Đang tải... (xem toàn văn)
báo cáo kết quả thí nghiệm protein enzyme , đối tượng enzyme thực vật từ đu đủ : papain các mục tiêu cần khảo sát : hoạt tính , hàm lượng protein sau mỗi giai đoạn tinh sạch , quá trình lọc gel , quá trình điện di
!"# $%&'$ ()&*+& ,- ./0./ 1234546789.23/. 123:;08<=>?236@A B>6CDEF23/6=G2HIJ:82K "" B>6CDEF23/6=G28=IK> " -"L)& M )=N>IO26/6=G2PC M )=H>IO26Q26:R/6 S TDB>?23U=N> V - - W"6ET23A6NAXN/DC266JR>Y26>6KJ2:J2/18QZ2 "! W 6ET23A6NAXN/DC266[\0E@23>6KJ8=IK> " W]6ET23A6NA:^/4_0`/3K0 "] Wa6ET23A6NAD8<298Db23 "] -]c,de)&f ]W"6g/>Z>6h2368<\ "# ]W Z>U=1>6h2368<\ "M -a$&ie)&f aW"8<20=j24Z>U=16JR>Y26 aW 8<20=j24Z>U=1D8<298 a aW]8<20=j24Z>U=10`/3K0 a fklm H:>K82K ]!!\0n2368o2p ]!!\0nA#qSp H:>K82K!W! M!!\0 r7/6s> Q26:R/6 A 68<>Dt >?23/t23 9g>Iu 7:K82"v #!\0 #v #!!\0 7!q# #!!\0 7" ""!\0 wJ082 "#!\0 K08>K "!!3 N> "#!3 n a p a a!v #!!\0 70PxJ6y7 #!!\0 7 a !W !!\0 /89/8>I8/!W" z!\0 !"# 7 a !W #"zqa\0n461J:N>Ap{V]qM\0n4:268<>p /89/8>I8/!W" "z"qM\0n461J:N>Ap{Mqa\0n4:268<>p "#X \0|]!\0n"/}A;23>6~4Jq>6~>6j>p 6g/>Z/6•/€2 7 a !W #"zqaX!W]|"##W# \0n4:Ap{V]qMX!W]| zW!z\0n4:268<>p |"z]WM\0 9g>Iu !!\0 /89/8>I8/!W" "z"qMX!W]|#aWaz\0n461J:N>Ap{MqaX!W]|"WV \0n4:268<>p |#MWa\0 9g>Iuz!\0 fk+•• $%& ' ()*+) ,) ,)* (-*. % /0% 1"23 45 ' 6) $7) e&*f 89**.**8:;<=>;? 89**)@*<+AB;C7"D E:;+-01FG*? 89**) 89**)H -"‚L)& )&ƒ&„… IJK>LMGJ*NO*P7FGJP-Q2RST+U%SIJ G/EV*PGJG/UWGJ7*V*EP7*+A./.P89 )X>)+A*SIJ-7F.B.'P*'>YEV*SZ0)X>)-89 *P>V*LGJ*HB#S [@*>V*K./.3P+;\7UM*1#./<*8-H]+A+E*?S ^H]+A+EPNV*J>_7UW+-_S`'*+AKV*EP WPaH)* `'*2*KV*&PbPaH) [;UcV*=>LGJO*NLd>Se'*O-BQ87U2@ Q)GJL2@+EGJP//+E*/*T <+A8.dG/ P;+A237U:1HGJ.fHg7UV*7UUJ2RV* 2R? 5>V*J>*1hQ=>:UHC\P.*+>V*O _>i+E7U1JGJ8PM%h/+AV*:;O\d73+A +E7U01JJ89=***-V* ^>V*B*.8/h/+A1]WA'g7US^A HV*+A73V*2j7"-UJ2RV*S IJ-02R\V*.%+J@*CU>SkBB:-0lB H8U=PLMBV*.*P8C2@M*M2@823-S ^:;U/*/73V*2jP/+AV*:;O\7U*7"md>1FS Za@Y+A0V*:;O\73/DDU+8W2.iPaP n0/U1;U7UJ89)X>)SkQP*PPnJ2RU1hV* W+AlScV*2j+A1&7";A+Ad+A*>.*+ _PV*A+A2R1JGJ=80:;U/5S )&ƒ [H"z!3V*=+A73"!!3/K08>K 7U"#!3/N>:R/6P&+o%LH N73 !!†]!!\09=239C/6/H:>K82K!W!a <N** MW]3/H:>K82K >) "!!!\07!W!#aP+&2R.pD02*;3#WS?S^ V*8U0>&'P81F3#LSI/"&7UE2RW873 ]!!\09=239C/6/H:>K82KSq*-p*%73>.))0&l09 "!!!\0Se>&'.*'2RQ8<-0\r?>Qs**.%S [@*QDH7UV*+A2R.pD7UG/"U>-0_Sc23Q -Ui.M*W7UO*PB SS$/123N8=*G/":.8)X>) 2R:;U&+8 ktuv(w$x$$y[^zc{[|c}~• e;2RL2RD8o=/6•26052AV1h/7U+>&H 2R+J""!\09=239C/67"S[=*O/8U-02R8*1hQW >dLa!!!IA\>IJ23]!A6‡>WeEL*8U>J/=*d>1;9 )b2R81FS I€x[•‚c,ƒcZtuc(„c{|`tcv€`q€k4|[6 $*.…*)7U)X>);†H1bN*P.*T@P>dLS[ _=*P1FFW-0M80>>**S[=*2Rp*HB73T *.…*)†H1bN*S I€x[•‚c,ƒcZtuc(„c{c|$ N**=*M!!