BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI  VŨ THỊ HẰNG NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUI TRÌNH NHÂN GIỐNG NẤM KIM CHÂM DẠNG DỊCH THỂ VÀ SẢN XUẤT NẤM KIM CHÂM (Flammulina velutipes) LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP Chuyên ngành : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Mã số : 60.42.80 Người hướng dẫn : PGS.TS. PHAN HỮU TÔN ThS. NGUYỄN THỊ BÍCH THÙY HÀ NỘI - 2012 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… i LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam ñoan, các số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn này là trung thực và chưa hề ñược sử dụng ñể bảo vệ một học vị nào. Tôi xin cam ñoan, mọi sự giúp ñỡ cho việc thực hiện luận văn này ñã ñược cảm ơn và các thông tin trích dẫn trong luận văn ñều ñã ñược chỉ rõ nguồn gốc./. Hà Nội, ngày tháng năm 2012 HỌC VIÊN Vũ Thị Hằng Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… ii LỜI CẢM ƠN ðể hoàn thành luận văn tốt nghiệp này, bên cạnh sự cố gắng nỗ lực của bản thân, tôi ñã nhận ñược sự ñộng viên và giúp ñỡ rất lớn của nhiều cá nhân và tập thể. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS. Phan Hữu Tôn, Khoa công nghệ sinh học - Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội ñã tận tình giúp ñỡ, tạo mọi ñiều kiện tốt nhất cho tôi thực hiện và hoàn thành luận văn tốt nghiệp này. Tôi xin bày tỏ long biết ơn chân thành tới ThS. Nguyễn Thị Bích Thùy ñã tận tình chỉ bảo, hướng dẫn tôi trong suốt thời gian thực hiện và hoàn thành luận văn tốt nghiệp này. Tôi xin chân thành cảm ơn sự giúp ñỡ của các thầy cô trong Khoa Công nghệ sinh học ñã tạo mọi ñiều kiện cho tôi thực hiện và hoàn thành luận văn. Tôi xin chân thành cảm ơn sự giúp ñỡ, tạo ñiều kiện của các phòng ban thuộc Trung tâm công nghệ sinh học thực vật, Trung tâm nấm Văn Giang ñã nhiệt tình giúp ñỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện ñề tài Tôi xin chân thành cảm ơn gia ñình và tất cả bạn bè ñã ñộng viên giúp ñỡ và tạo ñiều kiện thuận lợi cho tôi trong suốt quá trình thực hiện ñề tài và hoàn thành bản luận văn này./. Hà Nội, ngày tháng năm 2012 HỌC VIÊN Vũ Thị Hằng Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… iii MỤC LỤC Lời cam ñoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục bảng vi Danh mục hình vii Danh mục biểu ñồ, ñồ thị viii 1 MỞ ðẦU 1 1.1 Tính cấp thiết của ñề tài 1 1.2 Mục tiêu nghiên cứu của ñề tài 3 1.3 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của ñề tài. 3 1.4 ðối tượng nghiên cứu và phạm vi nghiên cứu của ñề tài 3 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU VÀ CƠ SỞ KHOA HỌC CỦA ðỀ TÀI 4 2.1 Tình hình nghiên cứu giống nấm dạng dịch thể trên thế giới 4 2.2 Tình hình nghiên cứu giống nấm dạng dịch thể trong nước 8 2.3 Nấm kim châm (Flammulina velutipes) 10 2.3.1 Giới thiệu chung về nấm kim châm (Flammulina velutipes) 10 2.3.2 Giá trị dinh