IH CM T.P H CHÍ MINH KHOA CƠNG NGH SINH H C KHÓA LU N T T NGHI P tài: NGHIÊN C U KH D CH CHI A C N M LINH CHI (GANODERMA LUCIDUM) KHI CB SUNG CH T C M AUXIN VÀO GIÁ TH TR NG GVTH: Th.s NGUY N TH SVTH: NGUY N TH NGA MSSV: 1053010465 NIÊN KHÓA: 2010 2014 NG SVTH: Nguy n Th Nga NH N XÉT C GVHD: Nguy n Th NG D N Ch kí GVHD Khóa Lu n T t Nghi p Page3 SVTH: Nguy n Th Nga GVHD: Nguy n Th L IC hồn thành báo cáo khóa lu n t t nghi p này, s c g ng n l c c a b n thân, em cịn nh cs c a q th y cơ, m c t p, n bè u tiên cho phép b cg il ic th y cô Khoa Công ngh Sinh h c Minh n quý i h c M Thành ph H Chí t cho em nh ng ki n th c c n thi t, nh ng kinh nghi m quý báu su t th i gian h c t Em xin kính g ng n cô Nguy n Th ic c nh t V i lòng yêu ngh nh ng ki n th c chuyên ngành quý báu, ng d em su t trình th c hi Em xin chân thành c tài Nguy n Vi t Trung, Phan Thanh Di n cô Nguy n Th Loan (Tr i n nh ng th c m th c t t o m n tình ng d n, gi i thích u ý ki n quý giá giúp em có thêm nhi u hi u bi t u ki n thu n l tài Cu i cùng, em xin c su t th em tài Sinh Viên Nguy n Th Nga Khóa Lu n T t Nghi p Page4 SVTH: Nguy n Th Nga GVHD: Nguy n Th DANH M C CÁC CH VI T T T AIA: Acid indol axetic M i ch ng TB: Trung bình PGA: Potato Glucose - Agar UV Vis (Ultraviolet Visite): T ngo i Kh ki n DPPH: 1,1-diphenyl-2picrylhydrazyl N.li u: Nguyên li u PP: Propylene Khóa Lu n T t Nghi p Page5 SVTH: Nguy n Th Nga GVHD: Nguy n Th DANH M C CÁC B NG B ng 2.1.1: Các ho t ch t sinh h c d n xu t n m Linh chi (Ganoderma lucidum) 19 B ng 2.2.1: L c b o Linh chi tác d c li u (Lý Th i Trân, 1595) 21 B ng 2.3.1: Các ho t ch t triterpenoid có tác d ng ch a b nh n m Linh chi (Ganoderma lucidum), (Lê Xuân Thám, 1996) 22 B ng 4.2.1: ng c a n n tr ng qu th n m Linh chi 50 B ng 4.3.1: ng c a n c qu th n m Linh chi 51 53 B ng 4.6.1: n kh ng c c b sung vào giá th tr ng n m Linh a d ch chi c n m Linh chi 55 B ng 4.12.1: K t qu kinh t sau thu ho ch n m Linh chi có b sung auxin vào t 63 Khóa Lu n T t Nghi p Page6 SVTH: Nguy n Th Nga GVHD: Nguy n Th DANH M C CÁC HÌNH NH Hình 2.1.1: L c b o Linh chi 14 Hình 2.1.2: N 15 Hình 2.1.3: Hình thái n m Linh chi 16 Hình 2.1.4: Chu trình phát tri n c a n m Linh chi 17 Hình 3.4.1: Quy trình s n xu t gi ng 31 Hình 3.2.2: C c vơi 33 Hình 3.2.4: Quy trình tr ng n m Linh chi m 35 b trí thí nghi m nghiên c u ng c cb sung vào giá th tr ng n n kh ng oxy hóa c a d ch chi t c n m Linh chi 38 n kh thí nghi m nghiên c u ng c a th tích dung mơi chi t ng oxy hóa c a d ch chi t n m Linh chi 40 kh thí nghi m nghiên c u ng c a th i gian ngâm chi n ng oxy hóa c a d ch chi c n m Linh chi 42 kh thí nghi m nghiên c u ng c a nhi n ng oxy hóa c a d ch chi t n m Linh chi 43 thí nghi m