B GIÁO D C VÀ ðÀO T O TRƯ NG ð I H C NÔNG NGHI P HÀ N I - - VŨ VĂN DŨNG KH O SÁT KHÁNG TH NEWCASTLE VÀ S LƯU HÀNH C A VIRUS TRÊN GÀ T I CH ð U M I GIA C M HÀ V CHUYÊN NGÀNH : THÚ Y Mà NGÀNH : 60.64.01.01 NGƯ I HƯ NG D N KHOA H C : TS NGUY N BÁ HIÊN HÀ N I – 2013 L I CAM ðOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên c u c a riêng tơi.Các s li u k t qu trình bày lu n văn trung th c chưa t ng đư c cơng b b t c cơng trình khác Tơi xin cam đoan r ng thơng tin trích d n lu n văn ñ u ñư c ch rõ ngu n g c Hà N i, ngày 28 tháng 09 năm 2013 Tác gi lu n văn Vũ văn Dũng Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… i L I C M ƠN ð hồn thành đư c b n lu n văn này, s c g ng n l c c a b n thân, tơi nh n đư c s ch b o t n tình c a nhi u cá nhân t p th Tôi xin g i l i cám ơn chân thành nh t t i: Ban giám hi u trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i, khoa Thú y t t c th y ch b o giúp đ tơi q trình h c t p ð c bi t tơi xin t lịng bi t ơn sâu s c kính tr ng t i Th y giáo TS.Nguy n Bá Hiên ñã t n tình hư ng d n, giúp đ tơi hồn thành lu n văn Tơi xin g i l i c m ơn chân thành t i Th y Cô giáo B môn Vi sinh v t – Truy n nhi m, Khoa Thú y Trư ng đ i h c Nơng nghi p Hà N i góp ý, ch b o đ lu n văn c a tơi đư c hồn thành Nhân d p xin chân thành c m ơn t i gia đình, b n bè đ ng viên giúp đ tơi q trình h c t p hồn thành t t lu n văn Tơi xin chân thành c m ơn! Hà N i, ngày 28 tháng 09 năm 2013 Tác gi lu n văn Vũ văn Dũng Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… ii M CL C L i cam ñoan i L i c m ơn ii M cl c iii Danh m c b ng vi Danh m c hình vii Danh m c ch vi t t t viii M ð U Chương T NG QUAN TÀI LI U 1.1 T ng quát v b nh Newcastle 1.1.1 Gi i thi u chung v b nh Newcastle 1.1.2 L ch s b nh Newcastle 1.2 Tình hình nghiên c u d ch b nh Newcastle nư c th gi i 1.2.1 Tình hình nghiên c u b nh Newcastle th gi i 1.2.2 Tình hình nghiên c u b nh Newcastle 1.3 ð c tính sinh h c c a virus Newcastle 1.3.1 Hình thái phân lo i 1.3.2 Kh ngưng k t h ng c u 10 1.3.3 Dung gi i h ng c u 11 1.3.4 Vi t Nam c ch ngưng k t h ng c u 12 1.3.5 S nhân lên c a virus Newcastle t bào 12 1.3.6 Gây hi n tư ng c n nhi m (Interference) 14 1.3.7 Kh ch u nhi t 14 1.3.8 S c ñ kháng c a virus Newcastle 14 1.4 D ch t h c b nh Newcastle 15 1.4.1 Loài m c b nh 15 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… iii 1.4.2 Ch t ch a xu t virus 16 1.4.3 Mùa v phát b nh 17 1.4.4 ðư ng xâm nh p cách th c lây lan 17 1.4.5 ð c l c c a virus 18 1.4.6 Cơ ch gây b nh 18 1.5 Tri u ch ng, b nh tích c a b nh Newcastle 19 1.5.1 Tri u ch ng 19 1.5.2 B nh tích 20 1.6 Ch n đốn b nh 22 1.6.1 Ch n đốn lâm sàng 22 1.6.2 Ch n đốn phân bi t 22 1.6.3 Ch n đốn virus h c 23 1.6.4 Ch n đốn huy t h c 24 1.7 Bi n pháp can thi p phòng b nh Newcastle 24 1.7.1 Bi n pháp can thi p 24 1.7.2 Phòng b nh Newcastle 25 Chương ð I TƯ NG, ð A ðI M, N I DUNG, NGUYÊN LI U VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U 29 2.1 ð i tư ng nghiên c u 29 2.2 ð a ñi m 29 2.3 N i dung nghiên c u 29 2.4 Nguyên li u 29 2.5 Phương pháp nghiên c u 30 2.5.1 Phương pháp thu th p m u huy t thanh, m