Luận văn thạc sĩ Hóa học Vũ Thị Ngân 1 ĐA ̣ I HO ̣ C QUÔ ́ C GIA HA ̀ NÔ ̣ I TRƯƠ ̀ NG ĐA ̣ I HO ̣ C KHOA HO ̣ C TƯ ̣ NHIÊN Vũ Thị Ngân XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI DƯ LƯỢNG KHÁNG SINH NHÓM PHENICOL TRONG MỘT SỐ LOẠI THỰC PHẨM TƯƠI SỐNG TRÊN ĐỊA BÀN HÀ NỘI BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ (LC/MS/MS) LUÂ ̣ N VĂN THA ̣ C SI ̃ KHOA HO ̣ C Hà Nội – 12/2011 Hà Nội - Năm Luận văn thạc sĩ Hóa học Vũ Thị Ngân 2 ĐA ̣ I HO ̣ C QUÔ ́ C GIA HA ̀ NÔ ̣ I TRƯƠ ̀ NG ĐA ̣ I HO ̣ C KHOA HO ̣ C TƯ ̣ NHIÊN Vũ Thị Ngân XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI DƯ LƯỢNG KHÁNG SINH NHÓM PHENICOL TRONG MỘT SỐ LOẠI THỰC PHẨM TƯƠI SỐNG TRÊN ĐỊA BÀN HÀ NỘI BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ (LC/MS/MS) Chuyên nga ̀ nh: Hóa phân tích M s: 604429 LUÂ ̣ N VĂN THA ̣ C SI ̃ KHOA HO ̣ C Ngƣời hƣớng dẫn: PGS.TS Nguyễn Xuân Trung Hà Nội - Năm Luận văn thạc sĩ Hóa học Vũ Thị Ngân 4 MỤC LỤC     1  12  12  12  12  12   17 1.1.2.1    17 1.1.2.2 [7] 18  20  21 1.2 Nhóm kháng sinh phenicol [9, 12, 14] 22  22  23 1.2.2.1 Chloramphenicol (C 11 H 12 Cl 2 N 2 O 5 )(CAP) 23 1.2.2.2 Thiamphenicol : (C 12 H 15 Cl 2 NO 5 S) (TAP) 27 1.2.2.3 Florfenicol: (C 12 H 14 ClFNO 4 S) (FF) 27  28 1.3. Mt s  trong phân tích t 30  30  31  31  32  33  34  36  [11] 36 ng trong HPLC [11] 37 1.3.2.4.5 Detector trong HPLC [11, 15] 38 1.3.2.5 Detector khi ph (Mass Spectrometry) [15, 17] 38  42  42  42  42 Luận văn thạc sĩ Hóa học Vũ Thị Ngân 5  43  43  43  43  44  45  45  46  48 -MS 48 -MS/MS 49  49 2.5  50  51 /MS 51  51  54  54  54  59  63  65   68  68  70  72  73  76  76 3 77  79  80  82  85 TÀI  86  Luận văn thạc sĩ Hóa học Vũ Thị Ngân 6 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ACN Acetonitrile CAP Chloramphenicol CV  FF Florfenicol GC-MS  Chromatography  Mass Spectrometry) HPLC  Chromatography) KPH  LC-MS   Mass Spectrometry) LOD  LOQ Gi MRL  MDL  Limit) SD  TAP Thiamphenicol VSATTP   Luận văn thạc sĩ Hóa học Vũ Thị Ngân 7 DANH MỤC CÁC BẢNG     29  47  51  52  52  MS/MS 53  58  62  64  69  73  75 khác nhau 75  76  78  79  80 Luận văn thạc sĩ Hóa học Vũ Thị Ngân 8 DANH M HÌNH V, BI   27  30 Hình 1 31                   CH3COOH 0,1% 47  H 2 O 48  CH3COONH 4 0,1% 48  H 2 0 49                     CH 3 COOH 0,1% 49                     CH 3 COONH 4 0,1% 49  MeOH:CH 3 COOH 0,1% = 30:70 (v/v) 51  MeOH:CH 3 COOH 0,1% = 50:50 (v/v) 52  MeOH:CH 3 COOH 0,1% = 60:40 (v/v) 52   sát MeOH:CH 3 COOH 0,1% = 70:30 (v/v) 53  sát MeOH:CH 3 COOH 0,1% = 80:20 (v/v) 53  sát MeOH:CH 3 COOH 0,1% = 90:10 (v/v) 54   57 2mL/phút58 Luận văn thạc sĩ Hóa học Vũ Thị Ngân 9 58 58 mL/phút59   63  70  . 