dưỡng của nấm kim châm 11 2.3.3 ðặc ñiểm hình thái 14 2.3.4 Phân loại nấm kim châm 15 2.3.5 Chu trình sống của nấm kim châm 16 2.3.6 Các yếu tố ảnh hưởng ñến sự sinh trưởng của sợi nấm và sự hình thành quả thể nấm 17 2.4 Kỹ thuật nuôi trồng Kim châm 22 2.4.1 Nguồn nguyên liệu chính 22 2.4.2 Công thức phối trộn cơ chất 22 2.4.3 ðóng bịch, khử trùng nguyên liệu 23 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… iv 2.4.4 Cấy giống, ươm sợi 24 2.4.5 Giai ñoạn chăm sóc ra quả thể 24 3 VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 3.1 Vật liệu và ñối tượng nghiên cứu 28 3.1.1 ðối tượng nghiên cứu 28 3.1.2 Hóa chất và vật liệu 28 3.2 Nội dung nghiên cứu 28 3.2.1 Nghiên cứu ảnh hưởng của môi trường dịch thể, pH, nhiệt ñộ, chế ñộ lắc, thời gian nuôi tới sự sinh trưởng của hệ sợi nấm kim châm 28 3.2.2 ðánh giá ảnh hưởng nguồn nhân giống ñến sinh trưởng, phát triển của hệ sợi nấm kim châm trên các môi trường giống cấp 2 31 3.2.3 ðánh giá ảnh hưởng của môi trường nuôi trồng và nguồn nhân giống ñến sự sinh trưởng, phát triển và năng suất nấm kim châm 31 3.4 Phương pháp nghiên cứu 33 3.4.1 Phương pháp nuôi nấm dịch thể 33 3.4.2 Phương pháp xác ñịnh mật ñộ khuẩn cầu trong dịch nuôi nấm 33 3.4.3 Phương pháp ño kích thước khuẩn cầu 33 3.4.4 Phương pháp xác ñịnh sinh khối sợi nấm 33 3.4.5 Phương pháp cấy giống nấm kim châm cấp 2 34 3.4.6 Phương pháp nuôi trồng nấm kim châm 35 3.4.7 Phương pháp thu hoạch nấm kim châm 36 3.4.8 Phương pháp tính năng suất nấm 36 3.4.9 Phương pháp bố trí thí nghiệm 36 3.4.10 Phương pháp xử lý số liệu 36 4 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 37 4.1.1 Ảnh hưởng của trường dịch thể ñến sự sinh trưởng phát triển của hệ sợi nấm kim châm. 37 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… v 4.1.2 Ảnh hưởng của pH ñến sự sinh trưởng phát triển của hệ nấm kim châm trong môi trường dịch thể. 42 4.1.3 Ảnh hưởng của nhiệt ñộ tới sự sinh trưởng phát triển của hệ sợi nấm kim châm. 45 4.1.4 Ảnh hưởng của chế ñộ lắc tới sự sinh trưởng ba chủng giổng kim châm Kdl, Ktm, Kcn. 47 4.1.5 Ảnh hưởng của thời gian nuôi tới sự sinh trưởng phát triển của hệ sợi nấm kim châm. 49 4.2 Nghiên cứu sự sinh trưởng của nấm kim châm trên môi trường giống cấp II sử dụng giống cấp I dạng dịch thể 52 4.3 Nghiên cứu sự sinh trưởng, phát triển của sợi nấm và sự hình thành quả thể nấm kim châm trên giá thể nuôi trồng sử dụng giống Kdl dạng rắn và dung dịch. 55 4.3.1 Ảnh hưởng của môi trường nuôi trồng và nguồn nhân giống ñến sự sinh trưởng, phát triển của hệ sợi nấm kim châm trắng. 55 4.3.2 Ảnh hưởng của môi trường nuôi trồng và nguồn nhân giống ñến năng suất nấm kim châm. 59 5 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 63 5.1 Kết luận 63 5.2 ðề nghị 63 TÀI LIỆU THAM KHẢO 65 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… vi DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang 2.1 Một số công thức phối trộn phổ biến ở nước ngoài. 