B GIÁO DCăVẨăẨOăTO TRNGăI HC M TP. HCM   BÁO CÁO KHOÁ LUN TT NGHP  tài: SÀNG LC VI KHUN NI SINH CÓ KH NNGăKệCHăTHệCH TNGăTRNG VÀ KHÁNG NM COLLECTOTRICHUM SP. GÂY BNH TRÊN CÂY T KHOA: CÔNG NGH SINH HC CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGH VI SINH GVHD 1: ThS. Nguyn Thanh Thun GVHD 2: ThS. NguynăVnăMinh SVTH: Nguyn Th Thùy Linh MSSV: 1053010394 Khóa: 2010 ậ 2014 Tp. H Chí Minh, Tháng 05 n14 BÁO CÁO KHÓA LUN TT NGHIP LI CMăN   hoàn thành đ tài này, em xin gi li cm n đn các Thy Cô khoa Công Ngh Sinh Hc, trng i hc M Thành ph H Chí Minh đã ging dy và truyn đt kin thc cho em trong sut nhng nm va qua. Em xin gi cm n sâu sc đn thy Nguyn Thanh Thun, thy Nguy đã tn tình hng dn, ch bo cho em trong sut thi gian em thc hin đ tài. Em xin cm cô t Linh, ngi đã truyn đt nhiu kinh nghim quý báu và to điu kin cho chúng em hoàn thành tt chuyên đ thc tp tt nghip. Em xin cm n thy  , ch Võ Ngc Yn Nhi, ch Nguyn Th M Linh và các anh, ch trong phòng thí nghim đã luôn ng h, giúp đ em trong lúc làm đ tài. Bên cnh đó, tôi xin cm n các bn ca tôi, các bn trong nhóm làm đ tài và các bn sinh viên hc vic phòng thí nghim Công ngh Vi sinh đã luôn quan tâm, giúp đ tôi trong quá trình thc hin đ tài này. Cui cùng con xin cm n Cha, M, cm n gia đình đã luôn bên con, to mi điu kin tt nht đ con hoàn thành vic hc ca mình. Em xin gi li chúc sc khe đn tt c ngi thy, ngi cô đáng kính khoa Công ngh sinh hc, Trng i hc m thành ph H Chí Minh, xin chúc thy cô ngày càng gt hái đc nhiu thành công. Xin chân thành cm n. Sinh viên thc hin Nguyn Th Thùy Linh BÁO CÁO KHÓA LUN TT NGHIP SVTH: Nguyn Th Thùy Linh i MC LC DANH MC VIT TT iv DANH MC BNG v DANHăMCăSă vi DANH MC HÌNH vii DANH MC BIUă viii T VNă 1 PHN 1: TNG QUAN TÀI LIU 4 1.1 CÂY T VÀ BNHăTHÁNăTHăTRểNăCỂYăT 5 1.1.1 Tng quan v cây t 5 1.1.2 Bnhăthánăthătrênăcơyăt 6 1.2 VIăKHUNăNIăSINH 7 1.2.1 Sălc v vi khun ni sinh 8 1.2.2 Mt s hotătínhăkíchăthíchătngătrng cây trng ca vi khun ni sinh 8 1.2.3 Tình hình nghiên cu th gii 13 1.2.4 Tình hình nghiên cuătrongănc 14 PHN 2: VT LIUăVẨăPHNGăPHÁPăNGHIểNăCU 16 2.1 AăIM VÀ THI GIAN NGHIÊN CU 17 2.2 VT LIU 17 2.3 THIT B, DNG C,ăMÔIăTRNG 17 2.3.1 Thit b 17 2.3.2 Dng c 18 2.3.3 Môiătrng, hóa cht và thuc nhum 18 2.4 PHNGăPHÁPăTHệăNGHIM 19 BÁO CÁO KHÓA LUN TT NGHIP SVTH: Nguyn Th Thùy Linh ii 2.4.1 B trí thí nghim 19 2.4.2 Phngăpháp 20 2.5 PHNGăPHÁPăTHNG KÊ S LIU 42 PHN 3: KT QU NGHIÊN CU VÀ THO LUN 43 3.1 KT QU PHÂN LP VI SINH VT NI SINH 44 3.1.1 Quanăsátăđi th 44 3.1.2 Quan sát vi th 47 3.2 PHÂN LP NM COLLECTOTRICHUM SP. GÂY BNH THÁN THăTRểNăCỂYăT 49 3.2.1 Kt qu thu thp mu bnh 49 3.2.2 Kt qu phân lp