1 ỦY BAN NHÂN DÂN TP.HCM THÀNH ĐOÀN SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ TP. HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO NGHIỆM THU NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG AN THẦN VÀ ĐỘC TÍNH CAO CHIẾT LẠC TIÊN TÂY (Passiflora incarnata L.) TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI: DS. VŨ THỊ HIỆP THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 05 / 2013 2 BÁO CÁO NGHIỆM THU Tên đề tài: Nghiên cứu tác dụng an thần và độc tính của cao chiết Lạc tiên tây (Passiflora incarnata L.) trên chuột nhắt trắng. Chủ nhiệm đề tài: DS. Vũ Thị Hiệp Cơ quan chủ trì: Trung tâm Phát Triển khoa học và Công nghệ trẻ Thời gian thực hiện: Tháng 12 năm 2011 đến tháng 12 năm 2012 Kinh phí đƣợc duyệt: 80.000.000 đ Kinh phí đã cấp: 72.000.000 theo TB số: 207 TB-SKHCN ngày 20/12/2011 Mục tiêu nghiên cứu: - Xây dựng một số tiêu chuẩn hóa lý cao chiết Lạc tiên tây - Nghiên cứu tác dụng an thần của cao chiết Lạc tiên tây trên chuột nhắt trắng - Nghiên cứu độc tính cấp và độc tính bán trƣờng diễn của cao chiết Lạc tiên tây trên chuột nhắt trắng. Nội dung nghiên cứu: Công việc dự kiến Công việc đã thực hiện Tiêu chuẩn nguyên liệu Lạc tiên tây Xác định độ tro, độ ẩm, vi phẫu, định tính, định lƣợng flavonoid toàn phần và vitexin Chiết cao dƣợc liệu Cao đặc Lạc tiên tây Xây dựng một số tiêu chuẩn lý hóa cao đặc Lạc tiên tây Xác định độ tro, độ ẩm, định tính, định lƣợng flavonoid toàn phần, vitexin Thử độc tính cấp và độc tính bán trƣờng Xác định đƣợc D max , bảng kết quả huyết 3 diễn của cao chiết Lạc tiên tây trên chuột nhắt trắng học, sinh hóa, mô học sau thử nghiệm 60 ngày Thử tác dụng an thần trên mô hình chữ thập nâng cao Bảng kết quả thực nghiệm an thần ở liều 1/5 D max và liều 1/10 D max trên mô hình chữ thập nâng cao Nghiên cứu tác dụng hiệp đồng với thiopental Đánh giá tác dụng an thần và giải lo âu của cao chiết Lạc tiên tây trên chuột nhắt trắng với mô hình hiệp đồng với barbituric ở liều 1/10 Dmax và 1/5 Dmax Nghiên cứu tác dụng an thần với mô hình đen trắng. Nghiên cứu tác dụng an thần trên mô hình đen trắng: Bảng kết quả thực nghiệm an thần ở liều 1/5 D max và liều 1/10 D max Xử lý số liệu, báo cáo kết quả Số liệu đƣợc xử lý thống kê, báo cáo toàn văn. 4 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Trung tâm Phát Triển Khoa Học và Công Nghệ Trẻ đã tài trợ và giúp đỡ cho nghiên cứu thực hiện thành công. Xin gửi lời cảm ơn chân thành và sâu sắc đến thầy GS.TS Nguyễn Minh Đức và các thầy cô trong hội đồng xét duyệt đề cƣơng, nghiệm thu đề tài đã dành thời gian đóng góp ý kiến và giúp tôi hoàn thành tốt công trình nghiên cứu này. Xin cảm ơn Trung tâm Nghiên Cứu và Sản Xuất Dƣợc liệu Miền Trung đã cung cấp nguyên liệu cho tôi hoàn thành nghiên cứu. Xin chân thành cảm ơn cô PGS.TS Nguyễn Phƣơng Dung và các thầy cô, anh chị đồng nghiệp tại Khoa Y Học Cổ Truyền – Đại Học Y Dƣợc TPHCM đã luôn giúp đỡ và ủng hộ tôi trong suốt thời gian thực hiện nghiên cứu tại Khoa. Xin cám ơn các anh chị, cán bộ tại sở Khoa Học Công Nghệ và Thành Đoàn TPHCM đã nhiệt tình hƣớng dẫn, hỗ trợ tôi trong suốt thời gian vừa qua. Cuối cùng, tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành và sâu sắc tới gia đình, thầy cô đồng nghiệp và bạn bè đã giúp đỡ tôi trong quá trình thực hiện nghiên cứu này. 5 TÓM TẮT ĐỀ TÀI Mở đầu: Lạc tiên tây (Passiflora incarnata L.) là một dƣợc liệu an thần, giải lo âu có trong Dƣợc điển Châu Âu và hiện nay đã đƣợc trồng thành công ở Việt Nam theo tiêu chuẩn VietGap. Nhƣng cho đến nay chƣa có công trình nghiên cứu nào về tác dụng dƣợc lý và độc tính của Lạc tiên tây trồng tại Việt Nam. Mục tiêu: Đánh giá tác dụng an thần giải lo âu và độc tính của cao chiết Lạc tiên tây trên chuột nhắt trắng. Nội dung: Xác định một số tiêu chuẩn hóa lý của dƣợc liệu và cao chiết Lạc tiên tây (độ tro, độ ẩm,soi bột, định tính, định lƣợng flavonoid toàn phần và vitexin). Nghiên cứu độc tính cấp (xác định LD 50 , D max ) và độc tính bán trƣờng diễn của cao chiết Lạc tiên tây. Đánh giá tác dụng an thần, giải lo âu của chuột nhắt trắng bằng mô hình chữ thập nâng cao ,tác dụng hiệp đồng với thiopental và mô hình đen trắng. Kết quả: Lạc tiên tây không thể hiện độc tính ở liều 3,2g/kg . Ở liều 150mg /kg Lạc Tiên tây thời điểm sau 30 phút tác dụng an thần giải lo âu trên thử nghiệm mô hình chữ thập nâng cao.Thử trên mô hình kéo dài thời gian ngủ của thiopental và chữ thập nâng cao, liều LTT300 thời điểm sau 60 phút cho chuột uống thuốc có tác dụng an thần giải lo âu. Thử nghiệm trên mô hình đen trắng, liều LTT150 thể hiện tác dụng giải lo âu. Nghiên cứu độc tính bán trƣờng diễn cho thấy không làm thay đổi số lƣợng hồng cầu, AST, ALT… nhƣng lại làm thay đổi chỉ số ure , creatinin và hình ảnh mô học gan thận. Kết Luận: Lạc tiên tây đã thể hiện tác dụng an thần giải lo âu trên chuột nhắt trắng ở liều 300mg/kg trên mô hình kéo dài thời gian ngủ của thiopental, cả hai liểu thử nghiệm đều thể hiện tác dụng giải lo âu trên mô hình chữ thập nâng cao ở liều 6 150mg/k.Thử nghiệm trên mô hình đen trắng, liều 150mg/kg thể hiện tác dụng an thần giải lo âu. Từ khóa: Passiflora Incarnata L. , an thần giải lo âu, mô hình chữ thập nâng cao,hiệp đồng với thiopental, mô hình đen trắng ,chuột nhắt trắng, LD 50 ABSTRACT Background: Passiflora incarnata L., which is a sedative and anxiolytic herb in the European Pharmacopoeia, has been grown successfully in Vietnam by VietGap standards. However, there has no research so far on the pharmacological and toxicological effects of this herb grown in Vietnam. Objective: Our research is aimed to evaluate the sedative and anxiolytic effects of Passiflora incarnata L. on mice. Method: In this research, some physicochemical standards of Passiflora