23 4.1 Tình trạng sinh trưởng sợi nấm kim châm trong môi trường dịch thể 38 4.2 Ảnh hưởng của pH tới số lượng khuẩn cầu, sinh khối của sợi nấm trong dịch lỏng 43 4.3 Ảnh hưởng của nhiệt ñộ ñến sự sinh trưởng hệ sợi 3 chủng giống kim châm 45 4.4 Ảnh hưởng của chế ñộ lắc ñến sự sinh trưởng 3 chủng giống kim châm 48 4.5 Ảnh hưởng của thời gian nuôi ñến sự sinh trưởng hệ sợi ba chủng giống nấm kim châm 50 4.6 Ảnh hưởng của công thức môi trường và nguồn nhân giống ñến sự phát trển sợi nấm kim châm trắng trên môi trường nhân giống cấp II 52 4.7 Ảnh hưởng của thành phần cơ chất và giống ñến sự sinh trưởng, phát triển của hệ sợi 56 4.8 Ảnh hưởng của môi trường nuôi trồng và nguồn nhân giống ñến năng suất nấm kim châm 59 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… vii DANH MỤC HÌNH STT Tên hình Trang 2.1 Nấm kim châm mọc tự nhiên 13 2.2 Nấm kim châm trồng công nghiệp 14 2.3 Quả thể nấm kim châm tự nhiên 15 2.4 Quả thể nấm kim châm nuôi trồng 15 2.5 Chu trình sống của nấm kim châm 17 4.1 Hệ sợi nấm kim châm sau 3 ngày tuổi 40 4.2 Sợi nấm kim châm 5 ngày tuổi 41 4.3 Sợi nấm kim châm 7 ngày tuổi 42 4.4 Tốc ñộ sinh trưởng của sợi nấm kim châm trên môi trường nhân giống cấp II (sợi nấm 8 ngày tuổi) 55 4.5 Ảnh hưởng của môi trường nuôi trồng và nguồn giống ñến sự sinh trưởng hệ sợi nấm kim châm. 58 4.6 Nấm kim châm trắng cấy giống dạng rắn 61 4.7 Nấm kim châm trắng cấy giống dung dịch 62 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… viii DANH MỤC BIỂU ðỒ, ðỒ THỊ STT Tên biểu ñồ Trang 4.1 Sinh khối sợi nấm kim châm trong các môi trường dịch thể 39 4.2 Ảnh hưởng của pH môi trường ñến sinh khối sợi nấm 44 4.3 Ảnh hưởng của nhiệt ñộ ñến sự sinh trưởng của hệ sợi nấm 46 4.4 Ảnh hưởng của chế ñộ lắc ñến sự sinh trưởng của nấm kim châm 48 4.5 Tốc ñộ phát triển hệ sợi nấm kim châm trong môi trường dung dịch 51 4.6 Tốc ñộ sinh trưởng của sợi nấm kim châm trên môi trường nhân giống cấp II 53 4.7 Ảnh hưởng của thành phần cơ chất và giống ñến sự sinh trưởng, phát triển của hệ sợi 57 4.9 Ảnh hưởng của thành phần cơ chất phối trộn và giống ñến năng suất nấm kim châm 60 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… 1 1. MỞ ðẦU 1.1. Tính cấp thiết của ñề tài Ngày nay khi khoa học kỹ thuật phát triển ñã giúp cho ñời sống con người ngày càng ñược nâng cao, thì nhu cầu về dinh dưỡng cũng tăng theo. Các sản phẩm thực phẩm không chỉ ñược quan tâm ñến giá trị dinh dưỡng mà còn rất ñược chú ý ñến vấn ñề an toàn và sạch. Nấm ăn một thực phẩm sạch và có giá trị dinh dưỡng cao ñang ñược chú ý ñến và sử dụng phổ biến trong các bữa ăn, do ñó nhu cầu về nấm ăn ngày càng cao. Nấm có ý nghĩa rất quan trọng trong ñời sống, chúng có vai trò trong nền kinh tế, khoa học và tham gia vào các chu trình vật chất & năng lượng trong tự nhiên. Ngoài việc ñược sử dụng làm thực phẩm giàu dinh dưỡng thì nấm còn là nguồn dược liệu