ỦY BAN NHÂN DÂN TP.HCM SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ BÁO CÁO NGHIỆM THU (Đã chỉnh sửa theo góp ý của Hội đồng nghiệm thu) TRIỂN KHAI QUY TRÌNH NHÂN NHANH CÁC GIỐNG LAN MOKARA, RENANTHERA, PHALAENOPSIS BẰNG PHƯƠNG PHÁP NGẬP CHÌM TẠM THỜI CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI (Ký tên) CƠ QUAN QUẢN LÝ CƠ QUAN CHỦ TRÌ (Ký tên/đóng dấu xác nhận) (Ký tên/đóng dấu xác nhận) THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG ___/ 200___ i TÓM TẮT Dự án sản xuất thử nghiệm “Triển khai quy trình nhân nhanh các giống lan Mokara, Renanthera và Phalaenopsis bằng phương pháp ngập chìm tạm thời” được tiến hành tại Trung tâm Công nghệ Sinh học Thành phố Hồ Chí Minh. Thời gian thực hiện: 30 tháng từ 07/2009 đến tháng 12/2011. Xuất xứ của dự án: - Là kết quả nghiên cứu của đề tài “ Ứng dụng hệ thống nuôi cấy ngập chìm tạm thời trong nhân giống cây lan Hồ điệp lai (Phalaenopsis hybrid)” đã được Hội đồng Khoa học cấp thành phố đánh giá và nghiệm thu ngày 16/11/2007. - Dự án được tiến hành trên cơ sở những nghiên cứu thuộc dự án cấp trung tâm “ Sưu tập, nhập nội và nhân nhanh các giống hoa lan phục vụ nội têu và xuất khẩu” Nội dung dự án: gồm 2 nội dung + Nội dung 1: Hoàn thiện quy trình nhân giống Mokara và Renanthera trên hệ thống ngập chìm tạm thời. Dự án kế thừa quy trình nhân giống lan Mokara và Renanthera trên môi trường thạch và thí nghiệm nhân nhanh các PLB ở các mật độ và chu kỳ bơm khác nhau của Trung tâm công nghệ sinh học. Trong nội dung 1 này chúng tôi chỉ tiến hành thí nghiệm 4 thể tích nuôi cấy 150 ml, 200 ml, 250 ml và 300 ml. Kết quả thu được như sau: - Tái sinh chồi từ PLB của giống lan Mokara đỏ lá quặt trên môi trường MS có bổ sung nước dừa 10%, pepton 1g/l và PVP 1g/l, sucrose 25 g/l ở thể tích môi trường nuôi cấy 200 ml cho số chồi nhiều. - Tái sinh chồi từ PLB của giống lan Ren. Red # 1 trên môi trường MS có bổ sung BA (1 mg/l), NAA ( 0,1 mg/l), nước dừa 10%, pepton 1 g/l và PVP 1 g/l, sucrose 25 g/l ở thể tích môi trường nuôi cấy là 250 ml cho số chồi và PLB nhiều. + Nội dung 2: Triển khai nhân giống trên hệ thống TIS các giống lan Mokara, Renanthera và Hồ điệp với số lượng 200000 cây. Đã tạo được 236494 cây lan cấy mô. Trong đó có 218588 cây lan hoàn chỉnh đạt tiêu chuẩn cung cấp ra thị trường và 17906 cây sẽ đạt tiêu chuẩn ra vườn vào giữa tháng 1/2012. Đã xuất bán 201000 cây lan các loại. Ngoài ra, từ kết quả của dự án, năm 2010, Trung tâm đã ký 02 hợp đồng chuyển giao công nghệ nhân giống trên hệ thống ngập chìm tạm thời, đào tạo 2 sinh viên làm đề tài tốt nghiệp về nhân giống Mokara và Renanthera trên hệ thống ngập chìm tạm thời và tạo việc làm cho sinh viên mới ra trường. ii SUMMARY OF TRIAL PRODUCTION CONTENT Trial production project "Implementation of fast propagation of Mokara, Renanthera, Phalaenopsis orchids