incarnata L. and its extract (ash, moisture, identification, quantitative and total flavonoid vitexin) were determined. Acute toxicity (LD 50 , D max value) and sub acute toxicity of P. incarnata extract were also studied. In addition to, the sedative and anxiolytic effects of Passiflora incarnata L. on mice were examined by using three trials: synergistic effect with thiopental in increasing mice’s sleeping time, advanced cross and light- dark test box model. Result: P. incarnata did not expressed the toxicity at the dose 3.2 g / kg. In advanced cross model, after taking 30 minutes, P. incarnata had the effects of sedative and anxiolytic at the dose of 150 mg / kg. P. incarnata has also shown the sedative and anxiolytic effects at the dose of 300 mg/kg in two other models. Due to sub acute toxicity study, P. incarnate did not change the number of red blood cells, AST, ALT However, there were some changes in the urea, creatinine values and mice’s histology images of liver and kidney. 7 Conclusion: Passiflora incarnata L. exhibited the sedative and anxiolytic effects on mice at the doses of 150 mg / kg and 300 mg/kg in various trials. Key words: Passiflora incarnata L., sedative, anxiolytic, mice, light- dark test box. 8 MỤC LỤC MỞ ĐẦU 16 CHƢƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 18 1. MẤT NGỦ THEO Y HỌC HIỆN ĐẠI 18 1.1 Định nghĩa giấc ngủ 18 1.2 Phân loại mất ngủ 19 1.3 Điều trị mất ngủ 22 2. MẤT NGỦ THEO QUAN ĐIỂM YHCT 24 2.1 Nguyên nhân - Cơ chế bệnh sinh [] 25 2.2 Một số bệnh cảnh thƣờng gặp 25 3. GIỚI THIỆU LẠC TIÊN TÂY 27 3.1 Đặc điểm thực vật 27 3.2 Những nghiên cứu về Lạc tiên tây 28 4. MỘT SỐ MÔ HÌNH THỬ NGHIỆM TÁC DỤNG AN THẦN GIẢI LO ÂU VÀ GÂY NGỦ TRÊN THỰC NGHIỆM 34 4.1 Mô hình chữ thập nâng cao 34 4.2 Thử nghiệm tác dụng kéo dài thời gian ngủ của thiopental 35 4.3 Mô hình đen trắng (light – dark test) 35 4.4 Mô hình môi trƣờng mở 36 CHƢƠNG II: NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 37 2.1 Tiêu chuẩn dƣợc liệu và cao chiết 37 2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu 37 2.1.2 Hóa chất và thiết bị 37 2.1.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 37 2.2 Chiết xuất cao và khảo sát tiêu chuẩn cao Lạc tiên tây 43 2.2.1 Chiết xuất cao 43 9 2.2.2 Khảo sát một số tiêu chuẩn 43 2.3 Thử độc tính cấp 49 2.3.2 Súc vật thử nghiệm 49 2.3.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 49 2.4 Thử tác dụng hiệp đồng với thiopental 54 2.4.1 Súc vật thử nghiệm 54 2.4.2 Hóa chất 54 2.4.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 54 2.5 Thử tác dụng an thần giải lo âu với mô hình chữ thập nâng cao 55 2.5.1 Súc vật thử nghiệm 55 2.5.2 Hóa chất 55 2.5.3 Dụng cụ thí nghiệm 55 2.5.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 56 2.5.5 Điều kiện thí nghiệm 57 2.6 Thử tác dụng an thần giải lo âu với mô hình đen trắng 57 2.6.1. Súc vật thử nghiệm 57 2.6.2. Phƣơng pháp nghiên cứu 57 2.7. Thử độc tính bán trƣờng diễn 58 2.7.1 Súc vật thử nghiệm 58 2.7.