Đang tải... (xem toàn văn)
1959 Thỏ ra đời bằng kỹ thuật thụ tinh trong ống nghiệm.1968 Edwards và Bavister thụ tinh trứng người trên in vitro.1979 Karl Illmensee công bố nhân bản được ba con chuột từ một phôi ban đầu. 1984 Steen Willadsen nhân bản thành công cừu từ các tế bào phôi bằng kỹ thuật chuyển nhân tế bào phôi. 1986 Steen Willadsen nhân bản một con bò từ các tế bào phôi một tuần tuổi đã biệt hóa. 1993 Bò được tạo ra bằng cách chuyển nhân từ các tế bào phôi nuôi cấy1996 Ian Wilmut và Keith Campbell ở viện Roslin, Scotland nhân bản thành công cừu Dolly từ các tế bào tuyến vú của một con cừu mẹ. 1998 Ryuzo Yanagimachi, Toni Perry, và Teruhiko Wakayama ở đại học Hawaii công bố đã nhân bản thành công 50 chuột từ các tế bào đã trưởng thành. Kỹ thuật nhân bản mới này do Wakayama phát triển và được chứng minh là hiệu quả hơn phương pháp dùng nhân bản cừu Dolly.1999 Khỉ Rhesus cái Tetra được nhân bản bằng phân chia các tế bào phôi sớm2002 Thỏ và mèo được nhân bản từ các tế bào trưởng thành.82005, Tiến sĩ Hwang cho ra đời con chó đầu tiên bằng sinh sản vô tính
Tạo dòng vô tính 1. Khái niệm Nhân bản vô tính là hiện tượng chuyển nhân của một tế bào soma vào một tế bào trứng đã lấy mất nhân, rồi kích thích phát triển thành phôi, từ đó làm cho phôi phát triển thành một cơ thể mới. 2. Lịch sử tạo dòng vô tính 1959 - Thỏ ra đời bằng kỹ thuật thụ tinh trong ống nghiệm. 1968 - Edwards và Bavister thụ tinh trứng người trên in vitro. 1979 - Karl Illmensee công bố nhân bản được ba con chuột từ một phôi ban đầu. 1984 - Steen Willadsen nhân bản thành công cừu từ các tế bào phôi bằng kỹ thuật chuyển nhân tế bào phôi. 1986 - Steen Willadsen nhân bản một con bò từ các tế bào phôi một tuần tuổi đã biệt hóa. 1993 - Bò được tạo ra bằng cách chuyển nhân từ các tế bào phôi nuôi cấy 1996 - Ian Wilmut và Keith Campbell ở viện Roslin, Scotland nhân bản thành công cừu Dolly từ các tế bào tuyến vú của một con cừu mẹ. 1998 - Ryuzo Yanagimachi, Toni Perry, và Teruhiko Wakayama ở đại học Hawaii công bố đã nhân bản thành công 50 chuột từ các tế bào đã trưởng thành. Kỹ thuật nhân bản mới này do Wakayama phát triển và được chứng minh là hiệu quả hơn phương pháp dùng nhân bản cừu Dolly. 1999 - Khỉ Rhesus cái Tetra được nhân bản bằng phân chia các tế bào phôi sớm 2002 - Thỏ và mèo được nhân bản từ các tế bào trưởng thành. 8/2005, Tiến sĩ Hwang cho ra đời con chó đầu tiên bằng sinh sản vô tính 3. Quy trình chung nhân bản vô tính động vật - Lấy tế bào trứng (nhân đơn bội) của cơ thể “mẹ”, hút bỏ nhân đơn bội. - Lấy tế bào thân trưởng thành (máu, da …) của cá thể sẽ nhân bản, đồng bộ hóa chu trình tế bào của tế bào này, hút lấy nhân lưỡng bội. - Đưa nhân lưỡng bội vào trong trứng đã hút bỏ nhân nói trên (bằng tiêm trực tiếp hoặc bằng kích thích xung điện) để tạo nên “hợp tử” hay “phôi vô tính”. - Kích thích để “hợp tử” tiếp tục phát triển và phân chia tạo nên khối blastocyst (dùng shock điện hoặc dùng môi trường có chứa chất cytochalasin B) - Sau đó khối blastocyst này được đem cấy vào tử cung của một “mẹ nuôi” để cho phát triển thành bào thai, qua đó có thể tạo nên một “bản sao” giống hệt cơ thể cho nhân tế bào. [...]