ñể phòng chống một số bệnh nguy hiểm như: tim mạch, béo phì, giải ñộc và bảo vệ tế bào gan, loãng xương…. Sở dĩ nấm ñược coi là nguồn thực phẩm giàu dinh dưỡng, là “rau sạch”, “thịt sạch” và có tính dược liệu là vì trong nấm có chứa hàm lượng protein, lipit khá cao; giàu các polysaccharide, hơn nữa trong nấm còn chứa ñầy ñủ các axít amin không thay thế cần thiết cho cơ thể, nấm là nguồn cung cấp các vitamin và khoáng chất phong phú. Trên thế giới nấm ñã ñược nuôi trồng từ rất lâu và hiện nay ở nhiều nước việc nuôi trồng và sản xuất nấm ñã trở thành một nghành công nghiệp thực thụ, ở trình ñộ cao và hiện ñại. Việt nam là một nước nông nghiệp, giàu tiềm năng lâm nghiệp do ñó nguồn phế thải từ nông, lâm nghiệp (rơm, rạ, mùn cưa, bã mía, thân ngô, lõi ngô…) rất dồi dào, ñây là nguồn nguyên liệu thích hợp ñể trồng nấm. Bên cạnh ñó, ñiều kiện tự nhiên (nhiệt ñộ, ñộ ẩm…) của nước ta rất phù hợp với việc trồng nấm. Hiện nay, ở nước ta việc nuôi trồng nấm ñang ñược ñẩy mạnh trong cả nước và là nguồn thu nhập ñáng kể trong quá trình chuyển ñổi cơ cấu cây trồng và vật nuôi, nhưng ở nước ta mới ñang trồng phổ biến khoảng 12-14 loại, [...]... bào t Quá trình tu n hoàn ñi l i như th chính là vòng ñ i c a n m kim châm Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 16 Ph i h p nhân ð mt Qu th ð m bào t (AB, ab, Ab, aB) Bào t ph n song nhân Qu th ñơn nhân S i song nhân S i ñơn nhân Ph i h p ch t Bào t khúc Bào t ph n ñơn nhân Hình 2.5: Chu trình s ng c a n m kim châm S i ñơn nhân c a n m kim châm có th hình... ng vào cơ ch t nuôi tr ng ñ n khi thu hái n m thương ph m dài ngày (15-70 ngày tùy thu c t ng lo i n m), d n ñ n giá thành gi ng n m và n m thương ph m cao 2.3 N m kim châm (Flammulina velutipes) 2.3.1 Gi i thi u chung v n m kim châm (Flammulina velutipes) N m kim châm là lo i n m ăn ñư c c khi m c trong t nhiên, ñư c tìm th y các vùng có khí h u l nh kéo dài v i nhi u ch ng lo i khác nhau N m kim châm. .. tròn, r ng, dài 5 – 18 cm, ñư ng kính 0,2 – 0,8 cm màu vàng nh t, ño n dư i màu nâu, trên có lông tơ ng n V i các gi ng khác nhau, c m n m có hình d ng khác nhau, màu s c khác nhau D a vào màu s c c a qu th mà ta có th chia n m kim châm thành gi ng màu s m và gi ng m u vàng nh t (Kim châm tr ng, Kim châm vàng) Trong nuôi tr ng nhân t o n m kim châm m c thành c m có hình thái khác hơn so v i ngoài t... nông nghi p …………………… 2 1.2 M c tiêu nghiên c u c a ñ tài Xây d ng ñư c qui trình công ngh nhân gi ng, s d ng gi ng n m d ng d ch th ph c v vi c s n xu t gi ng n m thương ph m và nuôi tr ng n m kim châm (Flammulina velutipes) trên qui mô công nghi p ñ t năng su t, ch t lư ng và hi u qu cao 1.3 Ý nghĩa khoa h c và th c ti n c a ñ tài Xây d ng ñư c qui trình công ngh nhân gi ng d ng d ch th làm cơ s cho... gi m, thích h p cho s n xu t gi ng n m và nuôi tr ng n m theo qui mô công nghi p… ð góp ph n thúc ñ y ngành n m phát tri n theo hư ng công