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 58 2.8 Phƣơng pháp thống kê xử lý số liệu 59 CHƢƠNG III: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 60 3.1 Tiêu chuẩn dƣợc liệu 60 3.2. Chiết xuất và khảo sát tiêu chuẩn cao Lạc tiên tây 68 3.2.1 Chiết xuất cao Lạc tiên tây 68 3.2.2. Khảo sát chỉ tiêu chất lƣợng của cao Lạc tiên tây 69 3.3. Kết quả thử nghiệm độc tính và tác dụng an thần của cao Lạc tiên tây 75 10 3.3.1. Độc tính cấp 75 3.3.2. Kết quả thử nghiệm tác dụng hợp đồng của cao Lạc tiên tây với Thiopental 76 3.3.3. Kết quả thử nghiệm tác dụng an thần giải lo âu với mô hình chữ thập nâng cao 77 3.3.4 Kết quả thử nghiệm mô hình hai ngăn sáng tối 80 3.3.5 Kết quả thử nghiệm độc tính bán trƣờng diễn 81 Nhận xét chung 83 CHƢƠNG IV: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 87 4.1 Kết luận 87 4.2. Đề nghị 88 TÀI LIỆU THAM KHẢO 91 HÌNH ẢNH THỬ NGHIỆM 96 [...]... nên tác dụng an thần giải lo âu của Lạc tiên tây có nhiều ƣu điểm hơn so với một số dƣợc liệu khác Trong phạm vi nghiên cứu này, chúng tôi tiến hành nghiên cứu độc tính cấp và bán trƣờng diễn, tác dụng an thần giải lo âu của cao chiết cây Lạc tiên tây đƣợc trồng tại Tuy Hòa, Phú Yên, Việt Nam Gồm các mục tiêu cụ thể sau: - Xây dựng tiêu chuẩn nguyên liệu Lạc tiên tây - Chiết xuất cao đặc Lạc tiên tây. .. cao chiết Lạc tiên tây - Đánh giá tác dụng an thần giải lo âu bằng mô hình chữ thập nâng cao, mô hình đen trắng và mô hình hiệp đồng thiopental trên chuột nhắt trắng - Thử độc tính cấp và bán trƣờng diễn của cao chiết Lạc tiên tây trên chuột nhắt trắng 17 CHƢƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1 MẤT NGỦ THEO Y HỌC HIỆN ĐẠI 1.1 Định nghĩa giấc ngủ Đƣợc chẩn đoán mất ngủ khi thỏa cả 3 tiêu chuẩn sau đây: - Than... pentobarbital: Lạc tiên tây làm tăng tác dụng của pentobarbital - Với các benzodiazepin: Lạc tiên tây làm tăng tác dụng giảm đau của benzodiazepin bằng cách gia tăng gắn kết benzodiazepin với thụ thể GABA - Với thuốc chống đông: Lạc tiên tây có tác dụng cộng hợp với thuốc chống đông máu - Với rƣợu: Lạc tiên tây gia tăng tác dụng giảm đau của rƣợu Kết quả nghiên cứu độc tính thực nghiệm: Kết quả nghiên cứu độc. .. nghiên cứu về Lạc tiên tây Tại châu Âu, Lạc tiên tây đƣợc sử dụng để làm giảm nhẹ các triệu chứng căng thẳng thần kinh (stress) và hỗ trợ giấc ngủ Tác dụng điều trị của cây Lạc tiên tây đƣợc thừa nhận liên tục từ những năm 1938 tới nay và cây này cũng thƣờng đƣợc kết hợp với nhiều loại thảo dƣợc an thần khác Bên cạnh đó, đã có những nghiên cứu chứng minh Lạc tiên tây không có độc tính (Weniger và Anton,... nên tác dụng an thần, giảm lo âu của cây Lạc tiên tây có nhiều ƣu điểm so với các thuốc nguồn gốc hóa dƣợc Thế giới đã có một số nghiên cứu sơ bộ về tác dụng an thần giải lo âu