B GIÁO DC VÀ ÀO TO TRNG I HC M TP. H CHÍ MINH BÁO CÁO KHÓA LUN TT NGHIP  tài: NHÂN GING CÂY THANH LONG RUT  HYLOCEREUS POLYRHIZUS (WEBER) BRITTON & ROSE KHOA CÔNG NGH SINH HC CHUYÊN NGÀNH NÔNG NGHIP GVHD: ThS. Nguyn Trn ông Phng SVTH: ng Vn Tùng MSSV: 1053010914 NIÊN KHÓA: 2010 - 2014 Thành ph H Chí Minh, tháng 06 nm 2014 LI CM N Em xin chân thành cm n quý thy cô Khoa Công Ngh Sinh Hc trng i Hc M TP. H Chí Minh đã tn tình truyn đt kin thc và nhit tình giúp đ em trong sut thi gian em hc ti trng. Em xin chân thành cm n cô Nguyn Trn ông Phng đã nhit tình hng dn và to điu kin giúp em thc hin đ tài. Em xin cm n ch Phc, ch Vân và ch Hng đã tn tình giúp đ em trong sut quá trình thc hin đ tài. Xin chân thành cm n các bn trong phòng thí nghim đã h tr và giúp đ mình trong sut thi gian thc hin đ tài. Con xin chân thành cm n B, M, Anh, Ch vì tt c nhng gì đã làm cho con, đ con có đc nh ngày hôm nay. i DANH MC CÁC CH VIT TT 2,4-D 2,4-dichlophenoxyacetic ABA Abscisic acid BA 6- benzyl adenine B1 Thiamin CAM Crassulacean Acid Metabolism GA Gibberellic acid H. Hylocereus IAA 3-indolylacetic acid MS Murashige và Skoog NAA - naphtalenacetic acid TDZ 1 - phenyl 1 - 3 - (1,2,3 - thiadiazol - 5 - yl) - ure ii DANH MC CÁC BNG Bng 2.1: S ln và lng phân bón trong nm đu sau khi trng thanh long. 17 Bng 2.2: S ln và lng phân bón cho thanh long đc trng  đt xu và đt màu m. 18 Bng 2.3: Thông tin giá tr dinh dng ca trái thanh long rut đ hylocereus polyrhizus (weber ) britton & rose: [11] 21 Bng 3.1: nh hng ca nng đ javel và thi gian kh trùng đn mu ht thanh long. 32 Bng 3.2: nh hng ca BA và chiu cây lên s to cm chi  cây thanh long rut đ con in vitro . 33 Bng 3.3: nh hng ca BA lên s to cm chi  đon thân (1 cm) thanh long rut đ in vitro. 35 Bng 3.4: nh hng ca NAA lên s to r thanh long rut đ in vitro 36 Bng 3.5: T l cht trng đ m cây. 37 Bng 4.1: nh hng ca nng đ và thi gian kh trùng mu ht thanh long bng javel. 39 Bng 4.2: nh hng ca nng đ BA lên s to cm chi t cây thanh long con  các kích thc khác nhau in vitro. 41 Bng 4.3: nh hng ca nng đ BA lên s to cm chi t đon thân (1 cm) cây thanh long con in vitro . 46 Bng 4.4: nh hng nng đ NAA lên s to r t chi thanh long in vitro. 49 Bng 4.5: Khong tng trng ca cây thanh long nuôi cy mô trên các t l cht trng. 52 iii DANH MC HÌNH NH Hình 2.1: Cây Thanh long rut đ 10 Hình 2.2: R cây Thanh long 122 Hình 2.3: Thân và cành Thanh long 122 Hình 2.4: Hoa Thanh long rut đ 133 Hình 2.5: Qu và ht Thanh long rut đ 144 Hình 3.2: on thân Thanh long con 344 Hình 4.1: Mu sng vô trùng sau 35 ngày cy 4040 Hình 4.2: Các kích thc mu cy 40 Hình 4.3: nh hng ca BA đn s to cm chi t cây Thanh long con vi các kích thc khác