2 BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ ĐỀ TÀI Tên đề tài: CHỌN TẠO GIỐNG LÚA LAI HAI DÒNG KHÁNG BỆNH BẠC LÁ BẰNG KẾT HỢP PHƯƠNG PHÁP CÔNG NGHỆ SINH HỌC (CÔNG NGHỆ ĐƠN BỘI, CHỈ THỊ PHÂN TỬ) VỚI PHƯƠNG PHÁP TRUYỀN THỐNG MỞ ĐẦU Hiện nay, lúa lai đã trở nên không thể thiếu được trong cơ cấu giống cây trồng ở Việt Nam, lúa lai đã đóng góp không nhỏ vào gia tăng sản lượng lương thực Quốc gia bảo đảm an ninh lương thực. Diện tích lúa lai trong những năm gần đây không tăng mà còn có phần giảm, nguyên nhân hạn chế chủ yếu là lúa lai hiện nay chưa kháng được bệnh bạc lá. Ở Việt Nam, bệnh bạc lá thật sự gây tác hại, nó làm giảm năng suất từ 30- 60% [15], Trường Đại học NN1,[14] Viện Bảo vệ Thực vât, Viện DTNN, đã thu thậ p, phân lập được nhiều nòi bạc lá khác nhau từ nước ngoài và các nòi mới được phân lập trong nước. Kết quả đánh giá thử nghiệm của các viện, trường, cho thấy có 3 gen kháng được phần lớn các nòi miền Bắc Việt Nam là xa5, Xa7 và Xa21, tuy nhiên hiện nay một số gen như Xa21 vẫn kháng được nhiều nòi bạc lá khác nhau nhưng mức độ kháng đã giảm đáng kể, vì vậy muốn tăng cường khả năng kháng bệnh bền vững cần phải quy tụ nhiều gen kháng vào một giống lúa. Bằng phương pháp lây nhiễm nhân tạo, chỉ có thể có kết luận, cá thể này kháng bệnh bạc lá, cá thể khác không kháng hoặc kháng nhiều, kháng ít, khó có thể biết được các thể nào mang 1 gen kháng, cá thể khác mang hai hay nhiều gen là những gen nào. Nhờ chỉ thị phân tử, không những có thể xác định nhanh chóng, chính xác những cá thể mang một hay nhiều gen mà là những gen nào để định hướng ch ọn giống kháng bền với bệnh bạc lá. 3 Viện lúa quốc tế đã quy tụ được những gen kháng bệnh bạc lá khác nhau vào các giống từ IRBB1 đến IRBB 63 trong đó có giống có tới 3 hoặc 4 gen vì vậy việc sử dụng vật liệu quy tụ của IRRI kết hợp với chỉ thị phân tử để quy tụ vào các giống lúa [28] khác nhau là hoàn toàn có thể được trong điều kiện Việt Nam. Dòng IRBB 62 mang 3 gen trội Xa4, Xa7, Xa21 kháng rất tốt với các nòi bạc lá của Việt Nam liên kết vớ i các chỉ thị phân tử MP1- MP2, P3, pTA248 vì vậy việc sử dụng dòng này làm vật liệu để lai quy tụ vào các giống lúa khác nhau là rất tiện lợi. Các nhà khoa học Thái Lan đã sử dụng thành công MAS và phương pháp nuôi cấy bao phấn lúa để quy tụ gen kháng bạc lá Xa21 và gen chịu úng SUB1 vào giống lúa KDML 105 (Khao Dak Mali). Đối với lúa lai do sử dụng hiệu ứng trội và siêu trội là chính nên những vật liệu, dòng, giống có chứa gen trội rất có ý nghĩa trong công tác chọn tạo gi ống lúa lai kháng bệnh bạc lá. Nếu ta quy tụ được hai gen Xa7 và Xa21 vào dòng mẹ TGMS và các dòng bố khác nhau sau đó sử dụng chúng trong sản xuất lúa lai thì có thể tạo được tổ hợp lai kháng được bệnh bạc lá[14]. Tuy vậy, các giống lúa lai chủ yếu vẫn nhập nội từ Trung Quốc và là lúa lai hệ ba dòng nên năng suất bị hạn chế. Muốn có ưu thế lai cao cần các tổ hợp giữa các phân loài phụ Indica/ Japonica, xong khi lai xa con lai thường b ị lép do không tương thích giữa dòng bố và mẹ. Để có được lúa lai cao sản cần phải lai xa giữa các phân loài phụ và dòng bố hoặc mẹ phải có gen tương hợp rộng S 5 n. Dòng mẹ PA64S mang gen tương hợp rộng S 5 n liên kết với chỉ thị phân tử RM225 và RM253 đồng thời mang gen bất dục đực mẫn cảm với nhiệt độ có thể sử dụng làm vật liệu cho chọn tạo dòng bố mẹ mang gen tương hợp rộng. Phương pháp nuôi cấy bao phấn là một phương pháp đã được sử dụng rộng rãi ở nhiều nước tiên tiến trên thế giới và là một phương pháp rất tiện l ợi 4 giúp nhanh chóng tạo dòng đơn bội kép. Đặc biệt, sử dụng phương pháp này rút ngắn thời gian chọn dòng TGMS từ 5-6 năm ở điều kiện thường xuống chỉ còn 1-2 năm và không phải phụ thuộc nhiều vào điều kiện ngoại cảnh. Muốn mở rộng diện tích lúa lai cần chọn tạo lúa lai hai dòng kháng bệnh bạc lá và trước hết phải chọn tạo dòng bố, mẹ kháng bệnh bạ c lá vì vậy chúng tôi chọn hướng nghiên cứu “Chọn tạo lúa lai hai dòng kháng bệnh bạc lá bằng CNSH (nuôi cấy đơn bội, chỉ thị phân tử) kết hợp với phương pháp thông thường” là khoa học và có ý nghĩa thực tiễn cao. Mục tiêu của đề tài - Làm chủ được công nghệ tạo dòng bố, mẹ mang gen tương hợp rộng và gen kháng bệnh bạc lá. - Tạo được 2-3 dòng bố, 1-2 dòng mẹ ngắ n ngày mang gen tương hợp rộng và gen kháng bệnh bạc lá. - Chọn được 1-2 tổ hợp lúa lai hai dòng kháng bệnh bạc lá có triển vọng. Đối tượng nghiên cứu Kế thừa một số vật liệu của đề tài “nghiên cứu chọn tạo giống lúa thuần kháng bệnh bạc lá bằng chỉ thị phân tử”. Đối tượng nghiên cứu là những dòng bố, mẹ lúa lai hai dòng, gen kháng bệnh bạc lá Xa7, Xa21 và gen tương hợp r ộng S 5 n. Phạm vi nghiên cứu Đề tài tập trung nghiên cứu chọn tạo dòng bố, mẹ lúa lai hai dòng kháng bệnh bạc lá, sử dụng những công nghệ nuôi cấy bao phấn, chỉ thị phân tử kết hợp với phương pháp lai truyền thống nên rút ngắn được thời gian. Dòng bố, mẹ có gen kháng bệnh bạc lá trội Xa7, Xa21 sẽ dễ tạo được lúa lai kháng bệnh bạc lá nên mang tính ứng dụng cao. 5 Tính cấp thiết Hiện nay, lúa lai nhiễm bệnh bạc lá nên khó mở rộng diện tích. Lý do chủ yếu là chưa tạo được dòng bố, mẹ mang gen trội Xa7, Xa21 kháng được với các nòi gây bệnh bạc lá của Việt Nam. Nếu chọn tạo được những dòng bố, mẹ mang gen này sẽ tạo được các tổ hợp lúa lai kháng bệnh bạc lá có thể mở rộng được diện tích lúa lai ở vụ Mùa. Ý nghĩa khoa học và th ực tiễn Đề tài đưa ra quy trình chọn tạo dòng bố, mẹ lúa lai hai dòng kháng bệnh bạc lá bằng CNSH (công nghệ đơn bội, chỉ thị phân tử) nên có ý nghĩa khoa học cao. Các dòng bố mẹ kháng bệnh bạc lá là cơ sở chọn tạo lúa lai kháng bệnh bạc lá, mang gen tương hợp rộng là cơ sở khai thác ưu thế lai xa nên có ý nghĩa thực tiễn cao. 6 CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU VÀ CƠ SỞ KHOA HỌC CỦA ĐỀ TÀI 1.1 Tình hình nghiên cứu và phát triển lúa lai trong nước và trên thế giới 1.1.1 Tình