nm bnh 50 3.2.3 Kt qu th nghim lây bnh nhân to 51 3.3 KT QU XÁCăNH KH NNGăC NHăNITăPHỂNăT 52 3.4 KT QU XÁCăNH KH NNGăHÒAăTANăLỂN 52 3.4.1 nh tính kh nngăhòaătanălơn 52 3.4.2 Kt qu đnhă lng hòa tan lân ca các chng vi khun th nghim 53 3.5 KTăQUăXÁCăNHăKHăNNGăSINHăIAA 55 3.6 KT QU KHO SÁT KH NNGă KHÁNGă NM COLLECTOTRICHUM SP. 57 3.7 KT QU NH DANH SINH HÓA CÁC CHNG MNH 60 3.8 KT QU TH KH NNGăTNGăTHệCHăGIA CÁC CHNG . 63 PHN 4: KT LUNăVẨă NGH 64 4.1 KT LUN 65 BÁO CÁO KHÓA LUN TT NGHIP SVTH: Nguyn Th Thùy Linh iii 4.2  NGH 65 TÀI LIU THAM KHO 66 PH LC 74 BÁO CÁO KHÓA LUN TT NGHIP SVTH: Nguyn Th Thùy Linh iv DANH MC VIT TT C. capsici Colletotrichum capsici C. nigrum Colletotrichum nigrum IAA IndolAcetic Acid MS Minimal Salt NA Nutrent Agar NB Nutrient Broth PDA Potato Dextrose Agar ppm pasts permilion OD Optical Density TSA Trypticase Soy Agar TSB Trypticase Soy Broth BÁO CÁO KHÓA LUN TT NGHIP SVTH: Nguyn Th Thùy Linh v DANH MC BNG Bng 2. 1 Xây dngăđng chun phospho 26 Bng 2. 2 Xây dng đng chun IAA 29 Bng 3. 1 Kt qu quanăsátăđi th các chng vi khun ni sinh 44 Bng 3. 2 Kt qu quan sát vi th các chng vi khun ni sinh 47 Bng 3. 3 Kt qu đnhălng hòa tan lân ca các chng 53 Bng 3. 4 KtăquăđnhălngăsinhăIAAăcaăcácăchng 55 Bngă 3.5ă ng kính vòng c ch và phnă trmă c ch nm Collectotrichum sp. ca vi khun 58 Bng 3.6 Kt qu đnh danh ca chng TL2 60 Bng 3.7 Kt qu đnh danh ca các chng TL5, TL11, TL19 61 Bng 4.1. Giá tr OD 600nm caăđng chun phospho 87 Bng 4.2. Kt qu OD 600nm xácăđnh phospho trong dch nuôi cy 87 Bng 4.3. Giá tr OD caăđthđng chun IAA 88 Bng 4.4. Kt quOD 530nm xácăđnh IAA trong dch nuôi cy 89 Bng 4.5. Kt qu đoăđng kính vòng kháng nm và phnătrmăc ch nm 90 BÁO CÁO KHÓA LUN TT NGHIP SVTH: Nguyn Th Thùy Linh vi DANHăMCăS  Săđ 2. 1 Quy trình thí nghim 19 Săđ 2.ă2ăQuyătrìnhăđnhălng phospho 27 Săđ 2.ă3ăQuyătrìnhăđnhălng IAA 30 BÁO CÁO KHÓA LUN TT NGHIP SVTH: Nguyn Th Thùy Linh vii DANH MC HÌNH Hình 1.1 Cu trúc phân t ca IAA và tryptophan 12 Hình 3. 1 Phân lp vi khun niăsinhătrênăTSAă(A),ăvƠăđaămôiătrng TSA đi chng cy dch ra cui cùng (B). 46 Hình 3.2 Hình nhăquanăsátăđi th mt s chng vi khun ni sinh trên môi trng NA 47 Hình 3. 3 Hình nh quan sát vi th ca mt s chng vi khun ni sinh di vt kính 100X 50 Hình 3.4 Mt s mu bnh thu thpăđc 51 Hình 3.5 Hình nhăquanăsátăđi th ca nm bnhătrênămôiătrng PDA 51 Hình 3.6 Bào t nm bnhăquanăsátădi kính hin vi 52 Hình 3.7 Triu chng bnh thán thătrênăqu tăđc gây bnh nhân to 51 Hình 3.8 Kh nngă phátă trin ca chng TL2 trênă môiă trngă vôă đm Ashby 52 Hình 3.9 Kh nngăhòaătanălơnăca chng TL4 trênămôiătrng Pikovskaya 53 Hìnhă3.10ănhălng phospho tan trong dch nuôi cy 54 Hìnhă3.11ănhălng kh nngăsinhăIAAătrongădch nuôi cy 57 Hình 3.12 Kh nngăđi kháng nm Collectotrichum sp. ca chng TL5 58 Hình 3.13 Th kh nngăđi kháng gia các chng TL5 và TL11 63 BÁO CÁO KHÓA LUN TT NGHIP SVTH: Nguyn Th Thùy Linh viii DANH MC BIU  Biuăđ 3.