73 Luận văn thạc sĩ Hóa học Vũ Thị Ngân 10 MỞ ĐẦU            ,             ,  coi  .      v n  .   gây      m soát      Luận văn thạc sĩ Hóa học Vũ Thị Ngân 11     an hành các               -BTS  BTS ngày 18/8/2005               0/TT-                     N 0 -BYT ngày 19/12/2007 [1, 2, 3, 4]. t nói chung và kháng sinh nói riêng,   - MS, LC-MS)    Tuy nhiên, do ,  và giá thành phân tích   pháp phân tích có                   các       Phenicol (Chloramphenicol và                 [...]... hiện ở nồng độ rất thấp Trong những năm gần đây, kỹ thuật sắc ký khối phổ đang đƣợc nghiên cứu và áp dụng khá rộng rãi đối với nhóm kháng sinh Phenicol, nhất là khi Chloramphenicol đang dần đƣợc thay thế bằng những kháng sinh thế hệ mới của nó thì việc phân tích và định lƣợng không chỉ dừng lại ở phân tích riêng CAP mà còn mở rộng sang cả nhóm kháng sinh này Trên tạp chí về sắc ký công bố năm 2009,... kết, sắc ký phân bố lỏng- lỏng và sắc ký trao đổi ion lỏng – rắn, sắc ký hấp phụ lỏng – rắn (trong đó một dạng đặc biệt là sắc ký ái lực) v.v [11] Trong LC/MS, phần sắc ký lỏng đóng vai trò tách chất để đƣa vào MS nhận biết và định lƣợng Do đó hai yếu tố quan trọng để thực hiện vai trò của HPLC cần nói tới ở đây là lựa chọn pha tĩnh (cột nhồi) và pha động cho quá trình chạy chất phân tích Trong luận... và cộng sự đã nghiên cứu thành công và áp dụng phƣơng pháp phân tích đó để kiểm soát CAP trong các mẫu sữa tại thị trƣờng Brazil bằng kỹ thuật sắc ký lỏng khối phổ Phƣơng pháp có độ thu hồi trên 95% và giới hạn phát hiện là 0,09ng/mL [30] Cục quản lý dƣợc và thực phẩm của Mỹ cũng đƣa ra một số quy trình tham khảo để phân tích và kiểm soát CAP trong một số mẫu thủy sản bằng kỹ thuật LCMS/MS vơí... Phƣơng pháp sắc ký khối phổ Nhìn chung các công trình nghiên cứu trƣớc đó với các phƣơng pháp phân tích sinh hóa, quang phổ, sắc ký lỏng, điện di mao quản đều cho ngƣỡng phát hiện cỡ ppm Nhƣng khi khối phổ ra đời, ban đầu chỉ đƣợc dùng chủ yếu cho xác định cấu trúc các chất, nhƣng khi đƣợc ghép nối với sắc ký lỏng hiệu năng cao nó đã trở thành một hệ thống có ƣu thế vƣợt trội trong phân tích các... QUAN 1.1 Kháng sinh và các vấn đề liên quan 1.1.1 Khái niệm và phân loại kháng sinh 1.1.1.1 Khái niệm kháng sinh Thuật ngữ kháng sinh đƣợc Vuillemin sử dụng từ năm 1889 Năm 1954, Turpin Velu định nghĩa: kháng sinh là chất hóa học do vi sinh vật tổng hợp hoặc hóa tổng hợp hữu cơ tạo ra, có hằng số hóa trị liệu cao, với liều lƣợng thấp có tác dụng điều trị thông qua ức chế một số quá trình sống của... fusidic: là kháng sinh duy nhất có cấu trúc steroid, cơ chế giống nhóm Macrolides, ức chế tổng hợp protein, tác dụng lên khuẩn gram dƣơng và âm - Fosfomycine: ức chế quá trình tạo vách tế bào vi khuẩn, có hoạt phổ kháng sinh rộng 9) Nhóm kháng sinh chống nấm: các kháng sinh trong nhóm này không tác dụng trên vi khuẩn, đƣợc phân theo nguồn gốc thành các nhóm sau: - Thuốc có nguồn gốc sinh học: nhóm polyens... giết thịt - Trộn kháng sinh vào trong thức ăn cho vật nuôi với mục đích bảo quản - Có thể cho thẳng kháng sinh vào thực phẩm với mục đích ức chế hay tiêu diệt vi sinh vật để bảo quản thực phẩm - Không tuân thủ tuyệt đối thời gian ngừng sử dụng kháng sinh trƣớc khi giết mổ động vật 1.1.2.5 Tình hình quản lý và sử dụng kháng sinh [7] */ Trên thế giới Theo báo cáo của Cục Thanh tra thực phẩm Canada (CFIA),... tổng kết khá lý thú về các công trình sắc ký lỏng hiệu năng cao đã đƣợc công bố: khoảng 74% các công trình thuộc về phƣơng pháp sắc ký pha liên kết, trong đó 60% là sắc ký pha đảo, phần còn lại là của sắc ký pha thƣờng 1.3.2.4.3 Pha động trong HPLC [11] Trong sắc ký pha thƣờng, pha động là các dung môi không phân cực nhƣ benzene, n-hexan, toluene… còn trong sắc ký pha đảo, pha động là các dung môi phân... Chloramphenicol (invitro) và Thiamphenicol, không độc tính nhƣ Chloramphenicol, kháng đƣợc sự vô hoạt của vi khuẩn cả trên những vi khuẩn đã kháng Chloramphenicol (đặc biệt vi khuẩn gây bệnh đƣờng ruột) Đƣợc khuyến cáo sử dụng cho gia súc cung cấp thực phẩm cho ngƣời, thay thế những kháng sinh phổ rộng mà có độc tính và tồn dƣ trong sản phẩm động vật Việc thay thế nhóm p-NO2 bằng CH3SO2 giúp loại độc... nay có nhiều loại kháng sinh mới đã đƣợc tổng hợp Để giúp cho việc định hƣớng lựa chọn kháng sinh có hiệu 12 Vũ Thị Ngân Luận văn thạc sĩ Hóa học quả trong nghiên cứu và điều trị, các nhà khoa học đã phân loại kháng sinh theo nhiều nhóm, có thể dựa theo nhiều cách: Phân loại theo nguồn gốc hoặc theo hoạt phổ kháng khuẩn, theo mức độ tác dụng hoặc theo cấu trúc hóa học Trong đó cách phân loại theo cấu . Vũ Thị Ngân XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI DƯ LƯỢNG KHÁNG SINH NHÓM PHENICOL TRONG MỘT SỐ LOẠI THỰC PHẨM TƯƠI SỐNG TRÊN ĐỊA BÀN HÀ NỘI BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ (LC/MS/MS) . Vũ Thị Ngân XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI DƯ LƯỢNG KHÁNG SINH NHÓM PHENICOL TRONG MỘT SỐ LOẠI THỰC PHẨM TƯƠI SỐNG TRÊN ĐỊA BÀN HÀ NỘI BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ (LC/MS/MS) Chuyên. Vũ Thị Ngân 12 Chƣơng 1: TỔNG QUAN 1.1 Kháng sinh và các vấn đề liên quan 1.1.1 Khái niệm và phân loại kháng sinh 1.1.1.1 Khái niệm kháng sinh t ng    