BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI KHAO KEONAM NGHIÊN CỨU MỘT SỐ BIẾN ðỔI BỆNH LÝ CỦA BỆNH CARE (CANINE DISTEMPER) TRÊN CHÓ VÀ ỨNG DỤNG PHƯƠNG PHÁP MIỄN DỊCH HUỲNH QUANG (IMMUNO FLUORESCENT) ðỂ CHẨN ðOÁN BỆNH LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP Chuyên ngành : Thú y Mã số : 60.62.50 Người hướng dẫn khoa học: TS. NGUYỄN THỊ LAN TS. NGUYỄN BÁ TIẾP HÀ NỘI – 2012 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… i LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam ñoan rằng, số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn này là trung thực và chưa từng ñược sử dụng ñể bảo vệ một học vị nào. Tôi xin cam ñoan rằng, mọi sự giúp ñỡ cho việc hoàn thành luận văn này ñã ñược cảm ơn, các thông tin trích dẫn trong luận văn ñã ñược ghi rõ nguồn gốc. Hà Nội, tháng 09 năm 2012 Tác giả luận văn Khao KEONAM Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… ii LỜI CẢM ƠN Cho ñến nay tôi ñã hoàn thành luận văn tốt nghiệp. Nhân dịp này tôi xin ñược bày tỏ lòng biết ơn chân thành, sâu sắc tới Bộ Giáo dục ðào tạo CHDCND Lào ñã tạo cơ hội cho tôi ñược ñào tạo thạc sỹ chuyên ngành thú y tại trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội. Ở Việt Nam, trước tiên tôi xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới toàn thể thầy cô giáo trong khoa Thú y, ñặc biệt là TS. Nguyễn Thị Lan và TS. Nguyễn Bá Tiếp người ñã hướng dẫn khoa học và tận tình giúp ñỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện ñề tài và hoàn thành luận văn tốt nghiệp này. Tôi xin chân thành cảm ơn các cán bộ trong Bộ môn Bệnh lý, Bộ môn Giải phẩm Tổ chức, Khoa Thú y, Viện ðào tạo Sau ñại học, các cán bộ và chuyên gia thuộc Phòng thí nghiệm trung tâm khoa Thú y, trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội, các phòng Khám ở ñịa bàn Hà Nội ñã tạo mọi ñiều kiện thuận lợi và giúp ñỡ tôi hoàn thành luận văn này. Cuối cùng, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc ñến gia ñình và bạn bè ñã giúp ñỡ, ñộng viên tôi trong suốt thời gian thực tập và hoàn thiện luận văn. Hà Nội, tháng 09 năm 2012 Tác giả luận văn Khao KEONAM Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… iii MỤC LỤC Trang LỜI CAM ðOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC BIỂU ðỒ HÌNH vii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ix PHẦN I: MỞ ðẦU 1 PHẦN II: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 2.1. Lịch sử của bệnh Care 3 2.2. Căn bệnh học 4 2.2.1 Phân loại virus gây bệnh Care 4 2.2.2 Hình thái của virus Care 5 2.2.3 Cấu trúc của virus Care 6 2.2.4 Sức ñề kháng của virus Care 7 2.2.5 Cơ chế sinh bệnh 8 2.3. Dịch tễ học 10 2.3.1 Loài vật mắc bệnh 10 2.3.2 Lứa tuổi mắc bệnh 10 2.3.3 Mùa vụ nhiễm bệnh 11 2.4. Truyền nhiễm học 11 2.4.1 Chất chứa virus 11 2.4.2 ðường xâm nhập và cách thức lây lan 11 2.4.3 Tỷ lệ ốm, tỷ lệ chết 12 2.5. Triệu chứng bệnh tích 12 2.5.1 Triệu chứng lâm sàng 12 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… iv 2.5.2 Bệnh tích 14 2.6. Chẩn ñoán bệnh 16 2.6.1 Dựa vào ñặc ñiểm dịch tễ học của bệnh 16 2.6.2 Dựa vào triệu chứng lâm sàng 17 2.6.3 Chẩn ñoán trong phòng thí nghiệm 17 2.7. Phòng và ñiều trị bệnh 21 2.7.1 Phòng bệnh 21 2.7.2 ðiều trị 23 PHẦN III: ðỐI TƯỢNG, ðỊA ðIỂM, THỜI GIAN, NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 3.1. ðối tượng