ă1ă th biu din nngăđ phospho tan dch nuôi cy các chng. . 54 Biuăđ 3.ă2ă th biu din nngăđ IAA trong dch nuôi cy các chng . 56 Biuăđ 3.3ă th biu din phnătrmăc ch nm (%) 59 Biuă đ 4.1.ă  th tngă quană gia mtă đ quang và nngă đ phospho chun 88 Biuăđ 4.2.ă th tngăquan gia mtăđ quang và nngăđ IAA chun 90 [...]... loài vi khu n n có kh t ng h p kích thích t auxin, giúp lo i b các ch t gây ô nhi ng các ch nh [47] M t s nghiên c u v vi khu n n i sinh cây nh ng, c th c hi n trong Nghiên c u c a Paul và c ng s (2013) [45] v m t s ch ng vi khu n n i sinh cây t và ho t tính kháng n m c a chúng trong phòng thí nghi m cho th y nhi u ch ng vi khu n n i sinh phân l ho t tính kháng n Bacillus và Burkholderia và s l c t cây. .. u v vi khu n n i sinh trong các loài cây n Th Thu Hà (2008) [5] trong m t s lo i c c vi khu n n i sinh p và Nguy phân l p vi khu n n i sinh trong cây khóm tr t nh Long An và huy Cao Ng t phèn huy n B n L c, n, t nh Kiên Giang Cao Ng s phát hi n vi khu n n tr ng Vi t p và c ng c s n (Oryza sativa L.) ng b ng sông C u Long Nghiên c u c H ng Hi p và p (2011) [6], phân l p và nh n di n vi khu n n i sinh. .. c v vi khu n n i sinh [58] [36], [58] [46] [26] [24] 1.2.2 M t s ho SVTH: Nguy n Th Thùy Linh ng cây tr ng c a vi khu n n i sinh 8 BÁO CÁO KHÓA LU N T T NGHI P 1.2.2.1 S c c a vi khu n Quá trình c M t trong nh ng quá trình vi sinh v t h i v i nông nghi p là quá trình c tr ng thi t y ng và phát tri n Trong nông nghi cây t c a cây tr ng c cung c p ch y u b và có h ng Trong kho ng không khí trên m có t... LU N T T NGHI P tích tr ng 54] ] Theo Isaac (1992), b Colletotrichum sp., héo Pseudomonas solanacearum do vi ] SVTH: Nguy n Th Thùy Linh 2 BÁO CÁO KHÓA LU N T T NGHI P sinh [3], [55], [56] ] ] ] ] Collectotrichum sp gây Collectotrichum b m u t c lân, sinh IAA và Collectotrichum sp gây b nh trên cây t nh danh nh ng ch ng vi khu n có ho t tính m nh SVTH: Nguy n Th Thùy Linh 3 BÁO CÁO KHÓA LU N T T NGHI... c c m mà cây tr ng có th s d c thông qua m c a chúng T các vi n c nh v sinh thái và kinh t , s m sinh h c do s liên k t gi a vi khu n v i cây tr i thi t y u, nh u mong i v i các cây tr ng có giá tr kinh t quan tr ng [2], [11], [12] quá trình c Trong quá trình c m sinh h c, khâu then ch t c a toàn b chu kh liên k t c a N2 thành NH3 nh vào ngu s ho ng ATP, ng c a ph c h p enzyme nitrogenase