BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY NGUYÊN PHAN ĐÌNH THUẬN XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN LOÀI, SỰ PHÂN BỐ VÀ KHẢ NĂNG NHIỄM VIRUS VIÊM NÃO NHẬT BẢN CỦA GIỐNG MUỖI CULEX TẠI CÁC TỈNH TÂY NGUYÊN, 2006 – 2009 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Buôn Ma Thuột - 2009 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY NGUYÊN …………  ………… PHAN ĐÌNH THUẬN TÊN ĐỀ TÀI XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN LOÀI, SỰ PHÂN BỐ VÀ KHẢ NĂNG NHIỄM VIRUS VIÊM NÃO NHẬT BẢN CỦA GIỐNG MUỖI CULEX TẠI CÁC TỈNH TÂY NGUYÊN, 2006 – 2009 Chuyên ngành: Sinh học Thực nghiệm Mã số: LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS. ĐẶNG TUẤN ĐẠT Buôn Ma Thuột, năm 2009 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam ñoan: ñây là công trình nghiên cứu của riêng tôi, các số liệu và kết quả nghiên cứu nêu trong luận văn là trung thực, ñược các ñồng tác giả cho phép sử sụng và chưa từng ñược công bố trong bất kỳ một công trình nào khác. HỌC VIÊN Phan Đình Thuận Lời cảm ơn Hoàn thành luận văn em xin chân thành cảm ơn: • BGH Trường Đại học Tây Nguyên ñã tạo ñiều kiện cho em trong suốt thời gian học tập và quá trình thục hiện luận văn. • Khoa Sau ñại học, Khoa KHTN & CN Trường Đại học Tây Nguyên • PGS.TS. Đặng Tuấn Đạt - Viện trưởng Viện VSDT Tây Nguyên ñã ñộng viên và khích lệ em trong quá trình học tập và cũng là thầy trược tiếp hướng dẫn em hoàn thành luận văn này. • Khoa Côn Trùng và Kiểm dịch, Khoa Virus Viện VSDT Tây Nguyên • TS. Nguyễn Văn Châu và Khoa Côn trùng Viện Sốt rét - KST - CT Trung Ương. • PGS.TS. Phan Thị Ngà và labo Virus Viện VSDT Trung Ương ñã giúp ñỡ về chuyên môn kỹ thuật phân lập virus VNNB. • Chân thành cảm ơn Trung tâm Y học dự phòng các tỉnh Tây Nguyên, Ủy Ban nhân dân và trạm Y tế các xã cùng nhân dân ñịa phương ñã giúp ñỡ nhiều mặt khi ñến ñịa phương thực hiện ñề tài. HỌC VIÊN PHAN ĐÌNH THUẬN MỤC LỤC Trang . MỞ ĐẦU………………………………………………………………. 1 Chương 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU…………………………………… 3 1.1. Nghiên cứu về muỗi Culex và vai trò truy ền bệnh VNNB của chúng. 3 1.1.1. Tình hình nghiên cứu trên thế giới 4 1.1.2. Tình hình nghiên cứu ở Việt Nam và khu vực Tây Nguyên 6 1.2. Những nghiên cứu về virus viêm não Nhật Bản 11 1.2.1. Nghiên cứu về virus VNNB trên thế giới 11 1.2.2. Nghiên cứu về virus viêm não Nhật Bản ở Việt Nam 12 1.3. Tình hình bệnh VNNB trên thế giới, Việt Nam và Tây Nguyên 15 1.4. Một số yếu tố tự nhiên và xã hội ở Tây Nguyên 20 Chương 2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU……………… ………… 24 2.1. Địa ñiểm và thời gian nghiên cứu 24 2.1.1. Địa ñiểm nghiên cứu 24 2.1.2. Đặc ñiểm sinh cảnh tại các ñiểm nghiên cứu 26 2.1.3. Thời gian nghiên cứu 29 