nhau sau 65 ngày cy. 455 Hình 4.4: nh hng ca BA đn s  to cm chi t đon thân (1 cm)cây Thanh long rut đ con sau 65 ngày cy. 488 Hình 4.5: nh hng ca NAA đn s hình thành và sinh trng ca r Thanh long rut đ in vitro sau 50 ngày nuôi cy. 511 Hình 4.6: Sinh trng ca cây Thanh long nuôi cy mô trên các t l cht trng khác nhau sau 5 tun. 544 Hình 4.7: S sinh trng ca Thanh long rut đ ex vitro  cùng mt điu kin sau 3 tun……………………………………………………………… …54 iv MC LC 1. T VN  7 2. TNG QUAN TÀI LIU 10 2.1. Gii thiu cây Thanh long 10 2.1.1. Ngun gc, phân loi và phân b 10 2.1.2. c đim hình thái và sinh lý cây Thanh long [3] 11 2.1.3. c đim sinh thái [3] 14 2.1.4. K thut trng trt [7] 15 2.1.5. K thut chm sóc [7] 16 2.1.6. Thành phn và công dng ca Thanh long 19 2.2. Nuôi cy mô t bào thc vt 22 2.2.1 Khái nim và ng dng 22 2.2.2 Các yu t nh hng đn nhân ging 22 2.2.3 Nhng vn đ trong nhân ging [4] 24 2.2.4 Các bc trong nuôi cy mô t bào thc vt [4] 25 2.2.5 Các nghiên cu v nuôi cy cây Thanh long 27 3. VT LIU VÀ PHNG PHÁP THÍ NGHIM 29 3.1 Vt liu nghiên cu 29 3.1.1 i tng nghiên cu 29 3.1.2 iu kin nuôi cy 29 3.1.3 Môi trng nuôi cy 29 3.1.4 Thit b, dng c và hóa cht 30 3.2 Phng pháp nghiên cu 31 3.2.1 Thí nghim 1: Kho sát nng đ và thi gian kh trùng mu ca dung dch javel 31 v 3.2.2 Thí nghim 2: Kho sát nh hng ca nng đ BA lên s to cm chi t cây Thanh long con vi các kích thc khác nhau 32 3.2.3 Thí nghim 3: Kho sát nh hng ca nng đ BA lên s to cm chi t đon thân cây Thanh long con vô trùng. 34 3.2.4 Thí nghim 4: Kho sát nh hng ca NAA lên s to r in vitro cây Thanh long rut đ 35 3.2.5 Thí nghim 5: Kho sát nh hng ca các t l cht trng đn s sinh trng ca cây Thanh long rut đ nuôi cy mô 36 3.2.6 Phng pháp thu thp và x lý s liu 37 4. KT QU VÀ THO LUN 39 4.1 Thí nghim 1: Kho sát nng đ và thi gian kh trùng mu ca dung dch Javel 39 4.2 Thí nghim 2: Kho sát nh hng ca nng đ BA lên s to cm chi t cây Thanh long con vi các kích thc khác nhau. 40 4.3 Thí nghim 3: Kho sát nh hng ca nng đ BA lên s to cm chi t đon thân cây Thanh long con vô trùng 46 4.4 Thí nghim 4: Kho sát nh hng ca NAA lên s to r in vitro cây Thanh long rut đ. 49 4.5 Thí nghim 5: Kho sát nh hng ca các t l cht trng đn s sinh trng ca cây Thanh long rut đ nuôi cy mô. 52 5. KT LUN VÀ  NGH 56 5.1 Kt lun 56 5.2  ngh 56 TÀI LIU THAM KHO 57 PH LC 59 7 1. T VN  Trái cây có vai trò vô cùng quan trng trong khu phn n ca mi chúng ta vì cung cp cho c th nhiu khoáng cht, nng lng, vitamin và mt s hot cht có hot tính sinh hc. Hin nay, cây n qu đã tr thành mt trong nhng loi cây là th mnh kinh t  Vit Nam. Sn phm cây n qu ngoài cung cp cho th trng trong nc, đng thi là ngun xut khu sang các nc trong khu vc c ng nh mt s thì