và enzyme... clohydric 2.4 PH NG PHÁP THÍ NGHI M 2.4.1 B trí thí nghi m D a vào m tài chúng tôi ti n hành thí nghi 2.1 M u t s ch b nh M u t b nh X lý m u X lý m u Phân l p vi sinh v t Phân l p n m b nh ng PDA n i sinh trên môi ng TSA Làm thu n Làm thu n nh danh Sàng l c vi khu n n i sinh có kh gi i lân, sinh IAA và kháng n m m, phân nh danh các ch ng có ho t tính cao Th kh a các ch ng 2 1 Quy trình thí nghi m SVTH:... r t nh ) có th s ng và cho qu liên t c trong nhi ng và phát tri n c a t là 25 t Nhi 28oC ban ngày và 18 Cây c n nhi u ánh sáng Thi u ánh sáng nh t là vào th gi m t l u trái c a cây SVTH: Nguy n Th Thùy Linh c h n th i k thích h p cho s 20o m ra hoa s làm u trái, 5 BÁO CÁO KHÓA LU N T T NGHI P ng trong vi c hình thành kh i ng và ch ng qu t th qu không m i 70%) qu hay b cong và v t quá cao (trên 80%)... ng ph bi n c s d ng làm gia v cây có giá tr kinh t và tr ng ph bi n t cay là t ng t Trong s các cây tr ng thu c h cà (Solanaceae), cây t có t m quan tr ng th hai ch sau cà chua [17] Theo Bosland và Votava (2003) qu ng Trong qu t có nhi u l i th trong vi c n u t có ch a nhi u ch t hóa h c bao g m ch t d u d d u béo, capsaicinoit, carotenoit, vitamin, protein, ch t s i và các nguyên t khoáng ch t Nhi... c Qu t có giá tr ng quan tr ng, t giúp làm gi m nhi m x và cholesterol, giàu vitamin A và C, nhi u khoáng kali, axit folic và vitamin E Trong qu a nhi ch a nhi i qu thu c h cây có múi và i c cà r t Hai nhóm ch t hóa h c quan tr ng trong t là capsaicinoit và carotenoit Capsaicinoit là alkaloit t o ra v cay cho qu t M t s cho qu ng l n carotenoit cung c p giá tr ng cao và màu s c t [54] t là cây m ,... LU N T T NGHI P 2.4.2 2.4.2.1 Phân l p vi khu n n i sinh L ym u L ym u tiên và quan tr ng nh t trong quá trình tìm ki m và phân l p m t ch ng vi sinh v t Vi c ch n l a ph s hi n di n c a ch ng vi sinh v t là cao nh t M m b o sao cho kh c l y, t t nh t là ti n hành ngay quá trình phân l p tuy n ch n [53] Vi sinh v t n c ti n hành phân l p t các lá, thân, r c a cây t kh e m nh, không sâu b nh M khi m . tài: SÀNG LC VI KHUN NI SINH CÓ KH NNGăKệCHăTHệCH TNGăTRNG VÀ KHÁNG NM COLLECTOTRICHUM SP. GÂY BNH TRÊN CÂY T KHOA: CÔNG NGH SINH HC CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGH VI SINH . bnhăthuăđc.  SƠngălcăchng vi khunăćăkhănngăcăđnhăđm,ăhòaătanălân, sinh IAA và kháng nm Collectotrichum sp. gây bnh trên cây t.  nh danh nhng chng vi khun có hot tính mnh. BÁO. KT QU NGHIÊN CU VÀ THO LUN 43 3.1 KT QU PHÂN LP VI SINH VT NI SINH 44 3.1.1 Quanăsátăđi th 44 3.1.2 Quan sát vi th 47 3.2 PHÂN LP NM COLLECTOTRICHUM SP. GÂY BNH THÁN THăTRểNăCỂYăT