u b nh ph m 30 2.5.2 Phương pháp b o qu n m u 31 2.5.3 Phương pháp làm ph n ng HA 31 2.5.4 Phương pháp làm ph n ng HI ñ giám ñ nh virus Newcastle 33 2.5.5 Phương pháp phân l p virus phôi tr ng 34 2.6 Phương pháp x lý s li u 35 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… iv Chương K T QU NGHIÊN C U VÀ TH O LU N 36 3.1 Tình hình kinh doanh gia c m t i ch ñ u m i gia c m Hà V 36 3.1.1 M t s nét v ch ñ u m i gia c m Hà V 36 3.1.2 K t qu xác ñ nh t l gà nghi m c Newcastle qua vi c m khám 39 gà ch t t i ch Hà V 3.2 K t qu phân l p giám ñ nh virus Newcastle t gà b nh lưu 40 thông t i ch Hà V 3.2.1 K t qu phân l p virus phôi tr ng t m u gà ch t nghi m c Newcastle 40 3.2.2 K t qu giám ñ nh virus Newcastle b ng ph n ng HI 47 3.3 Xác ñ nh hàm lư ng kháng th Newcastle c a gà lưu thông t i ch Hà V 3.3.1 50 Xác ñ nh hàm lư ng kháng th Newcastle c a gà lưu thơng t i ch Hà V theo tháng u tra 3.3.2 50 K t qu xác ñ nh hàm lư ng kháng th Newcastle c a ñàn gà lưu thông t i ch Hà V theo gi ng gà 3.3.3 52 K t qu xác ñ nh hàm lư ng kháng th Newcastle c a gà lưu thông t i ch Hà V theo hư ng s n xu t 3.3.4 55 K t qu xác ñ nh hàm lư ng kháng th Newcastle c a ñàn gà lưu 57 thơng t i ch Hà V theo đ a phương 3.4 K t qu xác ñ nh hàm lư ng kháng th ch ng Newcastle m t s ñàn gà ni t i huy n Thư ng Tín 60 K T LU N – ð NGH 64 K t lu n 64 ð ngh 64 TÀI LI U THAM KH O Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 66 v DANH M C B NG STT 3.1 Tên b ng Trang T ng s gia c m s s n ph m gia c m ki m tra t i ch Hà V (t tháng năm 2012 ñ n tháng năm 2013) 37 3.2 K t qu m khám gà ch t t i ch Hà V 39 3.3 K t qu phân l p virus phôi tr ng t m u gà ch t nghi m c Newcastle t i ch Hà V 3.4 K t qu xác ñ nh th i gian gây ch t phôi c a virus t b nh ph m gà nghi m c Newcastle 3.5 41 45 K t qu xác ñ nh t l virus gây ngưng k t h ng c u c a m u phân l p t gà nghi m c Newcastle 46 3.6 K t qu giám ñ nh virus Newcastle b ng ph n ng HI 47 3.7 T ng h p ch tiêu phân l p, giám ñ nh virus t m u gà ch t nghi Newcastle t i ch Hà V 3.8 49 K t qu xác ñ nh hàm lư ng kháng th Newcastle c a gà lưu thông t i ch ñ u m i gia c m Hà V theo tháng ñi u tra ( t tháng năm 2012 ñ n tháng năm 2013) 3.9 K t qu xác ñ nh hàm lư ng kháng th Newcastle c a gà lưu thông t i ch Hà V theo gi ng gà 3.10 51 53 K t qu xác ñ nh hàm lư ng kháng th Newcastle c a ñàn gà lưu thông t i ch Hà V theo hư ng s n xu t 56 3.11 M c ñ mi n d chch ng Newcastle c a gà theo ñ a phương 58 3.12 K t qu xác ñ nhhàm lư ng kháng th ch ng Newcastle c a m t s đàn gà ni t i huy n Thư ng Tín Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 61 vi DANH M C HÌNH STT Tên hình 3.1 Phơi ch t virus Nercastle phơi đ i ch ng 3.2 Trang T l kháng th Newcastle c a đàn gà lưu thơng t i ch Hà v theo tháng ñi u tra 3.3 56 Bi u di n t l kháng th ch ng b nh Newcastle c a gà theo ñ a phương 3.6 54 T l kháng th Newcastle c a đàn gà lưu thơng t i ch Hà V theo hư ng s n xu t 3.5 52 T l kháng th Newcastle c a đàn gà lưu thơng t i ch Hà V theo gi ng gà 3.4 50 59 Bi u di n t l kháng th ch ng Newcastle c a m t s đàn gà ni t i huy n Thư ng Tín Trư ng ð i h c