2.2. Đối tượng và vật liệu nghiên cứu 29 2.2.1. Đối tượng 29 2.2.2 . Thiết bị thu thập, ñịnh loại và bảo quản muỗi 29 2.2.3. Vật liệu phân lập virus 30 2.3. Phương pháp nghiên cứu 31 2.3.1. Phương pháp thu thập và ñịnh loại muỗi Culex 31 3.3.1.1. Phương pháp thu thập muỗi Culex 31 2.3.1.2. Phương pháp ñịnh loại muỗi Culex 32 2.3.2. Kỹ thuật phân lập virus 32 2.3.2.1. Kỹ thuật phân lập virus viêm não Nhật Bản từ muỗi 32 2.3.2.2. Định danh virus bằng kỹ thuật RT – PCR 33 2.4. Xử lý số liệu 33 Chương 3. KẾT QỦA VÀ BÀN LUẬN 34 3.1. Thành phần, sự phân bố các loài muỗi Culex ở Tây Nguyên 34 3.1.1. Kết quả thu thập muỗi và bọ gậy tại các ñiểm nghiên cứu 34 3.1.2. Thành phần và phân bố của các loài muỗi Culex ở Tây Nguyên (2006 - 2009) 36 3.1.3. Các loài muỗi Culex có vai trò truyền bệnh ñã ñược ghi nhận ở Tây Nguyên 38 3.1.4. Đặc ñiểm sinh thái một số loài muỗi Culex chủ yếu truyền bệnh VNNB ở Tây Nguyên 39 3.1.4.1. Mật ñộ, tập tính hoạt ñộng, ổ bọ gậy Culex gelidus 39 3.1.4.2. Mật ñộ, tập tính hoạt ñộng, ổ bọ gậy Cx. tritaeniorhynchus 41 3.1.4.3. Mật ñộ, tập tính hoạt ñộng, ổ bọ gậy loài Culex vishnui 43 3.2. Kết quả phân lập virus từ muỗi ở Tây Nguyên 45 3.2.1. Kết quả phân lập virus từ một số loài muỗi Culex thu thập ở Tây Nguyên, ( 2006 – 2009) 45 3.2.2. Kết quả phân lập virus VNNB từ một số loài muỗi Culex ở Tây Nguyên năm 2006 47 3.2.3. Kết quả phân lập virus VNNB từ một số loài muỗi Culex ở Tây Nguyên năm 2007 51 3.2.4. Kết quả phân lập virus VNNB từ một số loài muỗi Culex ở Tây Nguyên năm 2009 53 3.2.5. Kết quả phân lập chủng virus viêm não Nam Định từ muỗi Culex ở Tây Nguyên 53 3.2.6. Kết quả phân lập virus viêm não theo thành phần loài muỗi thuộc giống Culex ở Tây Nguyên (2006 - 2009) 54 3.2.7. Kết quả phân lập virus viêm não theo ñiểm nghiên cứu ở Tây Nguyên, (2006 - 2009) 55 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ…………………………….……………… 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO 58 PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC BẢNG BIỄU Trang Bảng 1.1: Số bệnh nhân viêm não/100.000 dân ở Việt Nam, năm 2006 19 Bảng 1.2: Số ñơn vị hành chính Tây Nguyên 20 Bảng 1.3: Dân số các tỉnh Tây Nguyên 22 Bảng 3.1: Số lượng muỗi và bọ gậy Culex ñã thu thập tại thực ñịa 34 Bảng 3.2: Số lượng loài muỗi Culex thu thập tại các ñiểm nghiên cứu 36 Bảng 3.3: Những loài muỗi Culex có khả năng truyền bệnh ở TN 38 Bảng 3.4: Mật ñộ Culex gelidus tại các ñiểm nghiên cứu 40 Bảng 3.5: Mật ñộ Culex tritaeniorhynchus tại các ñiểm nghiên cứu 42 Bảng 3.6: Mật ñộ Culex vishnui tại các ñiểm nghiên cứu 44 Bảng 3.7: Kết quả phân lập virus từ muỗi thu thập tại các ñiểm nghiên cứu ở Tây Nguyên 46 Bảng 3.8: Kết quả phân lập virus VNNB từ muỗi Culex thu th ập năm 2006 47 Bảng 3.9: Kết