nghiên cứu 24 3.2. ðịa ñiểm nghiên cứu 24 3.3. Thời gian nghiên cứu 25 3.4. Nội dung nghiên cứu 25 3.5. Nguyên liệu nghiên cứu 25 3.5.1 Mẫu bệnh phẩm dùng cho nghiên cứu ñược thu thập từ các cơ quan 25 3.5.2 Hóa chất dùng cho nghiên cứu 25 3.5.3 Máy móc, dụng cụ 25 3.6. Phương pháp nghiên cứu 26 3.6.1 Theo dõi triệu chứng lâm sàng của chó nghi mắc bệnh Care 26 3.6.2 Phương pháp mổ khám, quan sát bệnh tích ñại thể của chó nghi mắc bệnh Care 26 3.6.3 Phương pháp làm tiêu bản vi thể và quan sát bệnh tích trên tiêu bản của chó nghi mắc bệnh Care 27 3.6.4 Phương pháp miễn dịch huỳnh quang ñể chẩn ñoán bệnh Care 32 3.6.5 Phương pháp xử lý số liệu 34 PHẦN IV: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 35 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… v 4.1. Triệu chứng lâm sàng của chó nghi mắc bệnh Care 36 4.2. Biến ñổi bệnh lý ñại thể của chó nghi mắc bệnh Care 39 4.3. Biến ñổi bệnh tích vi thể của chó mắc bệnh Care 42 4.4. Kết quả ứng dụng phương pháp miễn dịch huỳnh quang ñể chẩn ñoán 46 4.5. Nghiên cứu sự phân bố của virus Care ở các cơ quan của chó mắc bệnh Care bằng phương pháp miễn dịch huỳnh quang 50 PHẦN V: KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 59 5.1. Kết luận 59 5.2. Kiến nghị 60 TÀI LIỆU THAM KHẢO 61 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… vi DANH MỤC BẢNG Số bảng Tên bảng Trang Bảng 4.1. Kết quả chẩn ñoán bệnh của chó tới khám và ñiều trị tại các phòng mạch 35 Bảng 4.2. Triệu chứng lâm sàng chủ yếu của chó nghi mắc bệnh Care 36 Bảng 4.3 Các tổn thương ñại thể ở chó nghi mắc Care 39 Bảng 4.4. Biến ñổi vi thể ở một số cơ quan của chó nghi mắc bệnh Care 44 Bảng 4.5. Kết quả chẩn ñoán bằng phản ứng miễn dịch huỳnh quang và RT-PCR 47 Bảng 4.6. Hồ sơ của 5 chó mắc bệnh Care ñược lựa chọn ñể nghiên cứu 51 Bảng 4.7. Triệu chứng lâm sàng chủ yếu của 5 chó mắc bệnh Care 52 Bảng 4.8. Biến ñổi ñại thể chủ yếu trên chó mắc bệnh Care 53 Bảng 4.9. Biến ñổi bệnh tích vi thể chủ yếu trên chó mắc bệnh Care 54 Bảng 4.10. Kết quả xác ñịnh sự phân bố của virus ở các cơ quan bằng phản ứng miễn dịch huỳnh quang. 55 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… vii DANH MỤC BIỂU ðỒ HÌNH Số hình Tên hình Trang Hình 1. Hình thái của virus ñược chụp dưới kính hiển vi 6 Hình 2. Kít chẩn ñoán nhanh bệnh Care 20 Hình 3. Khi chó mắc bệnh Care kít lên hai vạch 20 Hình 4. Quy trình làm tiêu bản vi thể 32 Hình 5. Kháng kháng thể có gắn chất phát huỳnh quang 33 Hình 6. Kính hiển vi huỳnh quang 33 Hình 7. Có nhiều dử mắt, có nước mũi 38 Hình 8. Chó nghi mắc bệnh Care có biểu hiện mệt mỏi, ủ rủ 38 Hình 9. Chó nghi mắc bệnh Care có phân dính ở hậu môn 38 Hình 10. Chó nghi mắc bệnh Care biểu hiện thần kinh 38 Hình 11. Chó nghi mắc bệnh Care có các nốt sài ở vùng da mỏng 38 Hình 12. Chó nghi mắc bệnh Care có gan bàn chân sưng, cứng 38 Hình 13. Xuất huyết phổi ở chó nghi mắc bệnh Care 41 Hình 14. Ruột bị hoại tử ở chó nghi mắc bệnh Care 41 Hình 15. Hạch dưới hàm của chó nghi mắc bệnh Care bị sưng 41 Hình 16. Hạch màng treo ruột của chó nghi mắc bệnh Care bị sưng 41 Hình 17. Xuất huyết ñại não và tiểu não ở chó nghi mắc bệnh Care 42 Hình 18. Khí quản của chó nghi mắc bệnh Care bị xuất huyết 42 Hình 19. Phổi của chó nghi mắc bệnh Care bị sung huyết 42 Hình 20. Xoang ngực tích nước ở chó nghi mắc bệnh Care 42 Hình 21. Chó nghi