Nơng nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 62 vii DANH M C CÁC CH VI T T T ARN : Acid Ribonucleic ATTP : An toàn th c ph m B NN PTNT : B Nông nghi p Phát tri n nông thôn HA : Hemagglutination test HI : Hemaggutination Inhibition test HN : Heamagglutinin – Neuraminidase MTD : Mean Death Time EID50 :50 precent Embryo infective dose CPI : Intracerebral pathogenicity index in day-old chicks IVPI : Intravenous pathogenicity index in week old chickens ELD50 : 50 precent Embryo lethaldose LD50 : 50 percent lethal dose HC : H ng c u VR : Virus RT-PCR : Reverse Transcription Polimerace Chain Reaction (-) : Âm tính (+) : Dương tính Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… viii M ð U Tính c p thi t c a ñ tài Trong nh ng năm g n chăn ni gia c m chi m m t v trí quan tr ng, chu kỳ s n xu t ng n, t o s n ph m th c ph m giàu dinh dư ng phù h p v i xu th tiêu dùng hi n nay…Ngành chăn nuôi gia c m nư c ta ngày phát tri n góp ph n khơng nh q trình phát tri n ngành nơng nghi p c a nư c nhà Hàng năm chăn nuôi gia c m cung c p m t kh i lư ng th c ph m ñ ng th sau chăn ni l n Nó tr thành ngu n thu nh p quan tr ng v i h nông dân m t nh ng ngh có tác d ng xóa đói gi m nghèo nhanh, góp ph n chuy n d ch c u n n kinh t nông nghi p Thành ph Hà N i sau m r ng v i di n tích 3.344,47 km2, dân s 6.233.940 ngư i, bao g m 29 qu n, huy n, th xã m t nh ng t nh thành ph có s lư ng gia súc, gia c m l n nh t c nư c: d ki n tháng ñ u năm 2012 ñàn gia c m 19,18 tri u con, ñàn l n 1,39 tri u con, đàn trâu bị 169,19 nghìn con.( T ng c c th ng kê: tình hình kinh t - xã h i thành ph Hà N i tháng ñ u năm 2012) Cùng v i s ñi lên c a ngành chăn ni nói chung ngành chăn ni gia c m nói riêng, s phát tri n kinh doanh, buôn bán gi t m gia c m khơng tránh kh i tình tr ng làm lây lan d ch b nh n u khơng đư c ki m soát ch t ch ð c bi t v i u ki n khí h u nhi t đ i nóng m v i s đa d ng kinh doanh, bn bán gà nư c ta thu n l i cho nh ng b nh truy n nhi m nguy hi m b nh Cúm gia c m, Newcastle, Gumboro, Marek, T huy t trùng…phát tri n gây nhi u thi t h i M t khác Hà N i trung tâm Chính tr - Kinh t c a c nư c, nơi tiêu th s lư ng l n gia c m s n ph m gia c m; có nhi u tr c đư ng giao thơng quan tr ng giao lưu v i phía B c phía Nam, đư ng v n chuy n s lư ng l n gia c m ð c bi t vi c v n chuy n l u gia c m t biên gi i phía Trư ng ð i h c Nơng nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… B ng 3.10 K t qu xác ñ nh hàm lư ng kháng th Newcastle c a đàn gà lưu thơng t i ch Hà V theo hư ng s n xu t S m u Hư ng s n xu t ki m tra (con) K t qu HI Hi u giá T l HI trung khơng có bình (log2) kháng th (%) T l T T l T l HI8log2 HI≥3log2 (%) ≤8log2 (%) (%) (%) Gà h u b lo i 60 3,83±2,18 8,33 20 68,34 3,33 71,67 60 3,8±1,97 5,00 23,33 70 1,67 71,67 60 6,15±1,47 0 95 100 th i Gà th t Gà đ lo i Hình 3.4 T l kháng th Newcastle c a đàn gà lưu thơng t i ch Hà V theo hư ng s n xu t Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 56 Theo nghiên c u c a chúng tơi gà th t gà ch y u ni cơng nghi p nên đ tu i t 45 – 50 ngày tu i, gà h u b lo i th i gà chu n b ñ thư ng gà 18 tu n