ỦY BAN NHÂN DÂN TP.HCM SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ BÁO CÁO NGHIỆM THU (Đã chỉnh sửa theo góp ý Hội đồng nghiệm thu) NGHIÊN CỨU TẠO DẪN XUẤT CỦA CHITOOLIGOSACCHARIDES, KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG OXI HĨA VÀ ỨC CHẾ MATRIX METALLOPROTEINASE CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI (Ký tên) PGS.TS NGÔ ĐẠI NGHIỆP CƠ QUAN QUẢN LÝ (Ký tên/đóng dấu xác nhận) CƠ QUAN CHỦ TRÌ (Ký tên/đóng dấu xác nhận) THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 12/ 2013 PHẦN MỞ ĐẦU Tên đề tài: Nghiên cứu tạo dẫn xuất chitooligosaccharide, khảo sát hoạt tính kháng oxi hóa ức chế matrix metalloproteinase Chủ nhiệm đề tài: PGS.TS Ngơ Đại Nghiệp Cơ quan chủ trì: Trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Tp Hồ Chí Minh Thời gian thực hiện: 24 tháng từ 09/2010 đến 09/2012 Kinh phí đƣợc duyệt: 460.000.000 đồng Kinh phí đƣợc cấp: Đợt 1: 300.000.000 đồng theo TB số 157/TBKHCN ngày 17/09/2010 Đợt 2: 114.000.000 đồng theo TB số 27/TBKHCN ngày 13/04/2012 Mục tiêu Cải biến chitooligosaccharide (COS) cách ghép phân nhánh chức nhằm nâng cao hoạt tính sinh học vốn có COS kháng oxi hóa ức chế matrix metalloproteinase (MMP-2 9), enzyme đóng vai trị q trình gây di ung thư Tạo sản phẩm sinh học dẫn xuất COS độc khơng độc, an tồn Nội dung nghiên cứu tiến độ theo hợp đồng TT Nội dung, công việc Sản phẩm cần đạt Mức độ chủ yếu 1 Nghiên cứu thu nhận Các thông số để thu nhận Đạt kết chitooligosaccharide COS: ảnh hưởng nồng độ (COS) với trọng lượng enzyme, thời gian thủy phân, phân tử khác (1-3 ảnh hưởng nhiệt độ pH lên kDa 3-5 kDa) từ trình thủy phân chitosan enzyme để thu nhận phân đoạn COS có trọng lượng phân tử 1-3kDa 3- 5kDa màng siêu lọc UF Nghiên cứu cải biến Phương pháp tạo số dẫn Đạt kết chitooligosaccharide xuất COS (COS) tạo dẫn xuất Tối thiểu dẫn xuất COS Điều kiện thích hợp để gắn tạo dẫn xuất COS đánh giá trình gắn Đạt kết Thử nghiệm hoạt tính kháng oxi hóa COS dẫn xuất COS Kết lực khử, kháng thơng qua lực khử oxi hóa khả bắt gốc DPPH Báo cáo sơ kết giai Báo cáo kết theo quy định Đạt, thông qua đoạn Đạt kết Thử nghiệm hoạ củ dẫn xuất ức chế collaganase collaganase ức chế MMP metalloproteinase (MMP-2,-9, collagenase) ệm Đạt thu sở thu sở ệm Chỉnh sửa theo góp ý hội đồng Đạt hồn chỉnh thu m thu Các sản phẩm khác đạt - Đã tham dự hội nghị quốc tế Chitin, Chitosan Châu Á, Thái Bình Dương 8/2011: - Đã tham dự hội nghị CNSH tồn quốc khu vực phía nam 11/2011: - Bài báo: (2 tạp chí Khoa học Cơng nghệ, tạp chí Hóa học) - Đào tạo: thạc sỹ cử nhân CHƢƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan chitin, chitosan, chitooligosaccharides dẫn xuất Chitin polymer sinh học có trữ lượng nhiều thứ hai tự nhiên, sau cellulose Cấu trúc hóa học chitin gần tương tự cấu trúc hóa học cellulose Chitin polymer sinh học có đơn phân 2-acetamido-2-deoxy-β-Dglucose hay N-acetyl glucosamine Chitin thành phần cấu trúc tạo nên lớp vỏ ngồi lồi động vật khơng xương sống tơm, cua, mực, côn trùng vách tế bào nấm Chitin khơng hồ tan nước dung mơi hữu phổ biến hồ tan dung môi N, N–dimethylacetamide, hexaflouroacetone hexanfluoro–2–propanol [6] Mức độ deacetyl chitin thông thường