nghi p hóa, ñáp ng nhu c u c a ngư i tiêu dùng và thúc ñ y hơn n a ngh nuôi tr ng n m nư c ta chúng tôi ti n hành ñ tài: Nghiên c u xây d ng qui trình nhân gi ng n m kim châm d ng d ch th và s n xu t n m kim châm (Flammulina velutipes) ” Trư ng ð i h c Nông nghi p... dung d ch ngày càng ñư c hoàn thi n và ñư c xây d ng thành quy trình chu n ñư c ng d ng khá ph bi n m t s nư c có ngành công nghi p nuôi tr ng n m phát tri n Hi n nay, có nhi u quy trình nhân gi ng n m l n khác nhau, ph thu c vào quy mô s n xu t và ñi u ki n kinh t xã h i, trình ñ công ngh c a t ng nư c Vi c s d ng phương pháp c y gi ng d ch th ñ s n xu t gi ng n m ăn và n m dư c li u ñã ñ t ñư c thành... n kinh t th trư ng và s du nh p c a nhi u lo i n m m i c a nư c ngoài vào Vi t nam M t s lo i n m cao c p v i giá tr dinh dư ng và ch t lư ng t t ñang ñư c nghiên c u ñ nuôi tr ng ph bi n t i Vi t Nam N m kim châm (Flammulina velutipes) cũng là m t trong s nh ng lo i n m cao c p ñang ñư c nghiên c u ñ nuôi tr ng theo qui mô công nghi p N m kim châm là lo i n m có giá tr dinh dư ng và dư c li u cao,... ho c vàng nh t, ño n dư i màu s m hơn, lông tơ ng n ho c không có Dư i kính hi n vi, ñ m bào t không màu, hình b u d c ho c tr ng, 5 – Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 14 7 µ x 3 – 4 µ , liên k t m t xích v i nhau, d u in c a bào t màu tr ng Hình 2.3: Qu th n m kim châm t nhiên (ngu n internet) Kim Châm vàng Kim Châm tr ng Hình 2.4: Qu th n m kim châm. .. tiêu th s n ph m kim châm t i th trư ng n i ñ a là r t l n, ư c tính m i năm s n ph m này ñang ph i nh p ph u hàng ch c nghìn t n t Trung Qu c v i giá t 50.000 – 80.000 ñ ng/kg S n ph m n m kim châm s n xu t trong nư c hi n nay luôn trong tình tr ng không ñ ñáp ng nhu c u tiêu th 2.3.2 Giá tr dinh dư ng c a n m kim châm N m kim châm tươi có ch a t i 89,7 – 89,9% nư c Trong 100g n m kim châm khô g m có... kim châm có th hình thành qu th ñơn nhân, nhưng tán qu th nh , năng su t r t th p, không có ý nghĩa th c t trong s n xu t Ph n bào t ñơn nhân ho c song nhân trong giai ño n sinh s n vô tính c a n m kim châm g p ñi u ki n thích h p n y m m thành s i ñơn nhân ho c song nhân, khi chuy n sang giai ño n h u tính s ti p t c phát d c và hình thành ñ m bào t S i c a n m kim châm còn có th ñ t ño n thành bào . dùng và thúc ñẩy hơn nữa nghề nuôi trồng nấm ở nước ta chúng tôi tiến hành ñề tài: Nghiên cứu xây dựng qui trình nhân giống nấm kim châm dạng dịch thể và sản xuất nấm kim châm (Flammulina velutipes) ” tiêu nghiên cứu của ñề tài Xây dựng ñược qui trình công nghệ nhân giống, sử dụng giống nấm dạng dịch thể phục vụ việc sản xuất giống nấm thương phẩm và nuôi trồng nấm kim châm (Flammulina velutipes) . DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI  VŨ THỊ HẰNG NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUI TRÌNH NHÂN GIỐNG NẤM KIM CHÂM DẠNG DỊCH THỂ VÀ SẢN XUẤT NẤM KIM CHÂM (Flammulina