ng c a s l n chi n kh ng oxy hóa c a d ch chi t n m Linh chi 45 Hình 4.1.1: ng c ns 48 Hình 4.1.2: ng c nt (sau 25 ngày) 49 Hình 4.3.1: ng c a n c qu th n m Linh chi 51 Hình 4.4.1: ng c n th i gian hình thành qu th n m Linh chi 52 Hình 4.4.2: S hình thành qu th n m Linh chi 52 Hình 4.5.1: Các túi phơi b nhi m b nh 54 Khóa Lu n T t Nghi p Page7 SVTH: Nguy n Th Nga GVHD: Nguy n Th Hình 4.7.1: ng c a th tích dung mơi ngâm chi n kh oxy hóa c a d ch chi t n m Linh chi 56 Hình 4.8.1: d ch chi ng c a th i gian ngâm chi n kh ng oxy hóa c a c n m Linh chi 57 Hình 4.9.1: D ch chi c n m Linh chi nhi khác 58 Hình 4.9.2: ng c a nhi n kh ng oxy hóa c a d ch chi t n m Linh chi 59 Hình 4.10.1: D ch chi t c a n m Linh chi v i s l n chi t khác 60 Hình 4.10.2: ng s l n chi n kh ng oxy hóa c a d ch chi t n m Linh chi 60 quy trình chi Khóa Lu n T t Nghi p c n m Linh chi 62 Page8 SVTH: Nguy n Th Nga GVHD: Nguy n Th M Khóa Lu n T t Nghi p U Page9 SVTH: Nguy n Th Nga GVHD: Nguy n Th TV t Linh chi m t nh c th cx p vào lo i c C c s d ng làm thu c th o nhi u tri i c a Trung Qu u ghi nh n c s d ng làm thu c t i Giá tr c li u c c gh ch c c a Trung Qu nh ng kinh nghi t s d ng Linh chi theo nhi u cách khác n khoa h t phát tri n, n c nhà khoa h c th gi i ch c cơng d ng h u ích vi u tr b nh: ung t áp, tim m ch, ti [3][8] Hi n nay, n m Linh chi khơng cịn khan hi i có th áp d ng khoa h nuôi tr ng nhân t o ngày phát tri n m nh th gi n quy mô công nghi p Trong hai th p niên g c c: Nh t B n, Hàn Qu c, Singapore, H ng Kô ng nghiên c u s n xu t n m Linh chi m r ng hi u qu s d c li u T i th ng Vi t Nam, nhu c u s d ng n m Linh chi làm thu c t kh n hành nghiên c u nuôi tr ng, ch bi ho t ch t sinh h c có n m Linh chi Các thành ph n hóa h c có n m Linh chi r t phong phú bao g m nhóm: [3]Trong n m Linh chi cịn có ho t ch t có kh ng oxy hóa Vi t Nam v i khí h u nhi i gió mùa ngu n nguyên li u xenllulose d i u ki n cho ngh tr ng n m nói chung n m Linh chi nói riêng khơng ng ng phát tri n.[6] iv i vi n oxy hóa khơng ch làm ch m g a b nh hi ng m ch, b ng hơ h p, tiêu hóa, tim m u th c ph m ch a ch làm cho s ng g c t y m hi n mu kh e m nh c n b sung nhi u ch t ch ng oxy hóa t t a D a vào tình hình th c t v i s ng d n c a Th.s Nguy n Th th c hi Nghiên c u kh hóa c a d ch chi c n m Linh chi (Ganoderma lucidum) c b sung ch t c m ng auxin vào giá th tr ng Khóa Lu n T t Nghi p Page10 SVTH: Nguy n Th Nga M 2.1 - - GVHD: Nguy n Th TÀI M c th c hi n nh m m c a qu th n nuôi tr ng n m Nghiên c u ki n chi c n m Linh chi xu t quy trình cho 2.2 cho vi c nghiên c u kh Linh chi Khóa Lu n T t Nghi p c t n m Rút ng n th i gian n kh kh ng oxy hóa c a d ch ng oxy hóa cao nh t ng oxy hóa t ch Page11 