Đang tải... (xem toàn văn)
Salmonella thuộc họ Enterobacteriaceae, trực trùng gram âm, hô hấp hiếu khí hoặc kị khí tùy ý, có khả năng di động, không tạo bào tửCác loại thực phẩm đều yêu cầu phải kiểm nghiệm Salmonella với tiêu chuẩn không phát hiện25g (ml)Salmonella là loại vi khuẩn có thể sống trong các ống ruột của người và động vật khácBất kỳ thực phẩm tươi có nguồn gốc động vật như thịt lợn, thịt gia cầm, sữa và các sản phẩm sữa, trứng, hải sản cùng với một số rau, quả có thể chứa salmonella.Động vật nuôi trong nhà cũng có thể mang vi khuẩn salmonella..Thử nghiệm sinh hóa cho kết quả:KIATSI: đỏvàng, cókhông H2S, sinh hơikhông Urea (), Indol (), VP ()LDC (+), ONPG ()Thử nhiêm ngưng kết kháng nguyên huyết thanh:(ngưng kết với ít nhất một trong hai kháng huyết thanh đa giá OMA, OMB)
L/O/G/O PHÂN TÍCH THỰC PHẨM ĐỊNH TÍNH SALMONELLA TRONG THỰC PHẨM NỘI DUNG Giới thiệu vi khuẩn Salmonella Quy trình phân tích Ví dụ Click to add title in here 1 2 3 Salmonella thuộc họ Enterobacteriaceae, trực trùng gram âm, hô hấp hiếu khí hoặc kị khí tùy ý, có khả năng di động, không tạo bào tử Các loại thực phẩm đều yêu cầu phải kiểm nghiệm Salmonella với tiêu chuẩn không phát hiện/25g (ml) 1,Giới thiệu vi khuẩn Salmonella Xác định Salmonella thông thường chỉ dừng ở mức độ định tính, tên chủng chỉ được xác định trong những trường hợp quan trọng Đồng nhất 25g mẫu trong 225ml dung dịch BPW ủ 37°C, 18-24 giờ Cấy 0.1ml canh khuẩn BPW sang RV, ủ 42°C, 18-24 giờ và sang Selenit cystein/TT, ủ 37°C /24 giờ Phân lập khuẩn lạc đơn trên ít nhất 2 môi trường chọn lọc phân biệt XLD, HE, BS, SS… Chọn các khuẩn lạc đặc trưng cấy sang canh BHI hoặc thạch TSA, ủ qua đêm, 37°C 2.QUY TRÌNH PHÂN TÍCH Thử nghiệm sinh hóa cho kết quả: • KIA/TSI: đỏ/vàng, có/không H2S, sinh hơi/không • Urea (-), Indol (-), VP (-) • LDC (+), ONPG (-) Thử nhiêm ngưng kết kháng nguyên huyết thanh: (ngưng kết với ít nhất một trong hai kháng huyết thanh đa giá OMA, OMB) Salmonella dương tính/ âm tính trên 25g (ml) thực phẩm NGUYÊN TẮC TĂNG SINH TĂNG SINH CHỌN LỌC KHẲNG ĐỊNH PHÂN LẬP BƯỚC 1 BƯỚC 2 BƯỚC 4 BƯỚC 3 Qui trình phân tích Samonella gồm 4 bước: Cân 25g mẫu đã nghiềng, hoặc hút 25 ml mẫu cho vào bình đã chứa sẵn 225ml dung dịch BPW và lắc đều để ở 370C trong 18 – 24 giờ BƯỚC 1: TĂNG SINH Hút 1ml canh khuẩn BPW sang môi trường RV, muôi trong 24h ở 420C Hút 1ml canh khuẩn BPW sang môi trường selenit-cystin/TT, muôi trong 24h ở 370C BƯỚC 2: TĂNG SINH CHỌN LỌC -Mỗi loại môi trường chỉ có tác dụng chọn lọc dựa trên một đặc điểm phát triển của Salmonell -Một số dòng chỉ có thể tăng trưởng trong môi trường này mà không thể tăng trưởng trong môi trường khác Để tăng khả năng phát hiện tất cả các dòng Salmonella hiện diện trong thực phẩm cần phải dùng ít nhất hai loại tăng sinh chọn lọc khác nhau cho cùng một mẫu BƯỚC 2: TĂNG SINH CHỌN LỌC [...]... ngay dưới bề mặt của môi trường lỏng LDC KẾT QUẢ ủ ở 37oC trong 24h Salmonella phát triển sẽ làm đục và chuyển màu môi trường sang tím hay đỏ tía, phản ứng dương tính Phản ứng âm tính khi môi trường màu vàng Thử nghiệm VP Mục đích Phát hiện vsv tạo sản phẩm trung tính (acetoin) trong quá trình lên men glucose Cở sở sinh hóa Acetoin được tạo ra trong điều kiện yếm khí hoàn toàn 2 pyruvate → acetoin +... / H2S THỬ NGHIỆM TSI/KIA Salmonella Salmonella Chỉ lên men được đường glucose trong môi trường TSI phần nghiêng của môi trường TSI có màu đỏ, phần sâu có màu vàng có khả năng H2S xuất hiện các vệt màu đen trong môi trường TSI 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 11 Cột thạch: ĐC Màu vàng: glucose dương tính (lên men glucose) Màu đỏ hoặc không đổi màu:glucose âm tính (không lên men glucose0... sinh indol các VSV có hệ emzym tryptophanase THỬ NGHIỆM SINH INDOL CÁCH TIẾN HÀNH Chủng