hình nghiên cứu và phát triển lúa lai trên thế giới Lúa (Oryza sativa L.) là cây lương thực quan trọng không chỉ đối với Việt Nam mà cả trên thế giới, đặc biệt quan trọng hơn đối với những nơi mà dân nghèo sinh sống. Vì vậy các quốc gia Châu Á hàng năm tiêu thụ tới 90% sản lượng lúa gạo của th ế giới. Để đảm bảo được nguồn lương thực, đáp ứng cho mức độ tăng dân số của thế giới, trong 30 năm tới sản lượng lúa gạo yêu cầu tăng từ 470 triệu tấn hiện nay, lên 740 triệu tấn. Do diện tích cây trồng nói chung và cây lúa nói riêng ngày một giảm, sản lượng lương thực buộc phải tăng mạnh hàng năm mới mong nuôi nổi lượng dân số trên thế giới đang ngày một tăng nhanh vì vậy cần phải chọn tạo giống lúa mới năng suất cao, chống chịu tốt. Việc sử dụng ưu thế lai nhằm tăng năng suất lúa là rất cần thiết, Trung Quốc là nước đầu tiên trên thế giới thành công đưa ra sản xuất lúa lai trên thế giới, ngày nay diện tích lúa lai chiếm khoảng 50% diện tích trồng lúa của nước này và đã góp phần không nhỏ vào việc gia tăng sản lượng lương thực xoá đói của quốc gia đông dân nhất hành tinh này. Hiện nay, ngoài Trung Quốc, lúa lai đã được nghiên cứu ở nhiều nước trên thế giới, Ấn Độ, Việt Nam là hai nước đã thu được những thành tựu nhất định trong nghiên cứu và sản xuất, lúa lai đã được mở rộng và khẳng định chỗ đứng không thể thiếu được trong sản xuất.[8] Diện tích lúa lai ở các nước ngoài Trung Quốc như Bănglades 40 000 ha, Ấn Độ 560 000 ha, Philippin gần 200 ngàn ha, Mỹ 43 000 ha, ngoài ra các nước khác như Srilanca, Ai Cập, Nhật bản cũng trồng lúa lai. Trong những năm cuối của thế kỷ trước, lúa lai trong sản xuất chủ yếu là lúa lai thuộc hệ ba dòng, sử dụng con lai dựa trên cơ sở của dòng mẹ là dòng 7 CMS, ngày nay trong sản xuất lúa lai hệ ba dòng vẫn còn giữ một vị trí quan trọng vì khá ổn định và không phụ thuộc vào nhiệt độ, xong lúa lai ba dòng còn một số hạn chế, khó duy trì và làm thuần dòng mẹ, phổ phục hồi thấp, giá thành hạt lai cao, khó sử dụng ưu thế lai xa vì vậy đã kịch trần về năng suất. Trung quốc đã đưa vào sản xuất nhiều giống lúa lai hệ hai dòng trong đó có tổ hợp Pêi ả i 64S/ 9311 cho năng suất siêu cao sản 17,1T/ ha/ vụ.[5] Trong các năm gần đây, các công ty giống của Trung Quốc, Ấn Độ đang khảo nghiệm nhiều tổ hợp lúa lai hai dòng ở Việt Nam và đang có kết quả tốt.[13] Để khắc phục những khó khăn của lúa lai hệ ba dòng, các nhà khoa học đã tìm ra hướng lúa lai hệ hai dòng và lúa lai 1 dòng. Tuy vậy lúa lai hệ 1 dòng đang còn trong nghiên cứu về lý thuyết, vì vậy việc nghiên cứu và sử dụng lúa lai hệ hai dòng là kinh tế, thu ận lợi và có giá trị thực tiễn hơn cả. Lúa lai hệ hai dòng dựa trên nền tảng sử dụng dòng bất dục đực mẫn cảm với ánh sáng ngày ngắn (PGMS), bất dục đực mẫn cảm với nhiệt độ (TGMS) được quan tâm và hiện thực hơn cả ngoài ra còn có dòng bất dục đực mẫn cảm với nhiệt độ ngược (Anti-TGMS) Do sự ưu việt của lúa lai hai dòng hệ TGMS so với