nhỏ 10% trọng lượng phân tử chitin khoảng 1,0 - 2,5 x 106 Da tương ứng với mức độ polymer khoảng 5000 – 10.000 Chitin cịn có cấu trúc đa hình, tức tự nhiên chitin tồn nhiều dạng khác nhau, chitin có dạng chính: α-chitin, β-chitin γ-chitin; α-chitin dạng phổ biến [6][15] Chitosan, polyglucosamine, tạo phản ứng deacetyl hố nhóm N– acetyl chitin Khi gốc acetyl (-COCH3) tách khỏi gốc amino (-NH2) nhóm acetamide (-NHCOCH3), hay chúng có số nhóm amin tự tăng lên nhiều so với chitin Chúng sản phẩm tự nhiên, khơng độc, an tồn với mơi trường sử dụng rộng rãi y học nông lâm ngư nghiệp Chitin, chitosan với dẫn xuất chúng có hoạt tính sinh học kháng khuẩn, kháng nấm, kháng oxi hóa [16], kích thích tăng cường hoạt động hệ thống miễn dịch, ức chế khối u, ung thư, ức chế enzyme angiotensin I converting enzyme đóng vai trị việc điều hòa huyết áp gây bệnh cao huyết áp hay myeloperoxidase tạo chất oxi hóa gây hư hại tế bào… Ngoài ra, chúng làm giảm cholesterol lipid máu cholesterol có hại [17][30] Mặt dù chitin chitosan biết có tính chất chức quan trọng nhiều lĩnh vực Tuy nhiên, độ hoà tan điều kiện sinh lý làm cho biến đổi hố học khó khăn hạn chế ứng dụng Chitooligosaccharide (COS) hay chitosan oligomer polymer mạch thẳng 2–amino–2–deoxy–D–glucose (GlcN) 2–acetamido–2–deoxy–D– glucose (GlcNAc) liên kết β-(14) với mức độ trùng hợp (DP, degrees of polymerization) từ – 20 [16] Các COS có DP từ – hoà tan hoàn toàn methanol oligomer với DP lớn hồ tan Trong trường hợp với chitosan trọng lượng phân tử thấp (Lower Molecular Weight Chitosan, LMWC, Mw < 1,5 x 103 Da) độ hồ tan nước cao thể phạm vi pH rộng [15][16][17] Chitooligosaccharide (COS) biết đến với nhiều hoạt tính sinh học kháng nấm, kháng khuẩn, kháng ung thư, tác động tăng cường miễn dịch, tác dụng chống lại nhiễm trùng [16][17] Mặt dù COS có hoạt tính sinh học mạnh nghiên cứu in vitro, lại có thơng tin khả gây độc hoạt tính sinh học COS thể người Tuy nhiên, thí nghiệm độc tính COS chuột cho thấy COS không gây tỷ lệ tử vong, thay đổi thành phần hoá học máu, phân tích nước tiểu trọng lượng chuột Do đó, coi COS khơng có độc tính tác dụng phụ cấp tính người Hơn nữa, kết mô học cho thấy COS không gây tổn thương mô chuột phạm vi liều thử nghiệm COS Ngoài ra, Rajapakse cộng báo cáo trường hợp khơng có tác dụng độc hại COS 0,050 mg/ml – mg/ml người dòng tế bào bạch cầu chuột Những phát tiếp tục khẳng định liều lượng COS không gây tác dụng phụ khơng mong muốn, động vật [29] 1.2 Các nghiên cứu nƣớc Từ trước tới nay, có nghiên cứu cho thấy chitosan có hiệu việc ngăn chặn phát triển vi khuẩn, khả kháng khuẩn chitosan phụ thuộc vào khối lượng phân tử, nồng độ, độ nhớt, loại vi khuẩn Tsai cộng (2002) công bố chitosan ức chế hoàn toàn vi khuẩn E.coli nồng độ 100 ppm, Bacillus cereus CCRC10250 nồng độ 200 ppm [30] Carolyn (1979) cơng bố hoạt tính kháng nấm chitosan chitin [7] COS cịn có khả bắt gốc tự kháng oxy hóa, hoạt tính phụ thuộc trọng lượng phân tử Năm 2004, Je, Park Kim báo cáo COS với độ deacetyl hóa cao (90%) thích hợp việc bắt DPPH, hydroxyl, superoxide gốc tự có carbon trung tâm Các nghiên cứu Huang, Mendis Kim (2005) cho thấy khả thu hút ion kim loại COS có ảnh hưởng lớn đến bắt gốc hydroxyl COS [20] Các nghiên cứu Kim Thomas (2007) [13], Chen cộng (2003) [8], Ngo, Kim Kim (2008) [22] cho thấy khả chống oxi hóa COS Nghiên cứu Je Kim (2006) [21], Ngo đồng (2012) [23][18] tổng hợp dẫn xuất chitosan, COS cho thấy hoạt tính chống oxy hóa, bảo vệ tế bào nâng cao Chitosan dẫn xuất chúng cịn có hoạt tính ức chế ung thư di căn, vài cơng trình nghiênc cứu như: Qin đồng nghiệp (2004) [27][28], Hongbin cộng (2004) [12], Rajapakse Mendis (2007) [29], Kim Kim (2006) [14], Ngo, Kim Kim (2006) [24] Chitin, chitosan dẫn xuất chúng cịn có khả kích thích tăng trưởng động vật như: Vitastim hỗn hợp gồm 10 loại oligosaccharide khác nhà khoa học Nhật Bản nghiên cứu kích thích khả kháng bệnh, ngăn ngừa bệnh cho loại thủy sản: tơm, cua, sị, cá…Nhiều nghiên cứu cho thấy chitooligosaccharide có khả kích hoạt tính lysozyme ngoại bào kích thích phát triển tế bào trơn giúp cho mạch máu lưu thông dễ dàng [9] Hơn oligoglucosamine cịn kích thích hoạt tính chitosanase thực vật Hiroshi Inui cộng (2008) dùng mơi trường có chứa oligoglucosamine ni mơ sẹo lúa nhận thấy hoạt tính chitosanase tăng nhanh đạt đỉnh sau ngày Mặc khác, xử lí mơ sẹo lúa với oligosaccharide Shinyu cộng (2002) cho kết tương tự Ngồi ra, chitooligosaccharide cịn ứng dụng thực phẩm chức Thực phẩm chức chia làm nhóm lớn probiotics, prebiotics biogenics Thông thường probiotics oligosaccharides Những nghiên cứu gần cho thấy COS có ảnh hưởng tích cực lên phát triển vi khuẩn bifido vi khuẩn lactic [15] 1.3 Các nghiên cứu nƣớc Hiện nay, nghiên cứu COS cách tạo dẫn xuất chúng để nâng cao hoạt tính sinh học, đặc biệt hoạt tính kháng oxi hóa ức chế matrix metalloproteinase (MMP) hạn chế chưa cơng bố Điều cịn rõ Việt Nam nay, chưa có cơng bố Việt Nam cho thấy COS dẫn xuất chúng có hoạt tính chống oxi hóa ức chế MMP-2, MMP-9 mà hầu hết nghiên cứu chủ yếu thu nhận oligoglucosamine, nghiên cứu ứng dụng COS đối tượng thực vật kháng vi sinh vật Từ năm 1999, tác giả Nguyễn Anh Dũng Nguyễn Tiến Thắng thu nhận oligoglucosamine có DP từ 8-16 phương pháp thủy phân enzyme hóa học [2] Nguyễn Quốc Hiến cộng (2000) nghiên cứu chế tạo oligochitosan phương pháp chiếu tia lên chitosan [4] Nguyễn Anh Dũng (2003, 2004) nghiên cứu ảnh hưởng oligoglucosamine đến kích thích sinh trưởng, tăng suất tăng cường khả kháng bệnh thực vật [1][25] Phạm Thị Lệ Hà, Nguyễn Quốc Hiến (2002) nghiên cứu khả kháng nấm gây bệnh phồng chè chitosan chiếu xạ [3] 3.5.3.3 Kh c ch MMP-2 MMP-9 c a AECOS 3000 – 5000 Da xác ñ nh b ng phương pháp Zymography Hình 3.89: nh hư ng c a AECOS 3000 – 5000 Da COS 3000 – 5000 Da lên MMP-2 MMP-9 t bào HT1080 th hi n k t qu zymography bi u ñ T bào HT1080 ñư c x lý v i COS ho c AECOS ppm PMA n ng đ 1ng/ml u ki n khơng có huy t AE-COS bi u hi n s qu nh ng n ng ñ 5, 10, 50, 100 c ch MMP-9 cao COS c ch 67.59% 47.21% n ng ñ v i hi u 100 µg/mL hình 3.89 Chúng cho th y c ch s bi u hi n MMP-9 ph thu c n ng ñ 148 CHƯƠNG IV: K T LU N VÀ ð NGH 3.6 K t lu n 3.6.1 ði u ki n thích h p cho ph n ng th y phân chitosan b ng emzym cellulase ñ thu nh n chitooligosaccharide - T l pha loãng enzyme cellulase: 100 l n - ði u ki n pH: - ði u ki n nhi t ñ : 550C - Th i gian th y phân hoàn