quả phân lập virus VNNB từ muỗi Culex thu thập năm 2007 51 Bảng 3.10: Kết quả phân lập virus VNNB từ muỗi Culex thu th ập năm 2009 53 Bảng 3.11: Kết quả phân lập virus viêm não Nam Định từ muỗi (2006-2009) 54 Bảng 3.12: Kết quả phân lập virus viêm não từ một số loài muỗi Culex 54 Bảng 3.13: Kết quả phân lập virus viêm não từ muỗi theo ñiểm nghiên cứu 55 DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Trang Hình 1.1. Muỗi Culex - vật trung gian truyền bệnh viêm não Nhật Bản 3 Hình 1.2. Hình ảnh của virus viêm não Nhật Bản (Japanese Encephalitis Virus) 11 Hình 1.3. Tình hình viêm não virus ở Việt Nam 1996-2006 18 Hình 2.1. Vị trí các ñiểm ñiều tra muỗi Culex ở Tây Nguyên năm 2006 - 2009 25 Hình 3.1. Kết quả ñịnh loại virus VNNB phân lập từ muỗi Culex ở Gia Lai, năm 2006 với cặp mồi ñặc hiệu virus VNNB 48 Hình 3.2. Kết quả ñịnh loại virus VNNB phân lập từ muỗi Culex ở Kon Tum, năm 2006 với cặp mồi ñặc hiệu virus VNNB 49 Hình 3.3. Kết quả ñịnh loại virus VNNB phân lập từ muỗi Culex ở Đắk Nông, năm 2006 với cặp mồi ñặc hiệu virus VNNB 50 Hình 3.4. Kết quả ñịnh loại virus VNNB phân lập từ muỗi Culex ở Đắk Nông, 2007 với cặp mồi ñặc hiệu virus VNNB 51 Hình 3.5. Kết quả ñịnh loại virus VNNB phân lập từ muỗi Culex ở Kon Tum, 2007 với cặp mồi ñặc hiệu virus VNNB 52 NHỮNG CHỮ VIẾT TẮC TRONG BÁO CÁO Ae: Aedes Ar: Armigeres bq: Bẫy quạt bñ: Bẫy ñèn CDC: Centers for Disease Control Cx: Culex DL : Đắk Lắk DN : Đắk Nông GL : Gia Lai KT : Kon Tum LĐ : Lâm Đồng KST- CT : Ký sinh trùng- Côn trùng NĐ : Nam Định MĐ : Mật ñộ MĐM: Mật ñộ muỗi RT - PCR: Reverse transcription - Polymerase Chain Reaction TN : Tây Nguyên TT: Thị trấn TX: Thị xã TƯ : Trung Ương VSDT : Vệ sinh Dịch tễ VNNB: Viêm não Nhật Bản 1 MỞ ĐẦU Muỗi Culex có thành phần loài khá phong phú, chúng phân bố rộng ở khắp nơi trên thế giới [7]. Sự hiện diện các loài thuộc nhóm côn trùng này có khả năng truyền bệnh ở các ñịa phương là dấu hiệu cảnh báo có thể xuất hiện hoặc lưu hành nguồn bệnh. Hiện nay, một số bệnh ñược xác ñịnh là do muỗi truyền như bệnh sốt Dengue/sốt xuất huyết Dengue (SD/SXHD), bệnh giun chỉ, bệnh viêm não Nhật Bản (VNNB) trong ñó bệnh VNNB do muỗi Culex truyền có ý nghĩa quan trọng, ảnh hưởng lớn ñến sức khoẻ cộng ñồng ở nhiều quốc gia và khu vực. Trên thế giới, bệnh VNNB ñã biết từ năm 1871. Bệnh lưu hành ở vùng Châu Á, Thái Bình Dương. Tại Việt Nam, từ năm 1959 ñã phát hiện ñược hội chứng viêm não ở trẻ em, bệnh ñã xảy ra trên ñịa bàn rộng và trong nhiều năm nay [28]. Trên ñịa bàn các tỉnh Tây Nguyên, trong các năm 2000-2001 có nhiều trường hợp có hội chứng não cấp. Trong ñó ñã xác ñịnh ñược 21 trường hợp VNNB, phân bố rải rác trong thời gian từ tháng 4 ñến tháng 10 tại tỉnh Gia Lai, Kon Tum và Đắk Lắk [7]. Từ ñó ñến