trên động vật của Lạc tiên tây ở dạng bột, trà thuốc, cao chiết cồn (22) Liều dùng: 0,5 – 8 g bột/ngày; 1 – 8 g trà/ngày; 8 – 16 ml cao lỏng/ngày (1:8, chiết bằng ethanol 25%); 2 – 6 ml cao lỏng/ngày (1:8, chiết bằng ethanol... báo cáo mang tính hệ thống khác lại cho rằng cần phải kiểm chứng tác dụng này thông qua các nghiên cứu ngẫu nhiên có đối chiếu [18] Sử dụng Lạc tiên tây cho bệnh nhân trƣớc phẫu thuật có hiệu quả giảm nhẹ lo âu [19] Tuy nhiên, có một nghiên cứu lại nhận thấy 5 loại cao chiết khác nhau từ Lạc tiên tây thể hiện tác dụng giải lo âu trên chuột nhắt trắng 2 trong các loại cao này không thể hiện tác dụng chống... phần cao chiết Lạc tiên tây ……………….69 Bảng 3.9 Kết quả định lƣợng flavonoid toàn phần theo phƣơng pháp cân cao chiết Lạc tiên tây …………………………………………………………………….73 Bảng 3.10 Kết quả định lƣợng flavonoid toàn phẩn theo vitexin cao chiết Lạc tiên tây ………………………………………………………………………………74 Bảng 3.11 Kết quả thử nghiệm độc tính cấp của cao Lạc tiên tây …………….76 Bảng 3.12Kết quả thử nghiệm tác dụng kéo dài thời gian... trí 6, 7 của flavone đã đƣợc ly trích và đƣợc cho là hoạt chất chủ yếu của Lạc tiên tây thể hiện tác dụng giải lo âu ở liều uống 10 mg/kg trên chuột nhắt trắng Dẫn chất này cũng thể hiện tác dụng đảo chiều trên chuột nhắt nhiễm morphin (liều 10 – 100 mg/kg), ngăn ngừa lệ thuộc nicotine ở chuột nhắt (10 – 20 mg/kg), ngăn ngừa sự lệ thuộc và chịu đựng Δ9-THC trên chuột nhắt (10 – 20 mg/kg) và ngăn ngừa... bởi maltol và dẫn suất gamma-pyrone có thể là cơ chế giải lo âu và giảm đau của Lạc tiên tây [12] Harman alkaloid có tác dụng ức chế monoamine oxidase tiên tây thể hiện hoạt tính kháng viêm nhẹ [36] [7] Lạc Dịch chiết cồn Lạc tiên tây làm giảm phù viêm do carrageenan, ức chế di chuyển bạch cầu và tạo u hạt trên chuột nhắt, mặc dù tác dụng này kém hơn aspirin [4] Phản ứng quá mẫn: Rất hiếm gặp [ESCOP,... Chƣa có thông tin về tác dụng gây ƣng thƣ, độc tính trên sinh sản và phát triển Kết quả nghiên cứu tác dụng dược lý thực nghiệm Nhóm Hänsel đã bắt đầu những nghiên cứu một số tác dụng dƣợc lý của Lạc tiên tây từ 1994 Tác dụng giảm đau của cao chiết cồn – nƣớc trên động vật gặm nhấm đƣợc ghi nhận, bao gồm tác dụng ức chế vận động tự nhiên và kéo dài giấc ngủ pentobarbital ở liều 50 – 400 mg/kg (tiêm phúc . tiêu nghiên cứu: - Xây dựng một số tiêu chuẩn hóa lý cao chiết Lạc tiên tây - Nghiên cứu tác dụng an thần của cao chiết Lạc tiên tây trên chuột nhắt trắng - Nghiên cứu độc tính cấp và độc tính. trình nghiên cứu nào về tác dụng dƣợc lý và độc tính của Lạc tiên tây trồng tại Việt Nam. Mục tiêu: Đánh giá tác dụng an thần giải lo âu và độc tính của cao chiết Lạc tiên tây trên chuột nhắt trắng. . Chiết xuất cao Lạc tiên tây 68 3.2.2. Khảo sát chỉ tiêu chất lƣợng của cao Lạc tiên tây 69 3.3. Kết quả thử nghiệm độc tính và tác dụng an thần của cao Lạc tiên tây 75 10 3.3.1. Độc tính cấp