tu i, gà ñ lo i th i nh ng gà già ñã h t kỳ ñ , s n lư ng tr ng th p, thư ng ñư c ni t đ n 1,5 năm T k t qu ki m tra hàm lư ng kháng th ch ng Newcastle c a gà nh n th y gà đư c ni theo hư ng s n xu t khác hàm lư ng kháng th khác M c ñ bi n ñ ng thương ñ i l n ñ c bi t gi a gà th t gà ñ lo i dao ñ ng t 3,8 ñ n 6,15 log2 Trong đó, hàm lư ng kháng th ch ng Newcastle trung bình c a gà đ lo i cao nh t 6,15±1,47còn c a gà th t th p nh t 3,8±1,97 Nguyên nhân có s bi n ñ ng gà m i l a tu i đ u có nguy nhi m b nh, gà nh t l m c b nh cao, hàm lư ng kháng th b o h th p D a vào hình 3.3: Chúng nh n th y T l % kháng th ñ kh b o h c a gà theo hư ng s n xu t khác khác dao ñ ng t 71,67 ñ n 100% Trong đó, gà đ lo i có hàm lư ng kháng th ñ kh b o h ch ng Newcastle cao nh t ñ t 100%, gà ñ lo i th i ch y u gà ñã h t kỳ ñ , s n lư ng tr ng th p, q trình ni đ phịng b nh ngư i chăn ni đ u tr ng t i công tác làm vacxin cho gà v y hàm lư ng kháng th gà thư ng cao Gà h u b lo i th i gà th t có t l % kháng th ñ kh b o h 71,67% ði u cho th y s lư ng gà khơng có kh b o h v i b nh Newcastle cịn tương đ i l n gà h u b gà th t 3.3.4 K t qu xác ñ nh hàm lư ng kháng th Newcastle c a đàn gà lưu thơng t i ch Hà V theo ñ a phương ð ñánh giá m c ñ c a gà theo ngu n g c xu t x chúng tơi ti n hành u tra ngu n g c c a gà ñư c mang đ n ch tiêu th sau l y máu ch t huy t làm ph n ng HI ñ kh o sát hàm lư ng kháng th ch ng Newcastle c a gà ñ a phương khác K t qu ñư c th hi n b ng 3.11 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 57 B ng 3.11 M c ñ mi n d chch ng Newcastle c a gà theo ñ a phương K t qu HI S T l m u HI trung khơng ki m bình có tra ð a m Hi u giá (log2) kháng T l T l T l T l HI8log2 HI≥3log2 (%) (%) (%) (%) th (%) Hà N i 60 3,85±2,27 6,7 25,0 66,6 1,7 68,3 B c Giang 60 4,39±2,42 3,3 16,7 73,3 6,7 80,0 B c Ninh 60 4,05±2,39 6,7 18,3 71,7 3,3 75,0 Hà Nam 60 4,13±2,3 6,7 13,3 76,7 3,3 80,0 H i Phòng 60 4,57±2,64 8,3 18,3 68,4 5,0 73,4 Thanh Hóa 60 3,82±2,22 10,0 20,0 70,0 70,0 ð ng Nai 60 5,73±1,96 6,7 86,6 6,7 93,3 Trung Qu c 60 6,45±1,27 0 95,0 5,0 100 nh p l u Qua b ng 3.11 cho th y: gà đ a phương khác t l hàm lư ng kháng th ch ng Newcastle máu gà khác dao ñ ng t 3,82 đ n 6,45 log2 Trong đó, hi u giá HI bình quân cao nh t gà nh p l u t Trung Qu c 6,45±1,27 Hàm lư ng kháng th ch ng Newcastle trung bình máu gà t nh Hà N i, B c Ninh, B c Giang, Hà Nam, H i Phịng tương đ i cao, cịn th p nh t Thanh Hóa (3,82±2,22) Theo chúng tơi đư c bi t Hà N i, B c Giang, B c Ninh, Hà Nam, H i Phịng t nh có u ki n khí h u, phương th c chăn ni tương ñ i gi ng nhau, h u trang tr i đ u đư c ni theo mơ hình an tồn sinh h c, d ch b nh đư c ki m sốt ch t ch hơn, mơ hình trang tr i đư c b trí h p lý, quy trình chăn ni đ m b o hàm lư ng kháng th trung bình cao t nh khác Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 58 Hình 3.5 Bi u di n t l kháng th ch ng b nh Newcastle c a gà theo ñ a phương D a vào b ng k t qu 4.11 hình 4.4 chúng tơi nh n th y t l % hàm lư ng kháng th ch ng Newcastle ñ kh b o h c a gà ñ a phương khác dao ñ ng t 68,3 ñ n 100% Hàm lư ng kháng th ñ kh b o h c a gà