SVTH: Nguy n Th Nga GVHD: Nguy n Th [11] Tr n Hùng, 2004 TP.HCM [12] Tr Nuôi tr ng ch bi n n ch a b nh.Nhà xu t b n Nông Nghi p, Hà N i c li u ih c m làm thu c [13] Tr nh Tam Ki , 1986.Sinh h c k thu t nuôi tr ng n Nhà xu t b n Nông Nghi p, Hà N i Tài li u ti ng anh [14]Afzal, M., Arm of herbal medicine for identifying antioxidant activity Methods in Molecular Biology, Oxidative Stress Biomarkers and -299 [15]Barry Halliwell 2001 Free Radicals and other reactive species in Disease Nature Publishing Group Encyclopedia Of Life Sciences, p 1-7 [16] Fu, H., Shieh, D., Ho, C., 2002 Antioxydant and free radical scavenging activities of edible mushroom J Foof Lipids 9, 35 46 [17] Komoda, Y., Hideo Nakamura, 1995 Strecture of terpenoid constituents of Ganoderma lucidum (Fr) Karst.Che Phar Bull 33 (11): 4829 4835 [18] Shufeng Zhou, A clinical Study of a Ganoderma lucidum extract in patients with type II diabetes mellitus Division of Pharmacology and Clinical Pharmacology, Faculty of Medicine and Health Science, Auckland University, Auckland, New Zealand [19] Yihuai Gao, Guoliang Chen, Jin Lan, He Gao and Shufeng Zhou, 2001 Extraction of Ganoderma polysaccharides at relatively low temperature Froc Int Symposium Ganoderma Sci, Auckland [20] Yihuai Gao, Jin Lan and Zhifang Liu, Extraction and determination of Ganoderma polysaccharides Int Med Complement Med Vol1, Supplement 1,00 00 Khóa Lu n T t Nghi p Page69 SVTH: Nguy n Th Nga GVHD: Nguy n Th PH N PH L C 1.1 t tính ch ng oxy hóa nh ho t tính kh g c t DPPH Nguyên t c: ch t nghiên c u có tác d ng ch ch d p t t g c t làm gi m màu c a dung d ch DPPH nh kh h p th c song có h p th c c tím t c song 517 nm Mơ t : cho ml m ng nghi d ch DPPH H n h cl nhi phòng, 30 phút bong t i M i l u l y giá tr trung bình M u tr c ti n hành u ki d ng m máy UV Vis c sóng 517 nm Tính k t qu nh kh t g c t DPPH c a dung d ch b ng công th c: % O= V i O: Ph ng oxy hóa A o: M i ch ng (khơng ch a m u c A 1= A A A 2: M A: M u tr ng (không ch a DPPH) Khóa Lu n T t Nghi p Page70 SVTH: Nguy n Th Nga B ng 2.1 K t qu Linh chi Khóa Lu n T t Nghi p GVHD: Nguy n Th ng c s li u thí nghi m n tr ng qu th n m Page71 SVTH: Nguy n Th Nga GVHD: Nguy n Th 2.2 K t qu ng c a n c a qu th n m Linh chi Khóa Lu n T t Nghi p c Page72 SVTH: Nguy n Th Nga GVHD: Nguy n Th 2.3 Khóa Lu n T t Nghi p Page73 SVTH: Nguy n Th Nga GVHD: Nguy n Th Cv= 21.9% (Trong m t c t s có m u t khơng có s khác bi m ) Khóa Lu n T t Nghi p Page74 SVTH: Nguy n Th Nga GVHD: Nguy n Th Cv= 11.8% (Trong m t c t s có m u t khơng có s khác bi m ) Khóa Lu n T t Nghi p Page75 SVTH: Nguy n Th Nga 2.4 K t qu n Linh chi ng c n kh GVHD: Nguy n Th c b sung vào giá th tr ng a d ch chi c n