lúa lai ba dòng, đặc biệt đối với các nước nhiệt đới, biên độ chiếu sáng trong ngày chênh lệch ít trong đó sự chênh lệch nhiệt độ giữa các tháng trong năm khá lớn và tương đối ổn định rất thuận tiện cho nghiên cứu và phát triển lúa lai hệ hai dòng, sử dụng dòng bất dục đực nhân nhậy cảm với nhiệt độ (TGMS). Vì vậy nhiều nước trên thế giới đầu tư nghiên cứu, chọn tạo dòng bấ t dục đực TGMS đã tìm được nhiều dòng có nguồn gốc khác nhau, dòng 5460S của Trung Quốc có gen tms1 nằm trên nhiễm sắc thể số 8, dòng đột biến từ Norin PL12 có gen tms2 nằm trên nhiễm sắc thể số 7, dòng đột biến từ IR32364 của IRRI có gen tms3 nằm trên nhiếm sắc thể số 6, dòng TGMS-VN-1 của Việt Nam,[23] đột biến từ giống Chiêm Bầu có gen tms4 nằm trên nhiễm sắc thể số 2, dòng SA2 của Ấn Độ có gen tms5 nằm trên nhiễm sắc thể số 9, Dòng TGMS-VN-6 thu 8 được từ đột biến D84-1 của Việt Nam có gen tms6 nằm trên nhiễm sắc thể số 4, dòng Anti-TGMS có gen rtms1 nằm trên nhiễm sắc thể số 10 của lúa. Hàng năm Trung Quốc có hàng trăm tổ hợp lúa lai mới và đang xuất khẩu sang các nước khác mang lại nguồn ngoại tệ đáng kể và tạo them công việc nâng cao thu nhập cho nông dân. 1.1.2 Tình hình nghiên cứu và phát triển lúa lai trong nước Ở Việt Nam, sản lượng lúa chiếm gầ n 90% tổng sản lượng các cây lương thực. Ngoài ra, trong khẩu phần dinh dưỡng của người Việt Nam, cơm cung cấp tới 68% lượng ca-lo cần thiết cho cơ thể. Do diện tích cây trồng nói chung và cây lúa nói riêng ngày một giảm, sản lượng lương thực buộc phải tăng mạnh hàng năm mới mong nuôi nổi lượng dân số trên thế giới đang ngày một tăng nhanh. Riêng đối với Việt Nam, các nhà kinh tế nước ngoài cho rằng t ừ nay cho đến năm 2020, sản lượng lúa cần phải tăng thêm 1,43% mỗi năm thì mới đáp ứng đủ nhu cầu tiêu thụ của người dân (Evenson, 1999). Từ năm 1991, lúa lai đã được nhà nước ta quan tâm, đầu tư nghiên cứu, sản xuất và ứng dụng. Đến nay, lúa lai đã được đưa vào cơ cấu giống chính thức của hầu hết các tỉnh và trở thành không thể thiếu được,[7] đặc biệt r ất cần cho vùng trồng cây vụ Đông. Năng suất lúa lai trong vụ Xuân tương đối ổn định và đã góp phần không nhỏ vào việc gia tăng sản lượng lương thực ở nước ta. Chất lượng lúa lai ngày được cải thiện, nhiều giống lúa lai hiện nay được người tiêu dùng đánh giá cao, giá thành gạo của nhiều giống lúa lai cao hơn một số giống lúa thuần nhập nội từ Trung Quốc đang được tr ồng phổ biến ở Miền Bắc như Q5, Khang Dân 18. Diện tích lúa lai hàng năm khoảng 600 ngàn ha (tương đương 18.000 tấn hạt lai) và được trồng phổ biến ở Miền Bắc. Các giống lúa lai mới ngắn ngày, dễ chăm sóc, tỏ ra có sức chống chịu với một số điều kiện bất lợi với thời tiết và điều kiện ngoại cảnh tốt hơn lúa thu ần nên có đóng góp vào sự gia tăng sản lượng lương thực trong cả nước. Mặc dù chúng ta đã làm chủ được công nghệ sản xuất hạt lai F1,[8] nhưng giống lúa lai đang được trồng chủ yếu nhập khẩu từ Trung Quốc nên không