hương liệu, bán tổng họp các chất hoá học khác nhau, đặc biệt là các chất chống đông máu và chất diệt loài gặm nhấm. Trong y học, tác dụng đáng chú ý của dẫn chất coumarin là tác dụng chống co thắt, làm giãn nở động mạch vành, làm bền và bảo vệ thành mạch. Nhiều chất coumarin có tính kháng khuẩn, một số khác có tác dụng kháng viêm, kháng nấm, kháng khối u, trừ giun sán, giảm đau và hạ nhiệt. Hình 1.5. Cấu trúc hóa học của coumarin 1.1.1.3. Alkaloid thực vật Alkaloid là những hợp chất chứa nitơ, không những chỉ có trong thực vật mà còn có cả trong động vật. Nguyên tử nitơ có thể là một phần, hoặc không phải là một phần của hệ thống dị vòng. Chúng có cấu trúc phân tử phức tạp, có hoạt tính Sinh - dược rõ rệt và phân bố hạn chế trong giới thực vật [69]. Hiện nay đã có hơn 12000 loại alkaloid khác nhau được phân lập. Trong cây, alkaloid tồn tại dưới 3 dạng: dạng tự do, dạng muối của các axit phổ biến như citric, lactic, oxalic, axetic, malic .và dạng oxit nitơ. Alkaloid không phổ biến rộng ở tất cả các loài thực vật mà chỉ tập trung ở một số ít loài, chủ yếu được tìm thấy trong các loài thực vật có hoa, nhưng chỉ có khoảng 20% số loài thực vật có hoa là có thể sản sinh ra alkaloid. Đa số alkaloid không có mùi, vị đắng, một số ít có vị cay, ở dạng chất rắn có màu trắng, trừ một vài chất có màu vàng (berberin, palmatin). về vai trò sinh học, các alkaloid được coi là một trong những “hàng rào phòng thủ hoá học hữu hiệu” bảo vệ cây trước sự tấn công của vi sinh vật gây bệnh và các loại côn trùng, sâu bệnh ăn lá [72]. về y học, alkaloid được sử dụng rất đa dạng: làm thuốc gây ức chế, hoặc kích thích hệ thần kinh trung ương, dùng làm thuốc điều hoà huyết áp, chữa loạn nhịp tim, thuốc diệt ký sinh trùng, kháng khuẩn, thuốc chống ung thư và nhiều tác dụng quan trọng khác. Dưới đây là 3 dạng alkaloid điển hình: Caffeine morphine Nicotin 1 [...]... đoạn dịch chiết quả Phật thủ Nhằm góp phần đánh giá thành phần các hợp chất tự nhiên cơ bản có trong cao các phân đoạn từ dịch chiết từ quả Phật thủ, chúng tôi tiến hành các phản ứng định tính, định lượng và sắc kĩ lớp mỏng: 3.2.1 Định tính một số họp chất tự nhiên có trong quả Phật thủ Bảng 3.2 Kết quả định tính các phân đoạn dịch chiết từ quả Phật thủ Nhóm họp chất Các phân ứng đặc trưng Mẩu Cao CHC13... các cao phân đoạn dịch chiết trong quá trình thí nghiệm là rất an toàn đối với việc sử dụng các phân đoạn dịch chiết quả Phật thủ để nghiên cún khả năng chống béo phì và rối loạn trao đối chất ở chuột thực nghiệm 3.4 Tác dụng của các phân đoạn dịch chiết từ quả Phật thủ lên chuột béo phì thực nghiệm 3.4.1 Kết quả gây mô hình chuột béo phì thực nghiệm bằng thức ăn có hàm lượng lipíd và cholesterol cao... băng dấu +) Ket quả định tính cho thấy, thành phần các họp chất tự nhiên trong quả Phật thủ khá phong phú, các nhóm chất tự nhiên phố biến như flavonoid, tannin và glycoside Trong đó, ở các phân đoạn hầu hết các phản ứng với các nhóm chất đều là dương tính, điều này nói lên rằng đây là những dung môi khá phù họp đế chiết rút các họp chất tự nhiên từ quả Phật thủ Trong các phân đoạn dịch chiết thì ở phân... trong dịch chiết từ quả Phật thủ có Quercetin và Naringin - các flavonoid đã có nhiều nghiên cứu về đặc tính sinh dược học Điều này hoàn toàn phù hợp với kết quả định tính ở trên và