\09=239C/6/H:>K82K!W! nAS†SW#pP=***8U+ M!370iSq*H@P>dˆa!!!IA\a!A6‡>0=*P1FF I€x[•‚c^‡[[vc [=*2R8U>&'73a!!\09=239C/6/H:>K82K!W!! ˆAMW#7U&+ HNS=*>&'2R&l8;MW#.*+) 7US{MLHN]!A6‡>0:08UP.*->"LaJG*P .*->d8La!!!IA\@0_:0S I€x[•‚c[xv^‡[[vc N**:02RL*8+;:23<8-aH) +J†?LHNSq*-7U<a@+>&?c*$1b N*<ˆ)?S^ †09c*$b7UP**1i B+;:LHNSe>&'2RMˆaJG*P.*->d=*S 8H=*)X>)-0‰r;:;U/+;:HBM*2 S Zzc{^z$ƒc^zc{ [=*)2R)A+Ad+A081F23S,).*+A+Ad +A2R1JGJ=80:;U/5:;)SI"_ **:+;-02R-i8).ja ,d8~ P !V*=+A c&73))7U /.8 e>.))P `PkQ8L $ ee; d8• ec*t` kQ8L $ (F=*O/ [=*** ,d8/+;: ec*$1bN* [=* ,d8+;: >.))S `LP [=* ,d8+;:1hc*$ >.))S`<TS ?P c*$i [=* d8=*73*.…*) † ee; - ‚- W"f‰fe G>"E%73d8U2*7U)1J.* e-* Š [p_ [p+A e$*.)†<? e[$| †<? e)X>)<? Lắc đều và giữ ở 35,5 o C trong 20 phút e[$| †<? Để yên 30 phút, lọc lấy dịch trong o k>%3+/P7U%5 Q=*%p_ 7U7U%5* Q'*%p+ASkU2jV W %N8 o [;D7U%%c*tP c7U%p4Pi 8P o .*\teL123 S o [E‹te~te [[ Cte [^ P.*-V*7Ua].>*2R.%Œ`[>.S • 2j"2@]>~*O•1<A?P73>U∆tePOU2R>.)P- ∆te.f.>*2R>.) H = )( ** *sin* UI vmt LVTyroM µ Ž3KK8H)X>))*.)<€vˆ? [...]... khi gel trong suốt, lúc này sẽ xuất hiện các vạch xanh lơ trên gel, chụp ảnh để lấy kết quả d) kết luận dựa vào thang mẫu đã biết để xác định từng loại protein trong hỗn hợp protein CHƯƠNG 3 : THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 3.1 THỰC TẾ THÍ NGHIỆM Quy trình thí nghiệm thực tế 99950 g đu đủ nguyên trái + vỏ Cắt nhỏ , xay trong cối xay Vvắt lấy dịch bỏ xác Chỉnh pH dịch lọc lên 9 bằng NaOH 1N Lọc lấy dịch trong... chứng tỏ enzyme không có mặt trong quá trình thu nhận , hoặc quá trình điện bị sai sót 4.3 Biện luận kết quả lọc gel • Tại ống số 3 số 6 và số 8 có xuất hiện peak , vì từ ống số 4 ta mới đổ dịch enzyme vào cột nên không tính peak này – ở 3 ống đầu chỉ toàn nước cất • Tại ống nghiệm số 6 xuất hiện peak nhỏ (1) , ống nghiệm số 8 xuất hiện peak cao (2) • Peak 1 các ống nghiệm từ 57 • Peak 2 các ống nghiệm. .. enzyme mất hoạt tính dần, hoặc lượng muối không đủ để tủa hết toàn bộ enzyme trong dịch , đây là nguyên nhân chính yếu giải thích vì sao ở phân đoạn tủa muối HTR lại giảm 2 do nguyên liệu ban đầu tiến hành thực nghiệm là nguyên trái đu đủ , cho nên lượng tạp chất rất lớn , và ảnh hưởng rất nhiều đến hoạt tính enzyme , mặt khác lượng enzyme trong khối nguyên liệu đó cũng chỉ có mặt 1 lượng rất nhỏ , cho... g Anson ODtt = 0,074 ODtk = 0,070 => ∆OD = 0,004 0, 002047.16.1 = 0, 000324757 20.1, 009.5 Hoạt tính H = Hàm lượng protein h = 1,75258 mg/ml Hoạt tính riêng pđ amoni sulfate UI/ml H 0, 000324757 = = 0, 0001853 h 1, 75258 HTR = UI/mg protein Kết quả chạy điện di Kết quả lọc gel ngày thí nghiệm T4/01/04/15 Tiến hành