toàn chitosan thành glucosamine: 5h30 3.6.2 Kh i lư ng phân t trung bình c a COS thu nh n ñư c th y phân b ng cellulase - COS phân ño n 1-3 kDa: hi u su t thu nh n 21,94 % sau gi - COS phân ño n 3-5 kDa: hi u su t thu nh n 22,37 % sau gi 3.6.3 Xây d ng đư c quy trình t o d n xu t c a COS v i u ki n thích h p đ cho ñ thay th cao: Quy trình t o Aryl-COS: Dung d ch COS 1% có pH đư c cho thêm dung d ch aldehyde theo t l t 1- 2,5% tùy t ng h p ch t, khu y nhi t đ 32oC đ ph n ng hình thành t i đa d ng base Schiff Sau thêm 0.1g NaBH4 làm tác nhân kh khu y thêm cho đ 24 gi Sau pH c a dung d ch ph n ng ñư c ñi u ch nh lên pH b ng dung d ch NaOH 15% Ly tâm thu l y d n xu t r a s ch nhi u l n b ng nư c c t r i r a 149 d n xu t nhi u l n v i ether đ lo i b aldehyde khơng ph n ng Sau d n xu t COS ñư c ñem s y 40oC thu ñư c d ng b t - BCOS: pH5, nhi t ñ 320C, t l 1:2 - MBCOS: pH5, nhi t ñ 320C, t l 1:2 - DMABCOS: pH5, nhi t ñ 320C, t l 1:2 - HBCOS: pH5, nhi t ñ 320C, t l 1:2,5 - CCOS: pH4,5, nhi t ñ 320C, t l 1:1 Quy trình t o d n xu t AECOS: Hút 10 ml aminoethyl hydrochloride (3M) ñưa vào 0,2g chitooligosaccharide khu y tr n ñi u ki n nhi t đ thích h p 50oC Sau thêm vào 10 ml dung d ch NaOH 3M, ti p t c khu y tr n 48 gi Sau h n h p đư c acid hóa b ng HCl 0,1M ñư c th m tách ngày 3.6.4 Ho t tính kháng oxi hóa c a chitooligosaccharides d n xu t - Các d n xu t AECOS, DMABCOS, HBCOS MBCOS ñ u có ho t tính kháng oxi hóa cao so v i COS ban ñ u, riêng AECOS HBCOS cao d n xu t khác - Các d n xu t th nghi m ñ u đ c ho c khơng đ c v i t bào HT 1080, riêng AECOS gây ñ c ñ i v i t bào HT1080 v i li u 250ppm - Các d n xu t AECOS, DMABCOS, HBCOS MBCOS đ u có ho t tính b o v protein, lipid DNA cao COS 150 - Các d n xu t CCOS, DMABCOS HBCOS có kh c ch collagenase CCOS, AECOS có kh c ch MMP-9 3.7 ð ngh C n kh o sát thêm ñi u ki n v nhi t đ đ có th nâng cao bi u su t Kh o sát kh ng d ng COS b o qu n th c ph m ho c làm ch t b sung cho th c ph m, th c u ng COS có th b sung vào nư c gi i khát Kh o sát kh ng d ng c a COS d n xu t phân bón cho m t s rau tr ng đ kích thích s phát tri n c a Nghiên c u sâu v ch tín hi u t bào kh c ch MMP c a d n xu t CCOS AECOS ð tài hi n hồn thành nh ng s n ph m ñ tài, m c dù ñã tr h n y u t khách quan ti n hành thí nghi m t bào thi t b làm thí nghi m zymography 151 TÀI LI U THAM KH O TÀI LI U TI NG VI T [1] Nguy n Anh Dũng (2003), nh hư ng c a oligoglucosamine d n su t Slicyden- oligoglucosamine ñ n sinh trư ng phát tri n c a m t s lo i rau Daklak, K y u H i ngh Khoa h c Công ngh tu i tr trư ng Nơng lâm ngư tồn qu c l n th I, Hà N i, tr 12-15 [2] Nguy n Anh Dũng, Nguy n Ti n Th ng (2001), Xây d ng quy trình cơng ngh thu nh n oligoglucosamine t chitosan ng d ng c a chúng nơng nghi p, Tuy n t p cơng trình nghiên c u Khoa h c Công ngh , tr 162-169 [3] Ph m Th L Hà, Tr n Th Thu , Nguy n Qu c Hi n (2002), Kh di t n m ph ng chè (Exobasidium vexans massee) c a chitosan chi u x , T p chí Sinh h c, tr 47-50 [4] Nguy n Qu c Hi n, Lê Quang Luân, Lê H i (2000), Nghiên c u ch t o oligochitosan b ng k thu t b c x , T p chí Hóa h c, S 38, tr 22-24 [5] Ph m Th Ánh H ng, Nguy n Anh Dũng, Ngô ð i Nghi p, Vịng Bính Long c ng s (2008), Nghiên c u thu nh n c i bi n nh m nâng cao ho t tính c a oligosaccharide ng d ng chăn nuôi, ð tài tr ng m ðHQG [6] Vịng Bính Long (2010), T ng h p d n xu t chitosan v i aldehyde thơm, amonium b c b n kh o sát m t s ho t tính sinh h c, Lu n văn th c sĩ hóa sinh, Trư ng ð i h c Khoa h c T nhiên, ðHQG Tp H Chí Minh 152 [7] Phan Kim Ng c, Ph m Văn Phúc (2007), Công ngh sinh h c ngư i ñ ng v t, NXB Giáo d c TÀI LI U TI NG ANH [8] Calabrese V., Lodi R., Tonon C., D’Agata V., Sapienza M., Scapagnini G., Mangiameli A., Pennisi G., Giuffrida Stella A.M., Butterfield D.A (2005), Oxidative stress, mitochondrial dysfunction and cellular stress response in Friedreich’s ataxia, Journal of the Neurological Sciences, 233, 145-162 [9] Carolyn R., Hadwiger L.A (1979), The Fungicidal effect of chitosan on fungi varying cell wall composition, Experimental mycology, 3, 285-287 [10] Chen A.S., Taguchi T., Sakai K., Kikuchi K., Wang M.W., Miwa I (2003), Antioxidant activities of chitobiose and chitotriose, Biological & Pharmaceutical Bulletin, 26, 1326-1330 [11] Cho Y.S., Kim S.K., Ahn C.B., Je J.Y (2011), Preparation, characterization, and antioxidant properties of gallic acid-grafted-chitosans, Carbohydrate Polymers, 83, 1617-1622 [12] Curotto E., F Aros (1993), Quantitative determination of chitosan and the percentage of free amino groups, Analytical Biochemistry, 211, 2240–2241 [13] Fanli K., Mingwei Z., Sentai L., Shujuan Y., Jianwei C., Zhencheng W (2010), Antioxidant activity of polysaccharide-enriched fractions extracted from Pulp Tissue of Litchi chinensis Sonn, Molecules, 15, 2152-2165 [14] Greg T H (2008), Bioconjugate Techniques, Published by AP 153 [15] Guillén-Sans R., Guzmán-Chozas M (1998), The thiobarbituric Acid (TBA) reaction in foods: a review, Critical Reviews in Food Science and Nutrition, 38(4), 315-330 [16] Han, Y.; Yu, Q (2005), Role of mannose receptor in oligochitosan- mediated stimulation of macrophage function, International Immunopharmacology, 5, 1533 – 1542 [17] Hansen M B., Nielsen S E., Berg K (1989), Re-examination and further development of a precise and rapid dye method for measuring cell growth/cell hill, Journal of Immunological Methods, 119(2), 203-210 [18] Hongbin W., Jingyuan D., Linyun C., Yuming D (2004), Carboxymethylated chitin reduces MMP-1 expression in rabbit ACLT osteoarthritic cartilage, Annals of the Rheumatic Diseases, 63, 369–372 [19] Hu F.Q., X Wu, Y.Z Du, J You, H Yuan (2008), Cellular uptake and cytotoxicity of shell crosslinked stearic acid-grafted chitosan oligosaccharide micells encapsulating doxorubicin, European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics, 117-119 [20] Isabella D.D., Ranieri R., Daniela G., Aldo M., Roberto C (2003), Protein carbonyl groups as biomarkers of oxidative stress, Clinica Chimica Acta, 329, 23-38 [21] Je J.Y., Kim S.K (2006), Antimicrobial action of novel chitin derivative, Biochimica et Biophysica Acta, 1760, 104-109 154 [22] Je J.Y., Kim S.K (2006), Reactive oxygen species scavenging activity of aminoderivatized chitosan with different degree of deacetylation, Bioorganic & Medicinal Chemistry, 14, 5989–5994 [23] Jeon Y.J., Kim