using temporary immersion systems" was conducted at the Biotechnology Center of Ho Chi Minh City. Implementation period: 30 months from 07/2009 to May 12/2011. Origin of the project: - The results of the project "Application of the temporary immersion system for propagating Orchid hybrid (Phalaenopsis hybrid)"which has been assessed by the Scientific Council of city on 16 / 11/2007. - The project was conducted on the basis of the project in the biotechnology center "Collecting, introducing and propagating orchid varieties for domestic and export" Contents of the project: Includes two contents + Content 1: Completing the process of multiplicating Mokara, Renanthera on temporatory immersion system. The project is inherited from the process of multiplicating Mokara and Renanthera on agar and rapid testing of PLB at the different pump densities and cycles in Biotechnology Center. In this content, we conducted four experiments culture volume 150 ml, 200 ml, 250 ml and 300 ml. The results were as follows: - Regenerating shoots from PLB of Mokara orchid on MS medium supplemented 10% coconut water, pepton 1 g / l and PVP 1 g / l, sucrose 25 g / l and in culture volume 200 ml gives multiple shoots. - Regenerating shoots from PLB of Ren. Red # 1 on MS medium supplemented BA 1 mg / l, NAA 0,1 mg / l, 10% coconut water, pepton 1 g / l and PVP 1 g / l, sucrose 25 g / l and in the culture volume 250 ml gives multiple shoots and PLB. + Content 2: Implementing propagation of Mokara, Renathera and Phalaenopsis on the temporatory immersion system with the number of 200,000 trees. We have created 236.494 orchids in vitro. Of which 218.588 standard orchids sell to the market and 17.906 trees will be in the garden in mid 1 / 2012. We has sold 201.000 orchids. Also, as a result of the project, in 2010, the Center has signed 02 contracts for transfer of propagation technology on temporary immersion system. We have trained two student thesis about Mokara, Renanthera propagation on temporary immersion system and created jobs for new graduate students. iii MỤC LỤC Trang  i  iii  v Danh sách  vi Danh sách hình vii  ix PHẦN MỞ ĐẦU 1 CHƢƠNG I : TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu về giống lan Mokara, Renanthera, Phalaenopsis 2 1.1.1 Lan Mokara 2 1.1.2 Lan Renanthera 3 I.1.3 Lan Phalaenopsis (Hồ điệp) 7 1.2. Tình hình sản xuất và tiêu thụ hoa lan 10 1.2.1 Tình hình sản xuất và tiêu thụ hoa lan ở Thái Lan 10 1.2.2 Tình hình sản xuất và tiêu thụ hoa lan tại TP. Hồ Chí Minh 12 1.3. Các kỹ thuật vi nhân giống sử dụng trong nuôi cấy mô, tế bào, cơ quan 12 1.3.1 Kỹ thuật vi nhân giống trên môi trường bán rắn 12 1.3.2 Kỹ thuật nuôi cấy lỏng 13 1.3.3 Kỹ thuật nuôi cấy ngập chìm tạm thời 14 1.3.3.1 Nguyên tắc vận hành và cấu trúc cơ bản hệ thống 14 1.3.3.2 Một số hệ thống nuôi cấy ngập chìm