VSV MT canh trypton 37oC / 24h Thuốc thử Kovac’s Pứ dương tính Pứ âm tính THỬ NGHIỆM SINH INDOL Kết quả: Salmonella Phản ứng cho phản ứng dương tính khi có vòng âm tính với đỏ trên bề mặt thử nghiệm môi trường (a) An uninoculated tube of tryptone broth (b) A positive indole test (c) A negative indole test PHẢN... chuyển thành màu nâu và sau đó chuyển sang màu đen nếu kéo dài thời gian ủ Khẩn lạc đặc trưng của Salmonella trên môi trường BS Từ mỗi môi trường phân lập cấy chuyển ít nhất 5 khuẩn lạc đặc trưng qua môi trường không chọn lọc như TSA Ủ ở 370C trong 18 – 24 giờ Các thử nghiệm sinh hóa chính cần thực hiện cho Salmonella là: lên men glucose, urea, manitol, indol, H2S, VP, ODC, LDC, saccharose, sorbitol THỬ... Thử nghiệm VP CÁCH TIẾN HÀNH Hòa một vòng que cấy đầy từ khuẩn lạc trên môi trường TSA vào các ống môi trường MR-VP Ủ ở 37oC trong 24h Lấy 0,2ml dịch cấy vào 1 ống nghiệm, Thêm 2 giọt creatin , 6 giọt dd 1- naphthol trong cồn ,sau đó thêm 2 giọt KOH 40% Salmonella cho phản ứng âm tính với thừ nghiệm VP , không đổi màu trên bề mặt môi trường • Thử nghiệm VP (+) khi có màu đỏ trên bề mặt môi trường THỬ... VÀ NHẬN DIỆN Dùng que cấy vòng thực hiện kỹ thuật cấy phân lập khuẩn lạc đơn với giống từ dịch tăng sinh chọn lọc trên đĩa môi Cường phân lập lọc và mức độ phân trường độ chọn đặc trưng cho biệt thể hiện ở hình thái của khuẩn lạc Salmonella như XLD, HE, BS Salmonella trên từng môi trường cũng khác nhau BƯỚC 3: PHÂN LẬP VÀ NHẬN DIỆN Môi trường XLD Khuẩn lạc tròn, lồi, trong suốt, có hay không có tâm... từ khuẩn lạc trên môi trường TSA vào ống chứa 3ml-5ml môi trường RSU vô trùng Lắc nhẹ ống để trộn đều vi khuẩn Ủở 37oC trong 48h Quan sát Thử nghiệm ure Salmonella không phản ứng với ure nên không làm thay đổi pH môi trường Sau khi nuôi cấy môi trường vẫn giữ nguyên màu Phản ứng dương tính việc phân giải ure sẽ sinh ra NH3 làm thay đổi màu phenol red sang màu hồng và sau đó sang màu tím hoa cà Thử nghiệm... THỬ NGHIỆM β-GALACTOSIDASE VỚI ONPG CÁCH TIẾN HÀNH ủ qua đêm Lactose agar Chủng VSV 37o C 2ml ONPG broth Pứ (+) Màu vàng Pứ (-) PHẢN ỨNG β-GALACTOSIDASE VỚI ONPG Salmonella cho phản ứng âm tính với thử nghiệm β-galactosidase Phản ứng dương tính đổi máu môi trường sang vàng THỬ NGHIỆM KHÁNG HUYẾT THANH Kiểm tra sự tự dính kết của các chủng Kiểm tra kháng nguyên O 1 2 4 3 Kiểm tra kháng nguyên H Kiểm... (không lên men glucose0 Màu đen: tạo thành sunfua hidro Có bọt khí hoặc có vết nứt:sinh khí từ glucose Bề mặt thạch nghiêng: Màu vàng: lactose/sacharose dương tính( có sử dụng lactose/sacharose) Màu đỏ hoặc không đổi màu lactose/sacharose âm tính THỬ NGHIỆM UREASE Mục đích Phát hiện VSV có mang enzym urease (NH2)2CO + H2O 2 NH3 + CO2 Cơ sở tăng pH môi trường đỏ phenol sinh hoá (vàng – đỏ) THỬ... khuẩn lạc, môi trường xung quanh chuyển sang màu hồng Khẩn lạc đặc trưng của Salmonella trên môi trường XLD BƯỚC 3: PHÂN LẬP VÀ NHẬN DIỆN BƯỚC 3: PHÂN LẬP VÀ NHẬN DIỆN Môi trường Khuẩn lạc có màu thay đổi từ xanh dương đến xanh lục, có hay không có tâm đen, đôi khi tâm đén quá lớn XLD bao trùm khuẩn lạc Khuẩn lạc đặc trưng của Salmonella trên môi trường HE BƯỚC 3: PHÂN LẬP VÀ NHẬN DIỆN khuẩn lạc có màu . nhất hai loại tăng sinh chọn lọc khác nhau cho cùng một mẫu BƯỚC 2: TĂNG SINH CHỌN LỌC Dùng que cấy vòng thực hiện kỹ thuật cấy phân lập khuẩn lạc đơn với giống từ dịch tăng sinh chọn lọc trên. thanh đa giá OMA, OMB) Salmonella dương tính/ âm tính trên 25g (ml) thực phẩm NGUYÊN TẮC TĂNG SINH TĂNG SINH CHỌN LỌC KHẲNG ĐỊNH PHÂN LẬP BƯỚC 1 BƯỚC 2 BƯỚC 4 BƯỚC 3 Qui trình phân tích Samonella. giờ BƯỚC 1: TĂNG SINH Hút 1ml canh khuẩn BPW sang môi trường RV, muôi trong 24h ở 420C Hút 1ml canh khuẩn BPW sang môi trường selenit-cystin/TT, muôi trong 24h ở 370C BƯỚC 2: TĂNG SINH CHỌN LỌC