mắc bệnh Care bị viêm phế quản phổi (HE x 10) 44 Hình 22. Chó nghi mắc bệnh Care lông nhung ruột ñứt nát (HE x 10) 44 Hình 23. Chó nghi mắc bệnh Care bị xuất huyết ở cơ tim (HE x10) 44 Hình 24. Chó nghi mắc bệnh Care có nang lympho teo (HE x10) 44 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… viii Hình 25. Thâm nhiễm tế bào viêm ở phổi của chó nghi mắc bệnh Care (HE x10) 45 Hình 26. Ruột chó nghi mắc bệnh Care xuất huyết và thoái hóa tế bào ruột (HE x40) 45 Hình 27. Gan của chó nghi mắc bệnh Care xuất huyết, thâm nhiễm tế bào viêm (HE x 40) 45 Hình 28. Hạch lympho của chó nghi mắc bệnh Care xuất huyết lan tràn (HE x 10) 45 Hình 29. CDV tập trung nhiều ở vách phế quản của chó mắc CDV (IF x 10) 49 Hình 30. Hình ảnh phế quản phổi của chó âm tính với phản ứng IF 10X (không chứa virus Care) 49 Hình 31. CDV phân bố nhiều trên tế bào vách phế nang (IF x 40) ở chó mắc bệnh Care 49 Hình 32. CDV phân bố ở vách phế nang (vị trí có màu xanh lá mạ) (IF x 10) của chó mắc bệnh Care 49 Hình 33. CDV phân bố ở vách phế nang của chó mắc bệnh Care (IF x 20) 50 Hình 34. CDV phân bố ít ở hạch lympho của chó mắc bệnh Care (IF x 10) 50 Hình 35. Kết quả chẩn ñoán chó mắc Care bằng phản ứng RT-PCR 50 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… ix DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT STT Tên viết tắt Tên ñầy ñủ 1 CD Canine Distemper 2 CDV Canine Distemper Virus 3 Cs Cộng sự 4 EDTA Ethylene diamine tetra acetic acid 5 ELISA Enzyme-linked immunosorbent assay 6 BSA Bovine Serum Albumin 7 HE Hematoxyline Eosin 8 MV Meales Virus 9 IF Immuno fluorescent test 10 IHC Immunohistochemistry 11 RPV Rinderpest Virus 12 PPRV Peste des Petits Ruminants Virus 13 RNA Ribonucleic Acid 14 PBS Photphate buffer saline 15 PDV Phocin Distemper virus 16 CPE Cyto pathogenic Effect 17 cDNA Complementary Deoxyribonucleic Acids 18 RT-PCR Reverse Transcription Polymesase Chain Reaction 19 TCID 50 50% Tissue Culture Infective Dose [...]... ñ i b nh lý c a b nh Care (Canine Distemper) trên chó và ng d ng phương pháp mi n d ch huỳnh quang (Immuno fluorescent) ñ ch n ñoán b nh” 1.2 M c ñích c a ñ tài Nh m hi u ñư c các tri u ch ng lâm sàng, bi n ñ i b nh lý ñ i th , vi th các cơ quan, t ch c c a chó m c b nh Care ð ng th i ch n ñoán chính xác ñư c b nh Care b ng phương pháp mi n d ch huỳnh quang, giúp cho vi c phòng và tr b nh k p th i Trư... c Care Trong ñó, phương pháp mi n d ch huỳnh quang nh m xác ñ nh s t p trung c a virus trong các cơ quan chó m c Care v i ñ chính xác cao và tin c y và mang l i nhi u hi u qu tích c c trong công tác ch n ñoán M t khác phương pháp mi n d ch huỳnh quang chưa ñư c ng d ng nhi u ñ ch n ñoán b nh Care t i Vi t Nam Vì v y, trong nghiên c u này chúng tôi th c hi n ñ tài: Nghiên c u m t s bi n ñ i b nh lý. .. u nhu m ch t phát huỳnh quang ñ phát hi n kháng nguyên chưa bi t Ph n ng mi n d ch huỳnh quang gián ti p Dùng kháng kháng th ñư c nhu m ch t phát huỳnh quang ñ phát hi n kháng nguyên chưa bi t Ch n ñoán phát hi n RNA c a virus Care b ng RT- PCR Phương pháp RT-PCR (Reverse Transcription Polymesase Chain Reaction) là s k t h p gi a phương pháp phiên mã ngư c và phương pháp PCR Phương pháp này có th phát... 3.3 Th i gian nghiên c u T tháng 08 năm 2011 ñ n tháng 06 năm 2012 3.4 N i dung nghiên c u - Xác ñ nh m t s tri u ch ng lâm sàng c a