nay, hàng năm bệnh viêm não Nhật Bản vẫn ñược ghi nhận ở một số ñịa phương của các tỉnh trong khu vực. Theo số liệu ñiều tra của Viện Vệ sinh dịch tễ Tây Nguyên, từ năm 2002 ñến 2005 trên ñịa bàn Tây Nguyên ñã phát hiện ñược trên 283 trường hợp viêm não trong ñó có 50 trường hợp tử vong. Đặc biệt, ở tỉnh Gia Lai ñã phát hiện ñược 46 trường hợp viêm não Nhật Bản từ 74 bệnh phẩm từ bệnh nhân có hội chứng não cấp (HCNC) bằng kỹ thuật MAC-ELISA. Những năm gần ñây, ñã có một số công trình ñiều tra nghiên cứu về vector truyền bệnh cũng như nghiên cứu tình hình dịch tễ bệnh VNNB ở khu vực Tây Nguyên ñã ñược công bố, như công trình nghiên cứu “Điều tra khu hệ côn trùng y học ở Tây Nguyên” của Đ ặng Tuấn Đạt, Nguyễn Ái Phương, [...]... vector và virus truy n b nh VNNB c n ư c ti p t c Do ó, chúng tôi xây d ng và th c hi n Tây Nguyên là i u c n thi t tài: Xác nh thành ph n loài, s phân b và kh năng nhi m virus viêm não Nh t B n c a m t s loài mu i Culex t i các t nh Tây Nguyên, 2006 - 2009 v i các m c tiêu sau: 1 Xác nh thành ph n loài, phân b c a m t s loài mu i Culex các t nh thu c khu v c Tây Nguyên 2 Phát hi n kh năng nhi m virus viêm. .. n i thành nhà M t [24] Tây Nguyên, năm 1993 các tác gi Phương, Lý Th Vi Hương và c ng s Culicinae Trong h ó gi ng ã xác ng Tu n t, Nguy n Ái nh có 41 loài mu i thu c phân Aedes có 16 loài, Armigeres: 8 loài, Mansonia: 1 loài, Orthopodomya: 1 loài, Malaya: 1 loài, Toxorhynchites: 3 loài, Tripteroides: 2 loài và c bi t gi ng Culex có 9 loài [3] M c dù ã có m t s công trình nghiên c u v thành ph n, phân. .. c a mu i Culex khu v c trong nh ng năm trư c ây Song, s chưa nhi u, s lư ng loài ã ư c xác ph n nh m t cách y i m i u tra nh và s phân b c a chúng chưa c a các loài mu i thu c gi ng Culex Nguyên Vì v y vi c m r ng di n i u tra nh m thu th p và xác y Tây nh ư c hơn thành ph n loài, s phân b c a chúng là th c s c n thi t 11 1.2 Nh ng nghiên c u v virus viêm não Nh t B n 1.2.1 Nghiên c u v virus VNNB... s b nh nhân viêm não Nh t B n Nguyên có chi u hư ng gia tăng các y u t liên quan, a bàn Tây ây là lý do quan tr ng cho s nghiên c u c bi t là xác nh và phát hi n các loài mu i Culex n kh năng nhi m vius c a gi ng mu i Culex là m t trong Trong ó chú ý nh ng m c xích trong chu kỳ t nhiên c a b nh VNNB t i khu v c Tây Nguyên 1.4 M t s y u t t nhiên và xã h i 1.4.1 V trí Tây Nguyên a lý Tây Nguyên là vùng... i c a Tây Nguyên có nh hư ng tr c ti p và gián ti p vector b nh viêm não Nh t B n Tây Nguyên n thành ph n loài, phân b 24 Chương 2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U 2.1 a i m và th i gian nghiên c u 2.1.1 a i m nghiên c u Các i m ư c ch n nghiên c u khu v c (huy n, t nh) Sinh i di n cho sinh c nh c trưng c a a c nh c a i m nghiên c u phù h