là cơ sở cho chúng tôi quyết định chọn các phân đoạn EtOH, n-hexan và EtOAc vào mô hình chuột thí nghiệm trong những nghiên cứu tiếp theo 3.3 Kết quả xác định liều độc cấp LD50 theo đường uống Xác định LD50 của dịch chiết. .. trọng đến việc phân lập các họp chất Đe tìm hiểu các thành phần hợp chất tự nhiên có trong quả Phật thủ chúng tôi tiến hành chiết các họp chất trong các dung môi có độ phân cực tăng dần, n - hexan, CHCI3, EtOAc Quy trình được trình bày trên hình 3.1 3 Hình 3.1 Mô hình chiết rút các phân đoạn họp chất tự nhiên từ quả Phật thủ (Citrus medica L var sarcodactylis (Noot.) Swingle) Quy trình trên được thực... trong đó cao CHCI3 có hàm lượng polyphenol thấp nhất là 0,5% Ket quả đó chỉ ra rằng, thành phần hoá học trong quả Phật thủ có chứa nhiều họp chất có khả năng tan tốt trong EtOAc 3.2.3 Phân tích thành phần họp chất tự nhiên từ quả Phật thủ bằng sắc kí lóp mồng Cao các phân đoạn dịch chiết từ quả Phật thủ được hoà tan trong dung môi thích hợp để chạy sắc kí Sử dụng bản mỏng tráng sẵn Silicagel 6OF254 Sau... nhau của các lô theo 2 chế độ ăn 2.23.2.2 Anh hưởng của các phân đoạn dịch chiết đến một số chỉ số hoả sinh trên mô hình chuột béo phì thực nghiệm Chuột sau khi nuôi bằng mô hình gây béo phì thực nghiệm, chúng tôi tiến hành làm thí nghiệm tiếp Chuột béo phì được chia làm 5 lô, mỗi lô gồm 6 con, cao của các phân đoạn dịch chiết từ quả Phật thủ được hoà vào nước cất rồi cho chuột uống hàng ngày vào buổi... quả Phật thủ lên trọng lượng và một số chỉ số hoá sinh máu của chuột béo phì thực о • 9 • • 1 • nghiệm 2.2.3.1 Thử độc tính cấp, xác định LD50 [50] Xác định LD5() của dịch chiết quả Phật thủ theo đường uống là xác định liều gây chết 50% số chuột thí nghiệm Chuột được nhịn đói trước 16h thí nghiệm và được cho uống theo liều tăng dần đến 8g/kg thể trọng (liều tối đa cho phép), theo dõi biểu hiện và số. .. là 21 ngày Sau 21 ngày cho uống các phân đoạn dịch chiết, chúng tôi tiến hành xác định trọng lượng và lấy máu chuột đế phân tích một số chỉ số hoá sinh: Glucose, cholesterol, triglycerid, HDL-C, LDL- C, lipase 2.2.4 Phương pháp gây rối loạn trao đổi glucose máu của 2 chuột béo phì thưc nghiêm bằng STZ liều thấp Đe tìm hiểu tác dụng của dịch chiết quả Phật thủ lên đường huyết, trước tiên chúng tôi tiến... nâu và màu vàng (đặc trung của flavonoid) chứng tỏ trong quả Phật thủ chứa khá đầy đủ các loại hợp chat polyphenol Đáng chú ý nhất trong phân đoạn CHCI3 và phân đoạn EtOAc đều có một vạch màu vàng (Rf = 0,54) giống với đặc điểm của flavonoid Quercetin có trong cột chất chuẩn, ngoài ra phân đoạn EtOAc còn có thêm một vạch màu nâu (Rf = 0,16) giống với đặc điểm của flavonoid Naringin có trong cột chất . rối loạn trao đổi chất của một số hợp chất tự nhiên từ dịch chiết quả Phật thủ (Citrus medica L. var. sarcodactyỉỉs (Noot. ) Swingle .) 2. Mục đích nghiên cửu 2.1. Bước đầu nghiên cứu thành. bản của quả Phật thủ (Citrus medica L. var. sarcodactylỉs (Noot. ) Swingle .). 2.2. Bước đầu nghiên cứu tác động của các phân đoạn dịch chiết từ qủa Phật thủ l n trọng l ợng cơ 2 thể và một số. DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC sư PHẠM HÀ NỘI 2 NGUYỄN XUÂN HẠNH NGHIÊN CỨU ĐẢC TÍNH HÓA SINH, KHẢ NĂNG CHỐNG BÉO PHÍ VÀ RÓI LOẠN TRAO ĐỐI CHÁT CỦA MỘT SỐ HỢP CHẤT Tự NHIEN TỪ DỊCH CHIẾT QUẢ PHẬT