thu tủa từ nguồn đu đủ khác Không đo hoạt tính , nhiệm vụ cao cả là thu cho được tủa ,... Biện luận kết quả hoạt tính Bảng số liệu tổng hợp Phân đoạn Hoạt tính enzyme Hàm lượng protein Hoạt tính riêng pH 5,7 (1) 0,0048 6,70103 0, 0007163 pH 9 (2) 0,00324 3,9003 0, 00085223 (NH4)2SO4 (3) 0,000324757 1,75258 0, 0001853 Hoạt tính của enzyme nói chung đều giảm qua các bước tinh sạch , điều này phù hợp với lý thuyết Hàm lượng protein cũng giảm qua các phân đoạn tinh sạch , điều này đúng với lý... lượng protein phải giảm Hoạt tính riêng tương quá nhỏ xấp xỉ bằng 0 , ở giai đoạn pH 9 thì hoạt tính riêng enzyme cao nhất trong cả 3 giai đoạn- điều này không đúng so với lý thuyết bởi vì càng tinh sạch thì ta thu được enzyme càng tinh khiết do vậy hoạt tính riêng phải càng cao Có nhiều nguyên nhân dẫn đến tình trạng này : 1 sau bước tủa với pH 9 là bước tủa với muối amoni , có khả năng do để lâu nên enzyme. .. yên trong 1h30 điều kiện lạnh 0-4 độ C Đổ bỏ dịch lỏng trữ lạnh tủa thu được để lọc gel và chạy điện di Ly tâm lấy tủa bám trên thành falcon 3.2 KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM Pt đường chuẩn Anson y= 1,954x Pt đường chuẩn Biuret y= 0,0582x – 0,00007 Ngày thí nghiệm 18/3/15 Nguyên liệu đu đủ gần chín Dịch ban đầu sau khi xay và lọc ODtt = 0,969 ODtk = 0,811 => ∆OD = 0,158 0, 081.16.1 = 0, 0105 20.1, 23.5 Hoạt tính... 0, 003324 20.1,01.5 Hoạt tính H = Hàm lượng protein h = 3,9003 mg/ml Hoạt tính riêng pH 9 H 0, 003324 = = 0,00085223 h 3,9003 UI/ml HTR = UI/mg protein Thí nghiệm ngày 19/3/15 Phân đoạn bằng ( NH4)2SO4 400 g đu đủ khác loại làm tiếp Lấy 39 g muối amoni kết tủa protein, đem ly tâm 5000 rpm 15 phút , Kết quả sau khi hòa tan tủa dạng paste dính trên falcon ( sau ly tâm) với đệm pH tối ưu là 7,6 Biuret OD... trị 0 chứng tỏ mẫu không chứa 1 loại protein duy nhất mà thực tế có nhiều loại • ở peak số 2 hoạt tính theo pp Anson cao hơn nên chọn peak 2 là khoảng quan tâm của ta , ở đó sẽ có nhiều protein - enzyme hơn • vì thời gian hạn hẹp nên không thể tiến hành rà peak được nữa , thực tế sẽ xuất hiện thêm nhiều peak nữa nếu ta tiến hành lọc gel tiếp và xác suất cao là enzyme sẽ nằm ở khu vực những peak này... tính hết rồi Cuối cùng cũng có tủa mặc dù rất ít Hòa tan tủa với 1ml đệm pH = 7,6 20 µl dịch tủa hòa tan với đệm + 10 µl dung dịch xử lý mẫu Chạy điện di , phần dịch enzyme với đệm còn lại đi lọc gel thủ công Kết quả OD Biuret của lọc gel ống nghiệm số OD 1 0,107 2 0,107 3 0,151 4 0,044 5 0,054 6 0,100 7 0,039 8 0,229 9 0,039 10 0,040 11 0,04 có peak lùn có peak cao Xác định hoạt tính Anson tại peak cao