tạm thời 15 1.2.3.3 Ứng dụng hệ thống nuôi cấy ngập chìm tạm thời trong vi nhân giống 19 1.3.3.4 Ưu và khuyết điểm của hệ thống nuôi cấy ngập chìm tạm thời 24 CHƢƠNG II: NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 2.1 Nội dung 1. Hoàn thiện quy trình nhân giống Mokara và Renanthera trên hệ thống ngập chìm tạm thời 26 2.1.1 Thí nghiệm 1: Nghiên cứu thể tích nuôi cấy để hoàn thiện quy trình nhân giống lan Mokara trên hệ thống ngập chìm tạm thời 26 2.1.2 Thí nghiệm 2: Nghiên cứu thể tích nuôi cấy để hoàn thiện quy trình nhân giống lan Renanthera trên hệ thống ngập chìm tạm thời 26 iv 2.2 Nội dung 2. Triển khai nhân giống trên hệ thống TIS các giống lan Mokara, Renanthera và Phalaenopsis trên hệ thống ngập chìm tạm thời 28 CHƢƠNG III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Nội dung 1: Hoàn thiện quy trình nhân giống Mokara và Renanthera trên hệ thống ngập chìm tạm thời. 31 3.1.1 Thí nghiệm 1: Nghiên cứu thể tích nuôi cấy để hoàn thiện quy trình nhân giống lan Mokara trên hệ thống ngập chìm tạm thời 31 3.1.2 Thí nghiệm 2: Nghiên cứu thể tích nuôi cấy để hoàn thiện quy trình nhân giống lan Renanthera trên hệ thống ngập chìm tạm thời 33 3.2 Nội dung 2: Triển khai nhân giống trên hệ thống TIS các giống lan Mokara, Renanthera và Phalaenopsis (Hồ điệp) 45 3.2.1 Giai đoạn 1. Tái sinh chồi từ PLB trên hệ thống ngập chìm tạm thời. 45 3.2.2 Giai đoạn 2: Tạo cây hoàn chỉnh 57 3.3 Kiểm tra virus sản phẩm cây con cấy mô đầu ra 61 3.4 Hiệu quả kinh tế - xã hội 62 3.4.1 Doanh thu bán cây từ dự án 62 3.4.2 Chi phí đầu tư 63 3.4.3 Phần còn lại sau khi dự án kết thúc 64 3.4.4 Hiệu quả kinh tế của dự án 64 3.4.5 Hiệu quả xã hội 65 CHƢƠNG IV: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 4.1 Kết luận 66 4.2 Đề nghị 66 PHỤ LỤC 67 TÀI LIỆU THAM KHẢO 74 v DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT VIẾT TẮT THUẬT NGỮ TIẾNG VIẾT MS Murashige & Skoog BA 6-benzyladenin NAA Naphthalene aetic acid IBA Indole-3 butyric acid PLB Protocorm-like bodies B1 Thiamine B6 Pyridoxine PVP Polyvinylpyrrolidone TIS  RHS Royal Horticultural Society England. NDM New Dogashima Medium. NPV T KTV  CV  Ren Renanthera Mok Mokara Phal Phalaenopsis Ren. Red #1 Renanthera Red Number One ORSV Odontoglossum ring spot virus CyMV Cymbidium Mosaic virus vi DANH SÁCH BẢNG SỐ TÊN BẢNG SỐ LIỆU TRANG 3.1 chi t        150 ml, 200 ml, 250 ml và 300ml 31 3.2 i t        150 ml, 200 ml, 250 ml và 300ml 34 3.3   n xut th t 1 45 3.4   n xut th t 2 47 3.5   n xut th t 3 48 3.6   n xut th t 4 50 3.7   n xut th t 5 51 3.8   6 53 3.9    54 3.10    8 55 3.11   9 56 3.12  57 3.13 0 62 3.14  62 vii DANH SÁCH HÌNH SỐ TÊN HÌNH ẢNH TRANG 1.  