chủ động trong sản xuất, nhiều khi bị ép giá đến 120-130 ngàn đồng/ kg. Tuy một số tổ hợp lúa lai của Trung Quốc có thể sản xuất được ở Vi ệt Nam nhưng các dòng CMS chúng ta vẫn chưa làm thuần đủ số lượng và chất lượng để đáp ứng nhu cầu của sản xuất. Đây là một việc khó mà đến nay nhiều đơn vị nghiên cứu, sản xuất lúa lai trong nước phải chấp nhận. 9 Qua nhiều năm thử nghiệm, đến nay các nhà khoa học Việt Nam đã khẳng định, lúa lai hai dòng hệ TGMS rất tiện lợi cho việc chọn và nhân dòng mẹ, sản xuất hạt lai ở nước ta.[3] Nhiều dòng bất dục đực nhân mẫn cảm với nhiệt độ TGMS đã được tạo ra ở Việt Nam, dòng TGMS-VN1 đột biến từ giống lúa Chiêm Bầu của Việt Nam, mang gen tms4 nằm trên nhiễm sắc thể số 2 c ủa lúa, TGMS-VN-6 có gen tms6 nằm trên nhiễm sắc thể số 4 của lúa. Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội là nơi có đội ngũ nghiên cứu lúa lai rất mạnh đã tạo được các dòng T1S-96, 103S, T4S, T7S đang được đưa ra sản xuất đại trà. Các dòng TGMS của Việt Nam [23] đã có đủ những đặc tính tốt của dòng mẹ, thấp cây, ngắn ngày, tỷ lệ thò vòi nhuỵ ra ngoài sau khi nở hoa cao, khả năng nhận hạt phấ n từ bên ngoài tốt, độ bất dục đực ở nhiệt độ cao ổn định có khả năng kêt hợp cao.[3], [7] Một số tổ hợp lúa lai của Việt Nam ngắn ngày, năng suất cao, nhiều tổ hợp có chất lượng tốt như VL 20, VL 24, TH3-1, TH3-3, TH3-4, TH5-1, TH5-4, TH7-2 đã được sản xuất chấp nhận và ngày càng chiếm được niềm tin cuả nông dân, các đơn vị sản xuất và cung ứng giống lúa lai trong nước. (S ơ kết sản xuất lúa lai vụ Đông-Xuân 2007-2008 và vụ Mùa 2008 và vụ Đông-Xuân 2008-2009 các tỉnh Phía Bắc của cục Trồng trọt ngày 9-7-2008) Trung tâm Nghiên cứu Lúa lai- Viện CLT và CTP đã tạo được nhiều dòng TGMS khác nhau như AMS30S, AMS31S, AMS32S, AMS33S…và nhiều tổ hợp lúa lai HYT83, HYT100, HYT 103, HYT 106, HYT 107… Công nghệ sản xuất hạt lai đã được nhà nước ta quan tâm từ năm 1991, đến nay không những nhà khoa học mà cả nông dân cũng có thể sản xuất được hạt lúa lai, đây là một kết qu ả rất đáng trân trọng trong đó phải kể đến hệ thống Khuyến nông Quốc gia. Năng suất hạt lai đã đạt được khá cao từ 3-4 tấn/ ha, như vậy việc sản xuất lúa lai trong nước đã trở thành một nghề nông mang lại hiệu quả thu nhập cao và còn đóng góp lớn vào sự nghiệp phát triển lúa lai nước nhà. Hiện nay, nhiều công ty giống cây trồng trong nước đã đầu tư khá l ớn vào nghiên cứu và sản xuất hạt lai F 1 mang lại hiệu quả kinh tế và góp phần vào phát triển lúa lai ở nước ta. Tuy chúng ta đã làm chủ được hầu hết các khâu trong quá trình nghiên cứu và sản xuất lúa lai, xong tổng số hạt giống lúa lai sản xuất được trong nước mỗi năm mới đáp ứng khoảng 25-30% diện tích lúa lai trong cả nước. Các giống lúa lai đang được trồng phổ biến nhập nội và sản xuất trong nước hiện vẫn bị nhi ễm bệnh bạc lá nên khó mở rộng diện tích ở vụ Mùa. Theo kế hoạch của Bộ NN & PTNT đặt ra là đến năm 2010 số lượng hạt giống