trng ln trên th gii nh Châu Âu và Hoa K. Do đó, cây n qu nói chung và cây Thanh long rut đ nói riêng có ý ngha to ln trong vic thúc đy s phát trin kinh t Vit Nam. Thanh long rut đ có ngun gc nhit đi, chu hn gii, nên đc trng  nhng vùng nóng, cng đ chiu sáng mnh, thích nghi trên nhiu loi đt. [1]  các vùng sinh thái khác nhau, s đt hoa ca ging Thanh long rut đ nhiu gp đôi ging Thanh long rut trng, ra 12 đt hoa/nm, ging trng ch có 6 đt hoa/nm. T l đu qu  các nm kho nghim đu đt trên 80%, cao hn ging trng (ch di 80%) và nng sut cng cao hn. Nm 2007, nng sut ging Thanh long rut đ đt t 15,7 - 20,1 kg/tr, trong khi đó ging Thanh long rut trng ch đt t 4,3 -13,5 kg/tr trong cùng điu kin kho nghim. Khi lng trung bình ca Thanh long rut đ đt 279,52 g; trong khi ging rut trng ch đt 251,17 g. [2] Mt s ch tiêu phân tích cht lng qu cho thy: tng hàm lng các cht rn hoà tan (đ brix), đng tng s, carotin ca Thanh long rut đ cao hn Thanh long rut trng. Các ch tiêu trên ln lt ca Thanh long rut đ là: 17,02; 10,78; 1,64; ca Thanh long rut trng là: 15,38; 9,21 và 0,03. [7] Chúng đc chung dùng làm món tráng ming, nc ép, sinh t hay dùng đ trang trí, có th ch bin màu thc phm, nc ung lên men, m phm nh son, phn, làm thuc tr ung th, làm ru. Giá bán trung bình 35 nghìn đng/kg (gp 1,5 - 2 ln Thanh long rut trng). [1] 8 Thanh long rut đ là loi cây n qu có giá tr xut khu, hiu qu kinh t cao và đang có nhu cu rt ln không ch  th trng nc ngoài mà ngay c  th trng trong nc. Hin nay, Hoa K đã cp mã xut khu cho Thanh long rut đ và vi k thut sn xut tiên tin Thanh long rut đ là sn phm tuân th nghiêm ngt v v sinh an toàn thc phm, d lng thuc bo v thc vt cng nh mt s yêu cu khác đã đc các đi tác xut khu M, Nht, Châu Âu tin dùng. n nay, do mi đc đa vào trng, nên din tích Thanh long rut đ  Vit Nam ch đt khong 30ha tp trung ti các tnh Bình Thun, Tin Giang, Long An và Tây Ninh. Do din tích cha nhiu nên ngay c th trng trong nc cng không cung cp đ dù giá Thanh long rut đ trong nc cao hn 5-10 ln so vi Thanh long rut trng. [16] Thanh long rut đ đc nhân ging ch yu bng phng pháp giâm cành vi thi gian và h s nhân ging thp, cây con không đng đu. Do đó, đ to ra ngun cây ging ln và đng đu cung cp cho sn xut, chúng tôi thc hin đ tài “Nhân ging in vitro cây Thanh long rut đ Hylocereus polyrhizus (Weber) Britton & Rose”. Mc tiêu ca đ tài :  tài này đc thc hin nhm mc tiêu nhân ging nhanh cây Thanh long rut đ vi s lng ln và cây con đng đu v mt kiu hình, kích thc, đc đim sinh trng và nng sut. To c s, nn tng cho các nghiên cu tip theo. 10 2. TNG QUAN TÀI LIU 2.1. Gii thiu cây Thanh long 2.1.1. Ngun gc, phân loi và phân b Cây Thanh long (tên khoa hc: Hylocereus undatus