S.K (2002), Antitumor activity of chitosan oligosaccharides produced in ultrafiltration membrane reactor system, Journal of Microbiology and Biotechnology, 12, 503- 507 [24] Kang K.B., Lee K.H., Chae S.W., Zhang R., Jung M.S., Lee Y.K., Kim S.Y., Kim H.S., Joo H.G., Park J.W., Ham Y.M., Lee N.H., Hyun J.W (2005), Eckol isolated from Ecklonia cava attenuates oxidative stress induced cell damage in lung fibroblast cells, FEBS letters, 579(6), 295-304 [25] Keelara V.H.P., Shylaja M.D., Kosagi S.J.R., Rudrapatnam N.T (2007), Free radical-induced chitosan depolymerized products protect calf thymus DNA from oxidative damage, Carbohydrate Research, 342, 190-195 [26] Keon W.K., Soo J.O., Shi Y.R., Gyu Y.S., Bong-Hee K., Jong S.K., Sang K K (2010), Evaluation of the total oxy radical scavenging capacity of catechins isolated from green tea, Food Chemistry, 121, 1089-1094 [27] Kim K.W., Thomas R.L (2007), Antioxidative activity of chitosans with varying molecular weights, Food Chemistry, 101, 308-313 [28] Kim M.M, Kim S.K., (2006), Chitooligosaccharides inhibit activation and expression of matrix metalloproteinase-2 in human dermal fibroblast, Federation of European Biochemical Society, 580, 2661–2666 155 [29] Kim M.M., Ta V.Q., Mendis E., Rajapakse N., Jung W.K., Byun H.G., Jeon Y.J., Kim S.K (2006), Phlorotannins in Ecklonia cava extract inhibit matrix metalloproteinase activity, Life Sciences, 79, 1436 – 1443 [30] Kim S.K (2010), Chitin, chitosan, oligosaccharides and their derivative: Biological activities and application, CRC Press [31] Kim S.K., Ngo D.N., Rajapekse N (2006), Therapeutic Prospectives of Chitin, Chitosan and their Derivatives, Journal of Chitin chitosan, 11, 1-10 [32] Kim S.K., Rajapakse N (2005), Enzymatic production and biological activities of chitosan oligosaccharides (COS): A review, Carbohydrate Polymers, 62, 375-368 [33] Kyung W K., R.L Thomas (2007), Antioxidative activity of chitosans with varying molecular weigh, Food Chemistry, 101, 308-313 [34] Lavertu M., Z Xia, A N Serreqi, M Berrada, A Rodrigues, D Wang, M.D Buschmann, Ajay G (2003), A validated 1H NMR method for determination of the degree of deacetylation of chitosan, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 32, 1149-1158 [35] Kim M.M., Ta Q.V., Mendis E., Rajapake N., Jung W.K., Byun H.G., Jeon Y.J., Kim S.K (2006), Phlorotannins in Ecklonia cava extract inhibit matrix metalloproteinase activity, Life Sciences, 79, 1436-1443 [36] Milne L., Nicotera P., Orrenius S., Burkitt M.J (1993), Effect of glutathione and chelating agents cooper-mediated DNA oxidation: pro-oxidant and 156 antioxidant properties of glutathione, Archives of Biochemistry and Biophysics, 304(1), 102-109 [37] Ngo D.H., Quian Z.J , Ngo D.N Vo T.S , Wijiesekara I., Kim S.K (2011), Gallyl chitooligosaccharides inhibit intracellular freeradical-mediated oxidation, Food Chemistry, 128, 974-981 [38] Ngo D.N (2008), Biological activities of chitin oligosaccharides and their derivatives, a thesis for degree of Doctor of Philosophy, Pukyong National University [39] Ngo D.N., Kim M.M., Kim S.K (2007), Effects of chitin oligosaccharides on production of reactive