nh p l u t Trung Qu clà cao nh t 100% Th p nh t gà có ngu n g c t Hà N i (68,3%), hàm lư ng kháng th ñ kh b o h ch ng b nh Newcastle c a gà có xu t x t t nh: B c Giang (80%), B c Ninh (75%), Hà Nam (80%)có t l tương đương Tình tr ng bn bán gà ñ lo i th i nh p l u t Trung Qu c t i ch Hà V tháng cu i năm 2012 v n nh n ñư c s quan tâm c a nhi u ban ngành c p c a ngư i dân Theo ơng C n Xn Bình – Chi c c trư ng Chi c c Thú y Hà N i cho bi t: gà ñ lo i th i ch y u gà ñã h t kỳ ñ , s n Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 59 lư ng tr ng th p, q trình ni đ phịng b nh ngư i chăn ni tiêm phịng nhi u lo i vacxin, s d ng nhi u kháng sinh đ phịng b nh Do đó, s gà đ lo i th i nh p l u có nguy mang m m b nh cao gây m t v sinh an toàn th c ph m v i hàm lư ng t n dư kháng sinh vư t m c cho phép gây nh hư ng t i s c kh e c a ngư i tiêu dùng Chính v y, đ b o v s c kh e ngư i tiêu dùng, ngăn ch n tình tr ng gia c m nh p l u vi c làm r t c n thi t Tuy nhiên tháng ñ u năm 2013 vi c áp d ng gi i pháp tăng cư ng qu n lý, si t ch t kinh doanh t i ch Hà V ñã mang l i hi u qu rõ ràng K t qu đ a bàn ch khơng cịn bóng dáng c a gà nh p l u Theo phó chi c c trư ng Qu n lý th trư ng Hà N i, ông Nguy n ð c L c cho bi t, g n ñây vi c v n chuy n, tiêu th gà nh p l u, không rõ ngu n g c, khơng đ m b o ATTP ñ a bàn thành ph b n đư c ki m sốt Khơng cịn tình tr ng v n chuy n gia c m l u b ng ô tô tr ng t i l n (Ngu n: báo Ti n phong) T i ch ñ u m i gia c m Hà V (Thư ng Tín), 16 h kinh doanh gia c m l u nh p l u trư c ñây ñã “b ngh ” T t c h kinh doanh gia c m Hà V ký cam k t “nói khơng” v i gà l u Vi c bán ch y gà m, chưa đ m b o v sinh chăn ni làm cho tình tr ng lây lan d ch b nh ngày tăng cao 3.4 K t qu xác ñ nh hàm lư ng kháng th ch ng Newcastle m t s đàn gà ni t i huy n Thư ng Tín Nh ng năm qua chăn ni gà t p trung v i quy mô l n gia đình, h u h t trang tr i nuôi gà s n xu t gi ng, nuôi th t, ni l y tr ng phát tri n r t m nh nhi u ñ a phương có Thư ng Tín, Hà N i Trong q trình chăn ni gà, b nh Newcastle m t b nh Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 60 truy n nhi m thư ng x y gây t n th t l n v kinh t cho ngư i chăn nuôi Hơn n a, ch ñ u m i gia c m Hà V , nơi buôn bán gia c m l n c a mi n B c n m ñ a bàn c a huy n Thư ng Tín ðây nơi d làm phát sinh m m b nh lây nhi m cho đàn gà có virus Newcastle ð phịng b nh Newcastle có hi u qu cho đàn gà, ngồi vi c th c hi n t t v sinh phòng b nh, vi c dùng vacxin t o mi n d ch cao m t vi c làm r t c n thi t Vì v y, đ kh o sát, đánh giá hàm lư ng kháng th ch ng Newcastle c a m t s đàn gà đư c ni t i Thư ng Tín, th i gian t tháng năm 2012 đ n tháng năm 2013, chúng tơi ti n hành l y máu c a m t s đàn gà lai t p, gà tam hồng, gà Lương Phư ng, gà đ gi ng ISA Brown ni m t s trang tr i thu c huy n Thư ng Tín thành ph Hà N i đ ki m tra hàm lư ng kháng th Newcastle K t qu thu ñư c ñư c th hi n b ng 3.12 B ng 3.12 K t qu xác ñ nhhàm lư ng kháng th ch ng Newcastle c a m t s đàn gà ni t i huy n Thư ng Tín K t qu HI S m u Gà Lương Phư ng Gà tam hồng Gà đ gi ng ISA Brown bình qn T l khơng T l (log2) có kháng th HI