lúa lai sản xuất được trong nước cần phải đáp ứng được 70% diện tích 10 trồng lúa lai. Diện tích lúa lai trong những năm gần đây không tăng mà còn có phần giảm, nguyên nhân hạn chế chủ yếu là lúa lai hiện nay chưa kháng được bệnh bạc lá, số lượng các tổ hợp lúa lai của Việt Nam còn ít, số dòng mẹ TGMS chọn ra từ trong nước còn ít và chưa thật ổn định, chưa có các gen trội kháng bạc lá như Xa7, Xa21 để có thể tạo ra lúa lai kháng bệnh bạc lá. Một số dòng mẹ nhập nộ i từ Trung Quốc như Pêi ải 64S có dạng cây đẹp, có gen tương hợp rộng xong vòi nhuỵ nhỏ, tỷ lệ vòi nhuỵ thò ra ngoài thấp dẫn đến khả năng nhận phấn từ bên ngoài thấp, năng suất hạt lai thấp. Các dòng bất dục đực thu thập từ IRRI cũng vậy, mặc dù khả năng kháng sâu, bệnh và chất lượng gạo khá hơn nhưng tỷ lệ thò vòi nhuỵ kém, khó sản xuất h ạt lai. 1.2 Bệnh bạc lá và những nghiên cứu bệnh bạc lá Bệnh bạc lá lúa được phát hiện đầu tiên ở Nhật Bản vào năm 1884 – 1885, sau đó Takasi (1908) và Bokusa (1911) đã nghiên cứu và phân lập thành công vi khuẩn, rồi tiến hành lây nhiễm bệnh nhân tạo bằng vi khuẩn vừa phân lập được. Tiếp sau Nhật Bản, một loạt các nước đã thông báo về bệnh bạc lá lúa ở nước mình. Năm 1970, bệnh xuất hiệ n ở hầu hết ở các nước Châu Á (trừ Tây Á), ở các nước Châu ÂU vào năm 1973 và ở Châu Mỹ La Tinh vào năm 1975. Vi khuẩn gây bệnh bạc lá lúa (vi khuẩn bạc lá lúa) được nhiều nhà khoa học nghiên cứu, phân lập nên nó được gọi với nhiều tên khác nhau như: năm 1927, theo khái niệm đặt tên của EF. Smit vi khuẩn này được gọi là Bacterium Oride (Uyed et ishitama) Nakata, sau đó được đặt tên là Xanthomonas Oryzae (Uyed et ishitama) Dowson, đến năm 1982, vi khuẩn này được đặt tên là X. Campestri pv. Oryzea (Uyed et ishitama) Dowson 1.2.1 Đặc đi ểm, triệu chứng bệnh bạc lá lúa. Bệnh bạc lá lúa do vi khuẩn Xanthomonas Campestris p.v.oryzae Dowson gây ra, bệnh này phổ biến ở các nước trồng lúa trên thế giới. Tác hại chủ yếu của bệnh là làm cho lá lúa đặc biệt là lá đòng sớm tàn, nhanh chóng bị khô, chết, bộ lá khô ảnh hưởng tới khả năng quang hợp và tạo ra các chất sống cho hạt. Từ đó, những ruộng lúa bị bạc lá có tỉ lệ lép rất cao, làm n ăng suất giảm lớn. 11 Bệnh bạc lá lúa gây hại trong suốt quá trình sinh trưởng và phát triển của cây lúa, vết bệnh điển hình thời kỳ cấy trên đồng ruộng, sau đó khi đẻ nhánh - trỗ - chín sữa, trường hợp nghiêm trọng bệnh xuất hiện ngay giai đoạn mạ. - Trên mạ: Triệu chứng không biểu hiện đặc trưng như trên cây lúa, do đó nếu ta không quan sát kĩ thì rất dễ nhầm lẫn sang bệnh khô đầu lá lúa sinh lý, vi khuẩn gây bệnh gây ra các tri ệu chứng ở mép lá, múp lá với những vết dài ngắn khác nhau, có màu xanh vàng, nâu bạc, rồi khô xác và chết. - Trên lúa: Triệu chứng vết bệnh thể hiện rõ hơn, tuy nhiên nó có thể thay đổi ít hay nhiều tùy thuộc vào từng giống và điều kiện ngoại cảnh. Vết bệnh từ mép lá, phiến lá rồi lan dần vào trong phiến lá hoặc kéo dài theo