3 2 Hoa lan Renanthera annamensis Rolfe 6 3 Hoa lan Renanthera citrina Aver 6 4 Hoa lan Renanthera coccinea Lour 6 5 Hoa lan Renanthera imschootiana Rolfe 6 6 Hoa lan Renanthera vietnamensis Aver 6 7  10 8  14 9 A:  Christie và Davies (1988), B:   16 10    ®                        ®    17 11  ® 18 12 Các thàn 18 13   Plantima 19 14 Lan Mokara Luenberger Gold 27 15  27 16 Lan Renanthera Akihito 27 17 Lan Renanthera Red Number One 27 18  32 19  35 20a lan Mokara Luenberger Gold 38 viii 20b ug lan Renanthera Red Number One 41 20c ung cây lan Phal. Jiuh Bao Sweetie 44 21  46 22  47 23 Phalaenopsis Juih Bao Sweetie  49 24  49 25  51 26  52 27 Hìn  56 28  58 29  59 30  59 31 Lan Mokara 6  60 32 Lan Renanthera 9  60 33 Lan Phalaenopsis 1 60 ix QUYẾT TOÁN KINH PHÍ    :        Kin           121/TB- KHCN ngày 16/06/2009)      2     39 /TB- ) TT Nội dung Kinh phí Trong đó Ngân sách Nguồn khác I  672.105.000 672.105.000 II Kinh p 747.105.000 747.105.000 1.  30.000.000 30.000.000 2. Công thuê khoán 176.000.900 176.000.900 3.        254.725.000 254.725.000 4.  138.480.000 138.480.000 5.      27.000.000 27.000.000 6.  0 0 7.  0 0 8.  0 0 9.  45.000.000 45.000.000 III  0 0 IV  75.000.000 75.000.000 [...]... nhõn ging lan Mokara trờn h thng ngp chỡm tm thi Thớ nghim 2: Nghiờn cu th tớch nuụi cy hon thin quy trỡnh nhõn ging lan Renanthera trờn h thng ngp chỡm tm thi Ni dung 2: Trin khai nhõn ging trờn h thng TIS cỏc ging lan Mokara, Renanthera v H ip vi s lng 200000 cõy 1 CHNG I TONG QUAN TAỉI LIEU 1.1 Gii thiu v ging lan Mokara, Renanthera, Phalaenopsis 1 1.1 Lan Mokara Lan Mokara l mt loi lan lai t 3... g/l, pH 5,8 + Cỏc ging Renanthera ó c nghiờn cu thnh cụng v a vo sn xut cõy con trong mụi trng thch l: Ren Red Number One, Ren Akihito 5 Hỡnh 2 Hoa lan Renanthera annamensis Rolfe Hỡnh 3 Hoa lan Renanthera citrina Aver Hỡnh 4 Hoa lan Renanthera coccinea Lour Hỡnh 5 Hoa lan Renanthera imschootiana Rolfe Hỡnh 6 Hoa lan Renanthera vietnamensis Aver 6 1.1.3 Lan Phalaenopsis (H ip) Lan H ip c tỡm thy vo... quy trỡnh nhõn ging Mokara v Renanthera bng h thng TIS + Trin khai ng dng quy trỡnh nhõn ging mt s ging lan H ip, Mokara, Renanthera trờn h thng TIS vi quy mụ t 1 vi s lng 30000 cõy, t 2 vi s lng 50000 cõy, t 3 vi s lng 60000 cõy, t 4 vi s lng 60000 cõy Ni dung: Ni dung 1: Hon thin quy trỡnh nhõn ging Mokara v Renanthera trờn h thng ngp chỡm tm thi Thớ nghim 1: Nghiờn cu th tớch nuụi cy hon thin quy. .. Renanthera citrina Renanthera coccinea Renanthera edefeldtii Renanthera elongata Renanthera histronica Renanthera imschootiana Renanthera matutina Renanthera monachica Renanthera philippinensis Renanthera pulchella Renanthera storiei Renanthera vietnamensis Ngoi cỏc ging lan t nhiờn, nm 1935 th gii ó nghiờn cu to ra ging Renanthera lai u tiờn cú tờn Renantanda Sanderi (Reathera imshootiana... nc tt Chi lan Ph ng vi (Ren.) cú khong 15 loi, phõn bụ t n ụ qua Trung Quụ c ờ n Philippi n, Malaysia cho ờ n New Guinea Vit Nam chi cú 5 loi, thng c go i la lan Ph