m Cv= 4.0% (Trong m t c t s có m u t khơng có s khác bi m ) Khóa Lu n T t Nghi p Page76 SVTH: Nguy n Th Nga 2.5 GVHD: Nguy n Th K t qu ng oxy hóa c a th cc t khác B ng 2.2: K t qu khác MT 500 ml 1.268 1000 ml 1.269 1500 ml 1.288 2000 ml 1.276 500 1000 1500 2000 Khóa Lu n T t Nghi p ng oxy hóa c a th 0.404 0.398 0.420 0.519 0.740 0.753 0.735 0.643 0.406 0.398 0.439 0.521 0.739 0.753 0.720 0.641 0.399 0.371 0.441 0.477 TB 0.403 0.389 0.433 0.506 cc t 0.075 0.084 0.079 0.063 0.744 0.774 0.719 0.676 Page77 SVTH: Nguy n Th Nga GVHD: Nguy n Th Cv= 4.8% (Trong m t c t s có m u t có s khác bi t có ý m ) Khóa Lu n T t Nghi p Page78 SVTH: Nguy n Th Nga 2.6 GVHD: Nguy n Th K t qu ng oxy hóa c a d ch chi t gian ngâm chi t khác B ng 2.3: k t qu gian ngâm chi t khác 2 gi gi gi gi 0.598 0.412 0.401 0.398 Khóa Lu n T t Nghi p 0.589 0.414 0.401 0.398 0.582 0.739 0.749 0.753 th i ng oxy hóa c a d ch chi t MT TB 0.596 0.409 0.398 0.371 1.268 1.268 1.270 1.269 0.594 0.512 0.4 0.398 th i 0.589 0.737 0.749 0.753 0.68 0.81 0.82 0.84 0.584 0.741 0.751 0.774 Page79 SVTH: Nguy n Th Nga GVHD: Nguy n Th Cv= 8.1% (Trong m t c t s có m u t có s khác bi t có ý m ) Khóa Lu n T t Nghi p Page80 SVTH: Nguy n Th Nga 2.7 K t qu GVHD: Nguy n Th ng oxy hóa c a d ch chi t ch chi t khác B ng 2.4: K t qu nhi d ch chi t khác o ( C) o 60 C 0.229 0.238 0.241 o 80 C 0.351 0.352 0.351 o 100 C 0.558 0.562 0.545 o C) 60 80 100 Khóa Lu n T t Nghi p 0.877 0.958 0.853 nhi t ng oxy hóa c a d ch chi t MT TB 1.267 1.269 1.261 0.236 0.352 0.555 0.870 0.957 0.850 0.073 0.298 0.373 0.867 0.958 0.864 Page81 SVTH: Nguy n Th Nga GVHD: Nguy n Th Cv= 4.5% (Trong m t c t s có m u t có s khác bi t có ý m c ) 2.8 K t qu chi t khác B ng 2.5: K t qu chi t khác L n1 0.558 L n2 0.630 L n3 0.769 ng oxy hóa c a d ch chi t l n ng oxy hóa c a d ch chi t 0.562 0.631 0.781 0.545 0.630 0.760 MT 1.279 1.267 1.280 TB 0.555 0.634 0.77 l n 0.373 0.18 0.009 0.853 0.958 0.853 Khóa Lu n T t Nghi p 0.870 0.957 0.850 0.867 0.958 0.864 Page82 SVTH: Nguy n Th Nga GVHD: Nguy n Th Cv= 7.4% (Trong m t c t s có m u t có s khác bi t có ý m ) Khóa Lu n T t Nghi p Page83 ... m Linh chi có màu khác nhau: g i H ng chi) H i Huy n chi) Thanh chi (Linh chi xanh g i Long chi) B ch chi (Linh chi tr ng cịn g i Ng c chi) Hồng chi (Linh chi vàng g i Kim chi) T chi (Linh chi. .. ng oxy hóa c a d ch chi t n m Linh chi 40 kh thí nghi m nghiên c u ng c a th i gian ngâm chi n ng oxy hóa c a d ch chi c n m Linh chi 42 kh thí nghi m nghiên c u ng c a nhi n ng oxy hóa. .. D ch chi t c a n m Linh chi v i s l n chi t khác 60 Hình 4.10.2: ng s l n chi n kh ng oxy hóa c a d ch chi t n m Linh chi 60 quy trình chi Khóa Lu n T t Nghi p c n m Linh chi