gân chính, nhưng cũng có khi xuất hiện từ gân lá rồi lan rộng ra. Vết bệnh lan rộng theo đường g ợn sóng, vết bệnh có màu vàng, mô bệnh tái xanh, vàng lục, lá màu bạc khô xác. Thông thường ranh giới giữa mô bệnh và mô khỏe phân biệt nhau rất dễ dàng có giới hạn theo đường gợn sóng màu vàng hoặc khô vàng có khi chia lá thành những đường viền màu nâu đứt quãng hoặc không đứt quãng. Trong điều kiện độ ẩm cao trên bề mặt ngọn khoảng vài phân, vết bệnh được phát triển dọc phiến lá cả về chiều dài và chiều rộng. Quanh vết bệnh thườ ng có những viền gợn sóng để phân biệt phần bị bệnh và phần không bị bệnh. Trên những cây bị nhiễm bệnh, lá bệnh thường bị héo tàn có màu bạc trắng rồi chết. Trên mô bệnh còn tươi vào buổi sáng ta quan sát thấy những giọt dịch vi khuẩn có hình tròn nhỏ, có màu vàng đục, khi keo đặc có màu nâu hổ phách. Giọt dịch này chuyển sang màu vàng rơm đọng lại thành hình cầu nhỏ li ti trên lá. - Trên hạt: Quan sát thấy hạt bị bệnh có nhữ ng vết bệnh không màu, xung quanh cso viền nước. Các vết bệnh được thấy rõ khi hạt thóc còn non và xanh, khi hạt chín vết bệnh màu vàng tím hoặc màu nâu nhạt. [...]... 0,05 33 S CHN TO DềNG B, M BNG CễNG NGH SINH HC (nuụi cy n bi, ch th phõn t) kt hp vi phng phỏp thụng thng Bc 1: Lai to con lai khỏng bc lỏ Bc 2: Lai qui t TGMS-VN-1 X IRBB62 Pời i 64S X IRBB62 Pời i 64S X F1 Con lai qui t Bc 3: Chn lc con lai qui t gen khỏng bc lỏ bng ch th phõn t X F1 X TGMS-VN-1 F1-2 Con lai quy t gen khỏng bc lỏ Bc 4: Nuụi cy bao phn con lai ó quy t gen to dũng n bi kộp Dũng n... phỏp lai v ỏnh giỏ u th lai S dng cỏc phộp lai n, lai kộp, lai quy t theo phng phỏp thụng thng ỏnh giỏ u th lai theo phng phỏp ca Trung tõm nghiờn cu v Phỏt trin Lỳa lai H Nam, Trung Quc Yuan LP (1996)[47] Đánh giá u thế lai bằng công thức: F1 C u th lai thc: TLT = x 100 % C - F1 l ch s ca con lai - C l ch s ca ging lỳa ang c trng ph bin lm i chng 2.3.5 Phng phỏp nuụi cy bao phn lỳa Mụi trng nuụi cy:... khỏng bc lỏ v gen tng hp rng Ni dung 2: Chn to dũng b, m (TGMS) lỳa lai hai dũng mang gen khỏng bnh bc lỏ v gen tng hp rng Ni dung 3: Tỡm t hp lai ngn ngy, nng sut cao, cht lng tt, khỏng bnh bc lỏ Ni dung 4: Nghiờn cu cụng ngh sn xut ht lai v trỡnh din t hp lai cú trin vng 25 2.3 Phng phỏp nghiờn cu 2.3.1 Phng phỏp ỏnh giỏ cỏc c tớnh nụng sinh hc ca cỏc dũng lỳa.Theo phng phỏp ca IRRI (1996)[7] Phng phỏp... - G hai tm kớnh, nh nhng búc gel Sau ú th gel vo b nhum Ethidium bromide cú nng 10mg/ml trong 20 phỳt - t bn gel trong mỏy soi UV, chp nh - Tỏch chit v tinh sch ADN - Nhõn nhanh s lng ADN bng k thut PCR - Kim tra phn ng trờn gel agarose - in di sn phm PCR bin tớnh trờn gel polyacrylamide - Nhum bn gel thu c bng dung dch AgNO3 2.3.4 Phng phỏp lai v ỏnh giỏ u th lai S dng cỏc phộp lai n, lai kộp, lai. .. Nhng thnh cụng v hn ch ca chn ging lỳa bng phng phỏp lai c in Chn ging lỳa bng phng phỏp c in c ỏp dng t rt sm, bao gm cỏc phng phỏp chớnh nh: nhp ni, gõy t bin, lai chuyn gen khỏng bnh bc lỏ ri cho phõn ly v chn lc Lai to l mt phng phỏp to ging truyn thng, nh lai to ta cú th quy t c ngun gen cỏc ging khỏc nhau Nu t bin to ra ngun nguyờn liu s cp thỡ lai to to ra ngun nguyờn liu th cp cung cp ngun vt... im l ng hp t rt cao v c coi l ngun vt liu a dng, phong phỳ cho chn ging [9], [12] i vi chn ging lỳa lai, nuụi cy bao phn nhm: Tinh lc v chn nhanh dũng b, m trong lỳa lai hai dũng: - Rỳt ngn quỏ trỡnh chn to dũng b - Rỳt ngn quy trỡnh chn to dũng m TGMS - Tỏch ra c nhng dũng thun cú nng sut cao t cõy lai d hp t Cỏc bao phn dựng nuụi cy thng c ly t cỏc cõy lỳa ca qun th F1 hoc F2 nhm to ra s di truyn... trin vng cho nng sut cỏ th cao v cú c tớnh nụng sinh hc tt c bit l cú kh nng chu mn [8] Nm 2004, Trn ỡnh Gii v Vng ỡnh Tun ó lai ging lỳa IR64 vi cỏc ging lỳa mi (new plant type), IR69146-15, IR69146-25, IR68530, IR70441 T hp lai IR64/IR69146-25 cho t l callus cao nht (8,85%) Tỏc gi khng nh mụi trng N6 cú b xung 2mg/l BAP + 0,5mg/l NAA cho t l cõy tỏi sinh cao nht (5,29%) Cỏc dũng TGMS n bi kộp c to... (2000), kh nng hỡnh thnh callus bng nuụi cy bao phn lỳa cú tớnh di truyn Cỏc tỏc gi nghiờn cu s dng k thut luõn giao, cỏc bao phn cha tiu bo t n nhõn ca hai ging japonica (Minehikari v Taipei 309), hai ging indica (Mingolo v Suweon 290), v 12 con lai F1 ca lai luõn giao (diallel crosses) ca 4 b m c nuụi cy trờn mụi trng Chaleffs R2 v ỏnh giỏ to callus Cỏc b m biu hin s sai khỏc cú ý ngha hỡnh thnh callus... phõn t h tr chn lc cỏc qun th trong lai Backcross chuyn gen khỏng bc lỏ [2], [8] 17 Tỏc gi Dng Thanh Ti v cỏc cng s ti Cụng ty Ging cõy trng Min Nam ó chn to thnh cụng ging lỳa lai Bc u 903 khỏng bnh bc lỏ Nhúm nghiờn cu ó s dng phng phỏp hi giao kt hp thanh lc bnh nhõn to chuyn gen Xa21 vo ging b Qu 99, t ú to ra Bc u 903KBL (cú kt hp dũng bt dc BoA) Ging lỳa lai Bc u 903KBL gn nh gi nguyờn c tớnh... Phng phỏp cy chuyn callus sang mụi trng tỏi sinh cõy Khi callus c hỡnh thnh t bao phn (4 - 6 tun sau khi cy) cú ng kớnh 1 - 2 mm tr lờn c chuyn sang mụi trng tỏi sinh cõy xanh Mi ng nghim ch cy 1 callus 32 2.3.6 Phng phỏp x lớ s liu X lý s liu theo chng trỡnh Excel 5.0 trờn mỏy vi tớnh mụ so to thnh Tn sut hỡnh thnh mụ so = x 100 % mu mụ to chi Tn sut tỏi sinh cõy = x 100 % mụ thớ nghim Xi X = . TỔNG HỢP KẾT QUẢ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ ĐỀ TÀI Tên đề tài: CHỌN TẠO GIỐNG LÚA LAI HAI DÒNG KHÁNG BỆNH BẠC LÁ BẰNG KẾT HỢP PHƯƠNG PHÁP CÔNG NGHỆ SINH HỌC (CÔNG NGHỆ ĐƠN BỘI, CHỈ THỊ PHÂN T ) VỚI PHƯƠNG. tích lúa lai cần chọn tạo lúa lai hai dòng kháng bệnh bạc lá và trước hết phải chọn tạo dòng bố, mẹ kháng bệnh bạ c lá vì vậy chúng tôi chọn hướng nghiên cứu Chọn tạo lúa lai hai dòng kháng bệnh. khoa học và th ực tiễn Đề tài đưa ra quy trình chọn tạo dòng bố, mẹ lúa lai hai dòng kháng bệnh bạc lá bằng CNSH (công nghệ đơn bội, chỉ thị phân t ) nên có ý nghĩa khoa học cao. Các dòng