oxygen species and matrix metalloproteinases in live cells, Advances in chitin science Ankara, 355-359 [40] Ngo D.N., Kim M.M., Kim S.K (2008), Chitin oligosaccharides inhibit oxidative stress in live cells, Carbohydrate Polymers, 74, 228-234 [41] Ngo D.N., Kim M.M., Qian Z.J., Jung W.K., Lee S.H., Kim S.K (2010), Free radical scavenging activities of low molecular weight chitin oligosaccharides lead to antioxidant effect in live cells, Journal of Food Biochemistry, 34, SI, 161-177 [42] Ngo D.N., Qian Z.J., Je J.Y., Kim M.M., Kim S.K (2008), Aminoethyl chitooligosaccharides inhibit the activity of angiotensin converting enzyme, Process Biochemistry, 43, 119-123 157 [43] Nguy n A.D., Nguy n T.T (2004), Effects of oligoglucosamine on the frowth and development of Peanut (Arachis hypogea), Proceedings of th Asia- Pacific chitin and chitosan Symposium, Singapore [44] Park P.J., Je J.Y., Kim S.K (2003), Free radical scavenging activity of chitooligosaccharides by electron spin resonance spectrometry, Journal of Agricultural and Food Chemistry, 51, 4624-4627 [45] Park P.J., Je J.Y., Kim S.K (2004), Free radical scavenging activities of differently deacetylated chitosans using an ESR spectrometer, Carbohydrate Polymers, 55, 17-22 [46] Patricia A.M., Beurden S., Johannes W Von den Hoff (2005), Zymographic techniques for the analysis of matrix metalloproteinases and their inhibitors, BioTechniques, 38(1), 73–83 [47] Qin C., Du Y., Xiao L., Li Z., Gao X (2002), Enzymic preparation of watersoluble chitosan and their antitumor activity, International Journal of Biological Macromolecules, 31, 111-117 [48] Qin C., Zhou B., Zeng L., Zhang Z., Liu Y., Du Y., Xiao L (2004), The physicochemical properties and antitumor activity of cellulase-treated chitosan, Food Chemistry, 84, 107-115 [49] Rajapakse N., Kim M.M., Mendis E., Kim S.K (2007), Inhibition of free radical-mediated oxidation of cellular biomolecules by carboxylated chitooligosaccharides, Bioorganic & Medicinal chemistry, 15, 997-1003 158 [50] Stephen T., Sinatra M.D., Jan Demarco R.N (1995), Free radicals, oxidative stress, oxidized low density lipoprotein (LDL), and the heart: Antioxidants and other strategies to limit cardiovascular damage, Connecticut Medicine, 59(10), 579-588 [51] Tao S., Quian Y., Dongxiang Z., Fang M (2008), Antioxidant activity of Ncarboxymethyl chitosan oligosaccharides, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 18, 5774-5776 [52] Tsai G.J., Su W.H., Chen H.C., Pan C.L (2002), Antimicrobial activity of shrimp chitin and chitosan from different treatments and applications of fish preservation, Fisheries Science, 68, 170-177 [53] Verma R.P., Hansch C (2007), Matrix metalloproteinases (MMPs): Chemical–biological functions and (Q)SARs, Bioorganic & Medicinal Chemistry, 15, 2223-2268 [54] Võ T.P.K., Nguyen A.D (2004), Effects of chitosan oligoglucosamine and modified oligoglucosamine the growth inhibition of Fusarium sp Fungi, Proceeding of 6th Asia-Pacific chitosan and chitosan Symposium, Singapore [55] Vong B.L., Ngo D.N (2010), Synthesis and antifulgal activity of N-aryl chitosan derivaties, T p chí Khoa h c công ngh , 48(2A), 