ng v ( min Bc ) hay lan Huyờ t Nhung (miờ n Nam) v c phõn bit da vo mu sc, ụ ln cua hoa 15 loi Renanthera o la: Renanthera annamensis Renanthera auyougii Renanthera bella 3 Renanthera citrina Renanthera coccinea Renanthera. .. ging lan H ip 1.2 Tỡnh hỡnh sn xut v tiờu th hoa lan 1.2.1 Tỡnh hỡnh sn xut v tiờu th hoa lan Thỏi Lan Thỏi Lan, sn xut phong lan l ngnh quan trng nht Cỏc khu vc sn xut phong lan Thỏi Lan tp trung quanh cỏc trung tõm ln nh Bangkok Theo Setapong Lekawatana (2010), Din tớch canh tỏc khong 3.500 hecta Trong ú khu vc sn xut hoa lan phc v ct cnh chim trờn 90% tng din tớch sn xut v 10% cho sn xut lan trng... hoa lan Thỏi Lan cng chu nh hng, giỏ tr xut khu cõy trng trong nm 2009 gim khong 6,3% so vi nhng nm trc õy Trong nm 2009, giỏ tr lan xut khu ti Thỏi Lan l 80 triu USD chim 77% cho tng sn xut ca ngnh trng hoa ca Thỏi Lan Trong ú, xut khu hoa phong lan chim 69 triu USD v 10,8 triu USD cho lan cõy, vi th trng xut khu chớnh l cỏc quc gia Nht, USA, Trung Quc, í, H Lan, i Loan Sn phm hoa lan bao gm, lan. .. Ascocentrum, Vanda v Arachinis (lan bũ cp) c to ra ti Singapore nm 1969 Do ú cú c tớnh ni bt t b m: dng hoa v mu sc p t Vanda, tng trng nhanh t Ascocenda (Ascocentrum v Vanda) Hin nay cú nhiu ging Mokara c lai to v a ra ngoi th trng Nhõn ging lan Mokara cng ging nh nhng loi lan n thõn khỏc, cú s lng ln cõy ging Mokara thụng thng s dng phng phỏp nhõn ging in vitro Nhõn ging lan Mokara t chi bt nh ó c Lim... Paphiopedilum, Phalaenopsis Thỏi Lan xut khu phong lan dng cõy sang Nht ln nht vi mc 2,4 triu USD, tip theo l H Lan, M, c, Triu Tiờn v Vit Nam vi giỏ tr tng ng l 1,6 1,4, 1, 0,9, triu USD Trong nm 2009, Thỏi Lan xut khu 211 ging cõy phong lan Trong ú hn 75% l xut khu lan lai cũn li khong 24% l lan thun chng Dendrobium v H ip cõy l ging quan trng nht cho xut khu chim 51,4 v 25,5% th trng Nhng ging lan xut... 22.917.059 cnh, lan Mokara l 153.288 cnh Ngoi ra cũn cú 33.160 cnh Oncidium Ngoi mt hng lan ct cnh, Thỏi Lan cũn xut sang Vit Nam 3.121.344 cõy lan cỏc loi C th: Dendrobium 2.502.178 cõy; Mokara 444.910 cõy; Van da 51.548 cõy; Cattleya 49.078 cõy; Phalaenopsis 42.000 cõy; Oncidium 31.630 cõy T kt qu ny cho thy nhu cu ging v hoa lan nc ta rt ln Do vy vic nhõn ging v cung cp cỏc ging lan l rt cn thit . hoàn thiện quy trình nhân giống lan Renanthera trên hệ thống ngập chìm tạm thời 26 iv 2.2 Nội dung 2. Triển khai nhân giống trên hệ thống TIS các giống lan Mokara, Renanthera và Phalaenopsis. TÓM TẮT Dự án sản xuất thử nghiệm Triển khai quy trình nhân nhanh các giống lan Mokara, Renanthera và Phalaenopsis bằng phương pháp ngập chìm tạm thời được tiến hành tại Trung tâm Công. 1 BÁO CÁO NGHIỆM THU Tên dự án: Triển khai quy trình nhân nhanh các giống lan Mokara, Renanthera, Phalaenopsis bằng phương pháp ngập chìm tạm thời Chủ nhiệm dự án: ThS. Hà Thị Loan