chó nghi m c b nh Care - Xác ñ nh bi n ñ i b nh lý ñ i th ch y u các cơ quan c a chó nghi m c b nh Care - Xác ñ nh b nh lý vi th ch y u các cơ quan c a chó nghi m c b nh Care - Áp d ng phương pháp mi n d ch huỳnh quang ñ ch n ñoán b nh Care 3.5 Nguyên li u nghiên c u 3.5.1... a chó ñư c tiêm vacxin phòng b nh Care ð ng th i vi c ch ng vacxin ch ng b nh do Parvovirrus cũng ñư c cho là gây c ch ñáp ng mi n d ch chó ñư c ch ng Care m c dù nh ng minh ch ng ñ y ñ còn thi u và nó cũng chưa ñư c ch ng minh chó nhi u tu i (Greene và Appel, 1987) PH N III ð I TƯ NG, ð A ðI M, TH I GIAN, N I DUNG, NGUYÊN LI U VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U 3.1 ð i tư ng nghiên c u - Chó nghi m c b nh Care. .. phát huỳnh quang (khi h p th 1 ánh sáng có bư c sóng nh t ñ nh s phát ra 1 ánh sáng có bư c sóng dài hơn) Phương pháp này ñư c th c hi n d a trên nguyên lý: khi dùng kháng th ho c kháng kháng th ñã ñư c nhu m b ng ch t phát huỳnh quang, r i cho k t h p v i kháng nguyên – kháng th khi soi dư i kính hi n vi huỳnh quang s phát sáng (Nguy n Bá Hiên và Tr n Th Lan Hương, 2010) Ph n ng mi n d ch huỳnh quang. .. kháng nguyên t n t i trong t ch c Phương pháp này ñư c th c hi n d a trên nghuyên lý là s k t h p Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 18 gi a kháng nguyên và kháng th ñ c hi u và ñư c phát hi n b ng ch t ch th màu (Nguy n H u Nam, 2011) Ch n ñoán b nh b ng phương pháp mi n d ch huỳnh quang Ph n ng mi n d ch huỳnh quang IF (Immuno fluorescent test) có ñ chính... ch ng lâm sàng c a chó nghi m c b nh Care ñư c xác ñ nh thông qua theo dõi, quan sát và ghi chép ñ y ñ ngay t khi chó xu t hi n tri u ch ng ñ u tiên ð ng th i chúng tôi cũng k t h p th c t c a ñ a phương v i vi c thu th p thông tin t ngư i nuôi chó và cán b thú y ñ tăng ñ tin c y cho ch n ñoán 3.6.2 Phương pháp m khám, quan sát b nh tích ñ i th c a chó nghi m c b nh Care - Phương pháp m khám, quan sát... Care B nh Care hay b nh sài s t hi m thư ng x y ra chó là m t b nh truy n nhi m c p tính nguy chó non, lây lan nhanh và t l ch t r t cao ðây là m t căn b nh nguy hi m nh t trên chó trong n a ñ u th k XIX T l m c b nh l n nh t chó con 3 - 6 tháng tu i, khi mi n d ch ch ñ ng t m truy n sang ñã gi m thì t l m c b nh t 25% t i trên 30% và t l ch t chó m c b nh thư ng cao t 50% - 90% (Ron Hines, 2006) Chó. .. linked Immuno Sorbent Assay) là m t phương pháp xét nghi m mi n d ch d a trên cơ ch k t qu ñ c hi u gi a kháng nguyên và kháng th , có s d ng kháng th có g n enzyme và ch t phát quang nh m phát hi n ra s k t h p ñó (Nguy n Bá Hiên và Tr n Th Lan Hương, 2009) Ch n ñoán b ng phương pháp nhu m hóa mô mi n d ch Nhu m hóa mô mi n d ch (Immunohistochemistry - IHC) là phương pháp có ñ chính xác cao cho phép . DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI KHAO KEONAM NGHIÊN CỨU MỘT SỐ BIẾN ðỔI BỆNH LÝ CỦA BỆNH CARE (CANINE DISTEMPER) TRÊN CHÓ VÀ ỨNG DỤNG PHƯƠNG PHÁP MIỄN DỊCH HUỲNH QUANG (IMMUNO. lý của bệnh Care (Canine Distemper) trên chó và ứng dụng phương pháp miễn dịch huỳnh quang (Immuno fluorescent) ñể chẩn ñoán bệnh . 1.2. Mục ñích của ñề tài Nhằm hiểu ñược các triệu chứng. phương pháp miễn dịch huỳnh quang ñể chẩn ñoán 46 4.5. Nghiên cứu sự phân bố của virus Care ở các cơ quan của chó mắc bệnh Care bằng phương pháp miễn dịch huỳnh quang 50 PHẦN V: KẾT LUẬN VÀ