p v i s t n t i và phát tri n c a các loài mu i Culex, b nh viêm não Nh... dòng C6/36 b ng virus viêm não Nam phương pháp lát c t siêu m ng sau ó gây nhi m 48 gi viêm não Nam nh nhân lên trong bào tương t bào, là ã xác nh virus c trưng i n hình c a virus có v t li u di truy n RNA v.v…[21] Nh ng năm sau ó, virus viêm não Nam nh ã ư c phân l p Gia Lai [19] 1.3 Tình hình b nh VNNB trên th gi i, Vi t Nam và Tây Nguyên B nh viêm não Nh t B n là b nh nhi m virus c p tính làm t... virus không gi ng trình t c a các ch ng virus ã công b trên th gi i và các tác gi là Virus Nam Nam c p nh n nh (N - theo tên ã t tên a phương c a b nh nhân) [18] Virus nh - m t virus Arbo m i ư c phân l p t b nh nhân h i ch ng não mi n B c Vi t Nam năm 2002, s lưu hành c a virus này ã ư c ghi mi n B c, mi n Trung và Tây Nguyên ã xác nh s nhân lên c a nh trên t bào Aedes albopictus dòng C6/36 b ng virus. .. ng loài mu i sau ây ã ư c xác nh là vector c a b nh viêm não Nh t B n và ã ư c nhi u tác gi nghiên c u: Culex gelidus Theobald, 1901 có th truy n viêm não Nh t B n Malaysia và Thái Lan Theobald 1901, ã thu th p loài mu i này Perak, Malaya and Quilon, Travancore, Năm 1907, Theobald thu th p ư c n n Taipang, t tên là Culex cuneatus và và Sarawak (Borneo), ông tên là Culex bipunctata Loài mu i này phân. .. Trung Ương và Vi n VSDT Trung Ương ã ph i h p i u tra, phân l p virus t mu i trên quy mô l n, và i t i nh n nh là nhóm Culex tritaeniorhynchus, Culex vishnui có liên quan m t thi t n mùa d ch VNNB Song t t c các phân l p virus t mu i u không thành công Năm 1971, ti p t c tìm hi u vai trò truy n b nh VNNB c a mu i nư c ta Nh m xác não th c nh s liên quan gi a các loài mu i và d ch t b nh viêm a (t i... các năm 1987, 1989 thu c nhóm genotyp 3 Các ch ng phân l p t l n và mu i trong các năm 2001 và 2002 thu c nhóm genotyp 1 S xu t hi n virus VNNB genotyp 1 mi n B c Vi t Nam trong các k t qu phân l p t mu i và l n l n u tiên ư c ghi nh n [17] Năm 2002, ch ng virus Arbo m i có ký hi u 02VN208 ư c phân l p t d ch não t y c a b nh nhân có h i ch ng não c p mi n B c Vi t Nam 15 b ng dòng t bào C6/36 Virus . virus viêm não Nhật Bản của một số loài muỗi Culex tại các tỉnh Tây Nguyên, 2006 - 2009” với các mục tiêu sau: 1. Xác ñịnh thành phần loài, phân bố của một số loài muỗi Culex ở các tỉnh thuộc. …………  ………… PHAN ĐÌNH THUẬN TÊN ĐỀ TÀI XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN LOÀI, SỰ PHÂN BỐ VÀ KHẢ NĂNG NHIỄM VIRUS VIÊM NÃO NHẬT BẢN CỦA GIỐNG MUỖI CULEX TẠI CÁC TỈNH TÂY NGUYÊN, 2006 – 2009. DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY NGUYÊN PHAN ĐÌNH THUẬN XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN LOÀI, SỰ PHÂN BỐ VÀ KHẢ NĂNG NHIỄM VIRUS VIÊM NÃO NHẬT BẢN CỦA GIỐNG MUỖI CULEX TẠI CÁC