Haw., tên ting Anh là Pitahaya hay còn gi là Dragon fruit) thuc h Xng rng (Cactaceae), có ngun gc  các vùng sa mc thuc Mehico và Colombia. Thanh long đc ngi Pháp đem vào trng  Vit Nam trên 100 nm nay, nhng mi đc đa lên thành hàng hóa t thp niên 1980. [3] Cây Thanh long rut đ (Hylocereus polyrhizus (Weber) Britton & Rose) đc nhà thc vt hc- phân loi hc Nathaniel Lord Britton (1858- 1934) và nhà thc vt hc ngi M Joseph Nelson Rose (1862 -1928) đt tên vào nm 1909. Theo h thng phân loi thc vt, cây Thanh long rut đ thuc [8] Hình 2.1 Cây Thanh long rut đ Gii Plantae Ngành Magnoliophyta Lp Magnoliopsida B Caryophyllales H Cactaceae Chi Hylocereus Loài Hylocereus polyrhizus (Weber) Britton & Rose [...]... cho các cây m c m c M i n m cây cho t 3 – 4 hai t cành Trong mùa ra cành, kho ng th i gian gi a t ra cành t 40 – 50 ngày S l tu i trung bình có vùng sa ng cành trên cây t ng theo tu i cây: cây m t 30 cành, hai tu i kho ng 70 cành, ba tu i kho ng 100 cành và b n tu i có kho ng 130 cành cây 5- 6 tu i ch duy trì kho ng 150 – 170 cành Hình 2.3: Thân và cành Thanh long 12 2.1.2.3 Hoa Thanh long là cây ngày... Hòa và r i rác Thanh long m t s n i khác Bình Thu n t ng trên 20.000 hectare, Long An trên 2.500 hectare và Ti n Giang kho ng 3.000 hectare Hi n nay, n nhi u n n n m 2013, di n tích tr ng cd i d ng qu t c ta ã xu t kh u Thanh long i Riêng v i Nh t B n do ch n ki m d ch th c v t quá kh c khe nên trong nh ng n m g n ây ã ch nh p Thanh long d i d ng ông l nh.[3] 2.1.2 c i m hình thái và sinh lý cây Thanh. .. ó l y cây con trong các bình này tr ng trên cát ( 4- 5 ngày) T i 2 l n/ngày vào bu i chi u 36 Ti n hành ph i tr n ch t tr ng theo các t l cát, phân bò hoai và tro tr u khác nhau r i chuy n vào ch u tr ng Sau ó tr ng các cây Thanh long con ã tr ng 4-5 ngày trên cát vào các ch u, ch m sóc (t theo dõi s sinh tr ng c a cây trong nhà l B ng 3.5: T l ch t tr ng i 1 l n/ngày vào bu i chi u) và i m cây Nghi... p v i phân vi l ng và acid humic…x t b n l n, m i l n cách nhau 1 tu n 2.1.6 Thành ph n và công d ng c a Thanh long Ho t ch t lycopene có tác d ng ch ng ung th , ch ng lão hóa có nhi u trong các trái cây có màu nh g c, carot và Thanh long ru t Lycopene có tác d ng làm gi m b nh ung th mãn tính và b nh tim m ch vành, có hi u qu trong vi c i u tr các b nh v m t, vô sinh nam, viêm và loãng x ng Nhi u... Thanh long là này lên thì t l cây con b ch t t ng d n.[10] N m 2012, Kari R., Lukman L A., Zainuddin R và Ja’afar H ã nghiên c u và tìm ra tr c môi tr ng Thanh long ru t n y m m K t qu cho th y môi ng MS có b sung 0,5 mg/l IBA + 1 mg/l BA và môi tr mg/l IBA cho t l h t n y m m cao Tuy nhiên môi tr ng MS ch b sung 0,8 ng MS ch b sung 0,8 mg/l IBA thì cây con hình thành r t t h n.