108-113 [56] Wanvimol P., Garry R.B., Suwabun C (2010), Chitosan gallate as a novel potential polysaccharide antioxidant: an EPR study, Carbohydrate Research, 345, 132–140 159 [57] Wenming X., Peixin X., Qing L (2001), Antioxidant activity of watersoluble chitosan derivatives, Bioorganic Medicinal Chemistry Letters, 13, 1699-1701 [58] Xing L., Guo Y., Wang L (2005), Relevance of molecular weight of chitosan and its derivatives and their antioxidant activities in vitro, Bioorganic & Medicinal Chemistry, 13, 1573-1577 [59] Xing R., Liu S., Guo Z., Yu H., Wang P., Li C., Li Z., Li P (2005), Relevance of molecular weight of chitosan and its derivatives and their antioxidant activities in vitro, Bioorganic & Medicinal Chemistry, 13, 15731577 [60] Xing R., Luu S., Li P (2006), Preparation of different molecular weight chitosan sulfates and comparision of their potential antioxidant activity, Advances in chitin science and technology, Preoceeding of the 7th AsiaPacific Chitin and Chitosan Symposium, 99-101 [61] Yen G.C., Chen H.Y (1995), Antioxidant activity of various teas extracts in relation to their antimutagenicity, Journal of Agricultural and Food Chemistry, 43, 27-32 [62] Choi C R., Kim E K., Kim Y S., Je J Y., An S H., Lee J D., Wang J H., Ki S.S., Jeon B T., Moon S H (2011), Chitooligosaccharides decreases plasma lipid levels in healthy men, International Journal of Food Sciences and Nutrition, 63, 103-106 160 [63] Igor A.K., Jerzy Z and Tacquiline K.B (2002), Phenylalamine ammonia lagase gene expression during abscission in citrus, Physiologia Plantarum, 116(1), 106-112 [64] Ngo D.N., Kim M.M., Kim S.K (2012) Protective effects of aminoethylchitooligosaccharides against oxidative stress in RAW 264.7 cells International Journal of Biological Macromolecules 50, 3, 624-631 [65] Ngo D.H., Ngo D.N Vo T.S., Ryu B.M., Ta Q.V., Kim S.K (2012) Protective effects of aminoethyl-chitooligosaccharides against oxidative stress and inflammation in murine microglial BV-2 cells Carbohydrate Polymers 88, 2, 743-747 [66] Valko M., Leibfritz D., Jan M., Mark T D C., Milan M., Joshua T (2007) Free radicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease, The International Journal of Biochemistry & Cell Biology, 39, 44 – 84 [67] Rajeshwar P V and Corwin H (2007), Matrix metalloproteinases (MMPs): Chemical-biological functions and (Q) SARs, Bioorganic & Medicinal Chemistry, 15, 2223 – 2268 [68] Hideaki N., Robert V., Murphy G (2006), Structure and function of matrix metalloproteinases and TIMPs, Cardiovascular Research, 69, 562 – 573 [69] 161 162 ... [15] 1.3 Các nghiên cứu nƣớc Hiện nay, nghiên cứu COS cách tạo dẫn xuất chúng để nâng cao hoạt tính sinh học, đặc biệt hoạt tính kháng oxi hóa ức chế matrix metalloproteinase (MMP) hạn chế chưa cơng... ban đầu Trong đó, CCOS dẫn xuất có hoạt tính mạnh ức chế 30,39% hoạt tính collagenase nồng độ 1000 g/ml Hai dẫn xuất cịn lại có hoạt tính thấp hơn, 23 với hoạt tính ức chế cao đạt 13,60% xử lý... tính kháng oxi hóa COS dẫn xuất 13 2.4 Nội dung 4: Thử nghiệm hoạt tính kháng oxi hóa lipid, protein màng, bảo vệ DNA COS dẫn xuất 13 2.5 Nội dung 5: Thử nghiệm hoạt tính ức chế matrix