... và ở những loài khác nhau có thể khác nhau ít nhiều nhưng nội dung cơ bản gồm các bước chính sau: tách chiết, phân lập gen mong muốn và tạo tổ hợp gen biểu hiện trong tế bào động vật; tạo cơ sở vật liệu biến nạp gen; biến nạp gen vào phôi động vật; nuôi cấy phôi và cấy truyền hợp tử (đối với động vật bậc cao); phân tích đánh giá tính ổn định và sự biểu hiện của gen lạ và tạo ra dòng động vật chuyển... trúc gen chuyển biểu hiện enhancer: gen tăng cường ATG: vị trí khởi đầu phiên mã SIG: trình tự tín hiệu AAA: đuôi polyA 2 Tạo cơ sở vật liệu biến nạp gen • Ở động vật có vú thì giai đoạn biến nạp gen thích hợp nhất là trứng ở giai đoạn tiền nhân (pronucleus), giai đoạn mà nhân của tinh trùng và trứng chưa dung hợp (fusion) với nhau Ở giai đoạn này tổ hợp gen lạ có cơ hội xâm nhập vào genome của động vật... phương pháp nuôi cấy trứng trong ống nghiệm Sau đó thụ tinh nhân tạo để tạo ra trứng tiền nhân - Ðối với cá, giai đoạn biến nạp thích hợp là phôi ở giai đoạn 1-4 tế bào Giai đọan này được tạo ra bằng thu nhận trứng, tinh dịch bằng phương pháp sử dụng kích dục tố (kích thích tố trong nhau thai của người (HCG) hoặc não thuỳ thể cá chép ), rồi thụ tinh nhân tạo 3 Chuyển gen vào động vật • Hiện nay có nhiều... được phát hiện bằng mẫu dò Chúng được nuôi cấy trong môi trường thích hợp để sinh trưởng phát triển tạo ra hàng triệu bản sao của vector chứa gen này Vector chứa gen này sẽ được tách ra khỏi tế bào vi khuẩn và gen mong muốn sẽ được tách chiết Phương pháp này có thể tạo ra hàng triệu bản sao của gen mong muốn mà không bị nhiễm bởi các gen khác Gen chuyển có nguồn gốc từ genome này chứa các đoạn exon... vector retrovirus để lây nhiễm các DNA vào các tế bào ở giai đoạn phôi sớm trước khi cấy vào con cái nhận + Dùng phương pháp vi tiêm, tiêm DAN vào tiền nhân đực của trứng đã thụ tinh - việc tạo ra chuột chuyển gen là một định hướng quan trọng trong ngiên cứu liệu pháp gen để diều trị các rỗi loạn gây nên bởi các lỗi của mã di truyền - Palmiter và Brinster đã phát hiện ra cơ chế đọc mã di truyền và dịch... đang được sử dụng để tạo động vật chuyển gen: vi tiêm, chuyển gen bằng cách sử dụng các tế bào gốc phôi, chuyển gen bằng cách sử dụng vector virus 4 Nuôi cấy phôi trong ống nghiệm • Tế bào trứng tiền nhân sau khi vi tiêm được nuôi cấy trong ống nghiệm để phát triển đến giai đoạn phôi dâu (morula) hoặc túi phôi (blastocyst) Ở giai đoạn này màng trong (pellucida) bị bong ra và phôi có thể làm tổ được... ngắn trong khi đó việc vi tiêm đòi hỏi nhiều thao tác tỉ mỉ và chính xác Ðể khắc phục các nhược điểm này, người ta có thể tiến hành loại màng thứ cấp (Hình 4.4B), kéo dài giai đoạn phôi 1-4 tế bào và ấp nhân tạo phôi trần để tạo cá bột Hình 4.3: Trứng cá chạch (Misgurnus anguillicaudatus) trước và sau khi khử màng thứ cấp (chorion) A B A.Trứng cá chạch chưa khử màng thứ cấp B.Trứng cá chạch đã được khử... gen được chuyển đã biểu hiện ở chuột chuyển gen và thế hệ con cháu của nó - Quy trình : + Chuyển một gen ngoại lai vào trứng chuột thụ tinh + Cấy các trứng đã được chuyển gen vào các chuột mẹ thay thế + Nhân giống chuột thế hệ con để kiểm tra sự di truyền Quy trình tạo chuột chuyển gen (transgenic mice) Chiết tách các gen cần cấy vào cơ thể chuột, sau đó cấy gen này vào trứng chuột Đưa trứng đã cấy gen... vào genome của tế bào vật chủ để tạo ra động vật chuyển gen phải được phân lập và tinh chế hay nói cách khác là nó phải được tạo dòng Các công cụ sử dụng để tạo dòng bao gồm các enzyme đặc biệt có hoạt tính cắt và nối DNA (enzyme hạn chế và ligase), các mẫu dò (probe), vector và tế bào vật chủ Tế bào vật chủ thường được sử dụng là tế bào vi khuẩn E.coli và vector thường được sử dụng là plasmid • Việc... chuột nhắt để tạo chuột nhắt khổng lồ - Cho đến nay thì hàng trăm gen khác nhau đã được đư vào các dòng chuột khác nhau đã tạo ra hàng trăm dòng chuột chuển gen khác nhau - ứng dụng + Cung cấp hiểu biết về sự điều hòa hoạt động gen, sự phát triển các khối u ứng dụng trong việc nghiên cứu điều trị các bệnh ung thư, tiểu đường… + Sử dụng chuột chuyển gen để sản xuất các protein quý hiếm thông qua tuyển