[13] 27 3 V T LI U VÀ... BA lên s t o c m ch i t c khác nhau nh chi u cao m u c y và n ng BA t i u t o c m ch i Thanh long it ng thí nghi m: các cây Thanh long ru t con có kích th c 0,5; 1; 1,5 cm vô trùng t thí nghi m 1 Môi tr ng nuôi m u: môi tr ng MS c b n + 7,5 g/l agar + 30 g/l ng, b sung BA Ph ng pháp th c hi n: Ti n hành chuy n cây Thanh long ru t c tr l nl t vào môi tr 2,0; 2,5; 3,0 mg/l Thí nghi m con (0,5; 1,0; 1,5... bình v i 3 m u trong 1 bình Th i gian ki m tra m u 40 -50 ngày Ch tiêu ánh giá: s r và chi u dái r hình thành 3.2.5 Thí nghi m 5: Kh o sát nh h tr ng c a các t l ch t tr ng ng c a cây Thanh long ru t M c ích: Xác n s sinh nuôi c y mô nh t l ch t tr ng thích h p m cây Thanh long con in vitro it ng thí nghi m: cây Thanh long hoàn ch nh in vitro cao t 3 - 5 cm, có t 5 – 7 r t thí nghi m 4 Thành ph n ch... cái l n h n s hóa b n làm gi m s m t n r Khi t khô các r s i s c vào t thông qua t m r l i m c tr l i m t cách d dàng - R khí sinh m c d c theo thân cây ph n trên không, bám vào cây ch ng giúp cây leo lên giá Nh ng r khí sinh n m g n ts i d n xu ng t 11 Hình 2.2: R cây Thanh long A: R a sinh B: R khí sinh 2.1.2.2 Thân, cành Thanh long tr ng Thân ch a nhi u n n c ta có thân, cành tr n bò trên tr (climbing... canxi, ph t pho, s t và các vitamin mà có th duy trì và thúc y m t c th kh e m nh [Morton (1987); Mahani and Halimi (2007); Ariffin et al (2009)] Các giá tr dinh d ng c a Thanh long ru t là không ch gi i h n trên trái c a nó, mà bao g m toàn b cây. [11] 20 B ng 2.3: Thông tin giá tr dinh d ng c a trái Thanh long ru t Hylocereus polyrhizus (Weber ) Britton & Rose: [11] Thành ph n Trong 100g n N 82,5- 83 c... i và s ch i hình thành 33 3.2.3 Thí nghi m 3: Kh o sát nh h ng c a n ng BA lên s t o c m ch i t o n thân cây Thanh long con vô trùng M c ích: Xác nh n ng BA t i u t o c m ch i Thanh long t o n thân it ng thí nghi m: o n thân Thanh long kích th c 1 cm vô trùng t thí nghi m 2 Môi tr ng nuôi m u: Môi tr ng MS c b n + 7,5 g/l agar + 30 g/l ng, b sung BA Ph ng pháp th c hi n: Ti n hành tách các ch i Thanh . Hình 2.1: Cây Thanh long rut đ 10 Hình 2.2: R cây Thanh long 122 Hình 2.3: Thân và cành Thanh long 122 Hình 2.4: Hoa Thanh long rut đ 133 Hình 2.5: Qu và ht Thanh long rut đ 144. ) britton & rose: [11] 21 Bng 3.1: nh hng ca nng đ javel và thi gian kh trùng đn mu ht thanh long. 32 Bng 3.2: nh hng ca BA và chiu cây lên s to cm chi  cây thanh. trng thanh long. 17 Bng 2.2: S ln và lng phân bón cho thanh long đc trng  đt xu và đt màu m. 18 Bng 2.3: Thông tin giá tr dinh dng ca trái thanh long rut đ hylocereus polyrhizus